Laboratorio de Hematología
LABORATORIO N° 1
BIOMETRÍA HEMÁTICA
Biometría Hemática Página 6
Laboratorio de Hematología
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA CLÍNICA
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUÍNEA
Objetivos Operativos:
1. Emplear el anticoagulante ideal en base a su acción y su uso para diferentes
determinaciones hematológicas.
2. Detallar las ventajas y desventajas entre la punción venosa y la punción capilar,
tomando en cuenta la técnica de extracción y el manejo de la muestra.
3. Ejecutar eficientemente la extracción de sangre venosa y capilar en base a la técnica
dada.
Introducción:
Para la obtención de la sangre se utilizan
dos métodos: la punción venosa y la
punción capilar.
La punción capilar ó cutánea se utiliza para
obtener muestras sanguíneas para
microanálisis; mientras que la punción
venosa se prefiere, por que permite
obtener mayor volumen de sangre y puede
tratarse conforme a las necesidades, es
decir se puede dejar coagular, para obtener
suero y otra mezclarse con anticoagulante
para separar el plasma ó utilizar la sangre
completa.
Usos Usos
Punción Venosa Punción Capilar
Métodos
Métodos
MUESTRA
SANGUÍNEA Frotis y
Directa Tinciones
Con Anticoagulante
Heparina
EDTA
Usos y
Acción Citrato Sin Anticoagulante
CPDA1
Doble Oxalato
Estudios de Suero
Coagulación
Sangre Completa
Anticuerpos
Anemias Biometria
Hemolíticas Hemätica
Estudios de
Coagulación
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ANTICOAGULANTES
Entre los anticoagulantes más utilizados en la Hematología, podemos mencionar: la
sal Disódica ó Dipotásica del Ácido EtilendiaminoTetraacético (E.D.T.A.), Oxalato de
Amonio y Potasio (mezcla de Wintrobe); Citrato de Sodio; Heparina; Citrato Ácido de
Glucosa (A.C.D.), Citrato Fosfato Glucosa (C.P.D.) y C.P.D. con Adenina (C.P.D.A1).
E.D.T.A. (Sal disódica ó dipotásica del Ácido Etilendiamino Tetraacético):
Ejerce su función como anticoagulante impidiendo que se ionice el Calcio (por
quelación). Se debe utilizar a una concentración de 1 a 2 mg. x ml. de sangre. Se
prepara disolviendo 2 gr. de sal de EDTA en 100 ml. de agua destilada. Para las
muestras se deben mezclar 0.1 ml. de anticoagulante por ml. de sangre; para obtener
así la concentración de anticoagulante por sangre será de 2 mg.
Ventajas: es el anticoagulante más recomendado para realizar pruebas hematológicas
como: Hemoglobina, Hematocrito, Recuentos celulares, VES; tiene además la propiedad
de evitar el agrupamiento de plaquetas in vitro, lo que permite realizar recuentos
bastante exactos.
MEZCLA DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO (Mezcla de Wintrobe):
Impide la coagulación, precipitando al Calcio en forma de sal insoluble. Se prepara bajo
una mezcla de 3 partes de Oxalato de Amonio (1.2 gr.) por 2 partes de Oxalato de
Potasio (0.8 gr.). Se disuelven en agua destilada y se seca. Se sirve a razón de 0.1 ml.
de anticoagulante por cada ml. de sangre, para mantener la concentración de 2 mg/ml.
de sangre.
Ventajas: se utiliza para determinaciones de concentración de Hemoglobina,
Hematocrito, recuentos celulares y las pruebas de la Hemoglobinuria Paroxística
Nocturna.
Desventajas: no se recomienda para realizar frotis con muestras Oxalatadas por que se
produce la degeneración nuclear de los Leucocitos. No puede utilizarse en transfusiones
sanguíneas.
CITRATO DE SODIO :
Evita la coagulación, impidiendo que se ionice el calcio. Es el anticoagulante empleado
en los estudios de coagulación. Se prepara a una concentración de 3.8 % y se usa en
una proporción de 1 parte de anticoagulante por 9 partes de sangre.
HEPARINA:
Es el mejor anticoagulante y es natural, pero muy caro. Se recomienda para realizar
las pruebas de Fragilidad Osmótica de los eritrocitos y la determinación de la deficiencia
de G6PD. Se usa a razón de 0.1 a 0.2 mg/ml. de sangre. Tiene su acción como
anticoagulante impidiendo la conversión de la Protrombina en Trombina.
