UT1: LAS TÉCNICAS DE INMUNOLOGÍA
1. La respuesta inmunitaria
El sistema inmunitario es el conjunto de órganos, células, moléculas y mecanismos que protegen al
organismo de agentes infecciosos o de células propias infectadas o alteradas.
Está formado por:
➢ Mecanismos inespecíficos de protección. Constituyen la inmunidad inespecífica, innata o
natural y responden de similar manera ante cualquier agente. Son los primeros mecanismos
que actúan ante cualquier agresión.
➢ Mecanismos específicos de protección. Constituyen la inmunidad específica o adquirida y
responden ante agentes concretos. Este nivel se activa cuando los mecanismos
inespecíficos no pueden resolver la situación.
1.1. Mecanismos inespecíficos de protección
El organismo dispone de diversos mecanismos inespecíficos: barreras físicas y químicas, células
sanguíneas y proteínas.
❏ Barreras físicas y químicas. La primera línea de protección:
1) La piel. Está recubierta externamente por una capa de queratina, que la hace
impermeable. Además, su superficie, con un pH de 5.5 y una alta salinidad, es un
ambiente hostil para los microorganismos.
2) Las aberturas naturales. Están protegidas por mucosas que impiden la entrada de
microorganismos mediante la secreción de lisozima, una enzima que destruye la
pared celular de muchas bacterias.
3) Los revestimientos interiores. Los conductos que están conectados con el exterior
disponen de mecanismos específicos de protección:
a) Las vías respiratorias están recubiertas de mucosidades que atrapan los
agentes patógenos; los cilios del epitelio de revestimiento barren este mucus
hacia la cavidad digestiva.
b) El tracto digestivo queda protegido en el estómago, donde la altísima
acidez (pH=2) y la presencia de bacterias simbióticas, que secretan
sustancias antibióticas, provocan la destrucción de la mayoría de
microorganismos.
c) El tracto genitourinario está protegido principalmente por la orina, que con
un pH ácido actúa barriendo los microorganismos cuando estos son
eliminados. Además el pH de la vagina protege de la invasión de
microorganismos patógenos.
❏ Células sanguíneas
1) Sistema fagocítico: Conjunto de las células con función fagocítica formado a partir
de los neutrófilos y los monocitos sanguíneos. Que encontrarán los gérmenes que
logran penetrar las barreras físicas y químicas.
a) Neutrófilos. Son un tipo de leucocitos, y constituyen el grupo de fagocitos
más abundantes y de mayor actividad fagocitaria.
b) Macrófagos. Los monocitos de la sangre, al igual que los neutrófilos,
abandonan los vasos sanguíneos para actuar como células fagocíticas . La
denominación común cuando están fuera de la sangre es macrófago,
aunque se usan denominaciones específicas en algunos tejidos, como
osteoclastos en el hueso.
2) Mastocitos o células cebadas. Se forman en la médula ósea a partir de la misma
célula progenitora que los basófilos. Los basófilos completan su maduración en la
médula, mientras que los mastocitos circulan en su forma inmadura hasta los tejidos.
Además liberan histamina para la vasodilatación.
3) Células NK. (Natural Killer) Son un tipo de linfocito. Son componentes importantes
en la defensa inmunitaria no específica, aunque no destruyen microorganismos
patógenos sino células infectadas o que puedan ser cancerígenas.
Al contrario que los neutrófilos y los macrófagos, no son células fagocíticas .
Destruyen las células atacando su membrana plasmática, lo que ocasiona una
difusión de iones y agua hacia el interior de la célula, un aumento del volumen
interno y finalmente la lisis celular.
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4) Eosinófilos. Son un tipo de granulocito. También pueden salir de los vasos
sanguíneos para participar en la respuesta inmunitaria. Tienen acción fagocítica
aunque su principal función es destruir parásitos no fagocitables. La presencia
elevada de eosinófilos se relaciona normalmente con infecciones parasitarias y con
reacciones alérgicas.
❏ Proteínas
Dos tipos de proteínas intervienen directamente en la respuesta inespecífica:
1) Sistema del complemento: La activación y fijación del complemento a
microorganismos constituye un importante mecanismo efector del sistema inmune,
ya que facilita la eliminación del agente extraño y genera una respuesta inflamatoria.
