U.

5 MUESTRAS DE
SANGRE.
Gestión de Muestras Biológicas.

Naïs Palomino
CFGS LABORATORIO CLÍNICO Y BIOMÉDICO. 1ºT
 U.5 MUESTRAS DE SANGRE.

ÍNDICE.
1. Como se obtienen las muestras.
2. Manejo de las muestras.
3. Aditivos.
4. Muestras de plasma.
4.1 Como se obtienen.
4.2 Como se almacenan.
5. Muestras de suero.
5.1 Como se obtienen.
5.2 Como se almacenan.
6. Especificaciones.
6.1 Derivados plaquetarios.
6.2 Factores de crecimiento.
6.3 Componentes y hemoderivados de la sangre.
7. Principales elementos formes y sustancias analizables en sangre.
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1. OBTENCIÓN.
Las pruebas pueden generar estrés, ansiedad y cambios
hormonales, los parámetros pueden ser alterados.

La sangre es la más utilizada ya que es fácil de extraer, una vez

Los parámetros normales son→
obtenida se separa mediante centrifugación en plasma, suero y
elementos formes o células. - Nivel de células.
- Nivel bioquímico de la glucosa.
Procedimientos→ - Colesterol.
- Potasio.
• Punción venosa. - Triglicéridos.
• Punción arterial. - Sodio, etc.
• Punción capilar.
La dieta también influye en los resultados, por lo que se
1º Identificar la muestra a través de etiquetas, las cuales deben
recomienda la última ingesta 8h previas a la extracción
de tener correlación entre etiqueta, muestra y solicitud. Al
sobre todo para hacer determinaciones de metabolismo
hacernos una analítica nos dan un código de barras, en los
basal.
centros de salid primero pasa por administración donde nos
dan la petición junto al código que se adhiere a cada tubo o En niños y ancianos no debe usarse sistemas de vacío, ya
contenedor de las pruebas. que pueden provocar la rotura de las venas.

2º Preparar el material, disponemos de tubos, solicitud, Debe de hacerse en una misma franja horario, en el caso
etiquetas, torniquete, identificaciones, gasas, palomillas, de que no sea dentro de esa franja, debe especificarse la
contenedores de desecho, etc. El paciente debe estar en una hora. Ya que las hormonas varían según la hora del día.
posición cómoda, con el brazo apoyado y debemos saber si
existe algún tipo de especificación respecto a la extracción. Punción venosa.

3º Detectar el punto de extracción y colocar el torniquete 1. Colocar material (Guantes, gasas, desinfectante,
dependiendo del tipo de extracción, en venosa siempre se palomilla, tubos, batea, esparadrapo, torniquete).
aplica. Tenemos que tener una jeringa con su aguja
correspondiente independientemente de que se use,
Consideraciones previas antes de una extracción→
el torniquete puede influir en estudios de
coagulación.
1. Postura del paciente.
 Sentado.
2. Verificar que es el paciente y colocar al paciente,
 Encamado→ Aumenta 5-15% la concentración de
(sentado, con brazo hiperextendido y apoyado).
moléculas de gran tamaño.
2. En el caso de que una persona esté transfundida si se
3. Localizar zona de punción, en el caso de no
realiza horas previas a la extracción se producen
localizarla se puede aplicar calor o masajear la zona
variaciones en el espécimen (potasio y LDH).
provocando la vasodilatación. Debemos dirigirnos a
3. Cuando un paciente tiene un catéter debe realizarse la
la zona cubital ya que es más fácil de acceder, en el
extracción en el brazo contrario, a ser posible realizarla
caso de no ser posible utilizaremos la vena cefálica,
una hora después de que se haya metido suero, si el
vena axílica o vena medial
catéter es usado para nutrición parenteral, debe realizarse
8h después la extracción.
4. Colocar torniquete entre 7-10cm de la zona de
Si se toma del brazo con el catéter antes de la extracción punción.
debe meterse un volumen igual al que extraes de solución
salina isotónica. Se desechan los primeros 5ml de sangre. 5. Limpiar la zona.

4. Cuando se somete a cirugía, biopsia, diálisis, punción 6. Puncionar con bisel hacia arriba.
aumentan los reactantes de fase aguda.
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7. Colocar el tubo, una vez lleno sujetando con una  Tubo no cerrado herméticamente.
mano se extrae de la campana y mezclar suavemente  No presionar correctamente.
por inversión.  Unión entre jeringa y aguja o tubo y jeringa no sea
adecuada.
8. Quitar vía y colocar algodón 5min con esparadrapo.  Vena colapsada.
 Palomilla se salga de la vena.
Debemos puncionar a 15º.
 Vena perforada, se produce hematoma, la zona se
En el caso de sangre arterial usamos aguja y jeringa. vuelve azul. Retirar torniquete y palomilla o jeringa.

