Enzimas

 Son biomoléculas especializadas en aumentar la velocidad de las

reacciones químicas que ocurren en las células sin alterarse
permanentemente por la reacción.
 Actúan en secuencias organizadas catalizando cientos de reacciones
consecutivas para degradar nutrientes, conservar y transformar energía
y fabricar macromoléculas biológicas

Las enzimas son proteínas “especialistas” y controlan TODAS las reacciones

químicas de nuestro cuerpo. Hay enzimas en todo lo que está vivo. Se dice que
son catalizadores, porque cada reacción química necesita una enzima para
que se realice, es decir, todo lo que se transforma lo hace gracias a una
enzima. Cada enzima actúa sobre una sustancia concreta, como una llave y
una cerradura.

Por que se estudiar las enzimas

• Muchas enfermedades genéticas ocurren por carencia o ausencia total

de enzimas.
• La actividad enzimática excesiva conduce a situaciones patológicas.
• La medición de actividad enzimática en plasma, células o tejidos sirve
para diagnóstico de enfermedades.
• El efecto biológico de fármacos se ejerce al interactuar con enzimas.
• Son herramientas importantes en ingeniería química, tecnología
alimentaria y agricultura.

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Características de las enzimas:

 Alto poder Catalítico

 Bajan la energía de activación
 Son altamente específicos
 Son eficientes
 Se Pueden regular

Las enzimas son sensibles: necesitan unas condiciones adecuadas para poder
hacer sus funciones y si las condiciones se alteran, mueren. La temperatura
es fundamental, por eso nuestro cuerpo no soporta fiebre por encima de 41-42º
un tiempo prolongado y morimos, ya que las enzimas se desnaturalizan.

Los alimentos No todas las enzimas se desnaturalizan a 40º, algunas aguantan

hasta 70º, pero lo que hay que tener en cuenta es que cuanta más tª y más
tiempo se mantiene la tª elevada, mayor es la destrucción enzimática.
Están en nuestro cuerpo para ayudarnos a hacer la digestión: segregamos al
día varios litros de jugos digestivos, que son jugos llenos de enzimas para
transformar proteínas, grasas y glúcidos.

–ASAS: todo lo que termina en –asa es una enzima. P ej.: la lactasa que
desdobla la lactosa (el glúcido de la leche) en sus dos azúcares simples:
glucosa y galactosa, la lipasa transforma los lípidos (el triacilglicerol en
glicerol), etc. También son enzimas la ptialina de la saliva o la pepsina del
estómago, aunque no terminan en –asa.

Según su forma:

 Son Globulares

Según su función:

 Catalizadores (aumentan la velocidad de reacción)

Según su composición:

 Simples
 Conjugadas (Holoenzimas)

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 La parte conjugada tiene una 2 partes:

1. Una Proteica (Apoenzimas)

2. No Proteica (Cofactores)

Parte no proteica puede ser:

1. Origen Mineral
2. Origen Orgánico (Coenzimas) (derivan de
vitaminas).

Su solubilidad:

Liposolubles(A, D, E, K)

Hidrosolubles (Vit. C, Complejo b,

Ácido Fólico.)

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 → Comisión conjunta de nomenclatura bioquímica de la IUPAC – IUBMB
(JCBN)

→ Comité de nomenclatura de la IUBMB (NC-IUBMB)

[Link]

Ec (Comisión de Enzimas)= 1. 1. 1. 1.

Clase Subclase SubSubClase enzima

Nomenclatura:

Ejm: ATP + Creatina ADP + Fosfocreatina

 Nombre Sistemático:
Grupo Transferido
Donador
ATP: Creatin Transferasa
Aceptor

 Numero Sistemático:
EC [Link] Enzima

Grupo Sub-Subgrupo

Subgrupo

Clase Ec: 1 Oxidorreductasa

Catalizan reacciones de oxidorreducción, es decir, tras la acción catalítica

quedan modificadas en su grado de oxidación por lo que se debe ser
transformado antes de volver a actuar, transferencia de hidrógeno (H) o
electrones (e-) de un sustrato a otro,

Ejm: Deshidrogenasas, Aminooxidasas.

Según la reacción general:

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 Clase Ec: 2 Transferasa

Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del hidrógeno) de un

sustrato a otro, estos pueden ser: fosfo, metil, acil, amino, carboxilo, glicosil.

