INFORME:
Cuantificación Colorimétrica de la Concentración
CAMILA ALEXANDRA ROJAS SIERRA
ANA SOFÍA VEGA RESTREPO
Datos, cálculos y resultados:
1. Preparación de diluciones de azul de metileno:
Para calcular el volumen necesario de solución stock para obtener las diferentes concentraciones
de azul de metileno :
C 1 ×V 1=C 2× V 2
C 2 ×V 2
V 1=
C1
Por ejemplo, para obtener una concentración de 8 ppm:
8 ppm ×10 ml
V 1=
10 ppm
V 1=8 ppm
Tabla 1. Volumen y concentración de las diluciones.
Concentración inicial Volumen inicial Concentración final Volumen final
ppm (mg/L) ppm (mg/L)
mL ml
10 10
9 9
8 8
7 7
6 6
10 ppm 5 5 10 ml
4 4
3 3
2 2
1 1
0.5 0.5
En la presente tabla se muestra la concentración inicial de la solución stock 10 ppm, de la cual se
realizaron diluciones con el propósito de obtener diferentes concentraciones de azul de metileno
en un volumen final de 10 ml.
Tabla 2. Longitud de onda y absorción en una disolución de azul de metileno
Gráfico 1. Curva de distribución espectral
Como se evidencia en la gráfica, la longitud de onda donde la absorción es
mayor en el caso del azul de metileno es en 660 nm, donde se tiene una
absorción de 0,885. Además, a partir de este punto se evidencia en la gráfica
que la absorción empieza a disminuir. Por tal motivo, para calcular la
absorbancia de las diluciones se empleó una longitud de onda de 660 nm.
2. Realización del gráfico de concentración vs absorbancia del azul de metileno
Tabla 2. Absorbancia obtenida en cada concentración
Concentración ppm (mg/L) Absorbancia
10 1,642
9 1,495
8 1,402
7 1,36
6 1,053
5 0,894
4 0,947
3 0,654
2 0,548
1 0,238
0,5 0,106
Muestra problema 0,555
Gráfico: Curva de calibración del azul de metileno.
3. Hallar la concentración de azul de metileno en la muestra problema
y=0,1556 x+ 0,1549
Y −0,1549
X=
0,1556
0,555−0,1549
X=
0,1556
X =2,571 ppm de azul de metileno
Para hallar la concentración de azul de metileno en la muestra problema se utiliza la ecuación
calculada en la curva de calibración, en la cual se obtuvo la recta: y=0,1556 x + 0,1549, donde y
corresponde a la absorbancia y x a la concentración. Se hace el respectivo despeje, sabiendo que la
absorbancia es 0,555.
Gráfico 3: Muestra problema en la curva de calibración.
4. Cálculo de la absortividad molar del azul de metileno
A=ε ×b × C
Y =mx+b
m=ε
Convertir ppm a Molaridad:
- Para el caso de una disolución con una concentración de 10 ppm:
10 mg C 16 H 18 ClN 3 S
10 , 0 ppm=
1 L solución
10 mgC 16 H 18 ClN 3 S
× ( 0 ,01 L )=0 , 1 mgC 16 H 18 ClN 3 S
1 L solución
1 g C 16 H 18 ClN 3 S 1 mol C 16 H 18 ClN 3 S
0 , 1 mgC 16 H 18 ClN 3 S × ×
1000 mg C 16 H 18 ClN 3 S 319.85 gC 16 H 18 ClN 3 S
¿ 3.126 x 10−7 moles C 16 H 18 ClN 3 S
3.126 x 10−7 moles C 16 H 18 ClN 3 S
M= =3.126 x 10−7 M
1 L solución
Tabla 3. conversión de concentraciones en ppm a Molaridad (M)
Absorbancia Concentración ppm (mg/L) Concentración (M)
1,642 10 3,126X10-7
1,495 9 2,814x10-7
1,402 8 2,501x10-7
1,36 7 2,189x10-7
1,053 6 1,876x10-7
0,894 5 1,563x10-7
0,947 4 1,250x10-7
0,654 3 9,397x10-8
0,548 2 6,253x10-8
0,238 1 3,126x10-8
0,106 0,5 1,563x10-8
Se realizó la conversión de unidades de la concentración de ppm a molaridad, como se mostró
anteriormente.
Gráfico 4: Curva de calibración del azul de metileno con concentraciones molares
ε =a la pendiente de la ecuación
6 l
ε =5 x 10 absortividad molar del azul de metileno a 660 nm
mol x cm
* La comparación estadística del dato no fue posible ya que no se cuenta con ningún valor real
para hacer la respectiva comparación de exactitud.
