Atlas de Histologı́a Vegetal y Animal

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

Cuestionarios
PREGUNTAS
y

RESPUESTAS

Manuel Megı́as, Pilar Molist, Manuel A. Pombal

Departamento de Biologı́a Funcional y Ciencias de la Salud.
Fcacultad de Biologı́a. Universidad de Vigo

(Versión: Septiembre 2018)

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Contenidos

1 Fijación 1

2 Inclusión 4

3 Corte 6

4 Tinción 9

5 Microscopios 13
 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 1

1 Fijación

Las siguientes preguntas pueden ser verdaderas (V) o falsas (F).

V F

1. x La fijación sirve para preservar las caracterı́sticas morfológicas y moleculares de los

tejidos.
Es cierto. De otra forma los tejidos sufren autolisis y degradación por microbios.
Además, los tratamientos en solventes orgánicos o a altas temperaturas a los que se
someterán los tejidos durante el procesamiento histológicos son muy agresivos con
las células.

2. x Existe un fijador universal para cualquier tipo de tejido y de técnica.

Es falso. Existen numerosos tipos de fijadores (alcoholes, aldehı́dos, óxidos, etcétera)
que se emplean según lo que queremos observar del tejido y también depende del
tipo de tejido que queramos procesar.

3. x Entre las caracterı́sticas que debemos considerar a la hora de elegir un fijador está
su velocidad de penetración.
Es cierto. Esto es especialmente importante cuando la fijación se hace por inmersión
y no por perfusión vascular. Por ejemplo, cuando trabajamos con material vegetal
o con biopsias animales.

4. x El efecto mordiente de los fijadores permite una mejor preservación de las estructuras
lipı́dicas de los tejidos.
Es falso. El efecto mordiente es una propiedad de algunos fijadores que permite
una mejor tinción de algunas estructuras tisulares. Con el uso de otros fijadores sin
efecto mordiente estas estructuras son muy difı́ciles de poner de manifiesto mediante
tinciones generales.

5. x Un artefacto durante el proceso de fijación provoca que se observen mejor ciertas

estructuras tisulares.
Es falso. Los artefactos son modificaciones que se producen en el tejido durante el
proceso de fijación, o en etapas posteriores, y que falsean la organización natural del
tejido. Por tanto tenemos que tenerlas en cuenta para no describir modificaciones
artificiales como si fueran caracterı́sticas propias del tejido. Por ello los fijadores
suelen prepararse a pH y osmolaridad fisiológicos.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 2

V F

6. x Hay fijadores que no son sustancias quı́micas.

Es cierto. Son los denominados métodos o fijadores fı́sicos. Por ejemplo, se pueden
usar calor, microondas o congelación para fijar los tejidos. Hay que tener en cuenta,
sin embargo, los artefactos que estos procesos puedan introducir en el tejido.

7. x La fijación por perfusión consiste en sumergir una pieza de tejido en el lı́quido fijador.
Es falso. La perfusión consiste en introducir el fijador por el sistema vascular del
animal o de un órgano concreto. Sumergir el tejido en lı́quido fijador se denomina
fijación por inmersión.

8. x El tiempo de fijación en la fijación por perfusión es mayor que en la que se realiza

por inmersión.
Es falso. La rapidez de la fijación por inmersión depende de la velocidad de pene-
tración del fijador y del grosor de la pieza de tejido que queramos fijar. Sin embargo,
la fijación por perfusión es extremadamente rápida y no depende crı́ticamente de la
velocidad de penetración del fijador puesto que siempre existen capilares sanguı́neos
a unas pocas micras de cualquier células del organismo. Por tanto, el fijador llega
muy rápido a todas las células del organismo, disminuyendo ası́ el tiempo de fijación.

9. x Con la fijación por inmersión se pueden fijar piezas de tejido mayores que con la
fijación por perfusión.
Es falso. La inmersión sólo permite fijar piezas menores a 0,5 cm de diámetro,
aunque puede variar en función de la velocidad de penetración del fijador. Ello
es ası́ porque a tamaños mayores de muestras se produce una degradación de las
células que están en el interior de la pieza por la tardanza en la llegada del fijador.
Por perfusión el fijador puede llegar a todas las células del organismo a través del
sistema vascular y por tanto se pueden fijar incluso animales enteros.