En el caso de equivocarnos en el lugar de punción, debemos Punción arterial→

cambiar la zona.
La sangre arterial es rojo brillante y es pulsátil. Si nos
Una vez lleno el tubo, pasamos al siguiente. Terminada la equivocamos debemos apretar durante 5min.
extracción colocar una gasa con esparadrapo.
No debemos pinchar en quemaduras, ya que la piel está más
Agitar por inversión, de manera lenta para no producir dura. Si tiene una mastectomía, no pinchar en la zona de la
hemólisis, si se realiza con aguja y jeringa, debemos aspirar mastectomía. Si tiene fístula o cánula no pinchar en esa zona.
lentamente para no producir hemólisis.
Si la extremidad tiene edema no pinchar.
Orden de tubos→
Las arterias son más difíciles de localizar, tienen pulso, es más
1. Frasco hemocultivo. fácil la aparición de hematomas y que las arterias tengan una
2. Tubo seco (rojo). vasoconstricción. Se realiza en arteria radial. En el caso de no
3. Tubo de citrato sódico (azul), estudios coagulación. encontrarla, ubicarlas en las extremidades inferiores, en la
4. EDTA (morado) / VSG (negro). femoral.
5. Heparina (verde).
Se realiza en gasometrías, pH de la sangre.
6. Oxalato, ácido láctico o glucosa, (gris).
No se pueden utilizar anticoagulantes, ya que cambian el pH
Frascos para hemocultivos→ de la muestra, no se puede utilizar nunca heparina de litio.

• Se usa frasco para recoger el hemocultivo. Se debe realizar una gasometría o pH cuando hay infección
• Tubo seco, rojo. respiratoria o problemas metabólicos.
• Citrato color azul, para estudios de coagulación.
• EDTA, lila. Se debe realizar con aguja y jeringa y debe ser procesada
• VSG negro. rápidamente en los próximos 15min y mantener a
• Heparina, verde. temperatura ambiente.
• Fluoruro de sodio, determinación glucosa y ácido
Punción cutánea→
láctico, gris.

No pasar sangre de un tubo a otro, deben estar sellados Se realiza en niños y ancianos, ya que suelen tener trombos o
herméticamente por lo que no deben destaparse, al recoger la diabetes en los ancianos, tienen las venas muy frágiles.
sangre debe resbalar por el tubo.
Se puede realizar en el pie, el talón o falange distal de
Problemas a encontrar en la extracción. cualquier dedo.

La aguja no puede tener más de 2-2,5mm, ya que es fácil

Muestra insuficiente por→
perforar y tocar el hueso.
 Torniquete demasiado apretado.
 No colocar bisel de la aguja hacia arriba.
 Si se realiza con aguja no mover hacia adelante y Precauciones→
hacia atrás, ya que puedes atravesar la vena o
colocarla en una vena incorrecta. 1. Limpiar la zona con alcohol de 70-90º.
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2. Utilizar gasa estéril, el alcohol puede alterar Punción cutánea en el dedo→

resultados.
3. Nunca usar Betadine ya que contamina la muestra y Contraindicada para menores de 18 meses, ya que tienen el
puede dar falsos positivos en potasio, fósforo, ácido hueso muy superficial y puede perforarse, realizándose en
úrico, bilirrubina. niños muy cuidadosamente en el centro de la yema (superficie
4. Desechamos la primera gota, se recoge en tubos palmar de la falange distal). La lanceta no puede sobrepasar
capilares y debemos sellar el tubo con vaselina. Se menor o igual de 2cm. Si masajeamos el dedo pueden salir
puede recoger en tiras reactivas que cambian de residuos celulares, desechando la primera gota de sangre.
color en función de los compuestos sanguíneos, Podemos calentar la zona añadiendo calor seco o húmedo
deben caer las gotas por las paredes. Si no resbala (paño caliente). Después podremos realizar la extracción.
por las paredes puede producirse hemólisis. En Podemos utilizar punción cutánea arterializada para
recién nacidos se suele realizar la prueba del talón. gasometrías y pH. La toalla caliente no puede estar a más de
48ºC y durante menos de 3min. Debemos buscar la pulsación
para ubicar la zona.

2. MANEJO DE
MUESTRAS
El manejo de muestras es diferente para una prueba de
coagulación, que para un hemocultivo.

El manejo de muestras de hemocultivo→

 Debemos mantener unas condiciones de asepsia.

 Utilizar gorro, mascarilla, guantes, pelo recogido, no
uñas largas, desinfectar con alcohol o agua y jabón.
Una vez desinfectado debemos usar guantes
estériles y crear campo estéril con paño estéril.
 Una vez extraída la muestra con jeringa, colocar en
posición vertical para evitar coagulación, no puede
contactar con ningún material, en el caso de
La profundidad máxima es de 2mm, no debe puncionarse dos
contacto debe ser material estéril. Una vez extraída
veces en la misma zona, para evitar contaminación. No
la sangre se almacena en un frasco anaeróbico y
debemos puncionar en la curvatura que conforma el talón con
después en uno aeróbico.
la pierna, ya que es una zona muy superficial al hueso.
 Debemos agitar por inversión para mezclar la sangre
Pasos de recogida→ y colocarlo en un medio de cultivo e identificar el
frasco. Mantener a temperatura ambiente y enviar a
Agarrar la planta del pie con la mano utilizando el pulgar laboratorio.
dejando los dedos entre el índice y el corazón libre de la zona
de punción. Puncionar y presionar de forma intermitente para Precauciones→
formar gotas, colocando el tubo capilar de micro hematocrito
 No debe entrar aire en ningún frasco.
dejando que ascienda por capilaridad. También se puede
 Recogemos 3 muestras con un intervalo de 30min
colocar la sangre en unos círculos en las tiras reactivas. Una
en cada una, total de la recogida en 1h 30min.
vez terminada la extracción debemos taponar la zona y
 En adultos se recogen 100ml y en niños menores o
colocar un apósito. En las tiras reactivas debemos dejar secarla.
iguales a un año (neonatos) 2ml. En mayores hasta
Si utilizamos un tubo capilar debemos taparlo con vaselina, una
4ml.
vez recogida identificar la muestra.
 Cuando sospechamos que la infección puede ser
causada por un catéter, para saber si está
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contaminado, debemos extraer sangre de cada Tipos de anticoagulantes:

