ESCUELA DE QUÍMICA Y FARMACIA

INFORME DE VALIDACION DE METODOS ANALITICOS PARA LA

CUANTIFICACIÓN DE FÁRMACOS

Informe de Validación del Método de Ensayo

Laboratorio No. 1
No. de muestra: 5

IDENTIFICACIÓN DEL MÉTODO DE ENSAYO VALIDADO

Nombre completo del método: Validación de un método espectrofotométrico de
análisis para el contenido de Ibuprofeno 400 mg en el producto CalmaDENT por
motivo de cambio de proveedor en materia prima y transferencia tecnológica en
equipo de compresión.

Analito: Ibuprofeno 400 mg

IDENTIFICACIÓN DE REACTIVOS, ESTÁNDARES E INSUMOS

Reactivos, estándares y material de referencia (Nombre, No. Lote, Fecha de Vencimiento,
Proveedor, Grado/Calidad).

Nombre: Ibuprofeno
Marca: SIEGFRIED
Lote: MP345-6
Fecha de vencimiento: 03/ 2026
Proveedor: Vitafarma
Grado/Calidad: No mencionado

Materiales, insumos y equipos necesarios para desarrollar la validación:

Materiales Reactivos Equipos

3 Matraces aforados de 100 mL Solución buffer fosfato pH 7,4 Espectrofotómetro UV

3 Matraces aforados de 50 mL Estándar de Ibuprofeno Balanza analítica

1 Probeta de 50 mL Almidón de maíz Sonicador

1 Propipeta Celulosa microcristalina

3 Pipeta pasteur Estearato de magnesio

1 Pipeta graduada 5 mL

1 Cinta masking

1 Plumón

Soluciones estándares y patrones involucrados. Cálculos de las

disoluciones para construir las curvas de calibración.
 1. Ensayo de selectividad:

Se masaron 400 mg de Ibuprofeno y se disolvieron en 100 mL de buffer fosfato

pH 7,4

Concentración inicial Ibuprofeno en solución: 400 mg / 100 mL = 4 mg / mL

Se tomó una alícuota de 10 mL a un matraz aforado de 50 mL y se aforó con la

solución buffer fosfato pH 7,4

Factor de dilución:

Fd = 50 mL / 10 mL = 5

Concentración Ibuprofeno diluida:

Fd = Concentración concentrada / Concentración diluida

Concentración diluida = Concentración concentrada / Fd

Concentración diluida = 4 mg / mL / 5

Concentración diluida = 0,8 mg / mL

Valores de absorbancia:

Blanco 1: 0,140
Blanco 2: 0,138
Blanco 3: 0,135
Promedio Blanco: 0,137

Buffer fosfato + excipientes 1: 0,190

Buffer fosfato + excipientes 2: 0,186
Buffer fosfato + excipientes 3: 0,192
Promedio Buffer fosfato + excipientes: 0,189

Buffer fosfato + excipientes + muestra 1: 0,508

Buffer fosfato + excipientes + muestra 2: 0,497
Buffer fosfato + excipientes + muestra 3: 0,499
Promedio: 0,501

Para ver la selectividad se restan los valores de Absorbancia para averiguar el

valor de Absorbancia del Ibuprofeno solo:

0,137 Abs. del blanco - 0,189 Abs. Buffer fosfato + exc. = 0,052 Absorbancia
excipientes

0,501 Abs. Buffer fosfato + excipientes + muestra - 0,052 Absorbancia

excipientes - 0,137 Abs. del blanco = 0,312 Absorbancia Ibuprofeno

2. Determinación de la concentración de las muestras para el ensayo

de exactitud, linealidad y precisión:

Para todas las muestras el factor de dilución es el siguiente:

Factor de dilución:
Fd = 50 mL / 10 mL = 5

Esto se explica ya que se tomó una alícuota de 10 mL a un matraz aforado de

50 mL y se aforó con la solución buffer pH 7,4

250 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 250 mg / 100 mL = 2,5 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 2,5 mg / mL / 5 = 0,5 mg / mL

300 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 300 mg / 100 mL = 3 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 3 mg / mL / 5 = 0,6 mg / mL

350 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 350 mg / 100 mL = 3,5 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 3,5 mg / mL / 5 = 0,7 mg / mL

400 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 400 mg / 100 mL = 4 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 4 mg / mL / 5 = 0,8 mg / mL

450 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 450 mg / 100 mL = 4,5 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 4,5 mg / mL / 5 = 0,9 mg / mL

500 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 500 mg / 100 mL = 5 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 5 mg / mL / 5 = 1 mg / mL

