CONTAMINACIÓN AMBIENTAL Y
ECOTOXICOLOGÍA
INFORME: BIOENSAYO
DE TOXICIDAD
ESTUDIANTES: FLORENCIA ACUÑA.
CAMILA BAGÜES.
ROCIO DIP.
PROFESORA: MARTA LEIVA
-2023-
INTRODUCCIÓN
El uso de agroquímicos como los pesticidas, plaguicidas o biocidas, que son
sustancias destinadas a combatir plagas de todo tipo, esto es, especies indeseadas
de plantas o animales, podría introducir un factor de contaminación en el suelo y en el
agua afectando a la salud humana, y a la producción de alimentos o productos
agrícolas.
En el presente bioensayo se evaluó la fitotoxicidad de un biocida, conocido
como cipermetrina, un insecticida sintético y no volátil, en la germinación de las
semillas de Lactuca sativa (lechuga).
La cipermetrina actúa por contacto o ingestión de los insectos. Uno de sus
principales usos se da en la agricultura, para proteger diferentes tipos de cultivos.
También resulta de mucha utilidad en los hogares, ya que controla a los mosquitos,
moscas, cucarachas, pulgas y garrapatas. Sin embargo hay que tener precaución al
usarla, porque aunque esté aprobado por S.E.N.A.S.A con el N° 00268, su toxicidad
es moderadamente peligrosa.
Durante el período de germinación y los primeros días de desarrollo de la
plántula, ocurren numerosos procesos fisiológicos en los que la presencia de una
sustancia tóxica puede interferir en la supervivencia y el desarrollo normal de la planta.
Por esta razón, la germinación es una etapa de gran sensibilidad frente a factores
externos adversos (Sobrero y Ronco 2008). Así, la inhibición en la elongación de la
radícula y el hipocotilo constituyen indicadores subletales muy sensibles y
especialmente para la evaluación de efectos biológicos en la germinación de semillas
de Lactuca sativa (lechuga).
Los bioensayos de germinación constituyen un método rápido, económico y
práctico para determinar la fitotoxicidad. Se basan en la reducción del porcentaje de
germinación y/o del crecimiento de la radícula y del hipocotilo, que experimenta la
plántula al ser sometida a diferentes soluciones con el insecticida. Además, permite
calcular la concentración de la sustancia que provoca una reducción del 50% (CE50)
en la elongación de la raíz con respecto al testigo.
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OBJETIVO
Evaluar los efectos fitotóxicos del insecticida de uso doméstico Cipermetrina,
durante el proceso de germinación de las semillas de Lactuca sativa. En las primeras
120 horas de crecimiento.
MATERIALES Y MÉTODOS
300 Semillas de Lactuca sativa (cualquier variedad) 15 potes con tapa de 1 kg de capacidad
obtenidas bajo la producción agroecológica
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15 servilletas de papel que servirán como sustrato de Insecticida Cipermetrina
germinación
Agua corriente Probeta Graduada
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Vaso de precipitado Varillas de vidrio
Pinzas Pipetas Pasteur
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Placas de Petri Marcadores
DESARROLLO DEL BIOENSAYO
Como paso previo se realizaron actividades de higiene como lavado de manos
de todas las operarias y desinfección de mesadas, potes y tapas plásticas con alcohol
70° para disminuir la probabilidad de proliferación de hongos en las semillas. Luego
se prepararon 5 diluciones de cipermetrina denominados tratamientos. Por cada
tratamiento se destinaron tres potes (repeticiones) etiquetados con su respectiva
solución (control y las diluciones).
Para preparar las soluciones se empleó el siguiente cuadro:
Tratamiento
Cipermetrina (ml) Agua corriente (ml)
(% de dilución)
Control - 100ml
5% 5ml 95ml
25% 25ml 75ml
50% 50ml 50ml
75% 75ml 25ml
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Se colocaron las servilletas de papel dobladas en 2, sobre las tapas plásticas
apoyadas hacia abajo. Cada servilleta se humedeció con su correspondiente solución
empleando las pipetas pasteur.
Utilizando pinzas se añadieron 20 semillas sobre cada servilleta y se hidrataron
las semillas con su respectiva disolución.
