BILIRRUBINA TOTAL

MÉTODO DE JENDRASSIK – GROF

Para la determinación “in vitro” de bilirrubina total en suero o plasma

PRINCIPIO PROCEDIMIENTO
La bilirrubina total se determina por reacción con el ácido sulfanílico diazoado,
en presencia de cafeína, que da lugar a la formación de un azopigmento. La
Técnica BL M (mL) PR (mL)
bilirrubina directa se determina mediante la reacción anterior, en ausencia de
cafeína. Reactivo B (Cafeína) 1,0 1,0
Reactivo diazo -- 0,1
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
La bilirrubina es un producto del metabolismo de la hemoglobina que se Dis. salina 0,1 --
transporta al hígado, allí se conjuga con ácido glucurónico y el hígado la segrega Muestra 0,1 0,1
a través de la bilis. Esta bilirrubina conjugada es la llamada bilirrubina directa,
mientras que la bilirrubina no conjugada se denomina bilirrubina indirecta. La
bilirrubina total en el suero equivale a la bilirrubina directa más la bilirrubina Mezclar e incubar a temp. ambiente (20 – 25ºC).
indirecta. Leer exactamente a los 10 min.
La bilirrubina directa aumenta en la obstrucción de vías biliares, cirrosis y
hepatitis. Lectura
El aumento de la bilirrubina indirecta o de la total puede indicar enfermedades Longitud de onda: 546 nm
hemolíticas, ictericia neonatal fisiológica, enfermedad Gilbert o intolerancia a la Blanco: H2O
fructosa. Cubeta: 1 cm de paso de luz

Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los CÁLCULOS

resultados se han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de Δ Abs = Abs PR - Abs BL M
laboratorio obtenidos.
Donde:
REACTIVOS Abs. PR: Absorción de la muestra
Kit 1 x 250 mL. (Ref. 99 27 14). Contiene: Abs BLM: Absorción del blanco de muestra
A. 1 x 50 mL Ac. Sulfanílico. Ref. 99 90 11
B. 2 x 100 mL Cafeína. Ref. 99 23 91 Δ Abs x 13,1 = mg bilirrubina total / dL
C. 1 x 2 mL Nitrito sódico. Ref. 99 90 94
Unidades SI
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO mg / dL x 17,1 = μmol / L
Preparación del reactivo diazo: Mezclar 1 parte de la disolución C con 50
partes de la disolución A. Se aconseja utilizar material de un solo uso para VALORES DE REFERENCIA
la preparación del reactivo de trabajo. Una vez preparado, se introduce en el Adultos: hasta 1,2 mg/dL
contenedor vacío suministrado con el kit. Recién nacidos:
< 14 días 0,19 - 16,6 mg/dL
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS < 15 días-1 año 0,05 - 0,68 mg/dL
Las concentraciones en las disoluciones reactivas son: 1-3 años 0,05- 0,40 mg/dL
Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca
A. Ác. sulfanílico 6 mM sus propios valores de referencia.
HCl 0,17 M
PRESTACIONES. CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO.
B. Cafeína 0,25 M Las características de funcionamiento de un producto dependen tanto del
Benzoato sódico 0,50 M reactivo como del sistema de lectura empleado.
Los resultados siguientes se han obtenido con un analizador automático:
C. Nitrito sódico 0,4 M
Sensibilidad, como límite de detección: 0,1 mg/dL
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Linealidad: Hasta 25 mg/dL. Para concentraciones superiores a 25 mg/dL, el
Los componentes del kit almacenados a temperatura ambiente (≤ 25ºC) son desarrollo de color obtenido (Abs > a 1,500 aprox.) puede resultar de difícil
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. lectura en espectrofotómetros no digitales. Se aconseja diluir 1/10 la muestra
El reactivo diazo es estable 10 días a temperatura ambiente (≤ 25ºC). con salina (Na Cl 0,9%). Multiplicar el resultado final por 10.
Exactitud, como % de recuperación: 97,8%
Indicaciones de alteración de los reactivos: Precisión en la serie, como CV%: 1,3%
Presencia de partículas o turbidez. Blanco del reactivo de trabajo > 0,100 Precisión entre series, como CV%: 1,7%
MATERIAL NECESARIO NO SUMISTRADO Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias
Material común de laboratorio. significativas al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC. Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están
Cubeta de 1cm de paso de luz. disponibles bajo demanda.

