UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD

INDUSTRIAL

“SIEMBRA, AISLAMIENTO, TRASPLANTE Y OBTENCIÓN DE CULTIVOS

MIXTOS Y PUROS DE BACTERIAS. MÉTODO DEL ESTRIADO EN PLACA.’’

QUINTO LABORATORIO DEL CURSO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL-BO-

122

EVELYN MIREYA VALENZUELA VERAMENDI - 20221636J

CIELO XIOMARA FAJARDO ROJAS - 20230485K

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
4 de mayo de 2024
 ÍNDICE

I. RESUMEN .........................................................................................3
II. INTRODUCCIÓN ................................................................................3
III. OBJETIVOS ...................................................................................4
3.1. Objetivo general ........................................................................4
3.2. Objetivo especifico ....................................................................4
IV. MARCO TEÓRICO .........................................................................4
4.1. Siembra de cultivo .....................................................................4
4.2. Aislamiento ................................................................................5
4.3. Trasplante ..................................................................................6
4.4. Obtención de cultivos puros ....................................................6
4.5. Técnicas de siembra de microorganismos ..............................8
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ............................................... 10
5.1. Materiales, equipos y reactivos .............................................. 10
5.2. Metodología ............................................................................. 14
5.3. Procedimiento.......................................................................... 15
VI. RESULTADOS ............................................................................. 18
VII. DISCUSION DE RESULTADOS ................................................... 21
VIII. CONCLUSIONES ......................................................................... 22
IX. RECOMENDACIONES ................................................................. 22
X. CUESTIONARIO .............................................................................. 23
XI. FUENTES DE INFORMACIÓN ..................................................... 25
XII. ANEXOS ....................................................................................... 26
XIII. APÉNDICE ................................................................................... 27
13.1. Diagrama de flujo ................................................................. 27
13.2. Datos originales y observaciones ...................................... 28
13.3. Procedimiento cálculo ......................................................... 29
13.4. Datos calculados ................................................................. 29

2
 I. RESUMEN
Este informe detalla el procedimiento de siembra, aislamiento, trasplante y
obtención de cultivos mixtos y puros de bacterias utilizando el método del estriado
en placa. La microbiología es fundamental para comprender la diversidad y
funciones de los microorganismos, y la manipulación de cultivos bacterianos es
una habilidad esencial en este campo.

La técnica de estriado en placa permite aislar colonias individuales de bacterias

presentes en una muestra, facilitando su estudio y caracterización. Es crucial
mantener condiciones asépticas durante el proceso para evitar la contaminación
cruzada y garantizar la pureza de los cultivos obtenidos.

En este informe, se describe el protocolo utilizado para cada etapa del proceso,
desde la preparación de las muestras hasta la observación de los cultivos
obtenidos. Se discuten los resultados obtenidos y su relevancia en el contexto de
la microbiología aplicada, destacando la importancia de esta técnica en la
identificación y estudio de bacterias específicas.

II. INTRODUCCIÓN
El presente informe detalla el procedimiento de siembra, aislamiento, trasplante y
obtención de cultivos mixtos y puros de bacterias utilizando el método del estriado
en placa. La microbiología es una disciplina fundamental para comprender la
diversidad y funciones de los microorganismos, así como su impacto en diversos
ámbitos, desde la salud humana hasta la industria alimentaria y ambiental.

La manipulación de cultivos bacterianos es una práctica común en el laboratorio

de microbiología y constituye una habilidad fundamental para los estudiantes y
profesionales en este campo. La técnica de estriado en placa permite aislar
colonias individuales de bacterias presentes en una muestra, facilitando su estudio
y caracterización.

Durante el proceso de siembra y aislamiento, es crucial mantener condiciones

asépticas para evitar la contaminación cruzada y garantizar la pureza de los
cultivos obtenidos. Además, el trasplante de colonias a medios de cultivo
selectivos o diferenciales permite identificar y caracterizar bacterias específicas
según sus propiedades bioquímicas.

En este informe, se describirá detalladamente el protocolo utilizado para llevar a

cabo cada etapa del proceso, desde la preparación de las muestras hasta la

3
observación de los cultivos obtenidos. Asimismo, se discutirán los resultados
obtenidos y su relevancia en el contexto de la microbiología aplicada.