Ejm: Transaldolasas, Transcetolasas.

Según la reacción:

Fosfo-----Cinasas

Amino--- transaminasas

A-B + C A + C-B

Clase Ec: 3 Hidrolasas

Clase de enzima que actúan normalmente sobre las grandes moléculas del
protoplasma, la acción catalítica se expresa en la ruptura de los enlaces
entre átomos de C y N o C-O. Catalizan rupturas de hidrolisis CPA
(ruptura de enlaces peptídicos).

Ejm: Glucosidasas, Fosfatasas.

Catalizan las reacciones de hidrólisis:

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 A-B + H2O AH + B-OH

Clase Ec: 4 Liasas

Enzima que cataliza la ruptura de enlaces químicos en compuestos

[Link] la degradación o síntesis(sintetasas) de os enlaces
denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de alto valor energético.

Ejm: Aldolasas, Descarboxilasas.

Entre ellas: -Descarboxilasas -Deshidratasas

-Hidratasas -Amino-Liasas

-Sintasas -Aldolasas

Clase Ec: 5 Isomerasas

Actúan sobre determinadas moléculas obteniendo de ellas sus isomeros de

función o de posición. Suelen actuar en procesos de Interconversión.

Ejm: Isomerasas de azúcar, mutasas, epimerasas, racemasas, cis- trans

Isomerasas.

Catalizan la Interconversión de isómeros:

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 A B

Clase Ec: 6 Ligasas

Realizan la degradación o síntesis de los enlaces fuertes mediante el

acoplamiento (unión de dos enzimas para formar una molécula) a sustancias ricas
en energía como los nucleosidos del ATP.

Ejm: Carboxilasas, peptidosidasas.

Clasificación:

6.1 uniones O-C 6.4 uniones C-C

6.2 uniones C-S 6.5 uniones Formación esteres fosfóricos

6.3 uniones C-N 6.6 uniones N-Metal

Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea de un nucleótido

trifosfato (ATP, GTP, etc.):

A + B + XTP A-B + XDP + Pi

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 Termodinámica, Cinética y Cinética Enzimática.
Los principios generales de las reacciones químicas se aplican también a las
reacciones enzimáticas. Por este motivo, antes de empezar con la cinética
química, se van a repasar algunos conceptos básicos de cinética química.

A continuación, se describirán personajes importantes yAlgunos conceptos:

 Eduard Buchner
 James Sumner
 J.B.S Haldane
 Cinética enzimática
 Modelo cinético de Michaelis-Menten
 Cálculo de la KM y la Vmax de un enzima
 Actividad enzimática

Eduard Buchner (1860-1917)

Destacado Quimico alemán que recibió el premio Nobel de Quimica por su
descubrimiento de la fermentación en concreto, sobre la fermentación
alcohólica en ausencia de células vivas. Con este experimento demostró
que la fermentación alcohólica se debe a la acción de unas enzimas
llamadas cimasas y no a la simple acción fisiológica de las células de la
levadura.
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James Sumner (1887- 1955)
Inicio sus investigaciones en el aislamiento de las enzimas en su forma
pura, un hecho que nunca se había podido conseguir, y que realizo durante
su estancia en Bruselas.

1926 consiguió aislar y cristalizar la enzima ureasa obtenida a partir de

frijoles.

Compartió el premio nobel de química en 1946.

J.B.S Haldane (1892- 1964)

Trabajo en Cinética enzimática como convertir S a P.

Cinética Enzimática
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del
mecanismo de la
reacción catalítica y
de la especifidad del
enzima. La velocidad

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 de una reacción catalizada por un enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el
enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción
observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse
bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.

Al seguir la velocidad de
aparición de producto (o de
desaparición del sustrato) en
función del tiempo se obtiene la
llamada curva de avance de la
reacción, o simplemente, la
cinética de la reacción. A medida
que la reacción transcurre, la
velocidad de acumulación del
producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el
sustrato de la reacción .

Para evitar esta complicación se

procede a medir la velocidad inicial
de la reacción (v0). La velocidad
inicial de la reacción es igual a la
pendiente de la curva de avance a
tiempo cero De esta forma, la
medida de v0 se realiza antes de que
se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del
experimento. Además, en estas condiciones no es necesario considerar la
reacción inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequeña que

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la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente
las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cinética

enzimática se mide el efecto de
la concentración inicial de
sustrato sobre la velocidad
inicial de la reacción,
manteniendo la cantidad de
enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0
obtenemos una gráfica como la
de la Figura de la derecha.