MUESTRA INTERFERENCIAS
Suero o plasma exento de hemólisis. La presencia de hemólisis puede interferir en el resultado.
La bilirrubina sérica disminuye en un 50 % después de 1 hora a temperatura
ambiente (≤ 25ºC), y expuesta a la luz solar directa. Las muestras mantenidas CONTROL DE CALIDAD
a 2-8ºC en la oscuridad son estables aproximadamente 3 días. Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref.
994148/996571) y Seriscann Anormal (Ref. 994685/999329) en cada proceso
PRECAUCIONES de medida para verificar los resultados. Se recomienda calibrar con el Calibrador
Los reactivos contienen azida sódica al 0,09%, manipular con precaución. para Autoanalizadores (Ref. 996280) siempre que se cambie el lote de reactivo
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. y/o calibrador y/o los sueros control no entren dentro de los márgenes.
El calibrador debe considerarse como una muestra humana y por lo tanto
potencialmente infeccioso. Utilizar protección adecuada. Se aconseja consultar
BIBLIOGRAFÍA
la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. La
Jendrassik, L., Gróf,P. (1938). Biochem Z., 297, 81-89.
eliminación de residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
Doumas, B.T., Perry, B.W., Sasse,E.A., Straumjord Jr. J.V. (1973). [Link].,
19, 984-993.
AUTOANALIZADORES
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos están disponibles bajo
Philadelphia (2012).
demanda.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN [Link]
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 07.2023 PRO4-9_BIT_9
TOTAL BILIRUBIN
JENDRASSIK – GROF METHOD
For “in vitro” determination of total bilirubin in serum or plasma

PRINCIPLE PROCEDURE
Total bilirubin is determined by reaction with diazotized sulphanilic acid, in the
presence of caffeine, with the final production of an azopigment. The same
Technique BL S (mL) SA (mL)
reaction, but in the absence of caffeine, is used to measure direct bilirubin.
Reagent B (Caffeine) 1.0 1.0
DIAGNOSTIC USE
Diazo reagent -- 0.1
Bilirubin is a metabolic hemoglobin product which is transported to the liver,
where there is conjugated with glucuronic acid and it is secreted through bile. Saline 0.1 --
This conjugated bilirubin is called direct bilirubin, while unconjugated bilirubin is Sample 0.1 0.1
called indirect bilirubin. The total serum bilirubin is direct bilirubin plus indirect
bilirubin.
Mix and let stand at room tem (20 - 25ºC). Read exactly at 10 minutes.
Direct bilirubin increases in biliary obstruction, cirrhosis and hepatitis. High
level of indirect or total bilirubin may indicate hemolytic diseases, physiological
Reading
neonatal jaundice, Gilbert’s disease or fructose intolerance.
Wavelength: 546 nm
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should
Blank: H2O
integrate clinical and laboratory data.
Cuvette: 1 cm light-path
REAGENTS
Kit 1 x 250 mL. (Ref. 99 27 14). Contents: CALCULATIONS
A. 1 x 50 mL Sulphanilic acid. Ref. 99 90 11 Δ Abs = Abs SA - Abs BL S
B. 2 x 100 mL Caffeine. Ref. 99 23 91
C. 1 x 2 mL Sodium nitrite. Ref. 99 90 94 Where:
Abs SA: Sample Absorption
Abs BLS: Sample blank Absorption
WORKING REAGENT PREPARATION
Preparation of the diazo reagent: Mix 1 part of solution C with 50 parts of solution Δ Abs x 13.1 = mg total bilirubin / dL
A. It is advisable to use single use material for working reagent preparation.
Once prepared, it is introduced into the empty container supplied with the kit. SI Units
mg / dL x 17.1 = μmol / L
REAGENTS COMPOSITION
The concentrations in the reagent solutions are: REFERENCE VALUES
Adults: up to 1.2 mg/dL
A. Sulphanilic acid 6 mM Pediatric:
HCl 0.17 M < 14 days 0.19 - 16.6 mg/dL
< 15 days-1 year 0.05 - 0.68 mg/dL
B. Caffeine 0.25 M 1-3 years 0.05- 0.40 mg/dL
Sodium benzoate 0.50 M The stated values are for guidance. Each particular laboratory should establish
its own normal range.
C. Sodium nitrite 0.4 M PERFORMANCE CHARACTERISTICS
The performance characteristics depend on the method used. It is recommended
STORAGE AND STABILITY to calculate these data for each particular test protocol. These results have been
The components of the kit, when stored at room temperature (≤ 25ºC), will obtained using an automated analyzer.
remain stable until the expiration date stated on the label.
Diazo reagent is stable for 10 days at room temperature (≤ 25ºC). Sensitivity, as detection limit: 0.1 mg/dL
Linearity: Up to 25 mg/dL. Concentrations higher than 25 mg/dL may produce
Signs of reagent deterioration: an absorbance value (ΔAbs > to 1.500) that can hardly be read in non-digital
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank >0.100 photometers. It is recommended in such a case, to carry out a 1/10 dilution of
ADDITIONAL EQUIPMENT the sample with saline, (NaCl 0.9%) and then to multiply the final result by 10.
General laboratory equipment. Accuracy: 97.8%
Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC. Cuvette: 1 cm light- Repetitivity, as CV%: 1.3%
path. Reproducibility, as CV%: 1.7%
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences
SAMPLE when compared with reference reagent.
Serum or plasma free from haemolysis. Serum bilirubin will decrease 50% in one Details of the comparison experiments are available on request.
hour if kept at room temperature (≤ 25ºC), and at direct sunlight. Samples kept
in the dark at 2-8ºC will remain stables for up to 3 days. INTERFERENCES
CAUTION Avoid hemolysed samples.
The reagents contain sodium azide at 0.09%. Handle with care. QUALITY CONTROL
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the SDS before Control serum, Seriscann Normal (Ref. 994148/996571) and Seriscann Anormal (Ref.
using the reagent. The calibrator must be considered as a human sample, and, 994685/999329) should be included in each test series. It is recommended to calibrate with the
thus, potentially infectious. Use adequate protection. Calibrator for Autoanalyzers (Ref. 99 62 80) whenever the batch of reagent and/or calibrator is
changed and/or the control sera do not fall within the margins.
The disposal of the residues has to be made according to local regulations. Each particular laboratory should establish its own control program.