10. x Los fijadores se pueden combinar entre sı́ para hacer mezclas fijadoras.
Es cierto. Es frecuente aprovechar las caracterı́sticas fijadoras de varias sustancias
en una misma solución fijadora. Por ejemplo, el ácido acético es bueno para los
ácidos nucleicos pero preserva mal las proteı́nas y membranas y por ello se suele
combinar con aldehı́dos.

11. x Los fijadores se pueden combinar entre sı́ para hacer mezclas fijadoras.
Es cierto.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 3

V F

12. x El formaldehı́do es uno de los fijadores más ampliamente usado.

Es cierto. Es un buen fijador para proteı́nas y lı́pidos, produce pocos artefactos y
sirve como conservante.

13. x Los tejidos que se van a procesar para su observación con el microscopio electrónico
necesitan fijarse con alcoholes.
Es cierto. Esta mezcla fijadora contiene además formaldehı́do y ácido acético. Es
ideal para observaciones con tinciones generales de muestras incluidas en parafina.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 4

2 Inclusión

Las siguientes preguntas pueden ser verdaderas (V) o falsas (F).

V F

1. x La inclusión de los tejidos sirve para obtener secciones delgadas ya que endurecen
la muestra.
Es cierto. Se sigue la regla de que cuanto más delgada queramos hacer la sección más
dura debe estar la muestra. También preservan la muestra durante mucho tiempo.

2. x La inclusión es la única manera de endurecer las muestras para obtener secciones.

Es falso. Con la congelación se pueden conseguir endurecer el tejido lo suficiente
como para conseguir secciones muy delgadas, incluso ultrafinas. La propia fijación
también endurece los tejidos.

3. x La parafina se endurece por solidificación.

Es cierto. Para infiltrar la parafina en los tejidos hay que colocarla a uno 60 grados
centı́grados, a los cuales es lı́quida, y añadir la muestra durante unas horas para
que la parafina lı́quida se infiltre en ella. Una vez infiltrada se lleva temperatura
ambiente para que se solidifique, con el consiguiente endurecimiento.

4. x Las resinas son medios de inclusión que se endurecen por polimerización.

Es cierto. Las resinas tipo epoxy se consiguen a partir de 2 componentes lı́quidos,
más un acelerador y un plastificante. A temperatura ambiente son lı́quidas y tras
infiltrarse en el tejido se colocan a 60 grados centı́grados, produciéndose la polimer-
ización. Estas resinas son las que aportan mayor dureza a los tejidos, gracias a la
cual se pueden obtener secciones muy delgadas. Otras resinas como el metacrilato
polimerizan cuando se someten a luz ultravioleta.

5. x Las resinas tipo epoxy y la parafina son miscibles en agua.

Es falso. Por ello, hay que eliminar el agua de los tejidos mediante una deshidrat-
ación, normalmente alcohólica. También es necesario usar un lı́quido intermediario
entre la resina o parafina y el alcohol absoluto, que normalmente es el xileno para
la parafina y el óxido de propileno para las resinas tipo expoxy. Igual ocurre para
el metacrilato. Hay otras resinas que son miscibles en agua y para las que no es
necesario deshidratar a las muestras de tejido.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 5

V F

6. x Las parafinas producen tejidos más duros que las resinas.

Es falso. Las resinas son las que más endurecen los tejidos, mucho más que las para-
finas. Por ello con las parafinas se obtienen cortes finos y con las resinas semifinos
y ultrafinos.

7. x La inclusión en parafina sirve para obtener cortes que se pueden observar con el
microscopio electrónico.
Es falso. Los cortes obtenidos a partir de tejido incluido en parafina son finos y
sirven, tras su tinción, para la observación con microscopios ópticos o fluorescentes.