III. OBJETIVOS
3.1. Objetivo general
• Capacitar al estudiante a obtener cultivos mixtos y puros por el método del
estriado a partir de las siembras realizadas en la clase anterior para llegar
a la identificación de uno o más microorganismos.

3.2. Objetivo especifico

• Reconocer la morfología celular bacteriana de cultivos mixtos aislados en
agares selectivos.
• Reconocer la morfología celular bacteriana de cultivos puros aislados en
agares selectivos.

IV. MARCO TEÓRICO

La manipulación de los microorganismos requiere de técnicas especiales, no sólo
por su tamaño microscópico, sino porque es necesario evitar la contaminación de
los cultivos por gérmenes indeseables e impedir el traslado de gérmenes
patógenos desde los cultivos al medio ambiente. Para una correcta manipulación
de los microorganismos es necesario trabajar con instrumentos estériles sobre
medios de cultivo estériles. Para estudiar un microorganismo determinado, es
necesario destruir todos los demás que pudieran encontrarse en el medio y en los
instrumentos de trabajo.

4.1. Siembra de cultivo

La selección de microorganismos, este paso es crucial y depende del objetivo del
estudio o la aplicación. Los microorganismos pueden ser seleccionados por su
interés científico, su potencial industrial, su relevancia médica, entre otros criterios.
Se pueden obtener de muestras ambientales, cultivos existentes o bancos de
microorganismos.

Los medios de cultivo se diseñan para proporcionar los nutrientes necesarios para
el crecimiento del microorganismo de interés. Pueden ser medios simples, como
el agar nutritivo, que contienen ingredientes básicos como extracto de carne y
peptona, o medios selectivos que favorecen el crecimiento de ciertos
microorganismos al inhibir el crecimiento de otros. La composición del medio de

4
cultivo puede ajustarse según las necesidades específicas del microorganismo
que se está cultivando.

La esterilización del equipo y el medio de cultivo es esencial para evitar la

contaminación durante el proceso de siembra. Se utilizan técnicas de
esterilización como autoclave, filtración por membrana o radiación para eliminar
cualquier microorganismo presente en el equipo y el medio.

La inoculación es el proceso de transferir una pequeña cantidad del

microorganismo de interés al medio de cultivo estéril. Esto se puede hacer
utilizando técnicas asépticas, como la flameado del asa de inoculación o el uso de
pipetas estériles. Dependiendo del tipo de estudio o aplicación, la cantidad de
microorganismo inoculado puede variar para obtener un crecimiento adecuado.

Después de la inoculación, el cultivo se coloca en condiciones de incubación que

favorecen el crecimiento del microorganismo. Esto puede implicar mantener una
temperatura constante, proporcionar la cantidad adecuada de oxígeno o ajustar el
pH del medio de cultivo. La duración de la incubación varía según el
microorganismo y las condiciones de crecimiento óptimas.

Durante el período de incubación, se realizan observaciones periódicas para

evaluar el crecimiento del microorganismo. Esto puede incluir la observación de
cambios en la apariencia del medio de cultivo, como la formación de colonias en
medios sólidos o la turbidez en medios líquidos. Además, se pueden realizar
pruebas bioquímicas, moleculares o morfológicas para caracterizar el
microorganismo y confirmar su identidad.

Tras completar el cultivo y analizarlo, el microorganismo puede almacenarse para

uso futuro. Esto puede implicar congelar el cultivo en un medio adecuado para
mantener su viabilidad a largo plazo o conservarlo en condiciones específicas,
como la liofilización, para facilitar su transporte y almacenamiento.

4.2. Aislamiento

Es la separación de un determinado microorganismo del resto de

microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por
estría sobre un medio de cultivo adecuado dispuesto en una placa de Petri.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se
reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan separadas

5
e inmovilizadas las células bacterianas. Tras la incubación en condiciones
adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas
divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas características
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevación, tamaño, consistencia, etc.
Los tipos de bacterias de la muestra original son visibles como diferentes de
colonias. De colonias separadas se puede obtener un cultivo puro de cada
bacteria presente en la muestra original.

