Replicación ADN
La síntesis de ADN se lleva a cabo durante el período S de la interfase del ciclo celular
-Se sintetizan moléculas de ADN para q las células hijas tengan la misma información
genética q la célula progenitora
-Tmb se sintetizan histonas p q se puedan unir al ADN y empaquetarse
El experimento de Meselson y Stahl muestra que la replicación del ADN es
semiconservativa: cada molécula hija conserva una cadena de la molécula original
Características de la replicación:
-Es semiconservativa: Cada molécula hija de ADN tiene una cadena original y una cadena
nueva recien sintetizada
-Comienza en los orígenes de la replicación. Los ORI son secuencias de ADN reconocidas
x proteínas iniciadoras
-En procariotas hay un solo orígen en el cromosoma, en euc. varios
-Bidireccional en ambas (euc/proc)
-Complementaria o fiel: se aparean bases complementarias
-Sentido de la síntesis 5 a 3. generando que la síntesis sea discontinua. Una de las cadenas
se sintetiza x fragmentos
Replicón: unidad de replicación. Es la porción de ADN que es replicada. Cada unidad se
replica 1 vez x ciclo celular.
Separación de las dos cadenas de ADN:
Se separan x ruptura de puentes de H
Se forma la burbuja de replicación q contiene dos horquillas de replicación
Descripción general replicación ADN
1. Desenrollamiento de la doble hélice en 1 sitio determinado de la molecula, estimulo
inicial.
2. Separación de las 2 cadenas y colocación de ribonucleótidos trifosfatados en forma
complementaria a los d-nucleótidos, formando ARN-cebador
3. Colocación de desoxi-ribonucleótidos trifosfatados en forma complementaria a los de
la cadena a replicar
4. Union de esos d-ribonucleótidos x enzima ADN polimerasa en sentido 5 -> 3
formando la nueva cadena de ADN
5. Enlace x puente de H entre bases complementarias
6. Eliminación segmentos cebadores
7. Unión de fragmentos de ADN sintetizados
Las cadenas nuevas son complementarias y antiparalelas respecto a las cad. molde
Es un proceso anabólico y endergónico
Sustrados: ATP, GTP, CTP, TTP
La energía proviene de la hidrólisis del nucleótido trifosfatado entrante y ruptura de los PPi x
la pirofosfatasa
Enzimas de la replicación:
-Helicasa: Rompe enlaces puente de H entre ambas cadenas (las separa). Abre horquilla.
-ADN polimerasa: Polimerizan nucleótidos utilizando la mol original de ADN como molde.
La polimerasa III es la responsable de la síntesis de ADN.
Sintetiza nuevas cadenas a partir de cebadores. Una en forma continua (lider o adelantada)
y otra discontinua (retrasada). Luego se eliminan cebadores y reemplazo x ADN
-ARN polimerasa o primasa: Sintetiza fragmentos de ARN q se usan como cebadores
-Ligasa: Cataliza la formanción de enlaces fosfodiester entre nucleótidos. Une segmentos
de ADN en cadena retrasada
-Topoisomerasas I y II: Alivian tensión de mol. de ADN evitando hiper-enrollamiento
-SSBP: Evita q las cadenas separadas x helicasa se unan antes d ser copiadas
-Primasa: sintetiza cebadores
-Fragmentos de Okazaki: segmentos de adn discontinuos sobre cadena retrasada
ADN polimerasa:
Catalizan unión de desoxirribonucleótidos para formar cadenas de ADN
Todas las ADN polimerasas comparten ciertas propiedades:
-Leen cadenas molde de ADN en dirección 3 a 5
-Sintetizan ADN en dirección 5 a 3 agregando nucleótidos al oxidrilo libre del carbono 3
-Agregan nucleótido solo si hay extremo 3 libre y para ello necesitan un cebador o iniciador
formado previamente y unido x puentes de hidrogeno a la hebra molde.
-La ADN pol no puede iniciar síntesis, solo continuarla. Precisa de iniciador o cebador.
En procariotas: POL I elimina cebadores y rellena con ADN
POL II repara ADN
POL III verdadera polimerasa
En eucariotas:
Burbuja de replicación
Cuando la ADNpol localiza el nucleótido complementario, cataliza su hidrolisis, separa dos
grupos fosfato y une el desoxirribonucleotido-monofosfato a la cadena de ADN q se está
formando mediante enlace fosfodiester.
La energía necesaria p esto se obtiene de hidrólisis de nucleótido-tri-fosfato.
Cadena conductora: crece en direccion de apertura de la horquilla
Cadena rezagada: Crece en dirección opuesta y fragmentada
La replicación se hace en forma bidireccional (direcciones opuestas)
Es discontinua (cadenas contienen fragmentos)
La ADNpol elimina el ARN cebador. El sector libre es ocupado x d-ribonucleótidos
La ligasa une todos los fragmentos de ADN
Telomerasa:
Finaliza la duplicación, se remueven los cebadores y eso produce acortamiento en el
telómero. La telomerasa proviene el acortamiento cromosómico.
-Es una ribonucleoproteína q hace transcripción reversa. Alarga el extremo 3 a partir de
molde ARN
-El extremo alargado se pliega y aporta un extremo 3 OH y se completa un telómero
En eucariotas la telomerasa solo actúa en células germinales y tumorales.
Reparación ADN:
Sistemas moleculares controlan y reparan el ADN
Daño: agentes endógenos, fallos en replicación, agentes exógenos
Si no hay reparación: muerte celular
Lesiones persistentes: Acumulan mutaciones, inducen tumores.
Correción de pruebas:
ADNpol tiene actividad de exonucleasa 3 a 5.
Eso les permite chequear si el ult. nucleótido fue incorporado bien
Si es incorrecto, lo eliminan e incorporan al correcto.
ADNpol III bacteriana + eficiente para este mecanismo
Reparación de apareamiento incorrecto
Enzima DAM metilasa metila nucleótidos de la cadena molde.
Complejo proteico MUT chequea 1000 nucleótidos de la cadena nueva y si encuentra uno
mal apareado, elimina todo el segmento
ADNpol rellena. ADN ligasa une. Proceso de reparación MUY costoso, requiere ATP.
Reparacion x corte de base
Se produce cdo 1 base es alterada quimicamente
Glicosidasa elimina esa base y genera sitio AP (apurínico-apirimidínico) reconocido x
endonucleasa q corta el ADN.
Reparación x corte de nucleótido
Endonucleasa corta el segmento alterado
Polimerasa inicia síntesis de hebra nueva
ADNpol rellenea y ligasa une.
Reparación directa:
Repara directamente el cambio quimico producido sin eliminar nucleótidos ni bases
Radiaciones UV sobre ADN generan dímeros de timina (union cov. entre 2 timinas)
Enzimas fotoliasas reparar esa alteración.
