UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION
FACULTAD DE INGENIERIA AGRONOMA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y
AMBIENTAL
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
TEMA:
SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
DOCENTE:
CASTILLO MORE FRANCISCO
AUTORA:
VALVERDE MANTILLA FATIMA RAQUEL
ASIGNATURA:
MICROBIOLOGÍA
CICLO II
HUACHO - 2023
INTRODUCCION
La microbiología, campo fundamental en la biología, se ha beneficiado enormemente de
las técnicas de cultivo y aislamiento de microorganismos, especialmente bacterias. Estas
técnicas son esenciales para comprender la diversidad microbiana y explorar su
potencial en áreas que van desde la medicina hasta la biotecnología. En este contexto, el
cultivo y aislamiento de bacterias juega un papel crucial, permitiendo la observación y
estudio de estos organismos a nivel individual y en comunidades microbianas
complejas. El proceso de cultivo de bacterias inicia con la selección de un sustrato
nutritivo y un ambiente físico que emule las condiciones óptimas para el crecimiento de
la bacteria de interés. A través de técnicas de esterilización, se eliminan
microorganismos competidores, asegurando que la muestra estudiada esté compuesta
únicamente por la especie de interés. Posteriormente, se inocula el medio de cultivo con
la muestra y se proporcionan las condiciones de temperatura, pH, y oxigenación
adecuadas para el desarrollo óptimo de las bacterias. Una vez establecido el cultivo, es
esencial proceder con el aislamiento de la bacteria de interés. Esto implica una serie de
técnicas que permiten separar y purificar la especie deseada de otras presentes en el
cultivo. La dilución en serie, por ejemplo, es una estrategia clave que reduce la densidad
de bacterias en la muestra, facilitando así la identificación y aislamiento de colonias
individuales. Además, la técnica de siembra en placa permite la formación de colonias
bacterianas individuales en una superficie sólida, facilitando su manipulación y estudio
posterior. El aislamiento de bacterias no solo es esencial para la investigación básica,
sino que también tiene implicaciones significativas en aplicaciones prácticas. En el
ámbito médico, por ejemplo, el aislamiento de patógenos bacterianos es crucial para el
diagnóstico y tratamiento efectivo de infecciones. Asimismo, en la industria alimentaria
y farmacéutica, la capacidad de aislar cepas bacterianas productoras de compuestos de
interés tiene un impacto directo en la producción de alimentos y medicamentos.
OBJETIVOS
Aprender a realizar el cultivo y aislamiento de bacterias de manera correcta.
Entender la importancia de la siembra y aislamiento de bacterias y como estas
impactaron en los avances de la medicina moderna.
MARCO TEORICO
El cultivo y aislamiento de bacterias tiene sus raíces en los primeros estudios de
microbiología, que datan del siglo XVII. Uno de los hitos más importantes fue el
descubrimiento de Antón van Leeuwenhoek, quien en 1676 observó por primera vez
microorganismos a través de un microscopio rudimentario. Aunque en aquel entonces
no se conocía la naturaleza precisa de estos diminutos seres, este hallazgo sentó las
bases para el estudio de la microbiología. A lo largo del siglo XIX, el campo de la
microbiología continuó evolucionando. Louis Pasteur y Robert Koch fueron dos de los
científicos más influyentes en este periodo. Pasteur desarrolló la teoría de la generación
espontánea, demostrando que los microorganismos no surgían de manera espontánea en
medios estériles. También desarrolló técnicas de pasteurización para evitar la
proliferación de microorganismos en alimentos y bebidas. Por su parte, Koch estableció
los postulados de Koch, un conjunto de criterios para demostrar que un microorganismo
específico era la causa de una enfermedad específica. Esto marcó un avance crucial en
la comprensión de las relaciones entre microorganismos y enfermedades infecciosas. El
cultivo de bacterias en medios de agar y gelatina también se desarrolló en esta época, lo
que permitió la observación y estudio de microorganismos en condiciones controladas.