El éxito del aislamiento, de la separación sobre el medio de cultivo, depende de la

superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. Es muy importante realizar el
mayor número de estrías posible. En las primeras estrías aparecerán colonias
confluentes o una masa continua de microorganismos. En las estrías finales
deberán aparecer colonias separadas unas de otras. El aislamiento requiere un
reducido inóculo de partida. La sucesiva disminución del tamaño de la población
sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de
cultivo, debe asegurar que finalmente algunas células queden suficientemente
separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie

4.3. Trasplante

Consiste en colocar al microorganismo ya aislado (en cultivo puro) en un nuevo

medio de cultivo para conservarlo en el tiempo, lo que permitirá realizar diferentes
estudios, como pruebas bioquímicas, morfología, coloración, análisis genéticos,
identificación taxonómica, etc.

4.4. Obtención de cultivos puros

En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como

poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos,
necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que todos
los microorganismos provienen de una sola célula. La obtención de un cultivo
puro, a partir de una población mixta, se lleva a cabo en dos etapas:

• La muestra debe diseminarse para que los microorganismos queden

separados sobre la superficie de un medio de cultivo sólido, y luego de la
incubación formen colonias visibles aisladas. Este proceso se conoce
como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias
correspondientes a los diferentes microorganismos presentes en la
población original.

6
 • Luego de tener las colonias aisladas, éstas deben transferirse con el
filamento a un tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa
colonia aislada; este procedimiento se conoce como trasplante.

Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada

tipo de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. Se
considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso,
todas las colonias obtenidas presenten las mismas características. El medio de
cultivo utilizado en el proceso de aislamiento dependerá de los requerimientos
nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de
microorganismos que, por sus características y/o por la cantidad en que se
encuentren en la muestra, dificulten su obtención aislamiento. En este último caso,
se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el
desarrollo de gérmenes contaminantes. La temperatura y otras condiciones de
incubación variarán según los microorganismos, usualmente la temperatura
óptima de los microorganismos patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC.
Cuando el microorganismo que se intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las
precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente
donde se desarrollará el mismo. Con base en el origen y naturaleza de la muestra
se pueden deducir los microorganismos presentes en la misma, y ese
conocimiento ayudará a seleccionar el medio y las condiciones de cultivo
adecuadas. Para iguales fines, es muy útil conocer los síntomas de la enfermedad
de quien obtuvo la muestra analizada.

Figura 4.1. Imagen de obtención de cultivos puros

7
 4.5. Técnicas de siembra de microorganismos
Se denomina siembra al paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo y
su finalidad de estas técnicas es aislar colonias bacterianas o el mayor número de
bacterias posibles. La cantidad de bacterias dependerá del tipo de técnica utilizada
y del medio empleado.

a. Siembra por agotamiento

• Primeramente, encendemos el mechero Bunsen para crear un
ambiente de esterilidad. Con cuidado, destapamos uno de los tubos
con medio líquido, flameamos su cuello, flameamos el asa de siembra
e introducimos está en el tubo, para coger el inoculo.
• A continuación, flameamos el cuello del tubo y lo volvemos a tapar
antes de dejarlo en la gradilla de nuevo.
• Después, con sumo cuidado, abrimos la placa Petri cerca del mechero
Bunsen y sembramos el inóculo de arriba hacia abajo, sin parar hasta
que nos quedemos sin espacio. La siembra debe ser muy superficial y
debe hacerse lenta y suavemente para no dañar el agar.
• Una vez acabada la siembra, cerramos la placa Petri y la apartamos
para continuar con la siguiente técnica.

Figura 4.2. Siembra por agotamiento.

b. Siembra por estría múltiple.

8
• Se tomará la muestra con el asa de siembra previamente estéril y dicha
muestra se depositará en el extremo superior de la placa, extendiéndola
de un extremo a otro, pero solo en la parte superior.
• Flameamos el asa de siembra y giramos levemente la placa, repitiendo el
proceso anterior, arrastrando una cantidad de muestra de la siembra
anterior.
• Este proceso se repetirá un total de 4 o 5 veces hasta acabar la superficie
de la placa

Figura 4.3. Siembra por estría múltiple.

c. Técnica de los cuatro cuadrantes.

