Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Bioquímica I
Integrantes:
• Guerrero Mishquero Nathaly Nicole
• Rodríguez Ordoñez Brittany Marissa CICLO I
Semestre: CUARTO Grupo: 4-3B
• Valdiviezo Cordova Carlos Isaac 2024 - 2025
• Vera Andrade Ricardo Xavier
• Yépez Cruz María de los Ángeles 2018
DOCENTE: INFORME #3
Q.F. Remilton Agustín Ramirez Reyes Mgs
SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFIA DE
PAPEL
Objetivo:
• Separar aminoácidos mediante la aplicación de la cromatografía ascendente de papel y su posterior
identificación mediante el reactivo de ninhidrina.
• Diferenciar alfa aminoácidos de iminoácidos.
• Calcular el factor de retención para cada aminoácido separado.
• Identificar las muestras desconocidas de aminoácidos.
Instrucciones o consideraciones previas
Se extrae de una fase líquida móvil la sustancia que se quiere separar y se le retiene en una fase sólida. El
fenómeno depende de adsorción por fuerzas de Van Der Waalls, puentes de hidrógeno o intercambio de iones. El
método de la cromatografía consiste en extender el adsorbente deseado sobre una placa de vidrio o algún soporte.
La gota de solución problema se aplica en un punto inicial conocido. La placa se coloca en una cámara
cromatográfica cerrada, junto con un sistema de solventes adecuado. Por capilaridad, el solvente recorre la capa
estacionaria y separa los componentes de la muestra. Después de la separación, se sacan las placas y, mediante la
adición de ciertos reactivos, se revelan las manchas correspondientes a los aminoácidos y estándares.
¿Qué es un aminoácido?
Los aminoácidos son compuestos orgánicos que se combinan para formar proteínas, las cuales son indispensables
para nuestro organismo. Están formadas de carbono, oxígeno, hidrógeno y nitrógeno. Entre sus funciones, los
aminoácidos ayudan a descomponer los alimentos, al crecimiento o a reparar tejidos corporales, y también pueden
ser una fuente de energía. Los aminoácidos son también los encargados de permitir la contracción muscular o
mantener el equilibrio de ácidos y bases en los organismos. Aparte, cada uno de los diferentes aminoácidos cuenta
con una función independiente. (Guillén Valera, y otros, 2021)
Composición
Los aminoácidos están compuestos por una molécula orgánica con un grupo amino y un grupo
carboxilo. Dependiendo de su estructura, se pueden diferenciar en formas L y D. Las estructuras
L son las naturales para los organismos, y por tanto, las más importantes.
¿Qué es iminoácido?
Un iminoácido es un compuesto orgánico que contiene un grupo imino y un grupo carboxílico juntos. Podemos
denotar el grupo imina como (> C = NH). Por tanto, a diferencia de los aminoácidos, estas moléculas tienen un
doble enlace entre los átomos de carbono y nitrógeno. Algunas enzimas pueden convertir aminoácidos en
iminoácidos. Por ejemplo, las enzimas D-aminoácido oxidasa son tales enzimas. Además, la prolina contiene un
grupo amina secundaria (lo llamamos imina), en lugar de un grupo amina primaria. Por lo tanto, llamamos prolina
un "iminoácido". (Smith, 2021)
Prolina
Reactivos: Materiales y Equipos de laboratorio
Solución de aminoácidos 200mg% • Cámara de cromatografía
- Alanina • Tubos capilares sin anticoagulantes
- Glicina • Probeta
- Leucina • Embudo
- Prolina • Pipetas
Solvente del desarrollo compuesto de: • Papel filtro 3MM
- Butanol
• Cinta adhesiva
- Propanol
- Ácido acético • Horno T° 100-120 °C
Revelador
- Solución de ninhidrina al 0.5%
Actividades desarrolladas
• Papel filtro 3 MM que debe tener dimensiones aproximadas a la cámara a utilizar.
• Realizar con lápiz una línea a 2 cm del borde inferior del papel.
• Aplique aproximadamente 5 ul de las soluciones de aminoácidos y muestras sobre la línea trazada, deje una
distancia entre aplicaciones de 2 cm.
• Esperar que el papel se seque.
• En la cámara para cromatografía agregue 50 ml de solvente desarrollador.
• Pegue el papel en el centro de la tapa de la cámara.
• Coloque la tapa con el papel en la cámara que tiene el solvente de desarrollo.
• Lleve el papel a una estufa por 3 a 5 minutos a temperatura de 100 a 120 °C.
• Retire el papel y con atomizador moje el papel con una solución de ninhidrina al 0,5%.
• Lleve el papel al horno entre 5 a 10 minutos a una temperatura de 80-120 °C.
• Retire el papel y marque el perfil de cada aminoácido separado.
Resultados obtenidos:
Distancia recorrida en el papel Distancia recorrida por el
Analito (aa)
(cm) solvente (cm)
Alanina 6.4 12
Leucina 11.5 12
Glicina 4.5 12
Prolina 7.0 12
Cálculos
Conclusiones:
• Realice un cálculo del coeficiente de retención individual para cada aminoácido y vea la diferencia entre el
punto de aplicación en el medio del tinte y el punto de aplicación frente al solvente. Esto nos da un
resultado numérico diferente para cada sustancia.
• Capaz de distinguir compuestos de alfa-aminoácidos (púrpura/lavanda) e iminoácidos (amarillo) porque una
de las 4 sustancias colocadas sobre el papel de filtro tiene un color diferente a las demás (prolina), lo que
indica que esta sustancia es una amina secundaria (iminoácido).
Recomendaciones
• Antes de la implementación, leer el manual práctico para comprender los materiales a utilizar y las
precauciones a tomar.
• No presione el capilar demasiado tiempo contra el papel de filtro para evitar derramar demasiada muestra y
no deje demasiada muestra en el papel de filtro.
• Anote el tiempo que se deja el papel de filtro en la estufa (es decir, 5 minutos) y el tiempo después de
agregar la ninhidrina (es decir, otros 5 minutos).
Bibliografías
Guillén Valera, J., Sánchez Monge, M., Callejo Mora, A., Gallardo, I., Sevilla Martínez, M., & Corral, M. (21 de enero de 2021).
Aminoácidos. Obtenido de CuidatePlus: https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/aminoacidos.html
Sánchez Enríquez, S., Flores Alvarado, L. J., Gurrola Díaz, C. M., & Heredia Chávez, P. (2014). Manual de prácticas de
laboratorio de bioquímica. México, D. F: McGraw-Hill Interamericana.
Smith, T. (19 de enero de 2021). Diferencia entre aminoácidos e iminoácidos. Obtenido de Strephonsays:
https://es.strephonsays.com/amino-acid-and-imino-acid-5679
