Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
Autor/es: Karina Paola Quispe Vilca 112136
Correo: kpquispe1-es@[Link]
Asignatura: Microbiología y Bacteriología I
Grupo: N1
Docente: Jose Andres Osorio Beltran
Fecha: 14/06/2024
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
1. Objetivo
Conocer las técnicas de preparado y sembrado de medios de cultivo bacteriológico.
2. Marco Teórico
Métodos de sembrado e identificación de bacterias:
1. Técnicas y Métodos de cultivo microbiano
• Siembra y estudio de bacterias
El proceso inicial de cultivo microbiano implica la transferencia de una muestra
microbiológica a un medio de cultivo. Este simple acto da inicio a un viaje fascinante
donde las bacterias y otros microorganismos se desarrollan en condiciones controladas.
Es importante saber cómo utilizar las placas de Petri en todo este proceso.
• Cultivo puro y cultivo mixto
Una vez que se ha obtenido el cultivo, se puede clasificar en dos tipos fundamentales:
cultivo puro, que contiene una sola especie de microorganismo, y cultivo mixto, que
alberga múltiples especies. Esta distinción es crucial para estudios específicos y
caracterizaciones detalladas.
• Cultivo axénico: rareza en el mundo microbiano
Los cultivos axénicos, constituidos por una sola especie microbiana, son raros en la
naturaleza y se obtienen artificialmente en el laboratorio. Aquí es donde entran en juego
técnicas especiales para eliminar contaminantes y garantizar la pureza del cultivo.
• Dispositivos esenciales: agujas, asas y pipetas
La transferencia de microorganismos requiere herramientas específicas. Agujas, asas de
inoculación, pipetas y pipetas pasteur son instrumentos de laboratorio esenciales que
deben esterilizarse meticulosamente antes de su uso. Cada uno tiene su aplicación
específica en el proceso de cultivo.
• Medios de cultivo: líquidos, semisólidos y sólidos
Los medios de cultivo varían en su consistencia y se seleccionan según el propósito del
estudio. Los líquidos permiten el desarrollo en superficie o en todo el líquido, los
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
semisólidos se utilizan para estudiar la movilidad de microorganismos, y los sólidos son
ideales para observar colonias, agregados microbianos visibles a simple vista.
• Técnica aséptica: prevenir contaminación a toda costa
La contaminación es una amenaza constante en el mundo del cultivo microbiano. La
técnica aséptica, que implica esterilización rigurosa de utensilios y medios, es esencial
para evitar la entrada de microorganismos indeseados y garantizar resultados confiables.
• Condiciones ambientales y de incubación
Ajustar el pH del medio de cultivo es crucial, ya que diferentes microorganismos prosperan
en diferentes condiciones. La incubación a temperaturas específicas, con consideraciones
de oxígeno, es esencial para el crecimiento óptimo. Las incubadoras microbiológicas son
aliadas valiosas, pero se deben utilizar con precaución.
2. Técnicas y métodos de cultivo en diferentes ámbitos
• Biología molecular: elevando el estudio microbiano a un nivel superior
En el siglo XXI, la biología molecular ha revolucionado el campo del cultivo microbiano.
Técnicas como la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) y la secuenciación genética
permiten estudios más profundos sobre la estructura y la función de los microorganismos.
• Microbiología: cultivo y multiplicación de microorganismos
En el ámbito general de la microbiología, el cultivo microbiano se presenta como un
método crucial para la multiplicación controlada de microorganismos. Este proceso
implica la preparación de un medio óptimo que favorezca el crecimiento y la reproducción
deseada. Es en el laboratorio microbiológico donde esta técnica cobra vida,
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
proporcionando una plataforma para el estudio detallado de bacterias y otros
microorganismos.
• Higiene alimentaria: controlando patógenos en la cadena alimentaria
La seguridad alimentaria es una preocupación primordial, y el cultivo microbiano
desempeña un papel vital en la prevención de enfermedades transmitidas por alimentos.
Diversos patógenos, como bacterias, virus, parásitos y hongos, pueden contaminar los
alimentos, amenazando la salud de las personas y animales. Las técnicas de cultivo
permiten identificar y estudiar estos patógenos, así como comprender su capacidad de
crecimiento y reproducción en entornos alimentarios.
• Microbiología clínica: identificación y sensibilidad en infecciones
En el ámbito de la microbiología clínica, las técnicas de cultivo son esenciales para la
identificación precisa del microorganismo responsable de diversas infecciones. Estas
técnicas no solo permiten detectar la presencia de bacterias, virus u otros agentes
infecciosos, sino que también desempeñan un papel crucial en la determinación de la
sensibilidad de estos microorganismos a diferentes antibióticos y antifúngicos. Este
conocimiento es fundamental para el diseño de tratamientos efectivos.