2) Interferón: Es un mecanismo inespecífico diferenciado en el caso de que el agente
patógeno sea un virus.
❏ La respuesta inflamatoria, es el mecanismo inespecífico que se activa ante la presencia de
cualquier agente extraño en el interior del organismo. El agente puede ser un
microorganismo, pero también una toxina..
En la inflamación intervienen los vasos sanguíneos, los leucocitos y proteínas plasmáticas
llamadas mediadores de la inflamación.
La inflamación y el proceso de reparación tisular ocurren al mismo tiempo, la inflamación
termina cuando desaparece el agente responsable del daño y la reparación continúa hasta
sustituir el tejido dañado mediante regeneración celular y cicatrización (fibrosis).
1.2. Fagocitosis. Tiene lugar de la siguiente manera:
1) Quimiotaxis: Los neutrófilos pueden ser atraídos al foco infeccioso por distintas sustancias,
son las quimiotaxinas, entre ellas destacan:
a) Proteínas bacterianas.
b) Componentes del complemento.
c) Factor quimiotáctico de neutrófilos (NFC) producido por mastocitos y basófilos.
2) Diapédesis: Es el paso de los leucocitos a través de las brechas que se producen entre las
células endoteliales.
Las sustancias vasoactivas que liberan los mastocitos y basófilos durante la reacción
inflamatoria, provocan una vasodilatación y un aumento del flujo sanguíneo que incrementa
la llegada de neutrófilos al foco infeccioso, esta vasodilatación facilita la diapédesis.
3) Opsonización: Recubrimiento del germen con unas sustancias, las opsoninas (como la IgG
y el fragmento C3b del complemento) que facilitan la unión del fagocito al microorganismo.
La fagocitosis también puede realizarse directamente sin necesidad de las opsoninas.
4) Activación de la membrana: Se produce al fijarse el microorganismo al neutrófilo.
5) Fase de ingestión del microorganismo: Se pone en marcha un sistema que se encarga de
emitir pseudópodos alrededor del germen, formando una cavidad que engloba al microbio y
que posteriormente se cierra formando la vacuola fagocítica o fagosoma.
6) Fusión de los gránulos y vaciado: Vertiendo su contenido al interior de la vacuola
fagocítica, alrededor del microorganismo fagocitado.
7) Destrucción del germen: Por enzimas hidrolíticas.
8) Liberación de los productos de desecho: Se arrojan al exterior por exocitosis.
1.3. Mecanismos específicos de protección
Se activan tras el reconocimiento de agentes concretos. Tienen la característica de la especificidad.
Antígeno (Ag): Es cualquier sustancia que provoca una respuesta inmunitaria, estimulando la
producción de anticuerpos. Puede proceder de un agente infeccioso, pero también puede ser
cualquier sustancia extraña al organismo.
Anticuerpos (Ac): Son proteínas plasmáticas (inmunoglobulinas) sintetizadas por linfocitos.
En general, la respuesta inmunológica específica se pone en marcha cuando el agente extraño ha
conseguido vencer las barreras de la inmunidad innata.
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❏ Órganos linfoides
1) Primarios
a) Timo. Órgano de situación retroesternal, que está muy desarrollado en la
infancia y que alcanza su tamaño máximo en la adolescencia y a partir de
ese momento involuciona aunque mantiene alguna parte de su actividad
durante toda la vida de la persona.
b) Bolsa de Fabricio. Sólo existe en las aves. En el hombre el equivalente
probablemente esté situado en la placenta, MO y en el hígado fetal.
2) Secundarios
a) Bazo, ganglios linfáticos y tejido linfoide asociado al intestino (placas de
Peyer y apéndice cecal) y aparato respiratorio (amígdalas y adenoides).
Estos órganos están conectados entre sí mediante los vasos linfáticos.
❏ Clases de linfocitos
1) Según su función:
a) Linfocitos T.
b) Linfocitos B.
Los linfocitos presentan una característica fundamental que los distingue del resto de las
células hematopoyéticas, ya que el proceso de maduración y diferenciación no se produce de
forma simultánea, sino que:
1) Hay una primera etapa de maduración, donde se producen los cambios celulares
que dan lugar a los linfocitos T o B.
