UNIVERSIDAD NACIONAL DEL
ALTIPLANO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA
SALUD
ESCUELA PROFECIONAL DE
NUTRICION HUMANA
INFORME DE LABORATORIO Nro3
TITULO: IDENTIFICACION CUALITATIVA DE PROTEINAS
ASIGNATURA: bioquímica
DOCENTE: Rivera Valdivia Karla Cecilia
ALUMNO: Vilca Sanca Karina Flora
PRACTICA N° 3
IDENTIFICACION CUALITATIVA DE PROTEINAS
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son uno de los principales componentes de todas nuestras
células. Los aminoácidos son la unidad básica de las proteínas y se agrupan
de acuerdo con su comportamiento químico. La unión de dos o más
aminoácidos mediante enlaces amida originan los péptidos. En los péptidos y
las proteínas estos enlaces reciben el nombre de enlaces peptídicos y son el
resultado de la reacción del grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo
amino de otro. Si el péptido está formado por 15 AA se trata de un
oligopéptido. Cuando contiene entre 15 y 50 se trata de un polipéptido y si el
número es mayor se habla de proteínas. La síntesis de las proteínas ocurre
mediante la unión entre sí de las cadenas de aminoácidos. Se conocen a 22 L-
aminoácidos que se clasifican por las propiedades químicas de su grupo -R o
cadena lateral. Las proteínas deben sus propiedades físicas, químicas,
fisicoquímicas y biológicas, al tipo de aminoácido que las forman en las uniones
peptídicas de las proteínas reaccionan con una variedad de compuestos
formando productos coloreados. Existen reacciones de coloración que son
específicas para aminoácidos de esas proteínas y son importantes tanto para la
detección como para el dopaje de aminoácidos y proteínas. Existen también
reacciones generales porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas
las proteínas como grupos amino o uniones peptídicas como lo son las
reacciones de ninhidrina y Biuret. El objetivo de esta práctica es ensayar varias
pruebas químicas para identificar de forma rápida aminoácidos y proteínas.
OBJETIVOS
Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.
Conocer algunas propiedades de las proteínas.
Conocer reacción xantoproteica y de biuret.
Aprender cómo reacciona la albumina ante las sustancias respectivas
MARCO TEÓRICO
Proteínas
Son macromoléculas biológicas más abundantes, estando presentes en todas
las células y en todas las partes de las mismas formadas por cadenas lineales
de aminoácidos. Las proteínas son esenciales para la vida debido a que
cumple funciones estructurales (80 % del protoplasma de la célula),
biorreguladoras (se desempeñan como enzimas) y defensivas (los
anticuerpos), esto les confiere una versatilidad única.
Las proteínas se clasifican acorde a su función, estas pueden ser: contráctiles
(Actina y miosina), enzimáticas (sacarasa), Estructurales (resilina), protectoras
(trombina), inmunológica (anticuerpos), etc.
Las proteínas tienen dos propiedades principales, la estabilidad y la solubilidad.
La estabilidad hace referencia a que las proteínas deben de ser estables en el
medio donde se encuentren de manera que su vida media sea larga y no
genere problemas para el organismo. La solubilidad, se refiere a las
condiciones en que las uniones entre los aminoácidos son estables
(temperatura y pfi). Cabe mencionar que propiedades secundarias dependerán
de las características químicas que tengan las proteínas. El estudio detallado
de la estructura tridimensional de las proteínas permite comprender la
importancia de esta distribución espacial en las diversas funciones de las
proteínas como son la función catalítica, estructural, recepción y trasmisión de
señales. Cada proteína tiene una estructura tridimensional característica
indispensable para realizar su función. Esta estructura es mantenida por
interacciones débiles formándose la estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria.
Desnaturalización de las proteínas
La desnaturalización de una proteína es el cambio estructural que trae como
consecuencia la pérdida de su estructura nativa y con esto su correcto
funcionamiento (pierden su estructura tridimensional). Algunos factores
desnaturalizantes pueden ser: el tipo de disolvente, fuerzas iónicas, cambios en
la temperatura, etc.