brazo y analizarla, si sólo crece en el brazo del
 Heparina.
catéter la infección es producida por éste, en el caso
de los dos brazos, lo más probable es que la  EDTA (Ácido etilendiaminotetraacético).
infección esté en la sangre.  Wintrobe.
 No debemos recoger sangre de un brazo con  ACD.
catéter por lo general.  CPD.
 Podemos ver si es intraluminal o extra luminal la  CPDA1.
infección (dentro o fuera del vaso).  CPDA2.
 También puede quitarse el catéter y realizar una
Heparina→
toma de la muestra.
 Si la sospecha es que la infección es del propio Tapón verde, mezcla de glucosaminoglucanos, número de
individuo no se realizará la extracción del catéter. residuos variable, aportan carga negativa a la muestra. Pueden
 No debemos tapar el código de barras estar en forma de sal sódica, potásica, de amonio o litio.
(identificación).
 No se debe usar congelador ni nevera, debe estar a Inhiben actividad y formación protrombina impidiendo
temperatura ambiente. formación de trombina; por lo tanto, la formación de fibrina a
partir de fibrinógeno.
Sangre venosa→
La más utilizada es la heparina de litio tamponada con calcio.
- Análisis hematológicos, bioquímicos, inmunológicos
La sangre con heparina debe procesarse antes de 3h a
y microbiológicos.
temperatura ambiente. Se emplea para determinaciones de
Sangre arterial→ plasma. Si no se usa para plasma, se almacena en frigorífico
durante 24h como máximo 4ºC.
- Gasometría y pH.
 Heparina de amonio→sustitutivo óseo, se utiliza en
Capilar→ implantes poliméricos bio reabsorbibles.
 Heparina potásica→para determinaciones
- Gasometrías. bioquímicas en sangre o plasma.
- En recién nacidos análisis bioquímicos y  Heparina de litio→Para estudios bioquímicos y
metabólicos. proliferación de células mononucleadas de sangre
periférica.
3. ADITIVOS.  Heparina de sodio→ Recuento celular,
principalmente gasometrías, taponada con calcio.
Sustancia que se añade para preservar la muestra o algunos de
sus componentes. Facilita la extracción y la utilización xe la Ventajas→
muestra en el laboratorio.
 No altera tamaño de eritrocitos.
En función del aditivo, el mecanismo es diferente, depende del  Reduce hemólisis al mínimo.
destino y uso de la muestra.
Inconvenientes→
Los más usados son anticoagulantes, agentes estabilizadores y
 Degenera el núcleo de los polimorfonucleares
geles separadores de suero.
neutrófilos.
Anticoagulantes→  No se puede utilizar para los estudios del test de
Coombs.
Son sustancias químicas que impiden o retrasan la coagulación  No se puede utilizar en estudios de
sanguínea, mejorando su manipulación, separación y el análisis inmunohematología.
de la muestra. Ventajas: no alteran el tamaño de los hematíes,
La sangre con heparina se tiene que procesar antes de 3
no producen hemólisis, evitan agregación plaquetaria, no
horas, si se mantiene a temperatura ambiente.
alteran la morfología de los leucocitos.
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Esta sangre heparinificada se emplea para extracciones de  Altera la morfología de los eritrocitos
plasma. contrayéndolos al igual que los leucocitos.
 No sirve para determinaciones bioquímicas ni
Si no vamos a utilizar esa muestra para obtener plasma, sí que
electrolíticas. Hay que procesarla antes de las 4h
la podemos mantener en frigorífico durante 24 horas. cuanto antes, a 4ºC como máximo 8h.

EDTA→
Oxalato→

Tapón del tubo morado, es una forma de sal disódica

Los tubos que llevan oxalato tienen la tapa roja.
Na2EDTA, tripotásica Na3EDTA.
Dentro de los oxalatos, los más importantes son:
Fijan el calcio impidiendo la acción de la trombina, por lo que
impiden la conversión del fibrinógeno en fibrina, evitando la • Oxalato de sodio al 1,4%→ Propiedades parecidas al
coagulación de la sangre. citrato de sodio al 3,8%, actúa sobre el tiempo de
protombina y de tromboplastina parcial.
Ventajas del potasio frente al sodio.
• Oxalato de Wintrobe→ Mezcla que se hace con

Las de potasio son más solubles que las del sodio en sangre. oxalato de sodio. Precipita el calcio.
Se usa en forma de polvo, en proporción 2:1.
Son útiles para estudios hematológicos o de biología molecular Por cada 2mg uno de oxalato.
(ADN y ARN). Se utiliza en proteómica
Se suele poner 2 mililitros por cada mililitro de sangre, es
También se utiliza para estudios cuantitativos, morfología de decir, 2 mililitros de anticoagulante por cada mililitro de sangre.
las células, recuento celular, para proteómica.
Ventajas→
Siempre que se realice una extracción, pero no sabemos que
determinación se va a hacer, se recogerá en EDTA, ya que • Precipita el calcio.

conserva mejor las características. • No afecta al volumen globular medio.

• Se puede usar para determinaciones del hematocrito,
Ventajas→ Inhibe agregación plaquetaria y no altera la hemoglobina y para hacer recuento celular o recuentos
morfología de los leucocitos. celulares.

