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1. MICROSCOPÍA OPTICA.

Objetivos.

 Familiarizar al estudiante con el equipo y con los procedimientos empleados en

microscopia.

 Formar al estudiante con los conceptos básicos de la microscopia óptica o convencional.

Marco Teórico.

Microscopio es una palabra derivada del griego cuyo significado literal es “visión de lo pequeño”;
como bien lo indica su nombre, nos permite visualizar elementos que a simple vista no son visibles,
o difícil de ver en detalle.

La utilización de lentes o lupas para observar elementos aumentados se conocía desde tiempos de
Arquímedes, pero, podemos encontrar que el origen del microscopio se remonta 1200 años atrás
gracias a la fabricación de las lentes correctivas de Abbas Ibn Firnas; aunque la invención del
microscopio óptico es desconocida suele atribuirse a muchas personas entre ellas existen dos
referencias una en 1610 asignada a Galileo según los italianos y otra en 1608 por ZachariasJanssen,
en opinión de los holandeses. Posteriormente se desarrolla como disciplina durante el siglo XIII con
el monje franciscano Roger Bacon; años más tarde los intentos por montar varios lentes entre sí
dieron origen a lo que se denomina el microscopio compuesto, apareciendo las primeras
publicaciones importantes en el campo de la microscopía, en 1660 Marcello Malpighi prueba la
teoría de William Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los capilares
sanguíneos, en 1665 Hooke observó con un microscopio la primera observación de células muertas,
en 1674 Anton Van Leeuwenhoek, utiliza microscopios simples de fabricación propia y describe por
primera vez protozoos, glóbulos rojos, espermatozoides y bacterias llamando a estos últimos
“animalículos”.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por asociación de
vidrios flint y crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta época
son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler, en 1850, Amici el primer sistema de
lentes para un microscopio acromático y más tarde desarrolla el objetivo de inmersión de agua;
posteriormente Ernst Abbe en 1877, publica su teoría física del microscopio y por encargo de Carl
Zeiss, mejoró la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite
obtener aumentos de 2000 veces.
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PARTES DEL MICROSCOPIO

Los microscopios tienen tres sistemas que facilitan su funcionamiento,que son:

SISTEMA MECÁNICO

 SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el [Link]:
Lugar donde se deposita la preparación.
 CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, etc.

 REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.

 TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque. Es la estructura que

sostiene las demás partes del microscopio y le permite moverse. Está formado por el tubo,la
platina y el pie. El tubo contiene en su extremo superior el ocular, y a través de él la luz llega
hasta el lente objetivo; La platina es donde se coloca la muestra que se va a observar;y el pie
es la estructura sobre la que se apoya el microscopio.

En el mecánico se incluyen dos tornillos que facilitan el enfoque del objeto observado: el tornillo
macrométrico (permite el enfoque global de la muestra) y el tornillo micrométrico (enfoca
detalladamente y con precisión cada una de sus partes). Por tanto, este sistema desoporte y mecánico
del microscopio está compuesto por: tubo del ocular, revólver, platina,pinzas, brazo, base, tornillos
macrométrico y micrométrico.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprendelos
siguientes elementos:

 FUENTE DE ILUMINACIÓN: se trata generalmente de una lámpara incandescente de

tungsteno sobrevoltada.

 CONDENSADOR: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los
rayos luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo
ángulo que el del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su lente
superior es generalmente plano convexa, quedando la cara superior plana en contacto con la
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preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); existen
condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente
superior y la preparación. La abertura numérica máxima del condensador debe ser al menos
igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar todo su poder separador. El
condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un
tornillo, bajándose para su uso con objetivos de poca potencia.

 DIAFRAGMA: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura

para ajustarla ala del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el
contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la
resolución del sistema óptico.

 SISTEMA ÓPTICO.
El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto
de lentes que lo componen. Está formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta
una imagen de la muestra que el ocular luego amplía.

 EL OCULAR: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la

cercanía de la pieza con el ojo del observador. Tiene como función aumentar la imagen
formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van
desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que
poseen una escala micrométrica; estos últimos tienen la finalidad de medir el tamaño del
objeto observado.

 LOS OBJETIVOS: se disponen en una pieza giratoria denominada revólver y producen el

aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la
preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:
objetivos secos y objetivos de inmersión.

Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación.
En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que producen, la abertura
numérica y otros datos. Así, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y160/0,17,
significa que el objetivo es plana cromático, su aumento 40 y su apertura numérica 0,65, calculada
para una longitud de tubo de 160 mm. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el
uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son:
4X,10X, 20X, 40X y 60X.

El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través
de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación,
de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos
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son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de color negro que rodea su extremo
inferior.

Figura 1: Microscopio óptico compuesto en el que se indican, mediante números, sus

principales componentes. (1) Ocular; (2) Tubo; (3) Cabezal; (4) Revolver; (5) Objetivo; (6)
Platina; (7) Pinzas para sujetar el portaobjetos; (8) Condensador; (9) Fuente luminosa con
diafragma; (10) Base o pie; (11) Interruptor; (12) Brazo; (13) Macrométrico; (14)
Micrométrico); (15 y 16) Mandos para de desplazamiento de la platina; (17) Botón regulador
de intensidad.
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VALORES FISICOS EN MICROSCOPIA.

