INTERFERENCIA DE LA BIOTINA EN LAS PRUEBAS DE
LA FUNCIÓN TIROIDEA
DIAPOSITIVA 1: Hola a todos, en esta presentación os voy a hablar sobre la interferencia de la biotina en las pruebas para
evaluar la función tiroidea.
DIAPOSITIVA 2: Para ello, comenzaré con una breve introducción del proyecto, luego mencionaré los principales objetivos y,
a continuación, seguiré con toda la parte del desarrollo del proyecto, donde hablaré en primer lugar sobre la biotina y su
determinación en el laboratorio y, en segundo lugar hablaré sobre la glándula tiroides y cómo se determina la concentración de
hormonas tiroideas en el laboratorio. Una vez explicados y comprendidos los dos conceptos principales del proyecto, pasaré a
explicar todo el proceso de interferencia de la biotina durante la determinación cuantitativa de hormonas tiroideas, y, por último,
cerraré la presentación con una pequeña conclusión.
DIAPOSITIVA 3: Uno de los conceptos principales de este proyecto es la biotina. La biotina es una vitamina hidrosoluble del
grupo B, también conocida como vitamina B7, vitamina B8, vitamina H o coenzima-R.
Esta vitamina presenta una serie de funciones entre las que se encuentran por un lado, actuar como cofactor enzimático en
múltiples reacciones bioquímicas del organismo y, por otro lado, actuar como sistema de inmovilización en diferentes pruebas
inmunológicas, especialmente las técnicas ELISA que explicaré más adelante.
Esta vitamina se ha popularizado en los últimos años por sus propiedades para favorecer el crecimiento del pelo, las uñas, mejorar
el aspecto de la piel, etc. Por este motivo se ha empezado a comercializar esta vitamina mediante suplementos vitamínicos, los
cuales contienen concentraciones excesivas de esta vitamina, originando un exceso en el organismo que, a pesar de no ser
perjudicial, puede interferir en diferentes pruebas inmunológicas, como pueden ser las empleadas para determinar la
concentración de hormonas tiroideas en sangre, provocando la obtención de resultados erróneos.
DIAPOSITIVA 4: Pasando a la parte de los objetivos, este proyecto tiene como objetivo principal evitar que el exceso de
biotina en el organismo afecte a las pruebas para evaluar la función tiroidea. A partir de este objetivo se detallan varios objetivos
principales como son: conocer la técnica y todo el procedimiento que se emplea para la determinación cuantitativa de biotina,
describir el empleo de la biotina en las pruebas inmunológicas, desarrollar todo el proceso de un enzimoinmunoensayo para la
determinación cuantitativa de hormonas tiroideas y, por último, conocer las consecuencias que provoca un exceso de biotina
durante la evaluación de la función tiroidea.
DIAPOSITIVA 5: Como he mencionado en la introducción, la biotina en una vitamina hidrosoluble, ¿qué quiere decir esto? que
se disuelve fácilmente en agua y, a diferencia de las vitaminas liposolubles, no se almacena en los tejidos grasos del organismo,
por ello, se debe ingerir diariamente. Esta ingestión se puede realizar a través de la dieta, que es lo más común, o a través de la
microbiota intestinal, la cual está compuesta por una serie de microorganismos capaces de producir biotina y otros capaces de
consumirla, pero no de producirla.
DIAPOSITIVA 6: Como la mayor parte de la biotina que ingerimos es a través de la dieta, en esta tabla os muestro una serie
de alimentos con la cantidad de biotina que contiene cada uno de ellos.
DIAPOSITIVA 7: Y en esta tabla os muestro las cantidades que se deben ingerir de biotina al día según la edad.
DIAPOSITIVA 8: Si determinamos los niveles de biotina en sangre, que explicaré a continuación cómo se hace, nos podemos
encontrar tres situaciones: por un lado, que exista un exceso de biotina, normalmente esto es debido a la administración de
suplementos vitamínicos con una alta cantidad de biotina.