AUTOANALYZERS REFERENCES
Adaptations to different autoanalyzers are available on request. Jendrassik, L., Gróf, P. (1938). Biochem Z., 297, 81-89.
Doumas, B.T., Perry, B.W., Sasse,E.A., Straumjord Jr. J.V. (1973). [Link].,
19, 984-993.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
Philadelphia (2012).

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Revision: 07.2023 PRO4-9_BIT_9
BILIRUBINE TOTALE
MÉTHODE DE JENDRASSIK – GROF
Pour la détermination in vitro de la bilirubine totale dans le sérum ou le plasma

PRINCIPE TECHNIQUE
La bilirubine totale est déterminée par réaction avec l’acide sulfanilique diazoté
en présence de la caféine, ce qui conduit à la formation d’un pigment azoïque.
Technique BL E (mL) ESSAI (mL)
La détermination de la bilirubine directe est obtenue par la réaction précédent,
en absence de caféine. Réactif B (Caféine) 1,0 1,0
Diazoréactif -- 0,1
UTILITÉ DE DIAGNOSTIC
La bilirubine est un produit du métabolisme de l’hémoglobine; elle est transportée Solution saline 0,1 --
vers le foie, où elle est conjuguée avec l’acide glucuronique, et le foie la sécrète Échantillon 0,1 0,1
à travers la bile. Cette bilirubine conjuguée est appelé bilirubine directe, tandis
que la bilirubine non conjuguée est appelé bilirubine indirecte. Mélanger puis incuber à température ambiante (20 – 25ºC).
La bilirubine sérique totale équivaut à la bilirubine directe plus la bilirubine Lire exactement au bout de 10 minutes.
indirecte.
La bilirubine directe augmente en cas d’obstruction des voies biliaires, de Lecture
cirrhose et d’hépatite. Longueur d’onde: 546 nm
L’augmentation de la bilirubine indirecte ou totale peut indiquer maladies Blanc: H2O
hémolytiques, ictère néonatal physiologique, maladie de Gilbert ou une Cuvette: 1 cm de trajet optique.
intolérance au fructose.
CALCULS
Δ Abs. = Abs. Essai - Abs. BL E
Un test de laboratoire unique ne peut pas établir un diagnostic. Les résultats
Où:
doivent être évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de
Abs. ESSAI= Absorption de l’essai.
laboratoire obtenus.
Abs. BL E = Absorption Blanc de l’échantillon.
RÉACTIFS
Kit 1 x 250 mL. (Réf. 99 27 14). Contenu: Δ Abs. x 13,1 = mg bilirubine totale / dL
A. 1 x 50 mL Ac. sulfanilique Réf. 99 90 11
B. 2 x 100 mL Caféine Réf. 99 23 91 Unités SI
C. 1 x 2 mL Nitrite de sodium Réf. 99 90 94 (mg / dL) x 17,1 = μmol / L
PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL VALEURS DE RÉFÉRENCE
Préparation du diazoréactif: mélanger 1 volume de la solution C avec 50 volumes
Adultes: jusqu’à 1,2 mg/dL
de la solution A. Il est recommandé d’utiliser un matériel à usage unique pour la
Pédiatrique
préparation du réactif de travail. Une fois qu’il soit prêt, il doit être mis dans le récipient
< 14 jours 0,19 - 16,6 mg/dL
vide fourni avec le kit.
< 15 jour-1 année 0,05 - 0,68 mg/dL
1-3 année0,05- 0,40 mg/dL
COMPOSITION DES RÉACTIFS
Les concentrations dans les solutions réactives sont les suivantes:
Il est recommandé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs de
référence.
A. Ac. sulfanilique 6 mM
HCl 0,17 M
PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