Ensayo cualitativo
Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen en su estructura un
grupo amino y un grupo carboxilo. Cuando dos aminoácidos se combinan a
través de una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el grupo
carboxilo del otros se libera una molécula de agua. El enlace generado se
llama enlace peptídico.
Esta molécula conformada por dos aminoácidos recibe el nombre de dipéptido,
si se une un tercer aminoácido se generará un tripéptido, y si se unen más,
conformaran un polipéptido.
La secuencia de aminoácidos que se encuentran en una proteína recibe el
nombre de estructura primaria, y determinara las propiedades sucesivas de la
proteína. Las interacciones generadas a través de puentes de hidrogeno entre
los átomos que generan el enlace peptídico determinara la estructura
secundaria de la proteína. Esta estructura secundaria dependiendo de los
aminoácidos presentes en la estructura y su orden puede ser ordenada o no
ordenada.
La estructura terciara de una proteína hace referencia al modo en la cadena
polipeptídica se pliega en el espacio, esta estructura esta determinada por la
estabilización de las interacciones hidrofóbicas de los átomos constituyentes de
los aminoácidos. Los aminoácidos apolares se situarán hacia en interior de la
proteína mientas los polares se orientarán hacia el exterior en un medio
acuoso. La estructura también se estabilizará a través de interacciones de
fuerzas de Vander Waals y la formación de puentes disulfuro.
La estructura cuaternaria consiste en la unión de varias cadenas peptídicas
asociadas que generan un ente, llamado multímero, con propiedades distintas
a las proteínas simples que lo constituyen. Para el caso de la unión de dos
proteínas, recibe el nombre de dinero, si ambas proteínas son iguales, se les
da en nombre de homodímero, y si son diferentes, heterodímero.
El análisis cualitativo de proteínas implica generalmente la digestión de la
muestra para liberar los aminoácidos presentes en la proteína, y el uso de una
reacción química que genera un cambio apreciable que indica la presencia o no
de uno o más aminoácidos.
Existe la posibilidad de falsos negativos o positivos, como también de
interferencia por parte de sustancias presentes en la muestra a analizar, por
eso es importante conocer la naturaleza de las muestras y realizar ensayos
confirmatorios si es posible.
Ensayo de Biuret
El ensayo de Biuret detecta la presencia de enlaces peptídicos a través de la
reacción de los iones cobre con el nitrógeno de los péptidos formándose un
complejo violeta/purpura. Debe su nombre a que también es capaz de detectar
la presencia de grupos funcionales Biuret ((H2N-CO-)2NH)
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos
cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida. Está hecho de hidróxido de sodio y sulfato de cobre.
El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a
rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de
sodio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario
para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método
colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una
muestra mediante espectroscopia ultravioleta-visible a una longitud de onda de
540 nm (para detectar el ion Cu2+).
Ensayo xantoprotéico
Algunos compuestos aromáticos reaccionan con ácido nítrico, generándose
compuestos nitro y nitroso de color amarillo. Estos compuestos en medio
básico generan un color amarillo- naranja intenso.
Los aminoácidos tirosina y triptófano dan resultados positivos a este ensayo,
mientras la fenilalanina no reacciona a pesar de tener un anillo bencénico en su
estructura.
METODOLOGÍA
Reacción de Biuret
1. Etiquetar 8 tubos: Albúmina
de huevo,
tirosina, triptófano,
fenilalanina,
cisteína, arginina, H₂O
peptonada y
pepsina
Reacción de Biuret
1. Etiquetar 8 tubos: Albúmina
de huevo,
tirosina, triptófano,
fenilalanina,
cisteína, arginina, H₂O
peptonada y
pepsina
Reacción de Biuret
1. Etiquetar 8 tubos: Albúmina de huevo, tirosina, triptófano, fenilalanina,
cisteína, arginina, H₂O peptonada y pepsina.