Análisis de resultados:
Para la preparación de soluciones con diferentes concentraciones de azul de metileno, fue
empleado el concepto de dilución, el cual es un proceso donde aumenta la cantidad de solvente
en la solución, en este caso agua destilada, por lo que ocurre una disminución en la concentración
(disminuye la cantidad de azul de metileno). Además de lo anterior, se aplicó una fórmula que
relaciona en forma de igualdad la concentración y el volumen inicial con la concentración y el
volumen final de una solución, por lo tanto, si se conocen tres valores se puede despejar la
incógnita faltante. En la práctica, se tenía la concentración inicial, y la concentración y volumen
final, por lo que empleando la fórmula se halló el volumen que correspondía al que se debía tomar
de solución stock.
Por otra parte, para realizar la curva de distribución espectral del azul de metileno, se utilizó una
solución con concentración de 5 ppm, a la cual se le midió la cantidad de intensidad de luz
absorbida en diferentes longitudes de onda en un rango de 350-700 nm, con el propósito de
comparar la absorción y determinar en qué longitud de onda el azul de metileno absorbe más
cantidad de luz. Como se evidencia en la gráfica 1, el punto máximo se encuentra a una longitud
de onda de 660 nm, ya que después de este punto la gráfica comienza a descender. Por lo tanto,
se tomó esta longitud de onda para medir la absorbancia de las disoluciones. Esto a su vez,
teniendo en cuenta el espectro visible de la luz, indica que el azul de metileno absorbe longitudes
de onda del color rojo (620-750 nm), y reflejan aquellas asociadas al color azul (450-495 nm). [2]
Una vez obtenidos los valores de concentración y absorbancia (cantidad de luz absorbida por la
solución), es posible realizar la curva de calibración; método que permite relacionar de manera
proporcional la concentración con la absorbancia. Como se observa en el gráfico 2, la relación es
directamente proporcional y la función crece de forma constante y positiva, es decir, a medida que
aumente la concentración de azul de metileno en una solución, aumentará la absorbancia. La recta
de calibrado corresponde al ajuste matemático y que se define por la ecuación y = mx + b, donde y
corresponde a la absorbancia y x a la concentración.
Cabe resaltar que algunos puntos no se encuentran exactamente en la recta, por lo que se calcula
el coeficiente de determinación o (r 2), el cual es un valor que oscila entre 0 -1, y que expresa que,
entre más cercano el valor está de uno, más cercanos están los datos a la recta, mientras que, si el
valor es muy cercano a cero, los valores no se acercan a la recta, y por ende, no es confiable dicha
curva de calibración. En el caso de la práctica, como se observa en el gráfico 2, el coeficiente de
determinación fue de 0,9686, y que al ser un valor muy cercano a uno, se afirma que la curva de
calibración obtenida para el azul de metileno sí es fiable (3).
La ley de Lambert-Beer se cumple particularmente cuando la solución es diluida. Relacionado con
lo mencionado anteriormente, esta ley permite generar la curva de calibración, por lo que está
directamente relacionada con la ecuación que se halla de la curva. Para el cumplimiento de la ley,
es importante tener en cuenta que debido a factores o limitaciones de orden físico, químico o
instrumental es posible encontrar desviaciones.
Con respecto a la concentración de la muestra problema, a partir de la curva de calibración, se
halló la concentración de la muestra problema, pues al medir la absorbancia de la muestra, que en
este caso fue de 0,555, se reemplaza este valor en la ecuación de la curva, y se despeja X, siendo
este resultado el de la concentración de la muestra, el cual da como resultado 2,571 ppm, tal
como se evidencia en el gráfico 3.
Por último, el coeficiente de absortividad molar, ε, depende de cada sustancia química. Para el
azul del metileno, la absortividad molar, también llamada coeficiente de extinción molar se calculó
convirtiendo la concentración expresada en ppm a molaridad, para luego encontrar la curva de
calibración, en la que la pendiente equivale a este coeficiente, y que dio como resultado
6 l
5 x 10 . Este valor indica la capacidad que tiene el azul de metileno para absorber una
mol x cm
determinada onda de luz. Además, con este dato también es posible comparar el azul de metileno
con otras sustancias sin tener en cuenta diferencias de concentración o longitud de la solución. (8)
Finalmente, la importancia de tener el espectrofotómetro calibrado en todo momento de la
práctica radica en que esto permitirá obtener una información mucho más precisa de la medición
del color, pues al tratarse de un instrumento fotosensible, puede presentar variaciones que
afecten los resultados. Para compensar las variaciones graduales del espectrofotómetro, se utiliza
la calibración con una sustancia llamada blanco. (9)
CONSULTAR EN SÍ:
● Investigue qué sustancias pueden actuar como interferentes en la colorimetría.