Desventajas→ En determinaciones de estudios de magnesio o Inconvenientes→

calcio, no debe usarse. Si no mantenemos la proporción
adecuada de EDTA y sangre, si te pasas se producirá No sirve para recuento plaquetario, ya que produce
alteraciones de leucocitos y eritrocitos haciendo que se agregación plaquetaria.

colapsen. Durante la mitosis evita que se forme el huso

Para extensiones sanguíneas solo sirve durante unos minutos.
acromático. Se debe procesar en menos de 3h si se debe
Por ésta razón no suele usarse, ya que hay que hacerlo muy
hacer determinación en el plasma, en otras determinaciones el
rápido porque se deteriora en unos minutos la muestra.
tiempo se puede ampliar. Debe almacenarse a 4ºC durante
24h. Otros tipos de anticoagulante que llevan citrato→

Citrato. • ACD.

Tapón azul, se usa citrato trisódico. Ácido cítrico, Citrato de sodio y dextrosa.

Es un quelante del calcio, inhibe la coagulación porque evita la Al tener citrato todos llevan tapón azul, salvo éste que es
conversión de fibrinógeno a fibrina. amarillo. Como quelante del calcio actúa en la coagulación.

Para pruebas de plasma y estudios de función plaquetaria, al La dextrosa sirve como sustrato para aumentar el tiempo de
ser quelante del calcio, es reversible añadiendo calcio a la vida de la muestra. Si no están en proporción adecuada no se
muestra para hacer otras determinaciones. obtiene el pH óptimo , cantidad de ácido cítrico y citrato de
sodio debe ser igual, para mantener el pH.
Inconvenientes→
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Para recuento de células mononucleadas, obtenerlas y estudiar  Las muestras mezcladas con este estabilizante solo
morfología; puede almacenarse hasta 21 días, sirve para sirven para obtención de ARN y se utiliza derivados
extracciones de sangre. hemáticos de ARN.
 PAXgene→ Entre 2/72h a t.a; 3-3 días a 4ºC y a -
• CPD→ 80ºC 50 meses.
 Tempus blood RNA→ 5 días 4ºC y años a -80ºc.
Citrato, fosfato y dextrosa.
 RNA latter→4ºC 1 mes, a -20ºC años
Tapón azul, estabiliza el pH de la sangre en valores cercanos a
Estabilizantes de ARN sirven para:
7,1.

Ventajas: permite que los componentes de la sangre siga su - Derivados hemáticos de ARN, a temperatura
metabolismo. El fosfato ayuda a preservar el ATP y mantener ambiente duran según su tipo.
niveles altos de DGP. Facilidad de hemoglobina por el oxígeno, - Para ADN en biología molecular.
se conserva hasta 28 días, para determinación de grupos
GEL SEPARADOR DE SUERO→
sanguíneos.
Tapón amarillo anaranjado/naranja.
• CPDA1→
Parecido al plasma, pero sin proteínas, no tiene fibrinógenos.
Citrato, fosfato, dextrosa y adenina.
Es un polímero inerte, actúa como barrera entre el suero de
Tapón azul, lleva menos dextrosa que el CPD, al tener adenina
la superficie, entremedias el separador y luego el coágulo.
permite que los hematíes tengan reserva de nucleótidos,
estabiliza la membrana nuclear y permite aumentar el tiempo Todos los tubos deben estar recubiertos por silicona y debe
de conservación de hasta 30 días. tener pequeñas partículas de sílice para acelerar la coagulación
de la sangre.
• CPDA2→
1. Extracción de la sangre dejando reposar 30min.
Concentración de adenina y dextrosa mayor. Facilita
2. Se centrifuga, quedando el suero en la parte superior y el
conservación de hematíes y reduce el pH, inhibe la agregación
coágulo en la inferior.
plaquetaria. Se almacena hasta 49 días, en caso de
concentrado de hematíes hasta 42 días.
4. MUESTRAS DE PLASMA.
ESTABILIZANTES→

Preservar determinados componentes de la sangre, 4.1 ¿CÓMO SE OBTIENE?

determinaciones ADN y sobre todo como agentes
Con sangre total por punción venosa.
estabilizantes de ARN.
Se centrifuga y se obtiene el alicuotado, las alícuotas se
 Agentes estabilizantes de ARN.
conservan en condiciones específicas.
Utilizado para estabilizar el perfil de la transcripción de genes y
Anticoagulante en función de la finalidad de la obtención.
reduce la degradación de ARN in vitro, minimizando la
inducción génica.
Según el tipo de aditivo→
Ventajas→
EDTA dipotásico o tripotásico→ si la muestra se sangre se
 Estabiliza ARN intracelular y minimiza determinadas obtiene para buscar células mononucleares en sangre
variables preanalíticas estabilizando los análisis de periférica (pellet). No se aconseja para muestra de plasma
ARN. para medir presencia de iones o búsqueda de cationes
bivalentes, que actúen como cationes bivalentes que actúen
Inconvenientes→ como intermediarios de la reacción.

ACD→ Recuento y estudio morfológico de eritrocitos.