2) Hay una segunda etapa de diferenciación, que se produce tras la estimulación
antigénica, y que lleva a la formación de:
a) Linfocitos T auxiliares (Th) y citotóxicos (Tc), a partir de linfocitos T.
b) Células plasmáticas a partir de linfocitos B
❏ Linfocitos T
Formación
El proceso de maduración de los linfocitos To incluye
la adquisición de:
1) Receptores de membrana o superficie
(TCR). Para reconocer el Ag y la proteína del
complejo mayor de histocompatibilidad
(CMH).
2) Antígenos de superficie o de
diferenciación linfocitaria. Reciben una
nomenclatura internacional que consiste en
las siglas CD seguidas de un número.
Cada variedad de linfocitos T expresa un tipo distinto
de antígenos de superficie que le dotan de unas
determinadas características funcionales y que sirven
para diferenciarlas.
1) Todos los linfocitos T expresan el antígeno CD3 o lo que es lo mismo son CD3 +.
2) Los linfocitos T cooperadores expresan el CD4.
3) Los linfocitos T citotóxicos expresan el CD8.
Funciones:
➢ Linfocitos Th o CD4+
Se activan tras la presentación del antígeno asociado a una molécula del MHC
(complejo de histocompatibilidad) a través de una APC (macrófago). Sus funciones:
○ Colaboran a la activación de los linfocitos Tc y linfocitos B.
○ Inducen a la proliferación de los linfocitos B y su diferenciación a células
plasmáticas productoras de anticuerpos.
○ También se producen Th de memoria que apoyaran las funciones
defensivas de otros linfocitos de memoria.
Estas funciones las realizan mediante la producción de linfoquinas. Producen también
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interferón.
➢ Linfocitos Tc o CD8+, con función citotóxica
Tienen por misión lisar las células diana dónde se encuentra el Ag, para ello el Ag
habrá de estar combinado con moléculas del sistema mayor de histocompatibilidad
(MHC) y situado sobre la membrana de una APC.
Una vez reconocido el Ag los Tc se activan y multiplican pudiendo atacar las células
que contienen ese antígeno.
Algunos linfocitos Tc activados se convierten en linfocitos Tc de memoria, que
reconocerán ese antígeno en un futuro.
En resumen los linfocitos T son los responsables de la Inmunidad celular e intervienen en
los siguientes procesos:
1) Defensa contra los gérmenes intracelulares.
2) Lucha contra el desarrollo de las neoplasias.
3) Reacciones de rechazo a los trasplantes.
❏ Linfocitos B
Formación
Comienza a nivel de la M.O. con las células
madres de orientación linfoide.
Esta va a producir millones de linfocitos B, con
distintos receptores, cada uno de los cuales
fabricará un solo tipo de anticuerpo.
Durante el proceso de maduración, las células
B, van adquiriendo receptores de membrana.
Entre estos cabe destacar los siguientes:
1) Receptores para el fragmento
cristalizable Fc de algunas Ig.
2) Receptores para algunos componentes
del complemento.
3) Cada célula B puede, por tanto,
reconocer a un determinado Ag, sin
necesidad de APC, y esto depende de
la estructura de sus receptores antigénicos.
4) Todas las células B también expresan en su superficie moléculas del complejo
principal de histocompatibilidad, que son fundamentales en el reconocimiento del Ag.
5) A través de este proceso se consigue una población de linfocitos B que está
capacitada para reaccionar ante una amplísima gama de antígenos.
Funciones:
La principal función de los linfocitos B consiste en la producción de Ac. Estos a su vez
pueden desempeñar varias funciones:
1) Neutralización de Ag.
2) Marcaje de células para que sean atacadas por otros leucocitos.
3) Destrucción de gérmenes extracelulares.
Todo esto se conoce como inmunidad humoral.
❏ Células de la tercera población
En este grupo se incluye a una serie de células linfoides que no presentan marcadores de
superficie de células T ni B se les llama células nulas.
A esta población pertenecen las células agresoras naturales o NK (Natural Killer). Estas
células son CD3- están presentes en el bazo y en la sangre periférica y adoptan el aspecto
de linfocitos grandes granulares. Son capaces de destruir células tumorales o infectadas por
virus, sin la necesidad de tener que reconocer el Ag en asociación del MHC propio.