En este tabla os muestro diferentes marcas comerciales de suplementos vitamínicos y su concentración de biotina, que (pasar a
anterior diapositiva) si nos fijamos en esta tabla, la cantidad máxima de biotina que se debe ingerir a partir de los 19 años son
30 µg al día (pasamos a la siguiente diapositiva) y estos suplementos contienen bastante más cantidad de la recomendada,
causando un exceso. Pero esta no es la única causa por la que puede haber un exceso de biotina, también se puede deber a, por
ejemplo, una insuficiencia renal.
Por otro lado tenemos la situación ideal que seria la de tener concentraciones normales de biotina.
Y, por último, también puede existir un déficit, cuyas causas pueden ser por una situación prolongada de nutrición parenteral sin
biotina, la administración de leche de fórmula que carece de biotina o el consumo durante un tiempo prolongado de huevo crudo.
Para identificar estas tres situaciones debemos determinar los niveles de biotina en sangre.
DIAPOSITIVA 9: Para ello, se emplea una técnica ELISA competitiva, que es un tipo de prueba inmunológica. Aquí os voy a
explicar la técnica manual, pero también se puede automatizar.
Para esta prueba se emplean placas de microtitulación que contienen una serie de pocillos recubiertos con partículas de
estreptavidina, una proteína que presenta una alta afinidad por la biotina. En primer lugar debemos añadir la muestra problema e
incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente. Durante la incubación, las partículas de biotina se unirán a las partículas de
estreptavidina. Posteriormente, se añaden partículas de biotina marcadas con una enzima, que es la peroxidasa de rábano.
Se vuelve a incubar 30 minutos a temperatura ambiente y durante la incubación, las partículas de biotina marcadas con la
enzima competirán con las partículas de biotina de la muestra problema por su unión a la estreptavidina. Aquí podemos ver como
en la muestra que contiene biotina, la biotina problema se une a la estreptavidina, mientras que en la muestra que no contiene
biotina problema, será la biotina marcada la que se una a la estreptavidina. A continuación, se añade el sustrato, el sustrato que
se emplea es un sustrato cromogénico que producirá un color azul intenso durante la degradación enzimática del peróxido de
hidrógeno por acción de la peroxidasa de rábano empleada como enzima anteriormente. Una vez añadido el sustrato, se incuban
8-12 minutos en oscuridad y, transcurrido el tiempo, se añade una solución de parada que provocará el cambio de color de azul
intenso a amarillo. Esto se debe a que la solución de parada es una solución ácida que pierde iones hidrógeno al entrar en
contacto con una solución básica con el objetivo de mantener el equilibrio ácido-base. Esta pérdida de iones hidrógeno de la
solución de parada va a provocar una cambio de pH de la solución en la que se realiza el ensayo que se manifestará mediante el
cambio de color de azul intenso a amarillo.
La intensidad del color va a ser inversamente proporcional a la concentración de biotina en la muestra problema, pero esto sería
una estimación cualitativa. Para conocer la concentración exacta de biotina en la muestra problema debemos llevar las
microplacas donde hemos realizado el ensayo a un lector de de absorbancia, el cual se encargará de leer la absorbancia de la
muestra, el valor de la absorbancia se interpola en una curva de calibración y, a partir de ahí, se obtendrá la concentración de
biotina en la muestra.
DIAPOSITIVA 10: Ahora pasamos a otro concepto principal del proyecto que son las hormonas tiroideas. Las hormonas
tiroideas se producen en la glándula tiroides, cuya producción de hormonas está regulada por la TSH mediante un mecanismo de
retroalimentación negativa. ¿En qué consiste este mecanismo de retroalimentación negativa? Consiste en que ante una
disminución de hormonas tiroideas en sangre, se produce un aumento de la secreción de TSH por parte de la hipófisis con el
objetivo de estimular a la glándula tiroides para que produzca y libere más hormonas. Mientras que si existe un exceso de
hormonas tiroideas en sangre, disminuye la secreción de TSH con el fin de evitar que la glándula tiroides produzca más
hormonas y, de esta forma, se consigue mantener los niveles de hormonas tiroideas en sangre en el rango de normalidad.
