Curso 202 /202
TGL
PRACTICA Nº
Fecha:
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
SEPARACIÓN DE LOS COMPONENTES COLOREADOS DE COLORANTES Y TINTAS DE
ROTULADORES.
Separar por cromatografía en capa fina, los distintos componentes coloreados de diversos
colorantes de laboratorio, las tintas de diversos rotuladores y extractos vegetales.
MATERIAL.
Cromatoplaca de Silicagel: Fase estacionaria sobre la que se lleva a cabo la separación de los
compuestos.
Eluyente:
Fase móvil 1 acetona/etanol 96º/agua (250/150/100)
Fase móvil 2 butanol/etanol/amoniaco (3/1/1)
Cubeta de cristal: Permite la colocación vertical de la placa con los bordes inferiores inmersos en
la solución del eluyente y el cierre de la misma para proporcionar así la saturación necesaria del
ambiente en su interior.
Muestras:
Cromatoplaca C1 (Fase móvil 1) Cromatoplaca C2 (Fase móvil 2)
A. CRISTAL VIOLETA A. CRISTAL VIOLETA
B. NIGROSINA B. NIGROSINA
C. SAFRANINA C. SAFRANINA
D. EOSINA D. EOSINA
E. MEZCLA DE LOS 4 COLORANTES E. MEZCLA DE LOS 4 COLORANTES
F. ROTULADOR 1 F. ROTULADOR 1
G. ROTULADOR 2 G. ROTULADOR 2
H. ROTULADOR 3 H. ROTULADOR 3
I. EXTRACTO VEGETAL 1 I. EXTRACTO VEGETAL 1
J. EXTRACTO VEGETAL 2 J. EXTRACTO VEGETAL 2
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PROCEDIMIENTO
- Realizar una extracción de los pigmentos vegetales mediante etanol al 80% o acetona al
60%. Preparar las diluciones, si es necesario, realizando los cálculos necesarios.
- Marcar el punto de aplicación a 2 cm del borde inferior de la placa y depositar, con una
punta de pipeta, cada uno de los colorantes y extractos y dejar secar. A continuación,
marcar puntos con cada rotulador y dejar secar (hemos de anotar el orden en que
colocamos cada sustancia).
- Se llena la cubeta con 1 cm de eluyente.
- Introducir las placas, sin que se toquen, sumergidas en el eluyente sin que este toque las
muestras.
- Tapar y esperar el desarrollo cromatográfico (durará varias horas).
CUESTIONES
1. Calcula los Rf (factor de retardo) de cada colorante de la cromatoplaca ( eosina, safranina, cristal
violeta, clorofilas, carotenos, excepto de los de la nigrosina, rotuladores).
2. ¿En qué se parecen el factor de retención y el tiempo de retención? ¿En qué situaciones se usa cada uno de
estos dos parámetros?
3. Observando las dos cromatografías de capa fina, ¿cuántos pigmentos tiene cada colorante?
¿Y los rotuladores? ¿Y los extractos vegetales?
4. ¿Por qué migran a diferente distancia según la fase móvil utilizada?
5. ¿Qué colorantes/rotuladores/extractos se han separado mejor con cada fase móvil?
6. ¿Dónde hay que colocar la muestra antes de meter la placa o el papel en la cubeta?
7. ¿Qué le ocurre a las manchas de pigmentos a medida que pasa el tiempo una vez sacada la
placa de la cubeta? ¿A qué crees que es debido? ¿Cómo podría solucionarlo?
8. Imagina dos moléculas distintas que migran juntas a la misma distancia usando una fase
estacionaria y una fase móvil. ¿Qué puedo hacer para separarlas entre sí?
INCIDENCIAS