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No se usa en inmunoensayos ya que disminuye valores a

determinar.
4.2 ALMACENAMIENTO.
- Alicuotar, -/= 0,5ml cada una, debe poderse
Heparina→ Estudios celulares.
congelar y se debe etiquetar. Sellar de forma
No se usa en análisis de proteínas o péptidos, influye en la hermética. Debemos anotar el número de
espectrofotometría de masa. alícuotas, no almacenar más de 2h a 4ºC.
- Se consigue plasma pobre en plaquetas, si no se
• Los tiempos varían en función del tipo de análisis y procesa en ese momento, se almacena a -80ºC.
derivados hematológico.
- Estudios virológicos, muestras hasta 24h.
- Estudios celulares hasta 1h 30min.
5. MUESTRA DE SUERO.
- Biomarcadores en plasma, tras la extracción tras El suero no tiene proteínas, es la fracción de sangre resultante
los primeros 30min centrifugar. Si se excede el tras la coagulación.
tiempo se alteran los biomarcadores.
• Influye el nº de centrifugaciones.
5.1 OBTENCIÓN.
- En caso de buscar disminuir plaquetas en plasma,
debemos hacer doble centrifugación. El 14% de El suero se diferencia del plasma porque no tiene proteínas de
los péptidos provienen de las plaquetas y después la coagulación, siendo la fracción de la sangre que resulta tras
de la centrifugación se activan. la coagulación, después de eliminar el coagulo de fibrina y
- Detección de biomarcadores libres en plasma, otros componentes como por ejemplo el fibrinógeno.
debemos eliminar plaquetas y minimizar liberación
Para obtener el suero hay que centrifugar la muestra de
de péptidos con doble centrifugación.
sangre, se pueden usar dos tipos de centrifuga con rotores
• Adaptar número y condiciones de centrifugación a
diferentes.
particularidades de cada estudio. Sobre todo, en estudio
de biomarcadores en plaquetas y estudios de función - Rotor angular.
plaquetaria. - Rotor oscilante.

Procedimiento de obtención→ Generalmente, se utiliza la centrifuga con rotor oscilante, ya

que el gel separador es más estable.
Tener en cuenta temperatura, tiempo de muestra y doble
centrifugación. Se centrifuga una vez, pero está prohibida la recentrifugación,
porque produce cambios en la reacción y realización de la
Temperatura→ Si se procesa la muestra en los primeros
analítica.
30min de la extracción, sería la deleción, a t.a entre 16-24ºC,
ya que se minimiza la activación plaquetaria y se minimiza 1. Centrifugar la muestra de sangre, usando un rotor angular
agregación de proteínas (péptidos). u oscilante. Por lo general se usa el oscilante, ya que hace
que la barrera del gel separador sea más estable, se
De no ser así, almacenar en frigorífico de 2-4ºC, para no
centrifuga una vez, pero no se puede Re centrifugar. Ya
alterar los componentes.
que altera la muestra y por consecuente sus resultados.
Si se congela en vez de refrigerar se debe esperar 2h desde la 2. Anotar la fecha y hora de extracción, ya que influye en los
extracción. Centrifugándose en la primera hora de la ritmos circadianos, determinaciones de biomarcadores.
extracción para posterior almacenamiento en congelador. 3. Depende del tiempo y la temperatura, por lo que hay
que procesar la muestra en el mínimo tiempo posible.
Doble centrifugación→1300-1500rpm, 15/30min, parte 4. Las congelaciones y descongelaciones afectan a las
superior plasma, intermedia leucocitos color claro, parte concentraciones de algunos biomarcadores. Lo ideal es
inferior hematíes color rojo. someter sólo un ciclo de congelación y descongelación, si
se realiza más de una vez, alteraría los biomarcadores.
Se obtiene aspirando con la pipeta y el sobrante se centrifuga
a 2500rpm durante 15min.
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Cómo procesar la muestra→ - Si lo recogemos en un tubo de tapón rojo pero

que tiene activador del coagulo, el tiempo de
1. Recoger espécimen de sangre periférica y procesarla retracción es 30 minutos.
lo antes posible, 1-2h.
2. Mantener la muestra a t.a hasta la hora de la Condiciones ideales para extraer la muestra→
centrifugación para evitar la activación de las
plaquetas, proteger la muestra de luz directa.  Extracción sea con tubo de vacío, aunque puede
3. Mantener el tubo en posición vertical durante 30min variar según el laboratorio, del tiempo de respuesta
como mínimo. En el caso de no centrifugar en los del resultado, la urgencia. Lo mejor es un sistema de
primeros 30min, se mantiene en posición vertical en vacío.
la nevera a 4ºC, durante máximo 2h. Anotando  Centrifugar para separar el coágulo del suero, se
cuando se almacena en nevera y durante cuánto utiliza como barrera un gel separador o partículas
tiempo. de sílice, que forman una línea. Se pueden añadir el
4. Centrifugar 1500-2000rpm durante 10min a t.a. gel o las partículas de sílice en el pre-centrifugado.
5. Sacar el tubo y retirar la parte superior de color Como separador se usa, gel separador (barrera
claro amarillento, con una micropipeta o con pipeta física que evita el contacto entre suero y coágulo
pasteur. Evitando tocar el gel separador, evitando la contaminación), tapón color anaranjado
trasladándolo a alícuotas o almacenar. o amarillo.
6. Alicuotar, (meter en alícuotas), la cantidad de cada  Las partículas de sílice activan el coágulo, el tapón
una entre 0,3-0,5ml, sellar con cierre hermético y del tubo es color amarillo.
anotar cuantas alícuotas se han obtenido.  Si se echa atropina, también es un
activador/acelerador de la coagulación, hace efecto
en 5min. El tapón del tubo es color naranja.
5.2 CÓMO SE ALMACENAN.
• Debemos conocer el tiempo de retracción del Otro tipo→ Función de acelerar y separar, en 5min
coágulo. Esperando 30min para que la sangre se producen la coagulación. Atropina, tapón naranja.
coagule. Si el espécimen se extrae de un paciente con
deficiencia de la coagulación o con un anticoagulante,
el tiempo se alargará. Debemos conocer antes de
6. ESPECIFICACIONES.
empezar a centrifugar la muestra los tiempos de
retracción del coágulo. 6.1 DERIVADOS PLAQUETARIOS.
• Los tiempos varían dependiendo del tubo de
Obtención de plasma rico en plaquetas (PRQ)→ Se usa para
recogida. En tubos de tapón rojo (sin activador),
tratamientos. Regeneración ósea, ya que facilita la aparición de
puede tardar la retracción 60min, en tubo de tapón
osteoblastos, efecto angiogénico (neovascularización, se crean
rojo, pero con activador del coágulo, el tiempo es de
nuevos vasos, produciendo que lleve más oxigeno a la zona),
30min. En tubo de tapón naranja, que lleva el gel
usado habitualmente en cirugía maxilofacial y estética
separador y el activador del coágulo, tardará 3-5min.
(antienvejecimiento), para regeneración de nervios, ejemplo
En tubo con tapón amarillo (no tiene gel separador,
nervio óptico para oftalmología. Mejora las autotransfusiones,
pero sí activador de coágulo), tardará 30min. Si hay
aumenta la vida útil y es usado en trasplantes.
menos cantidad de muestra (proporción entre el
espécimen y el activador cambia) se formará fibrina y Contiene factores de crecimiento, es una suspensión
los resultados serán erróneos. concentrada de la sangre centrifugada y con alta concentración
• Antes de centrifugar se debe tener claro la retracción de plaquetas. Se obtiene plasma rico en factores de
del coágulo. crecimiento, se obtiene la suspensión del plasma, libre de
- Varía dependiendo del tubo en el que va recogido factores de crecimiento, se puede congelar, el plasma rico en
el espécimen, si lo recogemos en un tubo que factores de crecimiento se puede congelar.
tiene tapón rojo sin activador del coagulo, es decir,
tubo con tapón rojo el tiempo de retracción es de También se puede obtener lisados plaquetarios, ricos en
60 minutos. plaquetas ya que se obtienen a partir de plasma rico en
factores de crecimiento, al cual se extraen las plaquetas por
 U.5 MUESTRAS DE SANGRE.