• Con un rotulador, hacemos dos líneas perpendiculares en la parte de atrás
de la placa, dejando esta dividida en cuatro cuadrantes. En cada
cuadrante, se pondrá un número para saber el orden que se ha seguido a
la hora de sembrar.
• Encendemos el mechero Bunsen y destapamos la paca Petri al lado de
este.
• Con el asa de siembra se toma el inóculo y se siembra en el primer
cuadrante, haciendo zig-zag desde la parte superior de este a la parte
inferior.
• A continuación, sin flamear, repetimos la acción anterior.
• Esto se repite dos veces más, hasta completar la placa.
• Se flamea el asa y se deja en la gradilla

9
 Figura 4.4. Técnica de los cuatro cuadrantes.

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
5.1. Materiales, equipos y reactivos
Tabla 5.1. Materiales, equipos y reactivos usados en el laboratorio.

MATERIALES

Asa de siembra

Mechero de Bunsen.

Encendedor

10
 Algodón.

Papel kraft

Gradillas

Pabilo

Pizetas

Placas Petri conteniendo agar

manitol salado (AMS)

11
Placas Petri conteniendo agar KF

Eosina azul de metileno (EMB)

Placas Petri conteniendo agar

Endo

Placas Petri conteniendo agar

Nutritivo

EQUIPOS

Autoclave

Contador de colonias.

12
 Incubadora 35°-37°C

Refrigeradora

Vortex

Plancha de calentamiento u hornilla

eléctrica.

Horno de aire caliente o estufa para

Esterilización (180 ° X 2 hrs).

Baño María 46°C

13
 REACTIVOS

Alcohol 70°

5.2. Metodología
El método del estriado en placa es una técnica fundamental en microbiología
utilizada para aislar y obtener cultivos puros de bacterias a partir de una muestra
mixta.

• Preparación del Medio de Cultivo: Prepara el medio de cultivo siguiendo

las instrucciones específicas del fabricante. Vierte el medio estéril en las
placas de Petri y deja que se solidifique.
• Estriado en Placa: Estériliza el asa de siembra pasándola por la llama del
mechero Bunsen hasta que esté al rojo vivo. Deja que el asa se enfríe
durante unos segundos tocando la superficie del agar en un área no
contaminada de la placa. Toma una pequeña cantidad de la muestra
bacteriana mixta con el asa de siembra.
• Abre la placa de agar y realiza movimientos de estriado sobre la superficie
del agar, distribuyendo uniformemente la muestra en un sector de la placa.
Repite este procedimiento con una nueva área del agar, utilizando siempre
la misma asa de siembra esterilizada. Cierra la placa de agar y etiquétala
adecuadamente con la muestra y la fecha.
• Incubación: Coloca las placas en una incubadora a la temperatura y
condiciones adecuadas para el crecimiento bacteriano. La temperatura y
el tiempo de incubación variarán según las bacterias que estés cultivando.
• Análisis y Selección de Colonias: Después de la incubación, observa las
placas para verificar el crecimiento bacteriano. Las colonias individuales
deberían haber crecido a partir de las bacterias de la muestra
mixta.Selecciona una colonia individual y utiliza el asa de siembra para
transferirla a un medio de cultivo fresco para obtener un cultivo puro. Repite
este proceso para cada colonia que desees aislar.

14
 • Identificación y Caracterización: Una vez que tengas cultivos puros,
puedes realizar pruebas bioquímicas, moleculares o de otro tipo para
identificar y caracterizar las bacterias presentes en las colonias.

5.3. Procedimiento
Tabla 5.2. Preparación de Agares.

PREPARACIÓN DE AGARES
Agar Manitol Salado (300
ml):
Suspender 33.30 g del
polvo en 300 ml de agua
destilada. Reposar 5
minutos y calentar con
agitación frecuente,
llevando a ebullición
durante 1 o 2 minutos para
PROCEDIMIENTO 1
disolución total (sin
grumos). Esterilizar en
autoclave a 121°C durante
15 minutos. En la práctica
colocar en Baño María para
mantenerlo líquido. Se
distribuirá en las placas de
Petri estériles en la
práctica.
Agar EMB (300ml):
Suspender 10.80 g del
polvo en 300 ml de agua
destilada. Reposar 5
minutos. Calentar con
agitación frecuente y llevar
a ebullición hasta su
disolución total. Esterilizar
PROCEDIMIENTO 2 en autoclave a 121°C
durante 15 minutos. En la
práctica colocar en Baño
María para mantenerlo
líquido. Se distribuirá en las
placas de Petri estériles en
la práctica.