C.P.D.A1 (Citrato de Fosfato Glucosa y Adenina),
A.C.D. (Citrato Ácido de Glucosa), C.P.D. (Citrato de Fosfato y Glucosa):
Se utilizan como anticoagulante de las bolsas recolectoras del Banco de Sangre, que
van a ser utilizadas para las transfusiones sanguíneas. Cada componente tiene una
función especial (que se detallará en el Seminario de Banco de Sangre), pero en
conjunto ayudan a prolongar la vida de los eritrocitos en las bolsas de recolección.
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EXTRACCIÓN SANGUÍNEA VENOSA
Se recomienda realizar la extracción en las venas
del pliegue del codo, de ser necesario se puede
utilizar las venas del dorso de la mano, como
también las del antebrazo. (Ver diagrama).
El paciente debe estar cómodo y su
brazo debe encontrarse apoyado
sobre una superficie plana.. (Ver
diagrama).
Se aplica el torniquete en el brazo del Se tensan ambos extremos del torniquete
paciente ó del área donde se realizará y se procede a realizar el cruce de los extre
la extracción mos para así ir realizando el medio nudo.
Se realiza el medio nudo dejando un extremo libre para que le permita deshacer el
nudo realizado (En el diagrama puede verse de negro el extremo fácil de deshacer).
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Se realiza el medio nudo dejando un extremo libre para que le permita deshacer el
nudo realizado (En el diagrama puede verse de negro el extremo fácil de deshacer).
Se procede hacer la extracción, tensando un poco la piel para evitar que se
mueva la vena escogida, se introduce la aguja con el bisel hacia arriba así como
se ve en el diagrama.
Luego de completada la extracción con la cantidad de sangre deseada, soltamos el
torniquete y entonces procedemos a sacar la aguja de la vena y cubrimos con un pad o
mota de algodón el sitio de la incisión y le pedimos al paciente que doble el brazo.
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Luego se procede a tapar la aguja colocando la tapa sobre la mesa para seguridad del
extractor.
PUNCIÓN CAPILAR
Se puede realizar en la yema del dedo, en el lóbulo de la oreja y en el talón
de los recién nacidos.
El dedo escogido, debe masajearse Se sujeta bien el dedo y se rea-
para estimular la circulación, desde liza la punción con una lanceta
la unión con la palma de la mano estéril con un movimiento rápido
hacia la punta del dedo y se limpia el y firme.
área con alcohol.
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Realizada la punción se vuelve a limpiar Obtenida ya la gota de sangre se
el área y se realiza un masaje del centro se procede a recogerla en capilares
del dedo a la punta para que aparezca la o colocarla directamente en una
gota de sangre. Placa o portaobjeto.
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BIOMETRÍA HEMÁTICA
Objetivos Operativos:
1. Indicar la importancia de los valores de ciertos elementos de la sangre periférica en
base al principio fundamental de cada prueba de la Biometría Hemática.
2. Mencionar el método útil para la obtención y determinación de la Hemoglobina.
3. Explicar el método y el procedimiento para la obtención del Hematocrito.
4. Realizar el Recuento de Glóbulos Blancos.
5. Detallar las relaciones de la Hemoglobina, el Hematocrito y el Recuento de Glóbulos
Rojos, para la determinación de los Índices Hematológicos.
6. Explicar el procedimiento para la realización de los recuentos de Glóbulos Rojos y
Plaquetas.
7. Realizar un extendido sanguíneo para realizar el recuento diferencial de Glóbulos
Blancos.
8. Decir los valores normales de las diferentes pruebas que componen la Biometría
Hemática.
9. Establecer las alteraciones de los valores normales que puede sufrir la Velocidad de
Eritrosedimentación.
10. Explicar el procedimiento para la obtención del Índice Reticulocitario.
11. Comparar los resultados obtenidos en la Biometría Hemática, en base a los valores
normales.
12.Establecer las alteraciones de los valores obtenidos en la Biometría Hemática con los
diferentes tipos de anemia.
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INTRODUCCIÓN:
La Biometría Hemática es el conjunto de determinaciones hematológicas, que
proporcionan al médico un punto de apoyo en combinación con otras pruebas de
laboratorio, para la confirmación de su impresión diagnóstica, en el caso de que el
examen físico se observen signos y síntomas de probable anemia.
La anemia ocurre cuando el nivel de la Hemoglobina circulante de una persona, en el
mismo entorno, es inferior a la de individuos sanos del mismo sexo y edad.