La interferencia analítica es considerada como la desviación clínicamente significativa en la medida
de la concentración de un constituyente, debido al efecto de otro componente o propiedad de la
muestra, por lo tanto si tenemos varios componentes en una muestra, es probable que la
medición colorimétrica del analito se vea afectada por la presencia de otras sustancias [10].
● Consulte el significado del término “factor de dilución”.
El factor de dilución representa el número de veces que el volumen final en una dilución, es mayor
que el volumen inicial. Esto implica que la concentración final será menor que la inicial en un
factor igual a la dilución. La fórmula que se utiliza para calcular el factor de dilución es
[11]
Conclusiones:
- La ley de Beer-Lambert permite la determinación de concentraciones de disoluciones
problema, a partir de una recta de calibración obtenida de las mediciones de la
absorbancia de las disoluciones patrón de concentraciones conocidas. Para hacer las
determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda correspondiente a
un máximo, pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima.
- El coeficiente de absortividad molar que se obtiene de la educación de Beer-Lambert se
calcula con el propósito de determinar la capacidad que tiene una sustancia para absorber
una determinada onda de luz. La absorción molar depende de la absorbancia de la
solución, la longitud del recipiente donde se encuentra la solución y la concentración (M)
de dicha solución.
- Calibrar el espectrofotómetro, el cual es un instrumento que permite calcular la
absorbancia de una solución a partir de la luz reflejada o transmitida de una muestra en
diferentes longitudes de onda, es de suma importancia debido a que permitirá mayor
precisión en la obtención de los datos que luego serán necesarios para la construcción de
la curva de distribución espectral y la curva de calibración para determinado .
- A través de la ecuación obtenida a partir de la curva de calibración, es posible calcular la
concentración de una sustancia si se cuenta con su absorbancia.
- El azul de metileno es un compuesto con la capacidad de absorber grandes longitudes de
onda alcanzando el rango del rojo que es entre 620 y 750 nm, lo cual se comprueba al
tener una mayor absorbancia en la longitud de onda igual a 660 nm. Ahora bien, con
respecto a su absortividad molar, tiene gran capacidad de absorción de luz, que se
comprueba con la intensidad del color de esta.
Referencias:
[1] Comisión Nacional de energía atómica . (1980). Determinación espectrofotométrica . Obtenido
de República argentina:
https://inis.iaea.org/collection/NCLCollectionStore/_Public/16/070/16070140.pdf
[2] Luz-visible. (2020). Tomada de
https://fotomanias.com.ar/wp-content/uploads/2020/05/luz-visible.jpg
[3] López, J. F. (2021, 19 febrero). Coeficiente de determinación (R cuadrado).
Economipedia. https://economipedia.com/definiciones/r-cuadrado-coeficiente-
determinacion.html
[4] EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO. ABSORCIÓN VISIBLE-ULTRAVIOLETA.. (s. f.)
https://www.upct.es/~minaeees/espectro_electromagnetico.pdf
[5] Padial, J. (2016, 17 octubre). ¿Qué es una curva de calibración? Curiosoando.
https://curiosoando.com/que-es-una-curva-de-calibracion
[6] Libro: Espectrofotometría: Introducción. (s. f.).
https://campus.ffyb.uba.ar/mod/book/view.php?id=291222
[7] AGQ Labs Chile S.A. (2017). Análisis químico, medir es comparar. https://agqlabs.cl/wp-
content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-comparar.pdf
[8] absorption spectra - the Beer-Lambert Law. (s. f.).
https://www.chemguide.co.uk/analysis/uvvisible/beerlambert.html
[9] Calibrar el espectrofotómetro. (s. f.). (C) Copyright 2005.
https://help.efi.com/cws/5.8/es-es/GUID-ED26B421-4CBC-4FFF-9111-
939EA3B881A2.html
[10] Universidad de Tarapacá. (2022). DILUCIONES. Recuperado de: http://dido.uta.cl/wp-
content/uploads/2022/10/01_Infografia_tutores_Qui%CC
%81mica_Diluciones.pdf#:~:text=El%20factor%20de%20diluci%C3%B3n
%20representa,factor%20igual%20a%20la%20diluci%C3%B3n
[11] Saldaña, I. M. (2016). Interferencia en las determinaciones de 24 constituyentes
bioquímicos. Obtenido de Tecnólogo Médico-Químico farmacéutico, Servicio de
Bioquímica, Departamento de Patología Clínica, Hospital Nacional Edgardo Rebagliati
Martins, EsSalud, Lima, Perú.: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1025-55832016000200009#:~:text=La%20interferencia%20anal
%C3%ADtica%20es%20considerada,muestra%20(1%2C2)