8. x Para observar secciones obtenidas a partir de tejidos incluidos en resina es necesario

eliminar previamente la resina.
Es falso. Es falso. Tanto los cortes semifinos como los ultrafinos se pueden teñirse
y contrastrar, respectivamente, para su observación con el microscopio óptico en el
primer caso y con el electrónico en el caso de las secciones ultrafinas.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 6

3 Corte

Las siguientes preguntas pueden ser verdaderas (V) o falsas (F).

V F

1. x La observación de los tejidos con microscopios ópticos debe hacerse sobre secciones
obtenidas a partir de dichos tejidos.
Es cierto. Ello es porque la luz debe atravesar el tejido y en porciones gruesas de
tejido esto no ocurre o la difusión de la luz impide ver las estructuras con nitidez.

2. x Los aparatos para obtener secciones de tejido se denominan microtomos.

Es cierto. Hay de diferentes tipos de microtomos que se usan en función del medio
de inclusión, el grosor del corte que queremos obtener o las caracterı́sticas del tejido
que queramos observar.

3. x El microtomo de rotación sirve para obtener secciones de material incluido en para-

fina.
Es cierto. Con él se obtienen secciones de entre 5 y 20 µm a partir de tejidos incluidos
en parafina.

4. x Para cortar bloques de parafina hay que estirar dichos bloques previamente con
calor.
Es falso. Lo que se estira con calor son los cortes obtenidos a partir de bloques de
parafina.

5. x El retallado de los bloques de parafina sirve para que las secciones sean más delgadas.
Es falso. El retallado sirve para obtener series de cortes bien orientadas y en tiras
rectas, además de para facilitar que un corte arrastre al previamente cortado del
borde de la cuchilla.

6. x Los cortes de parafina se depositan sobre portaobjetos recubiertos con una sustancia
adherente.
Es cierto. Esa sustancia sirve para que el tejido no se desprenda del portaobjetos
una vez hallamos eliminado la parafina.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 7

V F

7. x La temperatura de estirado de los cortes de parafina debe estar en torno a los 65

grados centı́grados.
Es falso. Debe estar en torno a los 30-40 grados centı́grados. A 60 grados las
parafinas son lı́quidas y los cortes se desharı́an.

8. x El vibratomo sirve para hacer cortes de tejidos que no han sido incluidos.
Es cierto. Este microtomo sirve para hacer cortes sobre tejido endurecido con fijador
o a partir de tejido vegetal, en el cual las paredes celulares dan consistencia al tejido.
No permite hacer cortes más finos de unos 30 a 40 µm y las secciones permanecen
en flotación.

9. x Cortes en flotación significa que las secciones no se adhieren a portaobjetos.

Es cierto. El procesamiento de estas secciones no supone la adhesión a un portaob-
jetos y se puede hacer con aquellas que son relativamente gruesas como las obtenidas
con el vibratomo o con el microtomo de congelación.

10. x Los bloques de tejido cortados con un criotomo deben estar previamente fijados con
fijadores quı́micos.
Es falso. Aunque es lo recomendable no es siempre necesario, puesto que el proceso
de congelación endurece suficientemente el tejido como para poder obtener secciones
finas con el criostato o más gruesas con el microtomo de congelación.

11. x La crioprotección es importante para no destrozar el tejido cuando usamos los crioto-
mos.
Es cierto. Los crioprotectores, como la sacarosa o el glicerol, se usan para que los
cristales que se formen durante la congelación no sean grandes y destruyan ası́ al
tejido. Aunque no es imprescindible, ayuda a una mejor preservación del tejido
congelar la pieza de forma muy rápida, por ejemplo usando nitrógeno lı́quido.

12. x El microtomo de congelación hace cortes más delgados que el criostato.

Es falso. Es el criostato con el que se pueden conseguir cortes más delgados, de unas
5 a 10 µm, mientras que con el microtomo de congelación se consiguen cortes por
encima de 30 µm. Hoy en dı́a existen los ultracriotomos que son capaces de obtener
secciones de pocas decenas de nanometros para su observación en el microscopio
electrónico de transmisión.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 8

V F

13. x Los cortes semifinos tienen un grosor de unos pocos nanometros.