15
 Agar ENDO (300 ml)
(Verificar en Etiqueta la
preparación):
Suspender 12,5 g del polvo
deshidratado en 300 ml de
agua destilada. Agregar 6
ml de etanol al 95%.
Mezclar vigorosamente.
Calentar agitando
frecuentemente y dejar
PROCEDIMIENTO 3 hervir durante 1 minuto
para disolver
completamente los
ingredientes. Esterilizar a
121°C durante 15 minutos.
Dejar enfriar a 45-50°C. En
la práctica colocar en Baño
María para mantenerlo
líquido. Se distribuirá en las
placas de Petri estériles en
la práctica.
Agar Nutritivo (300 ml):
Suspender 9.3 g del polvo
en 300 ml. de agua
purificada. Mezclar y dejar
reposar 5 minutos. Calentar
agitando frecuentemente y
hervir 1 o 2 minutos hasta
su disolución total.
PROCEDIMIENTO 4
Esterilizar en autoclave a
121°C durante 15 minutos.
En la práctica colocar en
Baño María para
mantenerlo líquido. Se
distribuirá en las placas de
Petri estériles en la
práctica.
Agar KF para
Estreptococos (300 ml):
Se distribuirá en las placas
de Petri estériles en la
práctica.

PROCEDIMIENTO 5

16
 Tabla 5.3. Siembra por agotamiento en medios selectivos y diferenciales.

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO EN MEDIOS SELECTIVOS Y

DIFERENCIALES.
Preparar el sitio de siembra
en condiciones asépticas.
Prender el mechero. Tomar
con una mano el tubo de
ensayo conteniendo el
cultivo puro y en la otra
mano el asa de siembra. Se
esteriliza (rojo
PROCEDIMIENTO 1 incandescente) y enfría el
asa de siembra. Se abre el
tubo de ensayo y con un
movimiento suave se toma
un inóculo. Debe quedar
una película liquida en el
extremo del aro (alambre de
nicrom).

Se cierra el tubo de ensayo

y se abre la placa con medio
selectivo estéril pasando el
asa sobre el medio de
cultivo, realizando un
estriado sobre la primera
zona de siembra en un
extremo de la placa. Se
cierra la placa, se esteriliza
PROCEDIMIENTO 2 y enfría el asa nuevamente.
Esta vez sin tomar más
muestra del tubo de ensayo
se pasa el asa estéril
tocando una sola vez la
zona demarcada
anteriormente y se realiza
un estriado simple. Se repite
el procedimiento hasta
marcar cuatro zonas.
Se incuba a la temperatura
de 35-37°C x 24 hrs.

PROCEDIMIENTO 3

17
VI. RESULTADOS
Tabla 6.1. Crecimiento de cultivos en los distinto agares

AGARES
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°01
mínimo crecimiento crecimiento mínimo mínimo
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°02
mínimo crecimiento crecimiento mínimo mínimo
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°03
regular crecimiento crecimiento mínimo excesivo
Crecimiento Crecimiento No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°04 regular de gran crecimiento mínimo excesivo
relieve
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°05
mínimo crecimiento crecimiento mínimo mínimo
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
C N°06 crecimiento crecimiento mínimo mínimo
mínimo
Presencias No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
de algunas crecimiento crecimiento mínimo mínimo
C N°07
manchas
amarillas
Presencia Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento
de una mínimo crecimiento crecimiento regular
C N°08
mancha
amarilla
Presencia Crecimiento No hubo Presencia Crecimiento
C N°09 mínima de mínimo crecimiento mínima de regular
colonias colonias
Crecimiento No hubo No hubo Crecimiento Crecimiento
BOCA regular crecimiento crecimiento regular regular
Crecimiento Crecimiento No hubo Crecimiento Crecimiento
MANO Regular en una parte crecimiento mínimo excesivo
especifica

Tabla 6.2. Imágenes de los agares con cultivo N°01.

COLONIA N°01
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

18
 Tabla 6.3. Imágenes de los agares con cultivo N°02.

COLONIA N°02
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.4. Imágenes de los agares con cultivo N°03.

