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Determinación de peso seco y contenido orgánico e inorgánico

Chapter · January 2007

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Domenico Voltolina
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste
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 DETERMINACIÓN DE PESO SECO Y CONTENIDO ORGÁNICO
Métodos y Herramientas E INORGÁNICO
Analíticas 23
en la Evaluación de la Biomasa Microalgal

CAPÍTULO 3
DETERMINACIÓN DE PESO SECO Y
CONTENIDO ORGÁNICO E INORGÁNICO
BERTHA OLIVIA ARREDONDO VEGA
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S. C. (CIBNOR). Laboratorio de
Biotecnología de Microalgas. La Paz, Baja California Sur. México. [email protected]

DOMENICO VOLTOLINA
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. (CIBNOR). Laboratorio de Estudios
Ambientales UAS-CIBNOR. Mazatlán, Sinaloa, México. [email protected]

CONTENIDO conocidos que se concentran en filtros de peso

seco conocido y se secan en una estufa hasta
1. INTRODUCCIÓN peso constante. La cantidad de biomasa total
2. DETERMINACIÓN DE LA BIOMASA SECA, TOTAL Y (orgánica e inorgánica) presente en ese cultivo
ORGANICA se calcula como la diferencia entre el peso inicial
2.1 PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIÓN DEL del filtro y el peso del filtro con la muestra, dividida
PESO SECO TOTAL Y CENIZAS entre el volumen de la muestra filtrada.
2.2 ECUACIONES PARA EL CÁLCULO DE PESO Es importante considerar que especialmente,
SECO TOTAL Y CENIZAS pero no exclusivamente, en el caso de microalgas
3. PESOS UNITARIOS marinas, esta determinación se verá afectada por
4. REFERENCIAS la cantidad de sales presentes en el filtro, en los
espacios intercelulares y en la superficie celular,
Palabras clave: peso seco, peso orgánico, por lo cual es indispensable eliminarlos mediante
cenizas, Pavlova lutheri. un procedimiento de lavado (Zhu y Lee, 1997).
Esta precaución es un paso importante para
la determinación de los pesos seco total y libre
de cenizas (peso orgánico). No obstante, existen
1. INTRODUCCIÓN en la literatura varios trabajos en los cuales no se
menciona si la muestra fue lavada, lo cual da lugar
El valor dietético de una microalga depende a dudas sobre la cantidad real de biomasa (Ben-
de su composición y de su contenido energético, Amotz et al., 1985; Chu et al., 1994; Reitan et al.,
el cual se relaciona con la cantidad de materia 1994). De la misma manera, hay autores que
orgánica presente en su biomasa. Ésta se reportan el uso de diferentes soluciones de
determina con las técnicas tradicionales que se lavado, como formato de amonio (Wikfors et
describen en los apartados siguientes. al., 1992; Brown y Farmer, 1994), cloruro de
sodio 0.9 % (López-Alonso et al, 1993; Hu y
Richmond, 1995), HCl 0.5 N (Molina-Grima et
2. DETERMINACIÓN DE LA BIOMASA al., 1994), agua acidificada a pH 4 (Vonshak
SECA, TOTAL Y ORGÁNICA 1997), agua destilada (Craigie et al., 1992) y/o
medio de cultivo fresco en agua destilada
El peso seco total de la biomasa microalgal (Spriharan et al., 1991). Otros han usado la
presente en un cultivo se determina usando combinación de formato de amonio y cloruro
muestras de volumen y concentración celular de sodio (Henderson et al., 1988).