Este avance fue especialmente importante para la identificación y clasificación de
diferentes especies bacterianas. A medida que la tecnología y la comprensión de la
microbiología avanzaron en el siglo XX, se desarrollaron técnicas más refinadas para el
cultivo y aislamiento de bacterias. La invención de medios de cultivo específicos y
métodos de aislamiento selectivos permitieron a los científicos estudiar una amplia
variedad de bacterias y comprender mejor sus funciones y roles en la naturaleza.
METODOLOGIA
PROCEDIMIENTO PARA LA SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
1. Primero, preparar nuestros materiales tales como el mechero, el asa de kolle, una
placa con agar agar esterilizada y una placa contaminada.
2. Segundo, después de tener todos nuestros materiales listos se procede a
desinfectar con una mano el asa de kolle en el fuego del mechero.
3. Tercero, con la otra mano se tomara la placa contaminada y se extraerá la
muestra con el asa de kolle mediante un movimiento suave por la superficie de
la colonia de bacterias que se encuentra en la placa.
4. Cuarto, después de extraer la muestra se cerrará y apartara la placa contaminada
y se tomara la placa esterilizada para abrirla y, se sembrara la muestra
delicadamente rozando el agar agar.
5. Quinto, por ultimo se cerrara la placa sembrada y se colocara en la incubadora.
PROCEDIMIENTO PARA VISUALIZAR BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
1. Primero, preparar nuestros materiales tales como el aceite de inmersión,
mechero, asa de kolle, Azul de Metileno, aceite de inmersion, un portaobjetos y
la placa de la cual obtendremos la muestra.
2. Segundo, despues de tener todos nuestros materiales listos se procede a
esterilizar con una mano nuestra asa de kolle con el fuego del mechero.
3. Tercero, con la otra mano libre se acercara la placa contaminada y se extraerá
delicadamente con el asa de kolle la muestra de colonia de bacterias elegida.
4. Cuarto, después de tener la muestra en nuestra asa de kolle, cerraremos y
apartaremos la placa para que, con la mano libre tomemos el portaobjetos y
introduzcamos la muestra de bacterias.
5. Quinto, una vez que tengamos nuestro portaobjeto con las bacterias, procedemos
a echarle una gota de Azul de Metileno, de manera que cubra toda la parte a
visualizar.
6. Sexto, después de 12 minutos, se le aplicara un suave chorro de agua al
portaobjetos para limpiar el sobrante de Azul de Metileno.
7. Septimo, por ultimo se pasara el portaobjetos por el mechero para secar el
exceso de agua, después se colocara la muestra en el microscopio y se le aplicara
una gota de aceite de inmersión para que sea visible al aumento de X100, y de
esa manera la muestra ya estará lista para su visualización en el microscopio.
DISCUSION
La siembra y aislamiento de bacterias fue un descubrimiento fundamental para el
avance de la medicina moderna, por ello se ha hecho importante en el estudio de
enfermedades, que a su vez se implementaron diferentes tipos de procedimientos de
acuerdo a las circunstancias de cada situación, y en la actualidad se convirtió en el
factor principal para la identificación y estudio en el campo de la medicina, aquí se
muestran algunos estudios y procedimientos mediante la siembra y aislamiento de
bacterias:
Identificación de Patógenos: Permite identificar y aislar bacterias patógenas que causan
enfermedades en humanos, animales y plantas. Esto es crucial para el diagnóstico y
tratamiento efectivo de infecciones.
Estudio de la Diversidad Microbiana: Facilita la investigación sobre la diversidad de
bacterias en diferentes entornos. Esto incluye su distribución geográfica, sus roles en
ecosistemas y su contribución a procesos biológicos.
Desarrollo de Terapias y Medicamentos: El cultivo y aislamiento de bacterias es
esencial para el desarrollo de antibióticos y otros medicamentos. Permite la
identificación de cepas productoras de compuestos beneficiosos o la modificación de
cepas existentes para mejorar su actividad.
Biotecnología y Producción Industrial: Se utiliza en la producción de alimentos
fermentados, como el yogur y la cerveza, así como en la producción de enzimas y
productos químicos industriales.
Investigación en Agricultura: Permite el estudio de bacterias benéficas que promueven
el crecimiento de plantas y la protección contra patógenos.
Estudio de Interacciones Microbianas: Facilita la investigación sobre las interacciones
entre bacterias y otros microorganismos en comunidades microbianas complejas.