COLONIA N°03
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.5. Imágenes de los agares con cultivo N°04.

COLONIA N°04
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.6. Imágenes de los agares con cultivo N°05

COLONIA N°05
MANITOL
EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

19
 Tabla 6.7. Imágenes de los agares con cultivo N°06

COLONIA N°06
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.8. Imágenes de los agares con cultivo N°07

COLONIA N°07
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.9. Imágenes de los agares con cultivo N°08

COLONIA N°08
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.10. Imágenes de los agares con cultivo N°09

COLONIA N°09
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

20
 Tabla 6.11. Imágenes de los agares con cultivo de la boca.

BOCA
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

Tabla 6.12. Imágenes de los agares con el cultivo de la mano.

MANO
MANITOL EMB ENDO KF NUTRITIVO
SALADO

VII. DISCUSION DE RESULTADOS

• En el Agar Endo no se presentó crecimiento de ninguna colonia.
• En el agar de manitol salado y en el nutritivo hubo crecimiento en todas las
colonias, que son agares que suelen creer todo tipo de bacterias.
• En el agar de Eosina azul de metileno (EMB) solo presento crecimiento en
las colonias de número 4, 8 y 9 como también en la muestra de la mano lo
cual significa que tienen presencia de bacterias coliformes fecales y totales
• La calidad de la muestra puede influir en los resultados finales, además del
medio donde elaboraron.
• En el agar KF la mayoría de las muestras se presentó un crecimiento
mínimo de colonias esto se debe ya que tuvimos una equivocación a la
hora de pasar las muestras de medios líquidos a solidos lo cual pude ser
un factor por lo cual las muestras presentaron crecimiento mínimo.
• Se logro el aislamiento de colonias individuales en algunos casos.

21
 • En el método de estriado el cual es crucial para encontrar colonias aisladas
se logró en algunas placas, esto se debe a la falta de experiencia de los
estudiantes
• En el Agar EMB del cultivo número cuatro se presentó un crecimiento
exuberante, lo cual pude ser índice de contaminación.
• El rayado de la “técnica por estría” debe ser suave, y no ser tosco, ya que
puede quemar los nutrientes debido a que el asa de siembra no se enfrió
correctamente

VIII. CONCLUSIONES
• La elección adecuada del medio de cultivo es crucial para favorecer el
crecimiento selectivo de ciertos microorganismos mientras se inhibe el
crecimiento de otros. Los medios selectivos y diferenciales utilizados en
este laboratorio, como el agar Manitol Salado, el agar EMB y el agar Endo,
están formulados específicamente para este propósito.
• La observación de las características morfológicas de las colonias
bacterianas, como su forma, tamaño, color, textura y patrón de
crecimiento, es esencial para la identificación preliminar de las especies
bacterianas presentes en el cultivo.
• Para notar la morfología de las células bacterianas debe dejar incubar al
menos 48 horas para que se hagan visibles.
• La técnica del estriado en placa permite obtener cultivos puros a partir de
muestras que originalmente contienen una mezcla de microorganismos.
• Los microorganismos pueden presentar diferencias morfológicas al ser
sembrados en diferentes medios debido a las diferentes composiciones de
los medios selectivos y diferenciales utilizados.
• Se observo que en el Agar ENDO no hubo crecimiento bacteriano en
ninguna de las placas Petri.
• En el medio Agar nutritivo se encontraron rastro de crecimiento bacteriano.

IX. RECOMENDACIONES
• Esterilizar el área en donde se va a desarrollar el trabajo para evitar
contaminantes en la muestra.
• Realizar la siembra de la colonia cerca de un mechero para disminuir la
probabilidad de contaminación.

22
 • Flamear el asa de inoculación y hacer girar la caja de Petri un cuarto de
vuelta. Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la
superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas.
• Después de la siembra, coloca las placas en una incubadora a la
temperatura y condiciones adecuadas para el crecimiento del
microorganismo. Esto puede incluir la temperatura, la humedad y la
atmósfera requerida.
• Elige un medio de cultivo adecuado para el microorganismo que deseas
cultivar. Puede consultar la literatura científica o las bases de datos
especializados para obtener información sobre los medios de cultivo
recomendados. Existe la posibilidad de que ni siquiera crezca en algunos
medios de cultivo.