filtración de los restos celulares de plaquetas, obteniendo así el - Mitógeno (aumenta la mitosis) y facilita la apoptosis
lisado, del cual se obtienen factores de crecimiento y (muerte celular programada).
- Proapoptógeno y facilita diferenciación de las células
Los factores de crecimiento del plasma, es directamente
renales y fibroblastos.
proporcional al número de plaquetas, A mayor número de
factores de crecimiento, mayor número de plaquetas. El plasma rico en plaquetas es extraído a partir de la muestra
de sangre, al ser obtenido a partir del propio paciente, no es
El plasma es rico en factores de crecimiento, mejora la
inmunorreactivo (no lo rechaza el sistema inmune).
regeneración d ellos tejidos.
El plasma rico en plaquetas contiene entre 3-5 veces una
Los factores de crecimiento son proteínas que segregan las
mayor concentración de plaquetas que la que hay en sangre
plaquetas.
normal.
Proceso→ Cuando un estímulo entra en contacto con la
Para obtener plasma rico en plaquetas, el mejor anticoagulante
membrana celular actúa sobre un receptor, lo activa y lo
es el citrato de sodio al 3%, el EDTA hincha plaquetas.
estimula aumentando la liberación celular, la concentración de
las células y su proliferación. Repara los tejidos. 1. Coger tubo con citrato.
2. Extraer sangre en el tubo, si es jeringa, meter la
sangre en el tubo, dejar el tubo en reposo durante
6.2 FACTORES DE CRECIMIENTO.
más de 30min si se desea coagular, hay gente que
Factores de crecimiento predominantes en el plasma→ dice 90min.
3. Agitador 10min para mezclar con el citrato.
• Factor de crecimiento derivado de las plaquetas
4. Centrifugar.
(PDGF)→
5. Extraer la parte superior del tubo parte
- Activación macrófagos y angiogénesis. leucoplaquetaria), ahí se encuentran los factores de
- Facilita mitosis de las células mesenquimales crecimiento, se recoge con pipeta estéril, no
- Facilita formación de colágeno tipo I. contaminar con hematíes.
- Es utilizado en medicina estética. 6. Transferir a tubo estéril 15ml.
• Factor de crecimiento beta transformador (TGFB)→ 7. Centrifugar 15min.
- Transformación y diferenciación de células
mesenquimales. Existen preparados comerciales que hacen la extracción
- Promueve la quimiotaxis. directa, ejemplo PDFG90/1, BRCA1, Curasan-system,
- Proangiogénesis y la creación de colágeno por los blateltex, sistema plaquetario.
fibroblastos (se producen cambios antes de la
• Plasma rico en factores de crecimiento PRFG→
formación del vaso).
Suspensión de plasma donde están libres los factores de
- Proliferación de osteoblastos.
crecimiento plaquetarios.
• Factor de crecimiento fibroblástico (FGF)→
- Creación de fibronectina. Pasos→
- Proliferación de osteoblastos.
- Disminuyen o inhiben los osteoclastos. 1. Para romper la membrana congelar a -90ºC mínimo.
- Facilita pro angiogénesis. Se puede mantener hasta 6 meses a -40ºC a -90ºC
• Factor de crecimiento insulin light (IFH)→ hasta 5 años.
- Síntesis osteocalcina, fosfatasa alcalina y colágeno. 2. Para extraer se descongela entre 1-6ºC.
- Células mesenquimales y de revestimiento. 3. Alicuotar antes o después de atemperar (t.a).
• Factor de crecimiento del endotelio vascular (VGF)→ 4. Lisado plaquetario quitando los desechos celulares,
- Facilita la hiper permeabilización de los vasos separando los factores de crecimiento, centrifugando
sanguíneos. por primera vez (se quitan los desechos) a 3500rpm
- Quimiotaxis que facilita el factor de crecimiento. 30min lisando así la mayoría de las células, el plasma
- Facilita el crecimiento de las células endoteliales. se pasa por un film entre 0,22 a 0,8micrómetros.
• Factor de crecimiento epidérmico (EGF)→ 5. Una vez filtrado, se hace el alicuotado, las alícuotas se
- Facilita la quimiotaxis. pueden conservar hasta 2 años.
 U.5 MUESTRAS DE SANGRE.