Las causas más comunes de anemia se debe a deficiencias nutricionales de hierro,
ácido fólico y con menor frecuencia de vitamina B12 y de proteínas.
Otras causas comunes de anemia son los defectos congénitos de la producción de
Hemoglobina, principalmente la Drepanocitosis y otras Hemoglobinopatías, incluyendo a
la Talasemia. La parasitosis, particularmente el Paludismo y las Uncinarias son causas
directas e importantes de anemia. Las infecciones bacterianas pueden agravar una
anemia preexistente e impedir la respuesta óptima a los hematínicos.
Como las anemias tienen múltiples etiologías, dos problemas se deben resolver:
1.- Comprobar la existencia de anemia.
2.- Definir su causa.
En la Biometría Hemática se evalúan los siguientes parámetros: determinación de
la Hemoglobina, Hematocrito, Índices Hematológicos, Recuentos Celulares de Glób.
Rojos, Blancos y Plaquetas, frotis de sangre periférica para el Diferencial de Glób.
Blancos, Índice Reticulocitario y la Velocidad de Eritrosedimentación. Muchos de ellos se
determina por métodos electrónicos con Analizadores Hematológicos.
La prueba denominada Hemograma es utilizada como prueba básica para tener el
conocimiento de cómo se encuentra una persona en cuanto al tejido sanguíneo, en ella
se determinan los siguientes parámetros: Hemoglobina, Hematocrito, Recuento de
Glóbulos Blancos y Diferencial de Glóbulos Blancos, dichas pruebas están
comprendidas dentro de la Biometría Hemática.
La determinación del volumen de glóbulos rojos empacados (Hematocrito), la
concentración de hemoglobina, el recuento eritrocitario, se relacionan con los índices
hematológicos, que los resultados de dichas pruebas comprueban entre sí y
constituyen el mejor índice de evaluación de las anemias, policitemias y de las
alteraciones de los glóbulos rojos.
Los Índices Hematológicos más utilizados en la Hematología Clínica para la
clasificación de las anemias son: la concentración media de la hemoglobina corpuscular
(CMHC), la hemoglobina corpuscular media (HCM), el volumen corpuscular medio
(VCM) y la Amplitud de Distribución Eritrocitaria ó el coeficiente de variación de la
distribución del volumen eritrocitario (ADE ó RDW-CV).
El recuento de glóbulos blancos para estimar su valor absoluto y su valor
relativo es incluido como parte de la Biometría Hemática (también del Hemograma),
por que sobre la base de los resultados obtenidos se pueden determinar un estado
patológico en la proliferación y diferenciación celular de los elementos que constituyen
la serie blanca.
El conteo de las plaquetas permite evaluarlas a ellas en su número; además de la
importancia de éstas en la Hemostasia.
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La cuenta reticulocitaria es un índice del control del funcionamiento de la médula
ósea.
La velocidad de eritrosedimentación, a pesar de que es considerado un
fenómeno inespecífico, es de utilidad clínica debido a que refleja muchos cambios en el
contenido de las proteínas plasmáticas, por lo que es empleado como un índice de la
presencia y progreso de enfermedades crónicas y además como una prueba de
orientación en el examen de rutina del paciente.
GLÓBULOS PLAQUETAS GLÓBULOS
ROJOS BLANCOS RECUENTO
DIFERENCIAL
Morfología %
RECUENTOS Relativo
Método Definición CELULARES
Valores Utilidad Frotis/Tinción
Elementos
HEMATOCRITO Maduros e
inmaduros
BIOMETRÍA
PRINCIPIO
Método de la HEMÁTICA VALORES
Cianmetahemoglobina V. E. S.
UTILIDAD
CLÍNICA
HEMOGLOBINA
Valores ÍNDICE
RETICULOCITARIO
Función ÍNDICE
HEMATOLÓGICOS
Extendido Citometría
Síntesis Sanguíneo de Flujo
V. C. M. H. C. M.
Serie Roja
C.M.H.C. ADE/RDW
Composición
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DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
La Hemoglobina es una proteína conjugada cuyo peso molecular es de 64,458.
Contiene cuatro grupos heme y la globina (compuesta de dos pares de cadenas
polipeptídicas).
En la clínica, el estado funcional del tejido
sanguíneo es evaluado mediante la concentración
de hemoglobina y el hematocrito. La hemoglobina
refleja la capacidad potencial de la sangre para
transportar oxígeno.