Finalizado este paso las tapas se cerraron con sus recipientes. Estos se usarán
como mini-invernaderos para la germinación.
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La incubación se lleva a cabo por 120 horas, pasadas las cuales se levantan y
procesan los datos.
TOMA DE DATOS
Para determinar el grado de inhibición en la germinación y crecimiento de las
semillas de lechuga. Se procedió a tomar la medición de longitud del hipocotilo y la
radícula de cada individuo.
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METODOLOGÍA
Para efectuar el procesamiento de los datos y las comparaciones adecuadas,
se trabajó con los promedios de las longitudes de la radícula y del hipocotilo, y el
promedio de las semillas germinadas y no germinadas discriminadas por tratamiento.
Además se empleó el porcentaje de la germinación relativa de semillas (GRS), el
crecimiento relativo de la radícula (CRR) y el índice de germinación (IG) de acuerdo
con Rodriguez Romero et al. (2014), mediante las siguientes expresiones:
Porcentaje de germinación relativa de semillas (GRS)
El GRS representa el porcentaje de semillas germinadas que contienen las
distintas concentraciones de biocida (Tratamientos 5%, 25%, 50% y 75%) con
respecto a aquellas germinadas en el Control.
Crecimiento relativo de la radícula (CRR)
El CRR representa el porcentaje de crecimiento de la radícula de las semillas
expuestas a los distintos tratamientos con respecto a aquellas del lote testigo.
Índice de germinación (IG)
El IG representa el producto de la germinación relativa de las semillas por el
crecimiento relativo de la radícula. Constituye un indicador de la interacción de los
factores que promueven o inhiben la germinación, así como de los respectivos
factores que favorecen o impiden el crecimiento de la radícula. Este índice expresa
tanto el porcentaje de semillas germinadas como el porcentaje de crecimiento que
alcanza la radícula durante el bioensayo.
Como cálculo adicional se decidió agregar el Crecimiento Relativo de la
Plántula (CRP) que representa el porcentaje de crecimiento de la plántula de las
semillas expuestas a los distintos tratamientos con respecto a aquellas del Control.
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RESULTADOS
Para el registro de los datos se confeccionó el siguiente cuadro:
Tratamiento Germinadas No Germinadas
Control 19 0
Control 19 1
Control 19 1
5% 20 0
5% 20 0
5% 20 0
25% 20 0
25% 20 0
25% 21 0
50% 19 1
50% 20 0
50% 20 0
75% 14 6
75% 16 4
75% 19 1
Tabla 1: Números de semillas germinadas y no germinadas de distintos tratamientos por
triplicado.
Como se puede observar el Tratamiento Control tuvo dos semillas que no
germinaron, además debemos aclarar que en una de las repeticiones se tuvo un error
de conteo y en lugar de tener veinte semillas, solo se colocaron diecinueve.
Gráfico 1: Semillas germinadas y no germinadas por cada tratamiento por triplicado.
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Para el tratamiento de los datos, se optó por trabajar sin tener en cuenta las
repeticiones, por lo que se presenta a continuación la Tabla 2 y Gráfico 2 con el total
de los datos analizados.
Total de germinación
Tratamiento Germinadas No Germinadas % germinación
Control 57 2 96,6
5% 60 0 100
25% 61 0 100
50% 59 1 98,3
75% 49 11 81,7
Tabla 2: Número total de semillas germinadas y no germinadas por cada
tratamiento y porcentaje de germinación.
En la presente tabla se puede observar el porcentaje de germinación por cada
tratamiento. Como ya se explicó anteriormente, el error de conteo y las semillas no
germinadas del Control, afectó al porcentaje esperado del mismo, que se estimaba
que fuera del 100%. La germinación del Control fue de 96,6%.
Por otra parte se observa una disminución abrupta de la germinación en el
Tratamiento de 75% (81,7%) lo que se corresponde con los resultados esperados.
En el siguiente gráfico se puede ver un resumen visual de las semillas
germinadas y no germinadas.
Gráfico 2: Número total de semillas germinadas y no germinadas por tratamiento.
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Al medir la longitud del hipocotilo y la radícula de cada individuo, se calculó el
promedio por cada grupo de Tratamiento, obteniéndose los siguientes resultados que
pueden observarse en la Tabla 3.