X. CUESTIONARIO
1. ¿Por qué deben realizarse varios pases de una colonia antes de su
identificación?

La realización de varios pases de una colonia de microorganismos antes de su

identificación se debe principalmente a las siguientes razones principales:

• Obtención de una muestra representativa: Las colonias bacterianas

pueden ser heterogéneas, lo que significa que dentro de una misma
colonia puede haber diferentes tipos de bacterias. Realizar varios pases
asegura que la muestra sea más representativa de la población bacteriana
presente en la muestra original.
• Reducción de contaminantes: Al realizar varios pases, se pueden eliminar
contaminantes que podrían haberse introducido durante el proceso de
cultivo, manipulación o identificación. Esto es especialmente importante en
laboratorios donde se trabaja con muestras ambientales o clínicas, donde
es común encontrar una diversidad de microorganismos.
• Aislamiento de colonias puras: El objetivo final de realizar varios pases es
obtener una colonia pura, es decir, una población bacteriana compuesta
por un solo tipo de microorganismo. Esto facilita enormemente la
identificación precisa del microorganismo en cuestión, ya sea mediante
técnicas de tinción, bioquímicas o moleculares.

23
 • Repetibilidad y validación de resultados: Al repetir el proceso de pases
varias veces, se puede verificar la consistencia de los resultados
obtenidos. Si diferentes pasajes producen colonias con características
similares, aumenta la confianza en la identificación final del
microorganismo.
2. ¿Por qué los microorganismos presentan diferencias morfológicas al
ser sembradas en diferentes medios, teniendo en cuenta los medios
que sembró cada grupo?

Los microorganismos pueden presentar diferencias morfológicas al ser

sembrados en diferentes medios, debido a varios factores:

• Composición del medio: Cada medio de cultivo tiene una composición

específica que proporciona los nutrientes necesarios para el crecimiento
de ciertos tipos de microorganismos. Por ejemplo, algunos medios pueden
contener carbohidratos, proteínas, sales minerales, o factores de
crecimiento que favorecen el crecimiento de ciertas especies bacterianas
sobre otras.
• Condiciones de pH y temperatura: Los microorganismos tienen
requerimientos específicos de pH y temperatura para su crecimiento
óptimo. Los medios de cultivo pueden variar en estos parámetros, lo que
afecta la capacidad de crecimiento y la morfología de los microorganismos.
• Presencia de inhibidores o selectores: Algunos medios de cultivo contienen
inhibidores que reprimen el crecimiento de ciertos microorganismos
mientras permiten el crecimiento de otros. Esto puede influir en la
morfología de las colonias que se desarrollan en el medio.
• Disponibilidad de oxígeno: La disponibilidad de oxígeno en el medio de
cultivo puede variar dependiendo de si es aeróbico, anaeróbico o
microaerofílico. Esto puede influir en el tipo de microorganismos que
prosperan y en su morfología.
• Factores genéticos y adaptativos: Los microorganismos pueden tener
adaptaciones genéticas que les permiten crecer mejor en ciertos medios o
condiciones ambientales. Estas adaptaciones pueden influir en la
morfología de las colonias que se forman.

24
XI. FUENTES DE INFORMACIÓN
1. Introduccion. (s. f.). https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-2-
introduccion.htm
2. Biológica, C. (2023, 18 noviembre). Morfología bacteriana. Comunidad
Biológica. https://comunidad-biologica.com/morfologia-bacteriana/
3. Prácticas de microbiología. (s.f.).
https://fiestadelosmicroorganismos.wordpress.com/2016/12/14/practica-7-
diferentes-tecnicas-de-siembra-siembra-por-agotamiento-y-estria-
multiple/
4. Marcelo Fress. (2016, 26 de junio). Sembrar muestras para cultivo.
https://sintesis.med.uchile.cl/procedimientos-diagnosticos-y-
terapeuticos/procedimientos-enfermedades-infecciosas/11548-sembrar-
muestras-para-cultivo
5. Artedinamico. (s. f.). "TÉCNICAS BÁSICAS PARA EL CULTIVO DE
MICROORGANISMOS: SIEMBRA y ESTUDIO DE BACTERIAS Equipos
y Laboratorio de Colombia.
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/tEcnicas-
bAsicas-para-el-cultivo-de-microorganismos:-siembra-y-estudio-de-
bacterias.
6. SIEMBRA, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE
MICROORGANISMOS. (s. f.). Corporación Biológica.
https://corporacionbiologica.info/wp-content/uploads/2020/11/2020-TP2-
BIOQ-Y-LCTA77.pdf.
7. Microbial Culture Media preparation. (s. f.).
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testing/microbial-culture-media-preparation

25
XII. ANEXOS
Anexo 1: Placas Petri sembradas.

Anexo 2: Técnica de aislamiento por estría en superficie.