Cuando se relaciona la hemoglobina, el
hematocrito, con el recuento de glóbulos rojos para
determinar el tamaño celular y el contenido de
hemoglobina del eritrocito se obtienen datos
importantes sobre la etiología de las anemias.
Se ha propuestos muchos métodos para medir la
concentración de la Hemoglobina en la sangre. La
confiabilidad del resultado varía según el método y
este frecuentemente se elige en razón del equipo de
que se dispone en un laboratorio y del grado de
precisión requerido.
Para medir la Hemoglobina existen varios métodos, los más usados son los
colorimétricos, de entre los cuales la Comisión Internacional Pro-Estandarización en
Hematología recomienda el Método de la Cianmetahemoglobina. Este método tiene
un margen de error de más ó menos 2 %.
Principio: En este método el Ferricianuro de Potasio [K3Fe(CN)6] convierte al hierro
de la hemoglobina del estado ferroso a férrico, para formar Metahemoglobina, que
al combinarse con el Cianuro de Potasio (KCN), se forma un pigmento estable, la
Cianmetahemoglobina.
Hb Fe ++
+ K3Fe(CN)6 Hb Fe +++
Hb Fe +++
+ KCN Cianmetahemoglobina
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Patrón Comercial: la solución de
Cianmetahemoglobina usada para la
calibración precisa y estandarizada diaria de
los instrumentos usados en la
determinación hemoglobínica. Para calcular
la concentración del estándar comercial se
debe transformar en gramo/100 ml la
cantidad indicada en el marbete (60
mg/100 ml) y luego multiplicarlo por la
dilución usada en el laboratorio (1:251).
MÉTODO DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA
1*- Encender el espectrofotómetro y colocarlo en la
longitud de onda de 540 nm.
2*- Colocar 20 lambdas (con una micropipeta) de sangre
capilar ó sangre venosa con anticoagulante (EDTA)
como le indica su profesor, en 5 ml de solución de
Drabkin [NaHCO3, KCN, K3Fe(CN)6].
3*- Mezclar por inversión y dejar en reposo por 10
minutos.
4*- Transferir la muestra a la cubeta de lectura, con la
indicación de su profesor.
5*- A una longitud de onda de 540 nm, gradúe el
espectrofotómetro a 100 % de tramitancia con la
cubeta de blanco que contiene 5 ml. de solución
Drabkin.
6*- Sustituya esta cubeta por la que contiene la solución
de hemoglobina y lea el porcentaje de transmisión
de luz (absorbancia). Obtenga los gramos de
Hb./100 ml de sangre usando la siguiente fórmula:
Concentración de la muestra = Concentración del Estándar
D. O. de la muestra D. O. del Estándar
Se considera que la densidad óptica (D.O.) es directamente proporcional a la
concentración del pigmento.
Valores Normales: Hombres: 16 ± 2 gr%
Mujeres: 14 ± 2 gr%
Causas de Error:
1. Errores en la obtención de la 5. Recuento de Leucocitos muestra
de sangre muy elevados
2. Muestra mal mezclada 6. Error en la dilución
3. Muestra de sangre coagulada 7. Instrumento mal calibrado
4. Error en el manejo de la pipeta Sahli 8. El reactivo se expuso a la luz
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DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO
El Hematocrito es el procedimiento hematológico más
preciso, con un error del 2 %
al 4 % siendo además, el mejor índice de gravedad de
la anemia y la policitemia.
Se define al Hematocrito como: la fracción de volumen
que los eritrocitos ocupan en un volumen de sangre.
Se obtiene al centrifugar la sangre venosa o capilar
no coagulada, determinando las cantidades de
eritrocitos empacados y de plasma.
La centrifugación tiene por objeto, aglomerar los
eritrocitos sin dejar plasma entre ellos, pero sin que
algunos se deformen ó sean expulsados. Cuando las
células están densamentes aglomeradas y queda poco
ó nada de plasma entre ellas, la columna de glóbulos
rojos del hematocrito es transparente. (Norma
Koeppe).
El examen visual del plasma sobrenadante en el tubo de Hematocrito puede
aportar información valiosa relativa a la causa de la anemia. Los niveles elevados de la
bilirrubina sérica, característicos de pacientes con anemia hemolítica ó megaloblástica,
se detectan por el color amarillo del plasma. En las deficiencias de hierro y en los
procesos inflamatorios, el plasma se observa más pálido de lo normal.
El aumento en el número de leucocitos y plaquetas puede apreciarse como una
delgada capa de células de color crema por encima de los eritrocitos empacados.