Promedio de crecimiento
Tratamiento
Raiz Long. (cm) Plántula Long. (cm)
Control 0,93 1,18
5% 0,98 0,79
25% 0,69 0,30
50% 0,54 0,33
75% 0,37 0,21
Tabla 3: Promedio del crecimiento de la raíz y el hipocotilo por cada tratamiento.
A continuación se presentan el Gráfico 3 y Gráfico 4 donde se podrá visualizar
de mejor manera los resultados presentados en la tabla anterior.
Gráfico 3: Promedio de la longitud de la raíz (cm) por cada tratamiento.
Como puede observarse en el Gráfico 3, hay un pequeño incremento de la
longitud de la raíz (de 0,93 a 0,98 cm) en el Tratamiento de 5% con respecto al
Tratamiento Control. Pero en los siguientes puntos se ve una clara disminución de
tamaño de las mismas. Además se pudo contemplar que los pelos absorbentes de
las raíces iban desapareciendo conforme iba aumentando la concentración de
Cipermetrina.
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Gráfico 4: Promedio de la longitud del hipocótilo (cm) por cada tratamiento.
En el Gráfico 4, podemos apreciar cómo se va comprometiendo el crecimiento
de la plántula a medida que aumenta la concentración del biocida. Existe una
diferencia de 0,39 cm entre el tratamiento Control y el de 5%, y hay una caída aún
mayor (0,49 cm) entre el tratamiento 5% y el 25%.
La pendiente decreciente del gráfico, corresponden a la teoría de que el biocida
Cipermetrina afecta al crecimiento de la plántula de lechuga.
En la Tabla 4 se presentan los resultados de los porcentajes de, germinación
relativa de semillas, del crecimiento relativo de la radícula, del crecimiento relativo de
la plántula (CRP) y del Índice de germinación.
Tratamiento GRS(%) CRR(%) CRP(%) IG(%)
5% 105,3 105,1 66,5 110,7
25% 105,3 74,0 25,3 77,9
50% 103,5 58,4 27,8 60,4
75% 86,0 39,2 18,1 33,7
Tabla 4: Porcentaje de GRS, CRR, CRP y IG por cada tratamiento.
Los resultados de GRS de los tratamientos 5%, 25% y 50% dieron por encima
del 100% porque como se aclaró anteriormente 2 de las semillas del Control no
germinaron y uno de las repeticiones contó con diecinueve semillas. Mientras que el
tratamiento 75% presenta una disminución de 14% de la germinación.
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Con respecto al CRR, el tratamiento 5% presenta un leve aumento con
respecto al Control (100%) porque el promedio de longitudes era superior. Las
siguientes concentraciones presentaron un crecimiento de la radícula inferior al
control, siendo las semillas más afectadas correspondientes al tratamiento de 75% de
concentración (39,2%).
Los resultados obtenidos del Índice de germinación (IG) muestran que el
tratamiento 75% presentó el IG más bajo (33,7%), mientras que los demás
Tratamientos obtuvieron valores superiores a 60%. El tratamiento del 5% resultó tener
un IG superior al 100% por tener un promedio de longitud de radícula superior al
Control y un mayor porcentaje de germinación. Para el cálculo del Índice de
Germinación no se tuvo en cuenta el Crecimiento Relativo de la Plántula (CRP).
CONCLUSIONES
En conclusión se puede decir que el insecticida (cipermetrina) tuvo un gran
efecto adverso sobre el desarrollo de las plántulas de Lactuca sativa. Ya que se
evidencio la disminución de las longitudes de las raíces y del hipocotilo. Así también
como la inhibición de los pelos radiculares de los distintos tratamientos con respecto
al control.
Además se puede destacar que en los tratamientos con mayor concentración
del insecticida (50% y 75%) fue mayor la cantidad de semillas que no germinaron en
comparación con el testigo aunque de este sólo hubo dos semillas que no germinaron.
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ANEXO
Evolución de la inhibición del desarrollo
de la plántula de lechuga a medida que
aumentaba la concentración del
insecticida.
(de izquierda a derecha, corresponde a
control, 5%, 25%, 50% y 75%)
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BIBLIOGRAFÍA
https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0188-
49992014000300007
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