550 mg de Ibuprofeno:
Concentración concentrada: 550 mg / 100 mL = 5,5 mg / mL
Fd = 5
Concentración diluida: 5,5 mg / mL / 5 = 1,1 mg / mL

PARÁMETROS DE VALIDACIÓN

Pruebas realizadas:
● Linealidad
● Sensibilidad
● Precisión
 ● Exactitud
● Robustez
● Límites
● Otros

RESULTADOS DE LAS PRUEBAS EXPERIMENTALES REALIZADAS

LINEALIDAD

Descripción:
 La linealidad de un método analítico se refiere a su habilidad para generar respuestas de instrumento,
como la absorbancia, que varían de manera directamente proporcional con los cambios en la concentración
del compuesto de interés, como el Ibuprofeno, dentro de un rango definido de concentraciones. En otras
palabras, conforme la cantidad de Ibuprofeno en la muestra se incrementa o reduce, la señal medida por el
instrumento, que es la absorbancia en este contexto, se ajusta en consecuencia de forma lineal. El criterio
de aceptación de este procedimiento es que el coeficiente de correlación (R2) debe ser mayor o igual a
0,995.

En primer lugar se prepararon 7 soluciones madre a diferentes cantidades de ibuprofeno, las cuales eran
las siguientes: 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg. Luego estas se llevaron a una
medición en el espectrofotómetro UV, junto con su respectivo blanco, el cual es el buffer fosfato pH 7,2 y
ambos midieron 7 veces su absorbancia a 221 nm.
A partir de esta medición se realizó una curva de calibración promedio a partir de todas las absorbancias
obtenidas a diferentes concentraciones de la muestra, en donde la variable independiente son las
concentraciones y la variable dependiente son las absorbancias. Se analizaron los 7 puntos de
concentración de forma creciente para luego obtener una ecuación de la recta y su respectivo coeficiente
de correlación.

Comprimido Concentraci ABS 1 ABS 2 ABS 3 ABS 4 ABS 5 ABS 6 ABS 7

(mg) ón (mg /mL)

250 0,5 0.254 0.251 0.257 0.298 0.258 0.269 0.287

300 0,6 0.2987 0.2879 0.302 0.322 0.301 0.305 0.309

350 0,7 0.377 0.368 0.399 0.387 0.396 0.401 0.397

400 0,8 0.402 0.436 0.425 0.444 0.429 0.422 0.411

450 0,9 0.508 0.497 0.499 0.510 0.511 0.506 0.507

500 1,0 0.568 0.587 0.544 0.599 0.487 0.553 0.510

550 1,1 0.602 0.654 0.633 0.624 0.610 0.641 0.600

Ecuación de la recta:
y = 0,5641x - 0,012

Rango Lineal: Valor obtenido Criterio de aceptabilidad.

Coeficiente de correlación: 0,9953 Mayor o igual a 0,995

Comentarios
A partir de cada una de las absorbancias en las respectivas concentraciones, se
realizaron diferentes curvas de calibración, de las cuales se obtuvo una curva de
calibración promedio. De esta curva de calibración promedio se obtuvo un
coeficiente de correlación de pearson (R2) de 0,9953. Este valor cumple con el
criterio de aceptación, por lo cual se acepta la ejecución de este ensayo.

SENSIBILIDAD

Descripción:
El método es capaz de identificar incluso pequeñas variaciones en la concentración del analito,
evidenciadas por cambios en la absorbancia. Una mayor sensibilidad del método permite detectar
diferencias mínimas en las concentraciones, crucial para el análisis de cantidades muy bajas de
compuestos. La sensibilidad del método se asocia con la pendiente (m) de la línea de calibración, indicando
cuánto cambia la respuesta del instrumento (absorbancia) con cambios en la concentración del analito.

Se realizó una curva de calibración a partir de un blanco buffer fosfato pH 7,2 y de diferentes
concentraciones de la muestra (ibuprofeno), las cuales varían desde 250 mg hasta 550 mg. Estas luego se
midieron en el espectrofotómetro para obtener sus respectivas absorbancias.
 Valor obtenido Criterio de aceptabilidad

Pendiente, m: 0,5641 m ≥ 0,98

Concentración 1,297 0,01 mg/mL

característica:

Comentarios: Cuando la pendiente en la ecuación de la recta es menor al criterio

de aceptabilidad durante una prueba de validación puede indicar que la relación
entre las variables no es lo suficientemente fuerte como para producir resultados
confiables o precisos. Esto podría deberse a distintas razones como que los datos
no son lo suficientemente precisos y por tanto, que exista una gran variabilidad
entre las mediciones, lo que afecta la relación entre las variables. Esto también se
podría deber a posibles limitaciones en la técnica utilizada para realizar esta
validación, lo que afectaría la precisión de los resultados. En este caso, como el
valor de la pendiente no se encuentra dentro del criterio de aceptabilidad, se
determina que la ejecución de este ensayo no es apropiada y con esto, podemos
acordar que este método analitico no es sensible para Ibuprofeno.