La glándula tiroides produce alrededor del 20% de triyodotironina y el 80% de tiroxina. La tiroxina es la hormona con mayor
concentración en sangre pero funcionalmente inactiva, mientras que la triyodotironina tiene menos concentración en sangre pero
es 5 veces más activa que la tiroxina. Otra característica que diferencia a estas dos hormonas es que la tiroxina es mucho más
estable en sangre ya que presenta una vida media de 6,5 días, mientras que la triyodotironina es menos estable, con una vida
media de 2,5 días. Por este motivo, la tiroxina será la que se determine con más frecuencia en los estudios hormonales, junto
con la TSH.
La determinación de la TSH y la tiroxina o T4 se emplea principalmente para diferenciar dos de las alteraciones más comunes
de la función tiroidea, que son el hipotiroidismo y el hipertiroidismo. El hipotiroidismo se caracteriza por una disminución de los
niveles de hormonas tiroideas en sangre, mientras que el hipertiroidismo se caracteriza por un aumento de los niveles de
hormonas tiroideas en sangre. Ambas enfermedades se clasifican en varios tipos según el origen de la alteración en el eje
hipotalámico-hipofisario-tiroideo, es decir, según si el fallo reside en la glándula tiroides, la hipófisis o el hipotálamo.
Para identificar estas enfermedades debemos determinar la concentración de hormonas tiroideas en sangre, concretamente la
TSH y la T4.
DIAPOSITIVA 12: Para la determinación de la TSH se emplea una técnica ELISA no competitiva o tipo sándwich en la que se
utilizarán una serie de reactivos que explicaré a continuación, los cuales presentarán los elementos necesarios para llevar a cabo
la reacción y poder cuantificar la hormona de interés.
El proceso consiste en añadir a la cubeta de reacción la muestra problema y, a continuación, añadir los reactivos
correspondientes que son, por un lado, el "reactivo fase sólida" formado por un anticuerpo anti-TSH con biotina unido a
partículas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina, que va a permitir posteriormente la inmovilización del inmunocomplejo, y,
por otro lado el "reactivo lumínico" formado por un anticuerpo anti-TSH marcado con quelato de rutenio.
Una vez añadida la muestra y los reactivos a la cubeta de reacción se incuba y durante la incubación el antígeno problema, que es
la TSH, se unirá por un epítopo al anticuerpo anti-TSH con biotina y por otro epítopo al anticuerpo anti-TSH marcado con
quelato de rutenio.
Después, se sitúa un campo magnético debajo de la cubeta de reacción que va a permitir inmovilizar el inmunocomplejo formado
gracias a las partículas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina. Una vez inmovilizado el inmunocomplejo, se añaden el
reactivo ácido y el reactivo base que, mediante una reacción de oxidación con el quelato de rutenio, provocará la formación de un
compuesto excitado que, al volver a su estado inicial, emitirá fotones en forma de luz y dará color a la reacción, cuya intensidad
será directamente proporcional a la concentración de TSH. La sustancia coloreada se lleva a un equipo de espectrofotometría
donde se medirá la absorbancia de la muestra, la cual será directamente proporcional a la concentración de TSH. Para conocer
la concentración de TSH se interpola la absorbancia en una curva de calibración.
DIAPOSITIVA 13: Para la determinación de la T4 se emplea una técnica ELISA competitiva, la misma que se empleaba para
la determinación de la concentración de biotina. En esta técnica también se emplearán una serie de reactivos que presentarán los
elementos necesarios para llevar a cabo la reacción y poder cuantificar la hormona de interés.