INDICE DE REFRACCIÓN
Cuando un haz de luz que se propaga por un medio ingresa a otro distinto, una parte del haz se refleja
mientras que la otra sufre una refracción, que consiste en el cambio de dirección del [Link] esto se
utiliza el llamado índice de refracción del material, que nos servirá para calcular la diferencia entre
el ángulo de incidencia y el de refracción del haz (antes y después de ingresar al nuevo material).
Se utiliza la letra n para representar el índice de refracción del material, y se calcula por la siguiente
fórmula:
n = C0 / V

n : Indice de refracción del medio en cuestión C0: Velocidad de la luz en el vacio (3x10 8 m/s) V :
Velocidad de la luz en el medio en cuestión

Es decir que es la relación entre la velocidad de la luz en el vacío y en el medio. Dado que la velocidad
de la luz en cualquier medio es siempre menor que en el vacío, el índice de refracción será un número
siempre mayor que 1.
En el vacío: n=1 En otro medio: n>1.

APERTURA NUMERICA.
En óptica, la apertura numérica (AN) de un sistema óptico es un número adimensional que caracteriza
el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz. Recíprocamente, también está relacionado
con el ángulo de salida del sistema. La definición exacta del término varía segúndiferentes áreas de la
óptica.
En la mayor parte de las áreas de la óptica, especialmente en microscopía, la apertura numéricade un
sistema óptico tal como una lente queda definido por la siguiente ecuación: AN = n . Sen ᶿ

Donde n es el índice de refracción del medio en el que la lente se encuentra (1 para el aire, 1,33 para
el agua pura, y hasta 1,56 para algunos aceites), y θ es la mitad del ángulo de aceptancia máximo que
puede entrar o salir de la lente; la A. N. de un objetivo esta impresa en el objetivo junto con otras
especificaciones del objetivo. Esta puede variar desde 0.04 para objetivos de bajoaumento hasta 1.3 o
1.4 para objetivos apocromáticos de altos aumentos para uso con aceite deinmersión

El LIMITE DE RESOLUCION (LR)

Es una cualidad del microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximosque
pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es
cercana una décima de milímetro. En el microscopio viene limitado por la longitud de onda de la
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radiación empleada; en el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2

décimas de micrómetro (la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio
electrónico, el poder separador llega hasta 10 Å.
LR = (0,61 x long. de onda)/ AN

PODER SEPARADOR.
También llamado a veces poder de resolución (PR), es la CAPACIDAD de todo sistema ópticode
percibir detalles. A menor LR, mayor PR. Por eso, el microscopio al tener menos
LR, tiene mayor PR que el ojo humano, es decir, percibe más detalles. Se determina mediante la
fórmula:
PR=1/LR.

PODER DE DEFINICIÓN.
Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo respecto a sus contornos. Esta
propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas.

AMPLIACIÓN DEL MICROSCOPIO.

En términos generales se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el
diámetro o longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un
objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto
(la superficie de la imagen será 1002, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el aumento que
está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos respectivos debidos al objetivo
y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la
ampliación con que estamos viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la
imagen del objeto está ampliada 450 veces, también expresado como450 diámetros.

CAMPO DEL MICROSCOPIO

Se denomina campo del microscopio al círculo visible que se observa a través del microscopio.
También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a través del [Link]
el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente
proporcional al aumento del microscopio. Para medir el diámetro del campo del microscopio con
cualquiera de los objetivos se utiliza el micrómetro, al que se hará referencia en el siguiente punto.

Materiales, Equipos e Insumos

 Microscopio óptico.
 Portaobjetos
 Laminillas o cubreobjetos
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Reactivos

 No se requiere.

Procedimiento

PRACTICA EN EL MICROSCOPIO.

1. Recorte un cuadrado de 1 cm. por cada lado de papel milimetrado, deposítelo sobre un porta
objetos con una gota de agua y cúbralo con una laminilla.

2. Enfoque con el objetivo de menor aumento hasta que se vea con claridad.

3. Mida el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde
del Campo de visión. Cuenta el número de milímetros que se ven y estime aproximadamente
la Fracción sobrante, si la hay, el resultado será el diámetro del campo visual para ese
aumento (Objetivo x ocular).

4. Realice el cambio de unidades a micrómetros (1mm = 1000 um).

5. Practicar en montajes y observación de las muestras dadas.

Nivel de Riesgo

Nivel 1. Riesgo moderado individual – Sin compromiso grupal- poblacional ni

medioambiental.

ANEXO:

Realice la siguiente consulta:

1. Elabore una línea de tiempo sobre la evolución del microscopio.

2. Consulte sobre otros tipos de microscopia que existen y realice un cuadro comparativo.

3. Qué precauciones debemos tener en cuenta al emplear el microscopio.

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Bibliografía

 Ruiz-Castell, P. (2013). Instrumentos para el estudio de la Historia Natural: del microscopio

óptico al microscopio electrónico. Memorias R. Soc. Esp. Hist. Nat.(2ª época), 11, 127-135.

 Rodríguez de la Concha Azcárate, G., López Téllez, G., & Vilchis Nestor, A. (2022). El
microscopio bajo mis manos: breve historia, funcionamiento y aplicaciones de la
microscopia. CIENCIA Ergo-Sum, 30(3). doi:10.30878/ces.v30n3a9

 Mertz, J. (2019). Introduction to optical microscopy . Cambridge University Press.