Para ejercer este efecto citolítico, sólo tienen que detectar la presencia de ciertas
glucoproteínas de elevado peso molecular que aparecen en la superficie de las células
diana.
Algunos linfocitos Tc y algunas células NK poseen en su membrana receptores para el
fragmento Fc de las Ig.
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Las células NK que poseen receptores para el Fc se denominan linfocitos K.
2.DINÁMICA DE LA RESPUESTA HUMORAL
● El conocimiento de la respuesta humoral es básico para realizar el seguimiento serológico
de la enfermedad infecciosa.
● Poco antes de la aparición de los síntomas específicos, así como después de su
desaparición, es posible detectar el agente infeccioso en la muestra biológica adecuada. Y es
posible asimismo la detección de anticuerpos específicos frente a ese patógeno, primero del
isotipo IgM, de rápida aparición y corta duración, seguidos del isotipo IgG, que normalmente
se puede detectar durante toda la vida del paciente.
2.1. LA RESPUESTA DE LOS ANTICUERPOS
El organismo responde ante un agente extraño mediante sus mecanismos inespecíficos de
defensa; si estos no son suficientes se activa la inmunidad adaptativa, con la producción de
anticuerpos.
Este nivel de inmunidad:
● Es altamente específico, ya que genera anticuerpos específicos para el antígeno
presente (son ineficaces frente a otros antígenos).
● Tiene memoria, ya que se generan linfocitos B de memoria, capaces de responder
de forma rápida ante una nueva entrada de ese mismo antígeno.
De forma general, la respuesta de anticuerpos implica una sucesión de fases:
1. Fase de latencia. Es el periodo comprendido entre la entrada del antígeno y la detección de
anticuerpos específicos en suero.
2. Fase exponencial. La concentración de anticuerpos en suero aumenta de forma logarítmica.
3. Fase de meseta. Se mantiene el nivel de anticuerpos, mientras persiste la estimulación antigénica.
4. Fase de disminución. Consecuencia de que los anticuerpos van neutralizando al antígeno, y los
inmunocomplejos formados van siendo retirados de la circulación.
Por tanto, el estudio del nivel de anticuerpos en suero permite valorar la fase de la enfermedad y
estudiar su evolución
2.2. LA RESPUESTA PRIMARIA Y RESPUESTA SECUNDARIA
● Respuestas primarias, que se deben a la activación de linfocitos B vírgenes, cuando no ha
habido un contacto previo del paciente con el antígeno.
● Respuestas secundarias, que se deben casi exclusivamente a la estimulación de clones
expandidos de linfocitos B de memoria.
Si se compara la dinámica de anticuerpos en una respuesta primaria con la que se observa después
de un segundo o sucesivos contactos con ese mismo antígeno, se detectan algunas diferencias
fundamentales:
● Dinámica en suero. En la respuesta secundaria la fase de latencia se acorta y se prolongan
la fase de meseta y la fase de disminución.
● Nivel de anticuerpos. En la fase de meseta de la respuesta secundaria, el nivel es unas
diez veces mayor que en la respuesta primaria.
● Isotipo de anticuerpos. En la respuesta primaria, especialmente al comienzo, las IgM
representan un porcentaje importante del total, mientras que en la respuesta secundaria hay
casi exclusivamente IgG.
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● Afinidad de los anticuerpos. Es mucho mayor en la respuesta secundaria.
3. Diagnóstico y seguimiento de las enfermedades infecciosas
El diagnóstico de las enfermedades infecciosas se efectúa en dos fases:
➢ Primera fase: diagnóstico de presunción o sospecha. Se basa en el estudio de las
manifestaciones clínicas y de los antecedentes epidemiológicos.
No proporciona un diagnóstico definitivo de la enfermedad.
➢ Segunda fase: diagnóstico de certeza o confirmación. Se basa en el hallazgo del agente
etiológico en una muestra biológica, o bien de las alteraciones que su presencia ha producido
en el sistema inmunitario.
3.1 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS
Las técnicas de inmunodiagnóstico se pueden aplicar a distintas muestras biológicas, pero la más
frecuente es el suero. En este caso se habla de diagnóstico serológico. Existen numerosas
técnicas para la detección en un suero de anticuerpos específicos frente a los antígenos procedentes
de patógenos.