23
24 DETERMINACIÓN DE PESO SECO Y CONTENIDO ORGÁNICO E INORGÁNICO

En nuestros laboratorios hemos estandarizado h) Por diferencia entre el peso del filtro lavado
el uso de filtros de fibra de vidrio, cuya porosidad con agua destilada y seco con respecto al
nominal depende del tamaño de la microalga en peso del filtro con la muestra seca dividido
cultivo, y de una solución de lavado de formato entre el volumen de cultivo filtrado, se obtiene
de amonio al 3 % (0.5 M) en el caso de microalgas el PESO SECO TOTAL (¼g/mL o mg/L) (Fig.
marinas, mientras que para las de agua dulce 1).
usamos agua destilada y en el caso de cianobac- i) El filtro con la biomasa seca y pesada se
terias, agua acidificada a pH 4 (Vonshak, 1997). incinera en una mufla a 490 °C durante por lo
menos 6 h.
2.1 Protocolo para la determinación del j) Colocar el filtro con las cenizas en un de-
peso seco total y de cenizas secador cerrado al vacío durante 1.5 h.
k) Pesar rápidamente los filtros con las cenizas
Los cultivos de microalgas se cosechan en la (sacando del desecador uno a uno y cerrando
fase de crecimiento de interés para el estudio que cada vez) en una balanza analítica de 5
se está realizando. dígitos, hasta cuando la lectura se estabiliza.
a) Lavar con agua destilada los filtros con la l) Regresar los filtros a la mufla y repetir la
porosidad nominal seleccionada y operación los dos días siguientes o hasta
prequemarlos en la mufla a 490 °C por 6 h. asegurarse que se logró peso constante.
Colocar los filtros prequemados en el m) Por diferencia del peso entre el filtro vacío y
desecador durante 1.5 h y pesarlos hasta el filtro con las cenizas, se obtiene el PESO
verificar que el peso permanece constante. INORGÁNICO o PESO DE CENIZAS (µg/mL
NOTA: guardar estos filtros en sobres de o mg/L).
papel aluminio previamente numerados n) Por diferencia entre el peso del filtro con la
con lápiz, cuidando utilizar suficiente muestra seca y el filtro con las cenizas, se
presión para que el número aparezca en obtiene el PESO ORGÁNICO.
relieve.
b) Tomar un volumen conocido del cultivo de mi- 2.2 Ecuaciones para el cálculo de peso
croalga (homogenizar bien la muestra antes seco (total y orgánico) y cenizas (Arredondo
de proceder) y filtrar en los filtros de peso Vega et al., 1997)
conocido.
c) Lavar la muestra filtrada con 10 mL de for- PST (µg/mL) = [(PSFM) - PSF] / VF
mato de amonio 3% (0.5 M), filtrar
nuevamente y guardar en el sobre. PSI (µg/mL) = (PSC – PSF) / VF
d) Colocar los sobres (entreabiertos) con filtro
en una estufa a temperatura entre 65 y 70 °C PSO (µg/mL) = PST – PSI
durante por lo menos 12 h (el tiempo de
secado depende del tipo de estufa y de la
humedad ambiental, además del volumen de
la muestra).
e) Pasar los filtros a un desecador, verificando
que el silicagel esté libre de humedad. Aplicar
vacío y dejar en el desecador durante 1.5 h.
f) Pesar rápidamente los filtros en una balanza
analítica de 5 dígitos (sacando los filtros uno
por uno del desecador y cerrándolo cada vez)
hasta cuando la lectura se estabiliza.
g) Regresar los filtros a la estufa y repetir la
Figura 1. Muestras de la microalga Pavlova lutheri
operación los dos días siguientes o hasta filtrada en filtros de fibra de vidrio (Hernández-Espinosa,
asegurarse que se logró peso constante. 1999).
 DETERMINACIÓN DE PESO SECO Y CONTENIDO ORGÁNICO E INORGÁNICO 25
En donde: sistemas de producción o a definir el momento
PST, PSI y PSO son los pesos seco total, más apropiado para la cosecha.
inorgánico (cenizas) y orgánico, en ¼g/mL. Esta información se consigue mediante las
PSF, PSFM y PSC son los pesos secos del ecuaciones:
filtro sin muestra, del filtro con muestra y del filtro
con la muestra incinerada. PSTU = PST / N
VF = Volumen de muestra filtrado.
(NOTA: las lecturas de las balanzas analíticas PSOU = PSO / N
son generalmente en gramos, por lo cual En donde:
deben ser multiplicadas por 106 para obtener PSTU y PSOU son los pesos secos total y
los pesos secos en ¼g). orgánico de una célula, PST y PSO son las
En la Tabla 1 se reportan los valores de peso cantidades de biomasa en un mL.
seco, orgánico y cenizas de la microalga Pavlova N es la concentración celular en el mismo
lutheri cultivada en condiciones autótrofa (medio volumen de cultivo.
f/2) y mixótrofa (medio f/2 adicionado con acetato (NOTA: en general la biomasa presente en un
de sodio). El sistema de cultivo fue batch (o por mL se expresa en ¼g/mL y el peso unitario se
lote) en condiciones controladas de temperatura, obtiene en pg/cél (pg= 10-12 g) multiplicando
pH e intensidad luminosa. La biomasa se cosechó PSTU o PSOU x 106).
a los 7 días y se lavó con 10 mL de formato de
amonio al 3 % (Hernández-Espinosa, 1999).
4. REFERENCIAS