6.3 COMPONENTES Y Hemocomponentes→

HEMODERIVADOS DE LA • Concentrado de hematíes→ Unidad extraída con

SANGRE. anticoagulante, con o sin conservantes, que, por
centrifugación o sedimentación, se extrae el plasma
Se trabaja con componentes sanguíneos y hemoderivados.
quedando un sedimento con eritrocitos, leucocitos y
• Con sangre total (hematíes y plaquetas se separan con plaquetas. El concentrado de hematíes se usa para
centrifugación suave). aumentar transporte de oxígeno, hemorragias o anemia.
• Plasma residual (se puede usar directamente o fraccionar • Concentrado de plaquetas→ Se consigue al centrifugar
para obtener otros componentes) los componentes una bolsa de donación, partiendo de un plasma rico en
obtenidos se denominan hemoderivados. plaquetas, obteniendo un concentrado de plaquetas que
contiene restos de eritrocitos, leucocitos y restos
En el banco de sangre→ celulares. El concentrado de plaquetas se usar para el
tratamiento de la enfermedad de una persona baja en
Cada vez que se realiza una extracción, se obtiene una unidad plaquetas y antes o mientras se realiza una cirugía en
de hematíes, otra de plasma y plaquetas, también se obtiene pacientes con riesgo de hemorragias o pacientes con
de cada donación esas 3 partes, pero plaquetas en menor enfermedad de Von Willebrand.
medida. • Plasma fresco congelado→ La unidad de 450ml de sangre
se centrifuga las 6h después de la extracción, obteniendo
Para obtener la unidad terapéutica de plasma, se necesitan 4
plasma fresco ----ml, se puede congelar a -30ºC hasta 1
donantes. Se usan para transfusiones y otros tipos de
año. Encontramos factor de coagulación 1, 3, 8, trombina
tratamientos. También pueden ser de hematíes. Los
y fibrina. Se utiliza para tratar la enfermedad de Von
hemoderivados más usados son los concentrados de hematíes.
Willebrand, tratar la hemofilia A, B, C; patologías con
El plasma del sobrenadante se recoge y se envía a la industria
déficit de vitamina A, enfermedades por parvovirus y en
farmacéutica para transformarlo en hemoderivados. A demás
neonatos con problemas de inmunidad pasiva.
de hemoderivados, plasma y concentrados de hematíes,
• Crioprecipitado→ Concentrado de proteínas del plasma,
también se pueden conseguir hemo componentes.
se obtienen al descongelar el plasma fresco, después de
Se obtiene a partir de sangre total o plasma fresco congelado, someterlo a una centrifugación y eliminar el
estos componentes pueden ser concentrado de hematíes y sobrenadante, después se vuelve a congelar para obtener
concentrado de plaquetas. el crioprecipitado. Está compuesto por factor de
coagulación VIII, VII y XIII, por fibrinógenos y factor de
Obtener hemocomponentes→ Von Willebrand.
Se usa para trombocitopenias, tratar enfermedad Von
1. Extraer una unidad de sangre total, las bolsas de 450ml
Willebrand tratar hemofilia, alteraciones de fibrinógeno
tienen 63ml de sangre conservadora CPD.
por exceso o defecto, hemostasia tópica quirúrgica. Para
2. Se almacena la sangre a 4ºC, se deja unos 2-3 días.
tratar coagulación cardiovascular diseminada.
3. Se extraen las plaquetas y los leucocitos. Si no se extraen
en ese periodo de tiempo, pierden sus propiedades, se
Tratar factor de coagulación V, VII, VIII, XIII. Cada
centrifuga la bolsa de sangre para que los hematíes se
concentrado contiene unas 80 unidades. De factor VIII y
vayan al fondo y los leucocitos y las plaquetas se extraen.
factor Von Willebrand, 250mg de fibrinógeno.
4. Una vez obtenida la bolsa con los tres niveles. Se extraen
También se usa para tratar la púrpura trombocitopénica
cada uno de ellos, plasma leuco plaquetaria, se añade una
trombótica congénita (PTTC). Se usa también en
solución conservante de glucosa (adenina, cloruro sódico
desprendimiento prematuro de placenta, Hay un tipo de
y manitol) para que los hematíes conservados en la bolsa,
crioprecipitados inactivados por patógeno, se usan como
produzcan hematocrito entre un 55-65% y la
fuente de fibrinógeno, la ventaja es que se pueden
concentración de hemoglobina sea de 40g/dl. En
congelar y almacenar a t.a hasta 5h. El crioprecipitado
condiciones normales, la concentración de hemoglobina
normal se descongela a -18ºC y debe usarse en las
es de 14g/dl.
primeras 4h.
5. De esta manera se obtiene un volumen aproximado de
200ml obteniendo los hemo componentes.
 U.5 MUESTRAS DE SANGRE.