3.2. SEGUIMIENTO DE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS
El seguimiento serológico en un proceso infeccioso tiene como finalidad no solo diagnosticar o
ayudar al diagnóstico de la enfermedad, sino conocer la fase de la enfermedad, su evolución, el
pronóstico, así como el riesgo de enfermedad congénita.
3.3. LOS ESTUDIOS SEROEPIDEMIOLÓGICOS
● La seroepidemiología es la parte de la epidemiología que se encarga de realizar estudios
epidemiológicos mediante la utilización de pruebas serológicas.
● El objetivo principal es conocer la seroprevalencia.
● La seroprevalencia es el nivel de anticuerpos en la población general frente a determinados
agentes infecciosos.
● A partir del estudio de los datos obtenidos se puede determinar cuáles son los principales
grupos de riesgo ante una determinada enfermedad infecciosa, así como los grupos
responsables del mantenimiento de esos niveles.
● Los movimientos de población que se registran en la actualidad obligan a las autoridades
sanitarias a realizar este tipo de estudios para conocer la situación epidemiológica tanto de
las enfermedades propias del país, como de las importadas, que cada vez son más
numerosas.
● Numerosos factores contribuyen a la globalización de las enfermedades: viajes por turismo o
negocios, emigración, acogida de refugiados procedentes de zonas en conflicto, adopciones
internacionales, movilidad laboral en trabajos estacionales, desplazamientos de militares, etc.
4. Las técnicas inmunológicas
● Se basan en la detección de los inmunocomplejos que se forman in vitro gracias a las
reacciones Ag-Ac
● Actualmente se dispone de procedimientos para la obtención de antígenos a partir de
patógenos y su purificación.
4.1 Obtención de antígenos
● Mediante métodos de fraccionamiento o solubilización que permiten la purificación parcial de
antígenos concretos.
● También se pueden obtener proteínas antigénicas por ingeniería genética.
4.2 Obtención de anticuerpos
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Es posible la preparación de anticuerpos policlonales y monoclonales de alta especificidad, que se
pueden usar para detectar antígenos en la muestra problema.
❏ Anticuerpos policlonales: Son Ac epítopo-específicos de distintos isotipos.
- Un solo antígeno presenta diferentes epítopos en su estructura.
- La respuesta inmunológica que induce en un animal es heterogénea, activando
distintos clones de linfocitos B, que aunque proceden de una misma célula madre,
producen diferentes anticuerpos.
- Cada uno de ellos presenta diferente especificidad frente a un epítopo concreto del
antígeno.
Las técnicas para detectar Ac precisan del empleo de antiinmunoglobulinas capaces de reconocer
los anticuerpos específicos presentes en el suero de los pacientes. Estas antiinmunoglobulinas se
pueden producir in vivo porque los anticuerpos de una especie animal van a ser reconocidos como
no propios por el sistema inmunológico de otras especies animales. Es decir, serán reconocidos
como antígenos produciéndose anticuerpos específicos frente a ellos. Los determinantes antigénicos
están presentes en la región Fc de las inmunoglobulinas.
❏ Anticuerpos monoclonales (Ac a partir de un único clon de linfocito B): Los anticuerpos
monoclonales son especialmente útiles en aquellas aplicaciones que requieran especificidad
frente a un antígeno único y un suministro constante durante tiempos prolongados de uso.
4.3 Fundamento de las técnicas inmunológicas
● La formación de inmunocomplejos in vitro es la base de todas las técnicas inmunológicas. La
dificultad radica en identificar y/o cuantificar estos complejos, para lo cual se pueden aplicar
distintas técnicas.
● Los inmunocomplejos formados se pueden detectar mediante:
❏ TÉCNICAS SECUNDARIAS O INDIRECTAS (cambios físicos)
➢ Un cambio en el medio. Es el caso de las reacciones Ag-Ac de aglutinación y
precipitación:
- Reacciones de aglutinación.
- Reacciones de precipitación.
- Técnicas de fijación del complemento.
❏ TÉCNICAS PRIMARIAS O DIRECTAS (ningún cambio físico)
➢ La detección de marcadores.