El proceso consiste en añadir a la cubeta de reacción la muestra problema y, a continuación, añadir los reactivos
correspondientes que son, por un lado, el "reactivo fase sólida" formado por un anticuerpo anti-T4 con biotina unido a partículas
paramagnéticas recubiertas de estreptavidina, que va a permitir posteriormente la inmovilización del inmunocomplejo, y, por otro
lado el "reactivo lite" formado por T4 marcada con quelato de rutenio.
Una vez añadida la muestra y los reactivos a la cubeta de reacción se incuba y durante la incubación el antígeno problema
compite con el antígeno marcado con quelato de rutenio por su unión al anticuerpo anti-T4 marcado con biotina.
Después, se sitúa un campo magnético debajo de la cubeta de reacción que va a permitir inmovilizar el inmunocomplejo formado
gracias a las partículas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina. Una vez inmovilizado el inmunocomplejo, se añaden el
reactivo ácido y el reactivo base que, mediante una reacción de oxidación con el quelato de rutenio, provocará la formación de un
compuesto excitado que, al volver a su estado inicial, emitirá fotones en forma de luz y dará color a la reacción, cuya intensidad
será inversamente proporcional a la concentración de T4. La sustancia coloreada se lleva a un equipo de espectrofotometría
donde se medirá la absorbancia de la muestra, la cual será directamente proporcional a la concentración de T4. Para conocer la
concentración de T4 se interpola la absorbancia en una curva de calibración.
DIAPOSITIVA 14: Una vez explicadas y espero que comprendidas las técnicas para la determinación de hormonas tiroideas
en sangre, voy explicar cómo interfiere el exceso de biotina en las técnicas. Antes de explicar esta interferencia es importante
saber que cuando existe un exceso de biotina en el organismo, este exceso no se elimina rápidamente, sino que se elimina de
forma gradual según la cantidad. Concentraciones mayores de 5 mg/día tardan una media de 8 horas en eliminarse y
concentraciones entre 100 y 300 mg/día tardan una media de 7,8 a 15,8 horas en eliminarse. Por ello, antes de realizar un
análisis que incluya la determinación cuantitativa de hormonas tiroideas, la Asociación Americana de Tiroides recomienda un
mínimo de 2 días antes de realizar el análisis sin administrar suplementos con biotina para evitar que el exceso de biotina
interfiera en la técnica, pero, lo que nos importa saber ahora es cómo interfiere ese exceso de biotina en la técnica y cómo puede
afectar a los resultados obtenidos.
DIAPOSITIVA 15: Empezando por la determinación de TSH mediante un ELISA no competitivo, las partículas de biotina en
exceso van a unirse al anticuerpo unido a partículas paramagnéticas recubiertas con estreptavidina, por su alta afinidad, y van a
impedir la unión del antígeno problema. Esto provocará que, cuando se añaden los reactivos ácido y base, estos no van a
interaccionar con el quelato de rutenio y, por tanto, no se producirá color, dando como resultado unos valores falsamente
disminuidos de la hormona, ya que la producción de color es directamente proporcional a la concentración de TSH.
DIAPOSITIVA 16: En cuanto a la determinación de T4 mediante un ELISA competitivo, las partículas de biotina en exceso se
van a unir al anticuerpo unido a partículas paramagnéticas recubiertas con estreptavidina, por su alta afinidad, y van a impedir la
unión del antígeno problema. Esto provocará que, cuando se añaden los reactivos ácido y base, estos no van a interaccionar con
el quelato de rutenio y, por tanto, no se producirá color, dando como resultado unos valores falsamente aumentados de la
hormona, ya que la producción de color es inversamente proporcional a la concentración de T4.
DIAPOSITIVA 17: Ahora os voy a mostrar un caso clínico para que sea vea ejemplificado la interferencia del exceso de biotina.