Cuando [S]0 es pequeña, la

velocidad inicial es
directamente proporcional a la concentración de sustrato, y por tanto,La Orden
de reaccion esta relacionada con la cocentracion del reactante, la saturación de
la enzima con la velocidad de la reaccion.

Hay diferentes tipos de las cuales podemos hablar de 3:

A.- Orden Cero

B.- Primer Orden

C.- Segundo Orden

La reacción es de primer orden. A altas [S]0, la enzima se encuentra

saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S] [Link] Velocidad de
la reaccion es directamente proporcional a la concentración del sustrato, solo
cuando la concentración del sustrato es baja. v= k [A]

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En este punto, la reacción es de orden cero Cuando la concentración del
sustrato se hace lo suficientemente elevada de forma que la enzima se satura.

V =k

Diferencia de primer orden y orden 0

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 Segunda Orden: Las concentraciones mucho menos rápidamente a
tiempos largos que para las reacciones de 1er [Link] aquella en que la
velocidad de formación del producto depende de la concentración de
dos sustratos v= k[A1] [A2], y depende también del cuadrado de la
concentración de un único sustrato v = k [A]2.

La expresión de las constantes de velocidad depende del orden de la

reaccion.

 Km: es la concentración del sustrato cuando la Vo es igual a la mitad

de la Vmax.

Ideal: Km Vmax

 Vmax: el producto se formara el producto. La misma cantidad de

sustrato que entra debe salir.
 Sitio Activo: ruptura o formación de enlaces con la participación de los
grupos R de los aminoácidos y de los cofactores.

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Si introducimos el parámetro V max en la ecuación general de la velocidad, (la
fórmula recuadrada anteriormente), obtenemos la expresión más conocida de
la ecuación de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuación de Michaelis-Menten. Se dice que

su cinética no es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostéricos, cuya
gráfica v frente a [S] no es una hipérbola, sino una sigmoide .En la cinética
sigmoidea, pequeñas variaciones en la [S] en una zona crítica (cercana a la
KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reacción.

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parámetro cinético importante

por múltiples razones:

 KM es la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción

es la mitad de la velocidad máxima.
 El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor
KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor K M, menor
afinidad.
 La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos análogos.
 Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la
concentración fisiológica de sus sustratos.

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CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v0 frente a
[S]0) es una hipérbola . La Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la
curva experimental, y la KM corresponde a la concentración de sustrato a la
cual la velocidad de la reacción es la mitad de la V max.

Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax es más sencillo utilizar

la representación doble recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea
recta.

Esta representación doble recíproca recibe el nombre de representación de

Lineweaver-Burk.

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Es una recta en la cual:

 La pendiente es KM/Vmax
 La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
 La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular

gráficamente, los valores de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

Actividad enzimática.
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima
que cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad
específica es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína
(U/mg prot) o por mililitro de disolución (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la

unidad de actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1
mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol
son 106 µmoles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60
x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente
los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9
kat).

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De qué depende:

 pH optimo
 Temperatura
 Concentración de iones pesados
 Fuerza iónica

Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros

activos por molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten
calcular el número de recambio del enzima, o sea, el número de reacciones
elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de
tiempo.

Cofactores:

Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa

molecular, necesario para la acción de una enzima. El cofactor se une a una
estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-cofactor
recibe el nombre de Holoenzimas.

Aquellos cofactores que están covalentemente unidos a la apoenzima se

denominan grupos prostéticos, ya sean orgánicos (coenzimas) o inorgánicos.

Los cofactores son básicamente de dos tipos, iones metálicos y moléculas

orgánicas, denominadas coenzimas.

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Sitio Activo

Cofactores metálicos
Entre los cofactores metálicos son cationes, como Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+,
Mg2+, entre otros. Los iones metálicos puede actuar como:

 Centro catalítico primario.

 Grupo puente para reunir el sustrato y la enzima, formando un complejo
de coordinación.
 Agente estabilizante de la conformación de la proteína enzimática en su
forma catalíticamente activa.
 Las enzimas que precisan de iones metálicos se llaman a veces
metaloenzimas.