Control de Contaminación: Ayuda a identificar y controlar bacterias contaminantes en
entornos industriales y de alimentos.
Avances en Ciencias de la Salud: Ha contribuido significativamente a la comprensión
de la microbiota humana y su influencia en la salud y enfermedad.
Diagnóstico Clínico y Epidemiología: Es crucial para el diagnóstico de infecciones,
seguimiento de brotes epidémicos y vigilancia de resistencia a antibióticos.
Avances en Investigación Científica: Proporciona las herramientas necesarias para
realizar investigaciones en una amplia gama de disciplinas científicas, desde la biología
molecular hasta la ecología.
RECOMENDACIONES
Preparación y Esterilización del Material: Contar con material de laboratorio limpio
y esterilizado, incluyendo pipetas, placas de agar, tubos de ensayo, hisopos estériles, etc.
Autoclava o esteriliza adecuadamente el material antes de su uso para eliminar cualquier
contaminación.
Manipulación Aséptica: Realizar todas las operaciones bajo condiciones asépticas en
una campana de flujo laminar o una zona desinfectada adecuadamente.
Selección del Medio de Cultivo: Escoger el medio de cultivo adecuado para las
bacterias que se desean aislar. Pueden ser medios selectivos o diferenciales,
dependiendo del objetivo.
Inoculación y Siembra: Utilizar una técnica de siembra apropiada para distribuir
uniformemente la muestra en el medio de cultivo. La técnica de siembra en placa suele
ser eficaz para la formación de colonias individuales.
Diluciones Seriadas: Si la muestra es muy concentrada, considerar realizar diluciones
seriadas para reducir la densidad de bacterias y facilitar el aislamiento de colonias
individuales.
Incubación Controlada: Incubar las placas a la temperatura y condiciones adecuadas
para el crecimiento de las bacterias. Esto puede variar según la especie.
Observación y Selección de Colonias: Realizar un seguimiento constante del
crecimiento de las colonias. Una buena iluminación y el uso de lentes de aumento
pueden ser útiles.
Aislamiento de Colonias Puras: Utilizar una pipeta estéril o un asa de siembra para
transferir una colonia individual a un nuevo medio de cultivo. Asegúrarse de identificar
y etiquetar correctamente cada cultivo.
Pruebas de Caracterización: Para confirmar la pureza y características de las colonias
aisladas, puedes realizar pruebas bioquímicas o moleculares según sea necesario.
Documentación Detallada: Registrar de manera detallada toda la información
relevante, como la fuente de la muestra, el medio de cultivo utilizado, las condiciones
de incubación y cualquier observación importante.
Descarte Seguro de Residuos: Eliminar los residuos biológicos de manera segura y de
acuerdo con los procedimientos de bioseguridad establecidos.
Mantenimiento de Cultivos Puros: Almacenar las colonias aisladas en condiciones
adecuadas para su mantenimiento a largo plazo.
BIBLIOGRAFIA
Kapital Inteligente. 14/04/2020. Cultivo de microorganismos, materiales y
procedimiento. https://www.kapitalinteligente.es/cultivo-de-microorganismos/
Laboratorio Clínico. 08/02/2023. ¿Qué es un cultivo bacteriano y para que se
utiliza? https://ieqfb.com/cultivo-bacteriano-tipos-usos/
Claudio Rodríguez Martínez, Raisa Zhurbenko. 2018. MANUAL DE MEDIOS
DE CULTIVO. BioCen
UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION
FACULTAD DE INGENIERIA AGRONOMA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y
AMBIENTAL
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
TEMA:
COLORACION GRAM
DOCENTE:
CASTILLO MORE FRANCISCO
AUTORA:
VALVERDE MANTILLA FATIMA RAQUEL
ASIGNATURA:
MICROBIOLOGÍA
CICLO II
HUACHO - 2023
INTRODUCCION
Las bacterias son microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser
humano. En muchos casos forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro entorno
sin ocasionar ningún peligro para la salud. En otras situaciones, las bacterias pueden ser
patógenas, es decir, producen infecciones de diversos tipos: cutáneas, abdominales,
óseas, etc. Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes
clasificaciones atienden a diversos criterios y características bacterianas: morfología,
metabolismo, presencia de pared celular, etc. Una de las maneras de diferenciar a las
bacterias es en base a la presencia de una pared celular. Así, hay bacterias con una pared
gruesa (formada por peptidoglicanos) y otras con una pared mucho más delgada. La
tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una técnica
muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una gran
utilidad en medicina. La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las
bacterias para observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del
peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así,
las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están
formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una
segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio
aparecen incoloras. Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa,
formada por un gran número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la
tinción Gram, dando un color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram
+.