LÍMITES

Descripción:
Valor Crítico (LC): Representa el límite de concentración de un componente analizado. Al superar este
límite, se sugiere con cierta seguridad que la cantidad de este componente en la muestra es mayor que en
un material de referencia. Esto simplifica la toma de decisiones al permitir comparaciones significativas entre
las concentraciones. Se calcula con la siguiente fórmula: “LC = 1,645 x Desviación estándar”.
Límite de Detección (LOD): Representa la concentración más baja de un componente analizado que un
método de análisis puede detectar de manera confiable, aunque no necesariamente cuantificar, con un nivel
de confianza establecido. Este límite señala la presencia del componente en la muestra a un nivel superior
al del material de referencia o al ruido de fondo, siendo crucial para identificar trazas de sustancias en
análisis químicos. Se calcula con la siguiente fórmula: “LOD = 3,29 x Desviación estándar”.
Límite de Cuantificación (LOQ): Se refiere a la concentración más baja de un componente analizado que
puede ser medida con precisión y exactitud adecuadas en un análisis. Normalmente se define mediante una
desviación estándar relativa de alrededor del 10%. Este límite representa el umbral mínimo para obtener
mediciones cuantitativas confiables. Se calcula con la siguiente fórmula: “ LOQ = 10 x Desviación estándar”.
 Valor obtenido Criterio de aceptabilidad
(unidades)

Límite crítico, LC: 0,2134 LC < LOD

Límite detección, LOD: 0,427 LC < LOD

Límite cuantificación, LOQ: 1,297 LC < LOD << LOQ

Comentarios:

Desviación estándar promedio: 0,1297

LC = 1,645 x Desviación estándar

LC = 1,645 x 0,1297
LC = 0,2134
LOD = 3,29 x Desviación estándar
LOD = 3,29 x 0,1297
LOD = 0,427

LOQ = 10 x Desviación estándar

LOQ = 10 x 0,1297
LOQ = 1,297

De acuerdo a los resultados obtenidos, tanto el valor de LC, LOD y LOQ cumplen los
criterios de aceptabilidad. Esto lo podemos asegurar ya que el valor de LC ( 0,2134)
es menor que el valor de LOD (0,427) y por otro lado, el valor de LOD (0,427) es
mucho menor que el valor de LOQ (1,297). Por lo tanto, el cumplimiento de los
criterios de aceptabilidad para LC, LOD y LOQ significa que estos límites son
apropiados para el análisis en cuestión, proporcionando una indicación confiable de
la presencia y la concentración del analito en la muestra, así como la capacidad de
cuantificar dichas concentraciones con precisión y exactitud aceptables.

PRECISIÓN

Descripción:
La precisión describe qué tan agrupados están los resultados de varias mediciones de una misma muestra
realizadas en condiciones comparables. Esencialmente, refleja la consistencia de los resultados obtenidos
al medir repetidamente. Para determinar la precisión de un método, se utilizan conceptos como la
repetibilidad, que examina la coherencia de los resultados bajo las mismas condiciones, y la
reproducibilidad, que considera la uniformidad de los resultados cuando hay variaciones en las condiciones
de medición.
 Precisión en condiciones de Repetibilidad

Nivel/ SD % CV Criterio de aceptabilidad

concentración
(unidades)

0,5 mg/mL 0,0224 4,51 %CV ≤ 3%

0,6 mg/mL 0,0111 1,99 %CV ≤ 3%

0,7 mg/mL 0,0277 3,89 %CV ≤ 3%

0,8 mg/mL 0,0184 2,38 %CV ≤ 3%

0,9 mg/mL 0,0256 2,79 %CV ≤ 3%

1,0 mg/mL 0,0530 5,33 %CV ≤ 3%

1,1 mg/mL 0,0225 2,00 %CV ≤ 3%

Comentarios:

La repetibilidad se refiere a la habilidad de un método para generar resultados

coherentes al medir varias veces la misma muestra en condiciones idénticas,
utilizando el mismo operador y equipo. Se evalúa realizando al menos seis
mediciones y se analiza mediante la desviación estándar y el coeficiente de
variación en porcentaje.
El objetivo del ensayo de repetibilidad es evaluar la capacidad de un método
analítico para producir resultados consistentes y cercanos entre sí cuando se
realizan múltiples mediciones de la misma muestra bajo condiciones controladas y
constantes. Esto incluye el uso del mismo instrumento, el mismo operador, y la
misma metodología en un corto periodo de tiempo. Al asegurarse de que el método
ofrece poca variabilidad bajo estas condiciones estrictas, se valida su confiabilidad
para mediciones precisas y repetibles en el laboratorio.
En este contexto, se identifica que tres mediciones no satisfacen el estándar de
aceptabilidad establecido, lo que pone en duda la confiabilidad del método para
generar mediciones precisas y consistentes. Dada esta limitación en la fiabilidad
del método, se concluye que la implementación de este ensayo no es adecuada y,
por ende, se procede a su rechazo.

Precisión en condiciones de Reproducibilidad

Nivel/ SD % CV Criterio de aceptabilidad

concentración
(unidades)

0,5 mg/mL 0,0224 4,51 %CV ≤ 3%

0,6 mg/mL 0,0111 1,99 %CV ≤ 3%

0,7 mg/mL 0,0277 3,89 %CV ≤ 3%

0,8 mg/mL 0,0184 2,38 %CV ≤ 3%

0,9 mg/mL 0,0256 2,79 %CV ≤ 3%

1,0 mg/mL 0,0530 5,33 %CV ≤ 3%

1,1 mg/mL 0,0225 2,00 %CV ≤ 3%

Comentarios:

La reproducibilidad, definida como la capacidad de un método para producir

resultados consistentes cuando se realizan mediciones de la misma muestra por
diferentes laboratorios, utilizando distintos equipos y realizado por diferentes
operados. En este caso, se observa que 3 mediciones (concentraciones: 0,5
mg/mL, 0,7 mg/mL y 1,0 mg/mL) presentan un coeficiente de variación mayor a 3%,
por ende, no se encuentran dentro del criterio de aceptabilidad, por lo que se
determina que la metodología no es precisa respecto a la reproducibilidad. Por
tanto, se concluye que este método de valoración no entrega resultados confiables
y consistentes cuando se realizan mediciones en distintos laboratorios, por distintos
operarios y utilizando diferentes equipos. Debido a esta limitación en la
confiabilidad del método, se llega a la conclusión de que no es apropiado
implementar este ensayo y por tanto, se procede a su rechazo.

Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad

Precisión del 4,06 % %RSD < 1 %

método %RSD

Horrat 2,07 % Horrat < 1%

Comentarios:

El valor de %RSD indica la variabilidad relativa de los resultados de precisión en

comparación con la media de las mediciones. Un %RSD de 4,06% no se considera
aceptable. Esto sugiere que el método tiene una variabilidad moderada y no puede
considerarse razonablemente preciso para el rango de concentraciones analizadas.

El valor de Horrat se utiliza para evaluar la precisión de los resultados en ensayos

interlaboratorios, comparando la desviación estándar relativa observada (%RSD)
con un valor esperado basado en el número de mediciones y la concentración del
analito. Un valor de Horrat cercano a 1 indica un acuerdo razonable con la
desviación estándar relativa esperada. Un Horrat de 2,07 es algo elevado, lo que
sugiere que la variabilidad observada en los resultados es aproximadamente el
doble de la que se esperaría basándose en criterios estándar. Esto podría indicar
que el método puede tener áreas de mejora en términos de su reproducibilidad o
que hubo factores no controlados que afectaron la precisión durante el ensayo.

En resumen, mientras que el %RSD sugiere que el método tiene una precisión
aceptable, el valor de Horrat elevado indica que hay una mayor variabilidad en los
resultados de la esperada, lo que podría requerir una investigación adicional para
identificar y reducir posibles fuentes de variación. Podría ser útil revisar las
condiciones experimentales, la homogeneidad de la muestra, la calibración del
instrumento y la técnica del operador para mejorar la reproducibilidad del método.
 ANEXOS (Anexar al presente informe los documentos necesarios para respaldar la información).

Elaborado por: Firma Fecha

Nombre y Apellidos

Nallely Chaparro Fredes 01/ 04/ 2024

Roberto Figueroa Barrios 01/04/24

Revisado por: Validación Firma Fecha

Nombre y Apellidos

Nallely Chaparro Fredes Aceptada 01/04/24

Roberto Figueroa Barrios Rechazada

BIBLIOGRAFÍA

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