MICROHEMATOCRITO (Procedimiento)
1. Puede usarse sangre venosa ó sangre
capilar.
2. Proceda a llenar el tubo capilar heparinizado
ó no heparinizado según la muestra. Llene
el tubo antes de 1 ó 2 cm. del extremo.
Tapone con el dedo él extremo contrario.
3. Selle el extremo llenado del tubo capilar con
masilla.
4. Coloque los tubos capilares en una de las
ranuras numeradas de la cabeza de la
microcentrífuga de tal manera que el
extremo sellado quede en contacto con el
área periférica de la centrifuga ó siga las
indicaciones de su profesor.
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5. Enrosque la cubierta plana de la cabeza de la microcentrífuga.
6. Centrifugue los capilares a 10,000 rpm. durante 5 minutos.
7. Determine el valor del hematocrito con ayuda de un dispositivo de lectura de
Microhematocrito (el profesor le dará las instrucciones).
Valores Normales: Hombres: 47 ± 5 gr%
Mujeres: 42 ± 5 gr%
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ÍNDICES HEMATOLÓGICOS
Comprueban y relacionan los resultados fundamentales obtenidos en los
exámenes hematológicos rutinarios completos como Hematocrito, concentración de
Hemoglobina y Recuento de Glóbulos Rojos, de modo que, permita la clasificación
objetiva de diversos tipos de anemia y el estudio de las variaciones específicas de los
hematíes.
CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA MEDIA CORPUSCULAR (C.M.H.C):
Indica la relación entre el peso de la Hemoglobina y
el volumen en que está contenida.
Es un índice interesante en las evaluaciones
terapéuticas por que se calcula utilizando dos
determinaciones hematológicas más exactas que
son la Hemoglobina y el Hematocrito.
C.M.H.C. = Concentraciónde Hemoglobina (gr%) x 100
Hematocrito (%)
Ejemplo: Hb.= 15.6 gr% Hto.= 45 %
C.M.H.C. = 15.6 gr% x 100 = 34.7 %
45 %
Valor Normal: 32 % a 36 %
Un C.M.H.C. disminuido indica que una unidad de
volumen de hematíes agrupados contiene menos
hemoglobina de lo normal ó que la hemoglobina
ha sido sustituida por estroma eritrocitario como
en las anemias macrocíticas y en la deficiencia de
hierro. Podemos encontrar el C.M.H.C.
aumentado en casos de Esferocitosis.
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (V.C.M.)
Expresa en micras cúbicas (u3) el volumen que
ocupa un hematíe de tamaño medio.
Se calcula utilizando la determinación del
Hematocrito y el recuento de Glóbulos Rojos y se
expresa en micras cúbicas (u3).
V.C.M. = Hematocrito (%) x 10
Recuento de Glób Rojos (10 6/mm3)
.
Ejemplo: Hto.= 45 %
Recuento de Glób Rojos = 5,340,000 mm3
V.C.M. = 45 x 10 = 84.2 u3
5.34
Valor Normal: 87 ± 5 fL ó um3
Cifras muy debajo de 80 fL indica Microcitosis.
Cifras muy por encima de 96 fL indican
Macrocitosis.
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INDICE ADE ò RDW
La Amplitud de Distribución Eritrocitaria
(ADE) ò el coeficiente de variación de la
distribución del volumen eritrocitario
(RDW). Este índice es facilitado por los
instrumentos contadores automatizados
y es útil, se utiliza como indicativo de
Anisocitosis. Un valor aumentado del
RDW-CV es observado en un frotis donde
hay varias cruces de anisocitosis
(diferentes tamaños). Se reporta este
índice como Normal o Aumentado.
Valor Normal : 11.5 - 14.5 %
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (H.C.M.)
Indica el peso de Hemoglobina en un hematíe
y se expresa en picogramos ó micromicrogramos
(pg ó uug).
Se calcula utilizando la determinación de la
concentración de Hemoglobina y el recuento de
Glóbulos Rojos.
H.C.M.= Conc. de Hemoglobina (g%) x 10
Recuento de Glób. Rojos (106/mm3)
Ejemplo: Hb.= 15.6 gr %
Recuento de Glób Rojos = 5,340,000 mm3
H.C.M. = 15.6 x 10 = 29.2 pg.
5.34
Valor Normal: 27 - 32 pg
En las anemias Microcíticas está disminuido; en las
anemias Macrocíticas está aumentado
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