B. Caféine 0,25 M Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture
Benzoate de sodium 0,50 M manuel ou automatique utilisé. Les données suivantes ont été obtenues à une
analyseur automatique:
C. Nitrite de sodium 0,4 M
Sensibilité comme limite de détection: 0,1 mg/dL
CONSERVATION ET STABILITÉ Linéarité: jusqu’à 25 mg/dL. Pour des concentrations supérieures à
Conservés à température ambiante (≤ 25ºC), les composants du kit sont stables 15 mg/dL, la lecture de la coloration obtenue (Abs > environ 1,500) peut être
jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. difficile avec de spectrophotomètres non numériques. Il est conseillé de diluer
Le diazoréactif est stable pendant 10 jours à température ambiante (≤ 25ºC). au 1/10 l’échantillon avec la solution saline (NaCl 0,9 %). Multiplier le résultat
final par 10.
Indications d’altération du réactif: Exactitude: le pourcentage de récupération est de 97,8 %.
Présence de particules ou de turbidité. Blanc du réactif de travail > 0,100 Coefficient de variation dans la série: 1,3 %
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Coefficient de variation entre les séries: 1,7 %
Matériel courant de laboratoire. Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37 ºC. différents par rapport au réactif de référence considéré.
Récipient de 1 cm de trajet optique.
ÉCHANTILLON L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.
Sérum ou plasma non hémolyse. La bilirubine sérique diminue de 50 % après
une heure à température ambiante (≤ 25ºC), et une exposition directe au soleil. INTERFÉRENCES
Conservés entre 2 et 8 ºC à l’abri de la lumière, les échantillons sont stables Les sérums très hémolyses interfèrent avec l’essai.
pendant environ 3 jours.
CONTRÔLE DE QUALITÉ
PRÉCAUTIONS Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf.
Les réactifs contiennent de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler avec précaution. 994148/996571) et Seriscann anormale (Réf. 994685/999329) dans chaque processus de
Les indications de sécurité figurent sur l’étiquette des produits. Le calibrateur doit mesure pour vérifier les résultats. Il est recommandé de calibrer avec le Calibrateur pour
être considéré comme un échantillon humain et donc potentiellement infectieux. Autoanalyseurs (Réf. 99 62 80) chaque fois que le lot de réactif et/ou de calibrateur est
Utiliser des protections adéquates. Il est conseillé de consulter la fiche de données changé et/ou que les sérums de contrôle ne rentrent pas dans les marges.
de sécurité avant de manipuler le réactif. L’élimination des déchets doit être réalisée Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les procédures
conformément aux normes en vigueur.
BIBLIOGRAPHIE
AUTOANALYSEURS Jendrassik, L., Gróf, P. (1938). Biochem Z., 297, 81-89.
Des adaptations aux différents analyseurs automatiques sont disponibles sur Doumas, B.T., Perry, B.W., Sasse,E.A., Straumjord Jr. J.V. (1973). [Link].,
demande. 19, 984-993.
Tietz, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
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