Es falso. Los cortes semifinos tienen entre 0.5 y 2 µm. Los cortes del orden de
nanometros se denominan ultrafinos.

14. x Con el ultramicrotomo se obtienen cortes semifinos y ultrafinos.

Es cierto. El ultramicrotomo es un microtomo de alta precisión con el que se con-
siguen cortes muy delgados (desde decenas de nanometros hasta 1 o 2 µm) a partir
de material incluido en resinas.

15. x Cuanto más endurecido está el tejido más delgados son los cortes que se pueden
obtener de él.
Es cierto. Es una regla general según la cual el grosor del corte está directamente
relacionado con la dureza del material que se corta. Por eso, para obtener secciones
ultrafinas se incluye el tejido en resinas que cuando polimerizan tienen una gran
dureza. Otra forma de endurecer el tejido es por congelación, sin necesidad de usar
resinas.

16. x Las cuchillas que usa el ultramicrotomo y el criostato son similares.

Es falso. El ultramicrotomo necesita un borde de corte de la cuchilla muy afilado,
que se consigue con vidrio o con diamante. Por el contrario, el criostato usa cuchillas
de metal con filos más romos.

17. x Las secciones que se obtienen con el ultramicrotomo se pueden procesar unidas a
portaobjetos.
Es cierto. Pero sólo para el caso de las secciones semifinas, para el caso de las
secciones ultrafinas se necesita un soporte distinto denominado rejilla. Las rejillas
son soportes de metal, normalmente nı́quel o cobre, sobre las cuales se depositan los
cortes ultrafinos.

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4 Tinción

Las siguientes preguntas pueden ser verdaderas (V) o falsas (F).

V F

1. x Los colorantes son pigmentos que se adhieren a determinados componentes celulares.

Es cierto.

2. x La parte del colorante que aporta el color se denomina cromóforo.

Es cierto. Los colorantes suelen tener tres componentes: esqueleto incoloro, el
cromóforo y el auxocromo, este ultimo se une al tejido.

3. x Un colorante ácido tiñe los núcleos de las células.

Es falso. Los colorantes ácidos se unen a estructuras básicas de la célula, como el
citoplasma, y fuera de la célula a la matriz extracelular. El núcleo es fundamental-
mente ácido debido a la abundancia de ácido desoxirribonucleico (ADN).

4. x La metacromasia significa que tras la unión del colorante al tejido, el color del tejido
es diferente al esperado.
Es cierto. Esto es debido a que algunos colorantes cambian sus propiedades de color
cuando interaccionan con los tejidos.

5. x La hematoxilina-eosina es una tinción general formada por un sólo colorante.

Es falso. Como su nombre indica esta tinción tiene dos colorantes: la hematoxilina,
un colorante básico, y la eosina, un colorante ácido. La hematoxilina y la eosina tiñen
la mayorı́a de las estructuras tisulares de un color púrpura y rosado, respectivamente.

6. x Durante las tinciones generales de tejidos incluidos en parafina siempre se tiñe antes
de desaparafinar las secciones.
Es falso. Primero hay que desparafinar las secciones puesto que de otra manera los
colorantes no podrı́an entrar en el tejido.

7. x Para teñir secciones incluidas en resina no es necesario eliminar dicha resina.

Es cierto. Algunos colorantes como el azul de toluidina pueden penetrar en dichas
resinas cuando se hace la tinción a alta temperatura (70- 80 o C).

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 10

V F

8. x Los cortes ultrafinos se contrastran con acetato de uranilo.

Es cierto. El uranilo se deposita sobre las membranas y otros elementos de la célula,
lo que provoca que los electrones reboten, no incidan en la pantalla fluorescente y
permita la formación de una imagen. También se añade citrato de plomo con el
mismo propósito, ayudando al acetato de uranilo.

9. x Las reacciones histoquı́micas suponen una reacción quı́mica en la que participan

moléculas del propio tejido.
Es cierto.