Hemoderivados→ Estudios de serie roja→ Recuento hematíes, determinaciones

hemoglobina, índice eritrocitario, elaborar gráfica entre índice
- Plasma rico en plaquetas. eritrocitario y número de hematíes.
- Plasma rico en factores de crecimiento.
- Concentrado de hematíes. Estudios de serie blanca→ Determinaciones del recuento y
valor absoluto de cada tipo de leucocito, índices leucocitarios,
Se encarga de obtenerlo la industria farmacéutica a partir del células LUC, índice mieloperoxidasa y la gráfica de
plasma. Los hemoderivados tienen albúmina, factor VIII de la diferenciación de los leucocitos con diferentes tinciones.
coagulación, inmunoglobulinas, fibrinógenos, complejo de la
protrombina. Plaquetas→ Recuento de plaquetas e índices plaquetarios.

Los hemoderivados es un grupo de productos farmacéuticos, Al estudiar sangre, se determina presencia y determinación de
el principio activo es sangre donada de pacientes sanos, analitos (colesterol, hormonas, etc.).
procesada para fraccionarla.
Antes de la cirugía se piden pruebas de coagulación. Se hacen
Nunca se va a emplear para obtenerlos métodos de síntesis a distintos niveles, al tener que hacer una prueba de
biológica o síntesis química. coagulación se debe tener en cuenta:

El fraccionamiento es someter a la sangre para fraccionarla y - Extracción lo menos traumática posible para no activar
purificarla. Obteniendo un producto terapéutico, es un plaquetas, no usar torniquete a ser posible.
vehículo para el transporte para otras sustancias. Es eficaz y - Mezclar sangre con citrato.
seguro. - Al transportarse debe ser a t.a, si se hace en frío se
activa el factor de coagulación 7.
Los principales hemoderivados a partir del plasma→ - En el manejo de la muestra no se puede hacer después
de 2h, se degradan factores de la coagulación.
• Albúmina→ Para hepatopatías, grandes quemados que
entra dentro de shock traumático. Incluye estudios de plaquetas (forma, tamaño, si se agregan o
• Factores de coagulación→ Como el factor VIII, utilizado no, número de plaquetas, etc.). Fase plasmática de la
en pacientes con hemofilia. coagulación si hay sospecha de activación o alteraciones de la
• Inmunoglobulinas→ Personas con enfermedades tromboplastina, recuento plaquetario (normal entre 150000 y
autoinmunes (inmunodeprimidas). 400000) si está por debajo es trombocitopenia. Si están por
• Alfa-1-antitripsina→ Se usa en pacientes con baja cantidad encima es trombocitosis. Hay que hacer estudios de
de esta enzima. agregación plaquetario, se realiza con un aparato de estudio
turbimétrico, a un plasma rico en plaquetas se le añaden
concentraciones distintas de ADP, colágeno o epinefrina,
6. PRINCIPALES ELEMENTOS
apareciendo así un coágulo para realizar el estudio de cuanto
FPORMES Y SUSTANCIAS tarda en producirse la agregación plaquetaria (cuánto tarda el
ANALIZABLES EN SANGRE. coágulo en formarse). También se estudia la funcionalidad de
plas plaquetas (Prueba FA100), mide el tiempo de obturación
Sustancias a analizar y elementos formes a analizar de las
(si hay una hemorragia, el tiempo que tarda en agregarse),
muestras de sangre (tipos de pruebas)→
función plaquetaria y citometría de flujo.
Las más relevantes son:
A demás de las pruebas de coagulación se puede estudiar la
 Hemogramas. fase plasmática de la coagulación, se debe determinar tiempo
 Estudios bioquímicos. de protrombina, el tiempo de tromboplastina parcial activada
 Pruebas de coagulación. (TTPA) ) o cefalina.

Hemograma→ Detectar alteraciones de hemostasia, dosificar factores de la

coagulación, análisis de multímeros de Von Willebrand niveles
• Serie roja. antigénicos de Von Willebrand y la actividad del factor del Von
• Serie blanca. Willebrand con el factor de Ristocetina. Se pueden utilizar
• Plaquetas. para determinaciones de multímeros de ristocetina.
 U.5 MUESTRAS DE SANGRE.

Se puede usar para detectar sustancias inhibidoras de factores

de la coagulación o anticuerpos de los factores de la
coagulación, o se pueden hacer estudios de biología molecular
para detectar alteraciones genéticas de trastornos de la
coagulación.

MODIFICACIONES.
Antes de los derivados plaquetarios→
- Las partículas de sílices son activadores de la coagulación.
- El tiempo de acción o el tiempo que tardan en actuar para
que se produzca el coagulo está entre los 30-60 minutos.
- El tapón es anaranjado.
- La trombina que es otro activador de la coagulación, un
acelerador. El tampón es de color amarillo.
- El tiempo de formación de coagulo es de 5 minutos.

Los derivados plaquetarios, usos→

- El plasma rico en plaquetas se usa en cirugía maxilofacial,
cirugía estética y para producir proliferación celular, para la
regeneración del nervio óptico en oftalmología y se usa
para autotransfusiones en los trasplantes.
- En el plasma rico en plaquetas no se puede usar EDTA ni
tampoco puede tener ACD porque tiene un pH bajo, por
debajo del 6,5 e interfiere en la agregación plaquetaria.

Pasos para la obtención de plasma rico en plaquetas→

- La centrifugación durante 15 minutos a 2.500 revoluciones
por minuto.

Hemocomponentes→
- Plasma fresco congelado. Se encuentra factores de la
coagulación I, VIII, antitrombina III y fibrinógenos. No hay
trombina.