2. Adicionar 3 mL de la sustancia correspondiente.
3. Agregar 2 mL de NaOH al 20%.
4. Agregar 4 a 5 gotas de sulfato cúprico.
5. Observar los colores desarrollados.
Reacción Xanoproteica
1. Etiquetar 7 tubos igual que en la reacción de Millón.
2. Agregar 2 mL de la sustancia correspondiente.
3. Adicionar 2 mL de ácido nítrico concentrado.
4. Calentar en baño María (ebullición 5 minutos).
5. Enfriar y agregar 1 mL de NaOH al 40%.
6. Observar los colores desarrollados.
PROCEDIMIENTO
Ensayo de biuret
1. Tomar un tubo de ensayo limpio y seco por cada una de las fuentes de
proteína a ensayar y aminoácidos puros a ensayar
2. Luego marcamos cada uno con su nombre respectivo y agregar 0.5 mL
o 0.25 g de la sustancia en cuestión v
3. Después aumentamos gota a gota solución de sulfato de cobre al 0.5%,
agitar
4. Finalmente observarnos la aparición de color violeta en la solución
Ensayo xandoproteica
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a
él vire de color.
5. Finalmente, observamos y reportar resultados.
RESULTADOS
Reacción de Biuret
Las cadenas de proteínas presentes en la clara de huevo y la leche, cuando
fueron sometidas al reactivo de Biuret, que en su composición tiene NaOH al
10% (el cual no participa de la reacción, pero es de fundamental importancia su
presencia ya que proporciona el medio básico necesario) junto con el CuSO4,
reaccionan con el sulfato cúprico y se tornan de color violeta lo que nos indica
que la reacción fue positiva.
Reacción xanoproteica
Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos reaccionan con ácido
nítrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por
lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de tirosina, fenilalanina y
triptófano.
CONCLUSIONES
Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos
que permiten un resultado positivo o negativo de acuerdo a las características
y composición de cada una de ellas, evidenciando en coloraciones,
presencia de anillos, etc. Se establecieron las características de estas pruebas
y se logró la identificación cualitativa de sustancias que pueden contener
aminoácidos, proteínas o péptidos.
BIBLIOGRAFÍA
1. Escalante, K. (2014). Pruebas generales para aminoácidos y proteínas.
De Universidad del Cauca, sitio web:
[Link]
CIDOS_Y_PROTEÍNAS
2. Giraldo, G. (2010). Reconocimiento de aminoácidos. En laboratorio de
bioquímica: una visión práctica. (96-97). Armenia, Quindio: Elizcom.
PRODUCTO
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el reactivo utilizado en el método de Biuret y qué función
cumple en la reacción?
En el método de Biuret, el reactivo utilizado es una solución de sulfato
cúprico, la cual actúa como agente complejante. El sulfato cúprico
reacciona con las proteínas presentes en la muestra formando un
complejo de color violeta.
2. Explica el cambio de color característico en el método de Biuret y
por qué es importante.
El cambio de color característico en el método de Biuret es la formación
de un complejo de color violeta intenso. Este cambio de color es
importante porque indica la presencia de enlaces peptídicos en las
proteínas, lo que permite la cuantificación de proteínas en una muestra.
3. ¿Qué factores podrían afectar los resultados del método de Biuret
en la determinación de la concentración de proteínas?
Varios factores pueden afectar los resultados del método de Biuret en la
determinación de la concentración de proteínas, como la temperatura, el
pH de la solución, la presencia de interferencias químicas y la pureza de
la muestra. Es importante controlar estos factores para obtener
resultados precisos.
4. ¿Qué reactivos se utilizan en la reacción xantoproteica y qué roles
desempeñan en el proceso?
En la reacción xantoproteica, se utilizan reactivos como ácido nítrico y
sulfato de sodio. El ácido nítrico descompone las proteínas en
aminoácidos, y el sulfato de sodio reacciona con los grupos tiol (-SH)
liberados, formando un complejo de color amarillo.
5. ¿Cuál es la base química del cambio de color observado durante la
reacción xantoproteica?
La base química del cambio de color observado durante la reacción
xantoproteica es la formación de un complejo de ácido picrométrico.
Este complejo se forma cuando el grupo tiol (-SH) de los aminoácidos
reacciona con el sulfato de sodio y el ácido nítrico, dando como
resultado un color amarillo intenso.
