15/11/23 Candela Muñoz Cruzado
1ºLAYCCT-Ensayos microbiológicos
Informe Práctica 5. Siembra y aislamiento
Nombre: Candela Muñoz Cruzado
Curso: 1ºLAYCCT
Fecha: 15/11/23
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Índice
Informe Práctica 5. Siembra y aislamiento..............................................................1
⚜Objetivo del ensayo................................................................................................ 3
⚜Fundamentos.......................................................................................................... 4
⚜Materiales................................................................................................................ 6
⚜Identificación, toma y preparación de la muestra............................................... 7
⚜Procedimiento razonado del ensayo.................................................................... 8
⚜Datos obtenidos durante la experiencia......................................................................... 10
⚜Conclusiones.....................................................................................................................13
⚜Descontaminación y limpieza.......................................................................................... 16
⚜Observaciones...................................................................................................................17
⚜Bibliografía.........................................................................................................................18
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⚜Objetivo del ensayo
1. Conocer los diferentes medios de cultivo.
2. Comprobar el crecimiento de los diferentes microorganismos.
3. Comprobar la importancia de lavarse las manos para evitar contraer enfermedades
producidas por microorganismos.
4. Obtener colonias aisladas a partir de una mezcla bacteriana mediante diferentes
técnicas de siembra.
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⚜Fundamentos
○ Siembra
- Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en
un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.
○ Tipos de siembra (placa)
- Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.
- Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la
capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
- Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido,
se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una
espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de
cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.
- Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se
deja solidificar.
- Siembra volumétrica: Este método de siembra consiste en sembrar una muestra
líquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o
líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de
Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala
de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el
hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen
que será sembrado.
- Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la
espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra líquida se esparce con la
espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiendo un
movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo
grueso embebido de un cultivo líquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.
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○ Técnicas de cultivo en placa:
- Técnica de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa
de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre
la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri . Conforme se van haciendo
estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han
realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de
medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células
individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las
células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias
visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula,
no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han
originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un
cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la
primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad,
cultivos axénicos.
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⚜Materiales
placa petri tubos de ensayo asa siembra
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⚜Identificación, toma y preparación de la muestra
La muestra que usamos es un tubo proporcionado por la profesora de E. coli y serratia.
Para la preparación se pone en el vortex para agitar antes de usar.
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⚜Procedimiento razonado del ensayo
Antes de todo se mete en el autoclave los tubos con agar y caldo nutritivo, 121º 15 min.
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Después de hacer la siembra se meten los tubos y las placas en la estufa. Los tubos se dejan
un día más para otra práctica.
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⚜Datos obtenidos durante la experiencia
Como se ve en la imagen, esta es la
siembra continua de [Link].
Esta es la estría en T, de [Link] ve
la colonia muy grande por ser [Link].
Esta es la estría en cuadrante, se ve
solo una colonia , en el 1 cuadrante.
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Esta es la siembra en tubo inclinado,
de [Link], se ve bastante bien la
colonia.
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⚜Conclusiones
En la siembra continua, cogí
demasiada cantidad y por eso no hay
tantas colonias aisladas. Aún así lo
rodeado de rojo son algunas colonias
aisladas.
En la siembra en T, hay aislamiento
en la zona 1, pero la estría debí
hacerla mejor, ya que se dobló un
poco en la zona 2-3.
En la siembra por cuadrante, hinque el
asa en el medio de cultivo y además
no esperé lo suficiente y me cargué la
E. coli.
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En el tubo inclinado si cogí bien de
cantidad, y hay aislamiento, por lo
que me salió mejor.
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En el tubo líquido si hay crecimiento
aunque no se aprecia en la imagen.
En el tubo sólido por hilo de siembra,
esperé mucha al introducirlo y por eso
sale difuminado, por tanto no salió
bien.
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⚜Descontaminación y limpieza
Para la descontaminación y limpieza primero las placas se desechan al contenedor de
residuos biológicos, y la bolsa entera de placas va al autoclave 121º y 15min para después
tirarlas al contenedor de residuos sólidos urbanos. Los tubos no se desecharon ya que los
dejamos para otra prá[Link] importante siempre al acabar de hacer la práctica lavarse las
manos con jabón y después echarse gel hidro alcohólico.
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⚜Observaciones
Hay que tener en cuenta que según de donde proceda la toma de muestra habrá que coger más
o menos, en el caso de la [Link] había que coger poca muestra ya que las colonias salen muy
grandes, sin embargo de la serratia no salen tan grandes.
A la hora de flamear tubos y tapones es importante hacerlo con ayuda o dejarlo muy cerca del
mechero bunsen. También hay que retirar bien el agua de condensación porque si no puede
salir mal la siembra o contaminarse.
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⚜Bibliografía
💻 [Link]
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