3. PESOS UNITARIOS ARREDONDO-VEGA, B.O., Cordero-Esquivel,

B., Herrero, C. y Abalde, J. (1997). Manual de
Es frecuente notar que un determinado Técnicas Bioquímicas Aplicadas en Ficología.
tratamiento proporciona concentraciones CIBNOR, CICESE, Universidade Da Coruña,
celulares significativamente mayores, pero que 41 págs.
no existen diferencias importantes en producción BEN-AMOTZ, A. Tornabene, T.G. y Thomas W.H.
de biomasa. Asimismo, se pueden registrar (1985). Chemical profile of selected species
incrementos de biomasa, aún cuando la of microalgae with emphasis on lipids. Jour-
concentración celular permanece constante. nal of Phycology 21: 71-81.
Ambas situaciones se deben a cambios en el peso BROWN, M.R. y Farmer, C.L. (1994). Riboflavin
celular unitario que es una información importante content of six species of microalgae used in
para interpretar los resultados de los mariculture. Journal of Applied Phycology
experimentos, en especial cuando están dirigidos 6:61-65.
a investigar el efecto de diferentes técnicas o CHU, W-L., Phang, S-M. y Goh, S-H (1994). Stud-
medios de cultivo sobre la productividad de los ies on the production of useful chemicals, es-
pecially fatty acids, in the marine diatom
Nitzchia conspicua Grunow. Hydrobiologia
Tabla 1. µg/mL de peso seco y orgánico y % de cenizas 285: 777-786.
de la microalga Pavlova lutheri cultivada en el sistema CRAIGIE, J.S., Correa, J.A. y Gordon, M.E. (1992).
batch y en condiciones autótrofa (f/2) y mixótrofa (f/2 +
acetato de sodio). La biomasa se cosechó a los 7 días
Cuticles from Chondrus crispus (Rodophyta).
(Hernández-Espinosa, 1999). Journal of Phycology 28: 777-786.
FABREGAS, J., Abalde, J., Cabezas, B. y
Medio de cultivo Peso seco Peso orgánico Cenizas
(µg/mL) (µg/mL) (%) Herrero, C. (1989). Changes in protein, car-
f/2 561.77 284. 33 49.39 bohydrates and gross energy in the marine
+ 0.25 g/L acetato Na 457.66 267.33 41.59
+ 0.50 g/L acetato Na 780.33 257.66 66.98
microalga Dunaliella tertiolecta (Butcher) by
+ 0.75 g/L acetato Na 835.53 383.20 54.14 nitrogen concentration as nitrate, nitrite and
+ 1.0 g/L acetato Na 403.33 293.00 27.35 urea. Aquacultural Engineering 8: 223-239.
26 DETERMINACIÓN DE PESO SECO Y CONTENIDO ORGÁNICO E INORGÁNICO

HENDERSON, R.J., Leftyley, J.W. y Sargent, effects of nitrate, silicate and light-dark cycles.
J.R. (1988). Lipid composition and biosyn- Journal of Phycology 17: 374-384.
thesis in the marine dinoflagellate SPRIHARAN, S., Bagga, D. y Nawaz, M.
Crypthecodinium conhii. Phytochemistry 27: (1991). The effects of nutrients and tem-
1679-1683. perature on biomass, growth, lipid produc-
HERNÁNDEZ-ESPINOSA, D. (1999). Variabilidad tion, and fatty acid composition of Cyclotella
bioquímica de la microalga marina Pavlova cryptica Reimann, Lewin and Guillard. Ap-
lutheri en condiciones autotróficas y plied Biochemistry and Biotechnology 28/29:
mixotróficas en un sistema de cultivo estático. 317-326.
Tesis de Licenciatura. Universidad Autónoma TADROS, M.G. y Johansen, J.R. (1988). Physi-
Metropolitana, Unidad Xochimilco, México, ological characterization of six lipid-producing
D.F. 51 págs. diatoms from the southern United States. Jour-
HU, Q. y Richmond, A. (1994). Optimizing the nal of Phycology 24: 445-452.
population density in Isochrysis galbana WIKFORS, G.H., Ferris, G.E. y Smith, B.C. (1992).
grown outdoors in a glass column The relationship between gross biochemical
photobioreactor. Journal of Applied Phycol- composition of cultured algal foods and growth
ogy 6: 391-396. of the clam, Mercenaria mercenaria (L.).
LÓPEZ-ALONSO, D., Sánchez-Pérez, J.A., Aquaculture 108: 135-154.
García-Camacho, F., García-Sánchez, J.L. y SOROKIN, C. (1973). Dry weight, packed cell
Molina-Grima, E. (1993). Improvement of volumen and optical density. En: Handbook
eicosapentaenoic acid content in isolates of of Phycological Methods. Culture Methods and
Isochrysis galbana. Journal of Marine Biotech- Growth Measurement. Stein, J.R. (ed.) Cam-
nology 1: 147-149. bridge University Press. Cambridge, 321-343
MOLINA-GRIMA, E., Sánchez-Pérez, J.A., pp.
García-Camacho, F., García-Sánchez, J.L., SPOEHR, H.A. y Milner, H.W. (1949). The chemi-
Acién-Fernández, F. G. y López-Alonso, D. cal composition of Chlorella: effect of environ-
(1994). Outdoor culture of Isochrysis galbana mental conditions. Plant Physiology 24: 120
ALII4 in a closed tubular photobioreactor. Jour- VONSHAK, A. (1997). Appendices. En: Spirulina
nal of Biotechnology 37: 159-166. platensis (Arthrospira): Physiology, Cell-Biol-
REITAN, K.I., Rainuzzo, J.R. y Olsen, Y. (1994). ogy and Biotechnology. Vonshak, A. (ed). Tay-
Effect of nutrient limitation on fatty acid and lor and Francis. 213-215 pp.
lipid content of marine microalgae. Journal of ZHU, C.J. y Lee, Y.K. (1997). Determination of
Phycology 30: 972-979. biomass dry weight of marine microalgae.
SHIFRIN, N. S. y Chisholm, S. W. (1981). Phy- Journal of Applied Phycology 9: 189-194.
toplankton lipids: interspecific differences and

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