OBJETIVOS
Aprender a realizar el procedimiento para visualizar bacterias Gram positivas.
Entender la importancia de la coloración Gram y como esta se ddesarrollo a lo
largo del tiempo.
MARCO TEORICO
La técnica de tinción Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian
Gram en 1884. Gram estaba buscando una forma de distinguir y clasificar bacterias de
manera más eficiente para sus investigaciones. Su técnica se convirtió en un hito
importante en el campo de la microbiología y sigue siendo una de las técnicas de tinción
más utilizadas en la actualidad.
La historia de la tinción Gram se puede dividir en los siguientes hitos:
Desarrollo de la técnica: Hans Christian Gram originalmente estaba buscando una
manera de visualizar bacterias en muestras de tejidos humanos. Experimentó con
diferentes colorantes y soluciones de fijación.
Descubrimiento accidental: Se cree que el descubrimiento de la tinción Gram fue en
gran parte accidental. Se cuenta que Gram cometió un error en el proceso, pero este
error resultó en una técnica altamente efectiva para diferenciar bacterias.
Publicación del método: En 1884, Gram publicó su método en una revista científica.
En este artículo, describió la técnica y la aplicó a una amplia variedad de muestras
bacterianas.
Reconocimiento y adopción: La tinción Gram rápidamente ganó popularidad entre los
microbiólogos y se convirtió en una herramienta fundamental en el estudio de bacterias.
Permitió una clasificación más precisa y rápida de diferentes tipos de bacterias.
Avances y refinamientos posteriores: A lo largo de los años, se han realizado ajustes y
refinamientos en la técnica original de tinción Gram. Se han introducido variantes y
adaptaciones para adaptarse a diferentes tipos de muestras y microorganismos.
La tinción Gram sigue siendo una técnica esencial en microbiología y juega un papel
fundamental en la identificación y clasificación de bacterias. Aunque se han
desarrollado otras técnicas de tinción, la tinción Gram continúa siendo una de las más
utilizadas y enseñadas en laboratorios de microbiología en todo el mundo.
METODOLOGIA
PROCEDIMIENTO PARA VISUALIZAR BACTERIAS GRAM POSITIVAS
1. Primero, identificamos nuestros materiales como acetona, el cristal violeta, el
Lugol, el mechero, el asa de kolle, alcohol, el portaobjetos y la placa de la cual
extraeremos la colonia de bacterias.
2. Segundo, despues de tener todos los materiales listos se procedera a esterilizar el
asa de kolle con el fuego del mechero para tomar la muestra de colonia de
bacterias de la placa y llevarla al portaobjetos.
3. Tercero, una vez teniendo nuestra muestra en el portaobjetos, se le aplicara unas
2 gotas de cristal violeta de manera que cubra toda la parte a visualizar de la
muestra, para que después se deje reposar 1 minuto.
4. Cuarto, pasado el minuto, se le aplicara un suave chorro de agua para quitar el
exceso de cristal violeta y, se le aplicara un poco de Lugol, y se le dejara reposar
1 minuto mas.
5. Quinto, pasado ese minuto, se le aplicara unas gotitas de alcohol, y se dejara
reposar 1 minuto para que después se le aplique un suave chorro de agua para
quitar el exceso de alcohol, este paso se repetirá 2 veces en intervalos de 1
minuto cada uno.
6. Sexto, después de darle el ultimo chorro suave de agua para quitar el exceso de
alcohol, se le aplicara unas 2 gotas de acetona a la muestra, y pasados unos 30
segundos se le aplicara un suave chorro de agua para quitar el exceso de acetona.