10. x La técnica de PAS sirve para poner de manifiesto los lı́pidos.

Es falso. Sirve para poner de manifiesto los hidratos de carbono.

11. x La histoquı́mica enzimática sirve para descubrir la presencia de ciertos enzimas en

los tejidos.
Es cierto. Se añaden sustratos especı́ficos que son procesados por el enzima deseado
y el producto de la reacción es una sustancia coloreada e insoluble que precipita en
el lugar donde se ha producido la reacción.

12. x La histoquı́mica enzimática sólo se puede realizar sobre tejido fresco, no fijado.
Es falso. Aunque la actividad enzimática de algunos enzimas se destruya con
la fijación, otros son activos tras la fijación con fijadores convencionales como el
paraformaldehı́do. De cualquier forma hay que tener en cuenta las caracterı́sticas
de cada enzima a la hora de detectar su presencia mediante histoquı́mica.

13. x Las lectinas son proteı́nas que son capaces de reconocer a glúcidos de manera es-
pecı́fica.
Es cierto. Existen diversas lectinas que se unen de forma especı́fica a diferentes
azúcares terminales (ver tabla de la página de lectinas).

14. x Las lectinas, una vez unidas a los azúcares, se pueden observar directamente con el
microscopio de fluorescencia puesto que tienen autofluorescencia.
Es falso. Las lectinas no son autofluorescentes y por ello se tienen que conjugar
con enzimas o con sustancias fluorescentes para poder observarla en sus lugares de
unión.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 11

V F

15. x La inmunocitoquı́mica se basa en el uso de anticuerpos para detectar moléculas en

el tejido.
Es cierto. Las inmunoglobulinas son las responsables de reconocer de manera es-
pecı́fica y con gran afinidad a la molécula que queremos poner de manifiesto en el
tejido.

16. x Con la inmunocitoquı́mica sólo se pueden detectar proteı́nas.

Es falso. Se puede detectar cualquier molécula que sea capaz de desencadenar una
respuesta inmune y por tanto producir anticuerpos.

17. x Los anticuerpos policlonales son capaces de reconocer más de una parte de la
molécula que queremos detectar.
Es cierto. Una molécula tiene diversos lugares que pueden actuar como determi-
nantes antigénicos cuando se inocula para la producción de anticuerpos. Se activan
diversos clones de linfocitos que producen las inmunoglobulinas, por tanto, poli-
clonales. Cuando se utiliza el suero de estas inmunizaciones se están empleando
anticuerpos policlonales que se unirán a diferentes partes de nuestra molécula.

18. x En la inmunocitoquı́mica la unión de los anticuerpos con las moléculas del tejido no
se puede detectar si no se une un enzima directamente a ese anticuerpo.
Es falso. Aunque la unión de un enzima al primer anticuerpo se usa en inmunoc-
itoquı́mica, se denomina técnica de detección directa, lo más normal es unir mar-
cadores a un segundo anticuerpo y la enzima está en un complejo que se une a ese
anticuerpo secundario, es la inmunocitoquı́mica con detección indirecta.

19. x La inmunofluorescencia permite la detección de más de una molécula en el mismo

tejido.
Es cierto. Para ello se usan anticuerpos unidos a fluorocromos diferentes que pueden
ser discriminados en un microscopio de fluorescencia o en microscopio confocal.

20. x Para la inmunofluorescencia se usan anticuerpos especiales, distintos a los empleados

en la inmunocitoquı́mica.
Es falso. Se usan los mismos anticuerpos sólo que la molécula usada para ponerlos
de manifiesto es un fluorocromo.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 12

V F

21. x El marcaje inmunofluorescente se puede estudiar durante tanto tiempo como el de

la inmunocitoquı́mica.
Es falso. Los fluorocromos van perdiendo capacidad de emitir luz visible cuanto más
tiempo se excitan. Ello quiere decir que la señal que podemos observar va decayendo
con el tiempo. La inmunocitoquı́mica, sin embargo, produce un precipitado insoluble
y coloreado que una vez deshidratado, montado con medios de montaje y cubierto
con un cubreobjetos puede durar para siempre (no se gasta con la observación).