Métodos de Sembrado
Siembra por Estría:
• Descripción: Consiste en extender una muestra bacteriana sobre la superficie de un
medio de cultivo sólido (generalmente agar) utilizando un asa de siembra o un hisopo
estéril.
• Propósito: Aislar colonias individuales para obtener cultivos puros.
Siembra por Extensión:
• Descripción: Se diluye la muestra original y se extiende sobre la superficie de un medio
de cultivo sólido con una espátula de vidrio o una varilla de vidrio en forma de L.
• Propósito: Contar unidades formadoras de colonias (UFC) y obtener colonias aisladas.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
Siembra en Placa de Vértice:
• Descripción: Se vierte una pequeña cantidad de la muestra diluida sobre una placa de
Petri y se dispersa uniformemente inclinando la placa en diferentes direcciones.
• Propósito: Obtener una distribución uniforme de colonias para cuantificación.
Siembra por Inmersión o Vertido:
• Descripción: Se mezcla la muestra con agar fundido y se vierte en una placa de Petri. El
agar se solidifica y las bacterias crecen tanto en la superficie como en el interior del medio.
• Propósito: Cuantificar bacterias y estudiar la morfología de colonias.
Métodos de Identificación
1. Observación Morfológica:
o Microscopía: Uso de técnicas como la tinción de Gram, la tinción de Ziehl-Neelsen
y otras tinciones específicas para observar la morfología celular y características
estructurales.
2. Pruebas Bioquímicas:
o Fermentación de Carbohidratos: Determinar la capacidad de la bacteria para
fermentar azúcares específicos produciendo ácido o gas.
o Prueba de Catalasa: Detectar la presencia de la enzima catalasa mediante la
adición de peróxido de hidrógeno.
o Prueba de Oxidasa: Identificar bacterias que producen la enzima citocromo c
oxidasa.
o Pruebas de Descarboxilación y Desaminación: Evaluar la capacidad de las
bacterias para descarboxilar o desaminar aminoácidos específicos.
3. Métodos Moleculares:
o PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa): Amplificación de secuencias de ADN
específicas para identificar y tipificar bacterias.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
o Secuenciación de ADN: Análisis de la secuencia del ADN para una identificación
precisa a nivel de especie.
o Electroforesis en Gel de Campo Pulsado (PFGE): Separación de fragmentos de
ADN para comparar perfiles genómicos.
4. Espectrometría de Masas (MALDI-TOF MS):
o Descripción: Análisis de los patrones de ionización de las proteínas bacterianas
para identificar especies bacterianas.
5. Pruebas de Sensibilidad a Antibióticos (Antibiograma):
o Método de Difusión en Disco (Kirby-Bauer): Colocación de discos impregnados
con antibióticos sobre una placa sembrada con bacterias para observar zonas de
inhibición.
o Dilución en Caldo o Agar: Determinación de la concentración mínima inhibitoria
(CMI) de antibióticos.
Estos métodos, cuando se utilizan de manera combinada, permiten una identificación precisa y
confiable de las bacterias, facilitando el diagnóstico y tratamiento de infecciones, así como la
investigación microbiológica en general.
[Link]ía:
Materiales:
• Placa Petri con agar agar.
• Asa de siembra o material estéril.
• Estufa de laboratorio.
• Mechero Bunsen.
• Agua destilada.
• Rotulador indeleble.
• Papel secante.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
• Guantes de látex.
• Isopo.
• Pipeta.
• Papel madera.
Procedimiento:
1. Preparación del medio de cultivo:
Utiliza una placa Petri con agar agar como medio de cultivo. Asegúrate de que la placa
esté etiquetada correctamente con el tipo de microorganismo y la fecha.
2. Preparación del área de trabajo:
Encender el mechero Bunsen para crear un ambiente aséptico alrededor. Trabajar
siempre dentro del área de influencia del mechero para evitar contaminaciones.
3. Toma de muestras:
Realizar la toma de muestras de microorganismos de dos sitios específicos, la garganta o
un billete.
4. Cierre de placas:
Despacio y cuidadosamente, cerrar las placas para evitar dañar el agar agar. Rotular en la
cara trasera para prevenir la pérdida de información en caso de extravío de la tapa
superior.
5. Encendido del mechero y trabajo aséptico:
Antes de comenzar el cultivo, encender el mechero para mantener la zona aséptica.