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Coenzimas
Las coenzimas, por lo general son vitaminas (vitaminas B, vitamina C,
Vitamina D, por ejemplo), la deficiencia de las vitaminas dentro de un
organismo, provoca la deficiencia en enzimas y por ende hay falta de
reacciones indispensables.

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Inhibición enzimática:
Puede ser:
1. Reversible:
 Competitivo
 No competitivo
 Acompetitivo

2. Irreversible
 Serina ( Quimiotripsina, Tripsina,
Acetilcolinesterasas).(DFP, Sarin,
Malation)
 Cisteína ( Iodoacetato)
 Metaloenzimas (Cianuro)
3. Alosterica
Inhibición enzimática

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y

disminuyen su actividad. Puesto que el bloqueo de una enzima puede matar a

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un organismo patógeno o corregir un desequilibrio metabólico, muchos
medicamentos actúan como inhibidores enzimáticos. También son usados
como herbicidas y pesticidas. Sin embargo, no todas las moléculas que se
unen a las enzimas son inhibidoras; los activadores enzimáticos se unen a las
enzimas e incrementan su actividad.

La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo

de la enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reacción
correspondiente. La unión del inhibidor puede ser reversible o irreversible.

Los inhibidores irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y

modifican su estructura química a nivel de residuos esenciales de los
aminoácidos necesarios para la actividad enzimática. También se le conoce
como envenenamiento de la enzima.

Los inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente,

dando lugar a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor
se une a la enzima, al complejo enzima-sustrato o a ambos.

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Muchos medicamentos son inhibidores enzimáticos, por lo que su
descubrimiento y mejora es un campo de investigación activo en la
bioquímica y la farmacología. La validez de un inhibidor enzimático
medicinal suele venir determinada por su especificidad (su incapacidad de
unirse a otras proteínas) y su potencia (su constante de disociación, la cual
indica la concentración necesaria para inhibir a una enzima).

Una alta especificidad y potencia asegura que el medicamento va a tener

pocos efectos secundarios y por tanto una baja toxicidad.

Los inhibidores enzimáticos también son usados en la naturaleza y están

implicados en la regulación del metabolismo. Por ejemplo, las enzimas en una
ruta metabólica pueden ser inhibidas por los productos resultantes de sus
respectivas rutas. Este tipo de retroalimentación negativa retarda el flujo a
través de la ruta cuando los productos comienzan a acumularse y es una
manera importante de mantener la homeostasis en una célula. Otros
inhibidores enzimáticos celulares son proteínas que se unen específicamente e
inhiben una diana enzimática.

Esto puede ayudar a controlar enzimas que pueden ser dañinas para la célula,
como las proteasas o nucleasas. Un buen ejemplo es el inhibidor de la
ribonucleasa, que se une a esta enzima en una de las interacciones proteína–
proteína más fuertes [Link] inhibidores enzimáticos naturales
también cabe destacar los venenos, que son usados como defensa contra los
depredadores o como forma de matar a una presa.

Inhibición Competitiva

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El sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma enzima al mismo
tiempo, como se muestra en la figura de la derecha. Esto generalmente ocurre
cuando el inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de una enzima en el que
también se une el sustrato; el sustrato y el inhibidor compiten para el acceso al
sitio activo de la enzima. Este tipo de inhibición se puede superar con
concentraciones suficientemente altas del sustrato, es decir, dejando fuera de
competición al inhibidor. Los inhibidores competitivos son a menudo
similares en estructura al sustrato verdadero (ver ejemplos expuestos más
abajo).

Inhibición No Competitiva

El inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo que el sustrato. Sin

embargo, la unión del inhibidor afecta la unión del sustrato, y viceversa.

Este tipo de inhibición se puede reducir, pero no superar al aumentar las

concentraciones del sustrato. Aunque es posible que los inhibidores de tipo
mixto se unan en el sitio activo, este tipo de inhibición resulta generalmente de
un efecto alostéricos donde el inhibidor se une a otro sitio que no es el sitio
activo de la enzima.

La unión del inhibidor con el sitio alostéricos cambia la conformación (es

decir, la estructura terciaria o la forma tridimensional) de la enzima de modo
que la afinidad del sustrato por el sitio activo se reduce.

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Inhibición Acompetitiva

En este tipo de inhibición, el Inhibidor y el Sustrato no compiten por el centro

activo de la enzima. El inhibidor solo se une al complejo ES ya formado.
Produciendo un complejo inactivo ESI estable.

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26