22. x La hibridación in situ se emplea para detectar la presencia de ARN mensajero.

Es cierto. Ese es uno de sus principales usos, pero modificaciones de esta técnica
sirven para detectar secuencias de ADN en los cromosomas, o cualquier otro tipo de
cadena de nucleótidos, como ARN de interferencia, ARN de transferencia o ARN
de las ribonucleoproteı́nas.

23. x Una sonda empleada para hibridación in situ para un determinado ARN mensajero
sirve para detectar ese ARN mensajero en cualquier especie.
Es falso. Un gen en diferentes especies no tiene una secuencia de nucleótidos idéntica
y por tanto es necesario producir una sonda para cada especie, ya que la detección
se basa en la complementariedad de bases.

24. x Para la detección de la hibridación de la sonda con el ARN mensajero se usan

siempre anticuerpos contra marcadores presentes en la propia sonda.
Es falso. Aunque esto es lo más frecuente, también se puede marcar directamente
la sonda con sustancias fluorescentes y, ası́, tras la hibridación, se puede observar
directamente con un microscopio de fluorescencia.

25. x La clonación es un paso previo a la obtención de una sonda para hibridación in situ.
Es cierto. La clonación supone la inserción de la secuencia de nucleótidos que quer-
emos detectar en plásmidos y éstos en bacterias. Una vez multiplicados, la sonda se
obtiene por transcripción de la secuencia que está en dichos plásmidos. Nótese que la
transcripción supone la obtención de una secuencia, nuestra sonda, complementaria
a la secuencia que queremos detectar.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 13

5 Microscopios

Las siguientes preguntas pueden ser verdaderas (V) o falsas (F).

V F

1. x Los primeros microscopios ópticos se inventaron a principios del siglo XVII.

Es cierto. El microscopio electrónico se inventó mucho después, a mediados del siglo
XX.

2. x El poder de resolución y los aumentos de un microscopio son la misma cosa.

Es falso. El poder de resolución es la capacidad para discriminar dos puntos
próximos. Es mayor cuanto más próximos estén los puntos. Para el microscopio
óptico es de 0.2 µm y viene determinado por el uso de la luz visible. Los aumentos,
por otra parte, son el resultado de multiplicar los aumentos que nos proporciona el
objetivo por el que nos proporciona el ocular. En el microscopio óptico es de unos
1000 a 1500 aumentos y dependen de la calidad de las lentes. Pero por más que
consigamos aumentar una imagen con el microscopio óptico no podremos aumentar
el poder de resolución.

3. x El aceite de inmersión se usa con el objetivo de 40 x.

Es falso. Se usa con el objetivo de 100x, y en algunos casos con objetivos de 60x. A
estos objetivos se les denomina de inmersión puesto que la imagen que aportan es
nı́tida sólo si en vez del aire entre la muestra y la lente colocamos aceite de inmersión,
que tiene el ı́ndice de refracción adecuado para estas lentes.

4. x El condensador es la fuente emisora de luz en los microscopios ópticos.

Es falso. Es la lámpara. El condensador sirve para concentrar el haz de luz de la
fuente sobre la muestra.

5. x El micrométrico es un dispositivo de los microscopios ópticos para enfocar la muestra

de una manera muy precisa.
Es cierto. Para el enfoque de la muestra en los microscopios ópticos se emplean el
macrométricos, para enfocar con objetivos de pocos aumentos, y el micrométrico,
para ajustes muy precisos cuando se usan lentes de grandes aumentos.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 14

V F

6. x La microscopı́a de campo oscuro usa luz polarizada.

Es falso. Primero hay que desparafinar las secciones puesto que de otra manera los
colorantes no podrı́an entrar en el tejido.

7. x La microscopı́a óptica de Nomarsky se usa para detectar fluoróforos.