Trabajar alrededor del mechero durante todo el procedimiento.
6. Siembra de muestras:
Destapar la placa de la mano y colocar la mano sobre el agar agar, repasando todas las
áreas lentamente en forma de zig zag. Tapar las placas con precaución.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
7. Cultivo en estufa:
Transferir las placas a una estufa de laboratorio regulada a la temperatura deseada,
comúnmente a 37 grados Celsius. Dejar que el cultivo se desarrolle durante 24 horas.
8. Análisis de resultados:
Después del período de cultivo, retirar las placas de la estufa y dejar que reposen para
disipar el calor. Observar a simple vista o realizar un conteo de microorganismos.
También se puede tintar las placas para identificar diferentes especies.
9. Resultados y observaciones:
Finalmente, analizar y documentar los resultados. Observar el crecimiento de diferentes
tipos o especies de microorganismos bajo condiciones controladas.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
4. Resultados
Crecimiento de Colonias:
• Se observaron colonias bacterianas bien definidas en las placas de Petri tras la incubación
a 37 grados Celsius durante 24 horas.
• Las colonias variaron en tamaño, forma y color, lo que indica la presencia de diferentes
tipos de bacterias.
Morfología de las Colonias:
• Colonias circulares y convexas con bordes lisos fueron identificadas, características típicas
de bacterias comunes como Escherichia coli.
• Otras colonias mostraron bordes irregulares y superficies rugosas, sugiriendo la presencia
de bacterias diferentes, posiblemente ambientales.
Tinción de Gram:
• Se realizaron tinciones de Gram en muestras seleccionadas de las colonias.
• Se identificaron bacterias Gram positivas (de color púrpura) y Gram negativas (de color
rosa), lo que confirma la diversidad bacteriana en las muestras.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
5. Conclusiones
1. Eficiencia del Proceso de Siembra:
o Las técnicas de siembra utilizadas (por estría y extensión) fueron efectivas para
aislar colonias bacterianas individuales y permitieron un análisis detallado de las
características de cada colonia.
2. Diversidad Bacteriana:
o Las muestras recogidas de diferentes sitios (garganta y billete) mostraron una
considerable diversidad bacteriana, reflejada en la variedad de colonias
observadas.
o La tinción de Gram y las pruebas bioquímicas confirmaron la presencia de
diferentes especies bacterianas, demostrando la efectividad de estas técnicas en
la identificación preliminar de bacterias.
3. Importancia de las Técnicas Asépticas:
o El uso de técnicas asépticas fue crucial para evitar contaminaciones y asegurar la
pureza de los cultivos.
o El ambiente controlado y las prácticas de esterilización garantizaron resultados
confiables y reproducibles.
4. Aplicaciones Clínicas y Microbiológicas:
o Este experimento subraya la importancia de las técnicas de cultivo y las pruebas
de identificación en microbiología clínica para el diagnóstico de infecciones y la
determinación de tratamientos adecuados.
o Las técnicas moleculares, como la PCR y la secuenciación de ADN, aunque no
fueron utilizadas en este experimento, representan el siguiente paso para una
identificación más precisa y rápida de microorganismos.
Este estudio destaca la relevancia de combinar métodos tradicionales de cultivo con técnicas
modernas de identificación para obtener un panorama completo y preciso del microbiota
presente en las muestras analizadas.
Microbiología Lic. José Andrés Osorio Beltrán
Título: Laboratorio Sembrado e identificación de Bacterias
6. Bibliografía
1. Calderaro, A., & Chezzi, C. (2024). MALDI-TOF MS: A reliable tool in the real life of the clinical
microbiology laboratory. Microorganisms, 12(2), 322.
[Link]
2. Uzuriaga, M., Leiva, J., Guillén-Grima, F., Rua, M., & Yuste, J. R. (2023). Clinical impact of rapid
bacterial microbiological identification with the MALDI-TOF MS. Antibiotics (Basel,
Switzerland), 12(12), 1660. [Link]
3. Winand, R., Bogaerts, B., Hoffman, S., Lefevre, L., Delvoye, M., Van Braekel, J., Fu, Q., Roosens, N.
H. C., De Keersmaecker, S. C. J., & Vanneste, K. (2019). Targeting the 16S rRNA gene for bacterial
identification in complex mixed samples: Comparative evaluation of second (Illumina) and third
(Oxford Nanopore Technologies) generation sequencing technologies. International Journal of
Molecular Sciences, 21(1), 298. [Link]
4. (S/f). [Link]. Recuperado el 15 de junio de 2024, de [Link]
microbiano-metodos-y-tecnicas