7. Septimo, por ultimo, se secara la muestra con una suave brasa por el mechero
para quitar el exceso de agua y, ya estaría lista para ser visualizada en el
microscopio.
DISCUSION
La tinción Gram es importante en microbiología por varias razones fundamentales:
Diferenciación de bacterias: Permite distinguir entre dos grupos principales de
bacterias, las Gram-positivas y las Gram-negativas, basándose en las diferencias en la
composición de su pared celular. Esta distinción es esencial para la identificación y
clasificación de microorganismos.
Guía en el diagnóstico médico: En el campo de la medicina, la tinción Gram es una
herramienta crucial en el diagnóstico de infecciones bacterianas. Ayuda a los
profesionales de la salud a determinar qué tipo de bacteria está presente en una muestra
clínica, lo que puede influir en el curso del tratamiento.
Selección de tratamientos adecuados: La distinción entre bacterias Gram-positivas y
Gram-negativas es crucial para la elección de antibióticos. Algunos antibióticos son más
efectivos contra un grupo específico de bacterias, por lo que la información
proporcionada por la tinción Gram es esencial para seleccionar el tratamiento más
adecuado.
Indicador de estructura celular: La tinción Gram ofrece información sobre la
estructura de la pared celular de las bacterias. Las Gram-positivas tienen una pared
celular más gruesa y rica en peptidoglicano, mientras que las Gram-negativas tienen una
pared celular más delgada y una membrana externa.
Investigación y clasificación de microorganismos: En el campo de la microbiología,
la tinción Gram es una herramienta clave para la identificación y clasificación de
bacterias. Permite a los científicos estudiar y comprender mejor la diversidad y
distribución de microorganismos en distintos entornos.
Rápida visualización en el laboratorio: La tinción Gram es una técnica relativamente
rápida y sencilla, lo que la convierte en una herramienta valiosa en entornos de
laboratorio para obtener resultados preliminares sobre la composición de las bacterias
presentes en una muestra.
En resumen, la tinción Gram es una técnica esencial en microbiología que proporciona
información valiosa sobre la estructura y composición de las bacterias, lo que tiene un
impacto significativo en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades infecciosas, así
como en la investigación científica en el campo de la microbiología.
RECOMENDACIONES
Preparación de muestras:
Asegúrate de que la muestra a analizar esté bien preparada y pura. Contaminantes o
impurezas pueden interferir con los resultados de la tinción.
Material y equipo:
Utiliza portaobjetos limpios y bien secos. Asegúrate de que las láminas de portaobjetos
no tengan astillas ni imperfecciones que puedan interferir con la visualización.
Cultivo bacteriano:
Cultiva las bacterias en un medio adecuado hasta alcanzar una densidad celular óptima.
Esto puede variar según el tipo de bacteria.
Fijación:
Fija las bacterias con calor suave o con soluciones de fijación adecuadas. Esto ayuda a
adherir las células a la superficie del portaobjetos.
Enjuague y secado:
Asegúrate de enjuagar suavemente entre cada paso para evitar desprendimientos
excesivos de colorante. Deja secar completamente antes de observar la muestra al
microscopio.
Observación al microscopio:
Utiliza un microscopio óptico de alta calidad con una objetiva de inmersión de aceite
para obtener los mejores resultados. Ajusta la iluminación y el enfoque adecuadamente.
BIBLIOGRAFIA
ALBERTO LÓPEZ. 13 SEPT 2019. DIARIO EL PAIS.
https://elpais.com/sociedad/2019/09/13/actualidad/1568359007_968117.html
Dra. Eva Ormaechea, 2023. MAPFRE. https://www.salud.mapfre.es/pruebas-
diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-de-gram/
Biblioteca Nacional de Medicina (EE. UU) .28/08/2019. MedlinePlus.
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-gram/
#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20Gram%20es,la%20sangre%20o
%20la%20orina.
María Jimena Casasola Bado. 29/08/2022. La importancia de realizar una
correcta tinción de Gram en la identificación bacteriana. Rev. Colegio de
Microb. Quím. Clín. De Costa Rica, vol. 27, N.°2.