Es falso. La microscopı́a de Nomarsky se usa para resaltar estructuras dentro del
tejido que se diferencian por su densidad, dando un aspecto de tridimendsionalidad.
Se necesitan filtros que polaricen la luz y objetivos especiales. Esto permite que en
ausencia de colorantes se puedan observar caracterı́sticas tisulares. Es muy útil para
observar secciones semifinas, de unas pocas µm de grosor.

8. x La microscopı́a de fluorescencia se usa para poner de manifiesto a unas moléculas

denominadas fluoróforos.
Es cierto. Estas moléculas, cuando son excitadas con una determinada longitud de
onda emiten luz visible, que es la que se observa por los oculares del microscopio
de fluorescencia. Ası́, la imagen que se observa es luminosa donde se encuentre el
fluoróforo y oscura o negra donde no esté presente.

9. x Los filtros en los microscopios de fluorescencia sirven para estimular selectivamente

a diferentes fluoróforos.
Es cierto. Los filtros sirven para dejar pasar una banda de longitudes de onda,
especı́fica para cada filtro, que excitará selectivamente a un determinado tipo de
fluoróforo para que emita luz visible. Éste es el fundamento para poner de manifiesto
dos o más fluoróforos en un mismo tejido, usar filtros especı́ficos para cada uno de
ellos.

10. x La microscopı́a de fluorescencia sirve como tinción general para la observación de

los tejidos.
Es falso. Salvo contados casos, los tejidos no poseen sustancias fluorescentes. Existen
fluoróforos que tiñen núcleos y pueden usarse para obtener una imagen general del
tejido, pero no se usan como tinción cotidiana sino cuando se combina con el uso de
otros fluoróforos.

11. x El microscopio confocal sirve para observar tejidos fluorescentes o fluorocromos

añadidos al tejido.
Es cierto. Es un tipo especial de microscopio de fluorescencia que permite una mayor
nitidez de observación de muestras fluoerescentes y mayor versatilidad a la hora de
tomar imágenes digitales de la muestra.

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 Técnicas histológicas. Cuestionarios. Respuestas. 15

V F

12. x La ultraestructura celular se observa con los microscopios electrónicos.

Es cierto. Gracias a su alta resolución se puede observa las forma y organización de
los compartimentos celulares.

13. x Los microscopios electrónicos usan lentes ópticas para concentrar el haz de elec-
trones.
Es falso. Usan lentes magnéticas puesto que lo que hay que concentrar son electrones
y no luz visible. Las lentes ópticas se usan en los microscopios ópticos.

14. x Con el microscopio electrónico de transmisión se pueden ver las membranas celulares.
Es cierto. Los metales pesados se depositan en las membranas que aparecen como
lı́neas oscuras gracias al poder de resolución del microscopio electrónico. Gracias
a este tipo de microscopios se pudo observar las caracterı́sticas morfológicas de los
orgánulos celulares.

15. x Las secciones que se observan con el microscopio electrónico de transmisión han de
teñirse con colarantes básicos.
Es falso. Las secciones se contrastan con metales pesados como el acetato de uranilo
y el citrato de plomo. En los microscopios electrónicos no se obtienen imágenes en
color puesto que no se usa la luz visible sino un chorro de electrones. Por tanto la
tinción con colorantes no tiene sentido.

16. x En el microscopio electrónico de transmisión se pueden ver secciones gruesas, de más

de 10 µm.
Es falso. Sólo se pueden ver secciones muy finas, denominadas ultrafinas, de unas
decenas de nanometros. Este delgado grosor permite a los electrones atravesar la
muestra y formar una imagen en una pantalla fosforescente.

17. x Para observar con el microscopio electrónico de barrido es necesario hacer secciones
ultrafinas.
Es falso. El microscopio electrónico de barrido sirve para ver superficies, no sec-
ciones. Las secciones ultrafinas se usan en el microscopio electrónico de transmisión.

18. x El microscopio electrónico de barrido sirve para ver superficies de tejidos con una
alta resolución.
Es cierto. Con este tipo de microscopio se barre una superficie tisular, previamente
recubierta de metales pesados, con electrones. El rebote de esos electrones crea una
imagen en un dispositivo receptor que luego se proyecta en una pantalla.

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