Es el caso de una mujer de 43 años diagnosticada con hipotiroidismo primario y tratada con Levotiroxina. Se le realiza un
análisis para la monitorización del tratamiento y se obtienen estos resultados en los que observamos unos niveles de TSH
disminuidos y unos niveles de T4 aumentados. Estos valores indican posible hipertiroidismo primario pero, ante la ausencia de
síntomas en la paciente, el médico decide disminuir la dosis del medicamento.
DIAPOSITIVA 18: Se vuelve a hacer un análisis y se vuelven a obtener resultados alterados con niveles de TSH disminuidos y
niveles de T4 aumentados. Estos valores vuelven a indicar posible hipertiroidismo primario pero, en este caso, la paciente
presenta síntomas asociados a hipotiroidismo debido al reajuste de la dosis del medicamente. Ante la discordancia entre la
sintomatología de la paciente y los valores obtenidos en el análisis, el facultativo decide volver a la dosis inicial del medicamento y
volver a realizar un análisis, pero esta vez en otro equipo para averiguar si la causa de los valores anómalos pueda ser por una
interferencia metodológica.
DIAPOSITIVA 19: Los resultados obtenidos con el nuevo equipo se sitúan dentro de los valores de referencia y la paciente ya
no presenta síntomas asociados a alguna patología tiroidea. Se decide mantener la dosis del tratamiento, pero se averigua la
causa de la alteración en los resultados de las analíticas previas.
DIAPOSITIVA 20: Para ello, se cuestiona a la paciente sobre la administración voluntaria de algún tipo de tratamiento. La
paciente afirma estar tomando suplementos multivitamínicos para la reducción de cansancio y caída de cabello. Se analiza la
composición del suplemento multivitamínico y se observa la elevada dosis diaria de biotina que contiene: 3.000 µg/cápsula
(cantidad recomendada: 30 µg/día). Por otro lado, se analizan los equipos en los que se han realizado las mediciones y se
obtiene que el equipo Cobas emplea biotina, mientras que el equipo ADVIA no emplea anticuerpos con biotina. Como conclusión
se obtiene que el exceso de biotina en el organismo de la paciente durante la realización de la prueba analítica ha interferido en el
método para la cuantificación de hormonas tiroideas, dado que el equipo analizador Cobas 8.000® emplea como sistema
inmovilizador el complejo biotina/estreptavidina, dando como consecuencia resultados falsamente erróneos; mientras que el
equipo analizador ADVIA Centaur XP Inmunoassay System® no emplea ese tipo de complejo, sino que utiliza anticuerpos
procedentes de animales (ratón y oveja concretamente) sin biotina, junto con partículas paramagnéticas sin estreptavidina que
permiten la inmovilización del inmunocomplejo, dando lugar a resultados acordes a la situación clínica de la paciente.
DIAPOSITIVA 21: Para finalizar la presentación, se obtiene como conclusión que el exceso de biotina en el organismo, a pesar
de no ser tóxico, sí puede interferir en diferentes pruebas inmunológicas, especialmente las dirigidas a evaluar la función tiroidea,
generando resultados falsamente elevados o disminuidos. Esta obtención de resultados erróneos puede interferir en el diagnóstico
de enfermedades tiroideas o en la monitorización de algún tratamiento orientado a regular la función tiroidea.
Para evitar esta situación, la Agencia Española de Medicamentos y Productos Sanitarios recomienda una serie de pautas, como
son: preguntar al paciente, previamente al análisis, por la posible administración voluntaria de algún complejo vitamínico,
sospechar de la interferencia de la biotina cuando los resultados no concuerden con la situación clínica del paciente y conocer
qué equipos emplean la biotina durante su técnica analítica.
Por último, es importante sabes que, mediante una dieta adecuada se obtendrá una concentración adecuada de biotina, y esto
evitará la necesidad de tomar suplementos vitamínicos y, de esta forma, evitar un exceso de biotina en el organismo que pueda
interferir en este tipo de pruebas inmunológicas.
DIAPOSITIVA 22: Hasta aquí mi presentación.