26
XIII. APÉNDICE
13.1. Diagrama de flujo
• Siembra por agotamiento en medios selectivos y diferenciales

27
13.2. Datos originales y observaciones
Tabla 13.1. Características en los medios de cultivos

MEDIOS DE CULTIVO CARACTERÍSTICAS

➢ Medio de cultivo deshidratado: color
beige claro, homogéneo, libre
deslizamiento.
➢ Medio de cultivo preparado: Color
ámbar claro, ligeramente opalescente.
➢ Las características del producto
pueden alterarse si no se conserva
apropiadamente.
AGAR NUTRITIVO
➢ En este medio crecerán
microorganismos de la familia
Enterobactenácea y una diversidad de
otros bacilos Gram-negativos.
➢ El agar Endo no Inhibe completamente
las bacterias Gram-positivas como
enterococos o estafilococos y ni las
levaduras.
AGAR ENDO
➢ La alta concentración de cloruro de
sodio resulta en una inhibición total o
parcial de microorganismos no
pertenecientes a los Staphylococcus.
➢ Las bacterias que crecen en un medio
con alta concentración de sal y
fermentan el manitol, producen ácidos,
con lo que se modifica el pH del medio
y vira el indicador de pH del color rojo
AGAR MANITOL SALADO al amarillo.
➢ Las colonias de lactosa fermentadoras
pueden ser de color rosa o morado
oscuro, mientras que las no
fermentadoras pueden aparecer
incoloras o transparentes.
➢ El Agar EMB contiene cristal violeta y
eosina, que inhiben el crecimiento de
bacterias grampositivas y favorecen el
crecimiento de bacterias
AGAR EMB gramnegativas.
➢ Observa cualquier cambio en el color
del indicador de pH (rojo de fenol) en el
agar. Las áreas amarillas indican
acidez debido a la fermentación de
carbohidratos, mientras que las áreas
rojas indican alcalinidad debido a la
desaminación de aminoácidos.

AGAR KF

28
 13.3. Procedimiento cálculo
Terminada la siembra en los diferentes medios de cultivo, se Incubo y se esperó
a que las colonias crezcan. Pasado el tiempo, se retiraron las placas Petri de la
incubadora y se procedió a describir la morfología celular bacteriana de los
cultivos formados.

13.4. Datos calculados

Tabla 13.2. Observaciones en los diferentes medios de cultivo.

MEDIOS DE CULTIVO OBSERVACIONES

➢ En todas las muestras se observó
crecimiento, ya que es un medio
general que admite el crecimiento de
AGAR NUTRITIVO
una amplia gama de
microorganismos.

➢ La muestra no se inoculó
correctamente en el medio de agar o
la cantidad de microorganismos
presentes en la muestra era
demasiado baja, podría no haber
crecimiento visible en el agar Endo
AGAR ENDO por eso.
➢ Por otro lado, se puede llegar a la
conclusión de que las bacterias
coliformes no están presentes en la
muestra o su concentración es
demasiado baja.

➢ Las muestras extraídas de la colonia

n°09, boca y mano produjo un cambio
en el color del medio de agar manitol
salado, es probable que esto haya
AGAR MANITOL SALADO sido causado por la presencia de
bacterias capaces de fermentar el
manitol, como Staphylococcus aureus
u otras bacterias halófilas.

➢ Las colonias de color morado y

rosado que se observa en el medio
de agar EMB sugieren la presencia
AGAR EMB de bacterias capaces de fermentar la
lactosa y producir ácido láctico como
producto de fermentación.

➢ Se observa que en casi todas las

placas Petri hubo crecimiento, esto se
debe a que no es un medio de cultivo
AGAR KF
altamente selectivo como algunos
otros medios específicos.

29
30