UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAÉN

GUIA DE PRACTICA N° 01

CURSO:
Histología y Embriología.
TEMA:
Uso, Manejo Y Cuidados Del Microscopio.
DOCENTE:
Lic. T.M. Felipe Jesús Muguerza Ortiz
INTEGRANTES:
Alarcón Vásquez Karen Leandra
Carrasco Campos Jhackson
Guevara Estela Henry Jayo
Huaman Guerrero Yuvi Isaela
Mondragon Wilcamango Aldo Junior
Tucto Cabrera Ingrid Brishit

JAEN – PERÚ
2024
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 Uso, Manejo Y Cuidados Del Microscopio.

1. INTRODUCCIÓN:
El microscopio es una herramienta fundamental y muchas veces se ha mencionado que
es la herramienta principal en el laboratorio de Tecnología Médica, permitiendo la
observación de estructuras y organismos que no son visibles a simple vista. Su uso
adecuado, manejo correcto y mantenimiento son esenciales para obtener resultados
precisos y prolongar la vida útil del equipo. Esta práctica de laboratorio está diseñada
para familiarizarnos con las partes y funciones del microscopio, así como con las
técnicas apropiadas para su utilización y conservación.

Durante esta práctica, aprenderemos a identificar los componentes principales del

microscopio, como la platina, los objetivos, el ocular, el condensador y el sistema de
iluminación. Aprenderemos los procedimientos para preparar y colocar las muestras,
ajustar el enfoque y cambiar entre diferentes aumentos para obtener imágenes claras y
detalladas. Además, se enfatizaremos la importancia de manejar el microscopio con
cuidado, siguiendo prácticas seguras para mover y ajustar el equipo sin causar daños a
sus componentes delicados.

También abordaremos los distintos tipos de microscopios mencionando cual es su

importancia y uso de cada uno, asegurando su funcionamiento óptimo y evitando el
deterioro prematuro.

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 2. OBJETIVOS:
a) Objetivo General:
• Desarrollar habilidades prácticas y técnicas en el uso, manejo y cuidados del
microscopio, con el fin de realizar observaciones microscópicas precisas y de
alta calidad en diversas muestras biológicas.
b) Objetivos específicos:
• Identificar y describir las partes principales, comprendiendo su función y la
importancia de cada componente en el proceso de observación y análisis
microscópico de los distintos microscopios que podemos encontrar en un
laboratorio de Tecnología Médica.

• Aplicar procedimientos adecuados para el mantenimiento y cuidado de los

distintos microscopios, garantizando su correcto funcionamiento y prolongando
su vida útil, a través de prácticas de manejo seguro.
3. MARCO TEÓRICO:
a) Microscopio Electrónico:

El microscopio electrónico es una herramienta invaluable en la investigación científica

por su capacidad de aumentar imágenes de muestras a niveles superiores al
microscopio óptico. Al utilizar electrones en lugar de luz visible, se logra una mayor
resolución en la visualización de las muestras.

En un microscopio electrónico, los electrones son acelerados a altas velocidades para

iluminar la muestra. Al interactuar con la muestra, algunos electrones se reflejan
mientras que otros la atraviesan, permitiendo la reconstrucción de una imagen detallada,
además, se dividen en microscopios de transmisión y de barrido, según la técnica
utilizada. Los componentes clave de un microscopio electrónico incluyen una fuente de
electrones, un sistema de aceleración y enfoque, y un detector para captar la señal
electrónica.

TIPOS DE MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS.

• El microscopio electrónico de transmisión (TEM): Utiliza electrones que

atraviesan la muestra para obtener imágenes detalladas de las estructuras
internas. Los electrones son dirigidos hacia la muestra mediante lentes
electromagnéticas, y al impactar, algunos atraviesan la muestra mientras otros
son dispersados.
• El microscopio electrónico de barrido (MEB): Es una herramienta
fundamental en la investigación científica para observar los detalles de la

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 superficie de las muestras. En este tipo de microscopio, los electrones impactan
la muestra escaneando distintos puntos en lugar de iluminarla por completo
simultáneamente. Al interactuar con la muestra, los electrones generan
electrones secundarios que se desprenden de la superficie, proporcionando
información detallada sobre la misma.

USOS.

El microscopio electrónico es una herramienta fundamental en la investigación científica

y biomédica, permitiendo visualizar microorganismos, células, moléculas y virus con
gran detalle. Se utiliza en laboratorios y universidades para estudiar la morfología y
funcionamiento de diversas estructuras. Además, en Odontología tiene aplicaciones
significativas.

El uso efectivo de un microscopio electrónico en laboratorios requiere destreza y

precisión. Los pasos típicos para utilizar este dispositivo:

• Preparación de la muestra: Es fundamental preparar la muestra de manera

cuidadosa. Se debe fijar, cortar en secciones delgadas y recubrir con una capa
de metal para mejorar la conductividad eléctrica.
• Ajuste de parámetros: Se deben ajustar la intensidad del haz de electrones y las
lentes electromagnéticas para enfocar y dirigir el haz hacia la muestra. La
configuración correcta es clave para obtener imágenes nítidas.
• Adquisición de imágenes: Una vez configurado el microscopio, se procede a
capturar imágenes. Los científicos pueden observar la muestra en tiempo real y
tomar imágenes de alta resolución para su análisis.

IMPORTANCIA.

La microscopía electrónica es esencial para caracterizar nanomateriales. En su forma

de alta resolución, permite ver las columnas de átomos en una muestra e incluso
observar átomos individuales en una monocapa. Las imágenes muestran intensidades
específicas que deben interpretarse considerando la interacción del haz electrónico con
la muestra. Se describen las características clave de la microscopía electrónica de alta
resolución y resolución atómica, con ejemplos en materiales específicos. Se destaca la
importancia de la interacción de los electrones con la muestra para obtener imágenes
precisas de la distribución atómica sin distorsiones por la intensidad del haz electrónico.

b) Microscopio de fluorescencia:

La microscopía de fluorescencia es una forma especial de microscopía óptica. Utiliza la

capacidad de los fluorocromos para emitir luz después de ser excitado con luz de una

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determinada longitud de onda. Un microscopio de fluorescencia es un microscopio
óptico convencional al que se le añade un adaptador de fluorescencia, el cual permite
realizar la observación óptica de la muestra de manera tanto convencional como con
contraste con fluorescencia.

Mientras que un microscopio convencional utiliza luz visible, que está entre los 400 y
700 nanómetros para iluminar y magnificar la imagen de una muestra, el microscopio de
fluorescencia, por otro lado, usa una intensidad de la luz mucho mayor, la cual excita
las especies marcadas con fluorescencia en la muestra.

¿Como funcionan estos tipos de microscopios?

La función más básica de un microscopio de fluorescencia es la de permitir que la luz

excitada irradie el espécimen, para luego separar la luz más débil emitida de la imagen.

• Primero, el microscopio tiene un filtro que solo deja que pase la radiación con
una longitud de onda específica que sea la misma que la del material
fluorescente.
• La radiación choca con los átomos en el espécimen y los electrones son
excitados a un nivel de energía mayor.
• Cuando se relajan a un nivel menor, éstos emiten luz. Para ser detectables, o
sea, visibles al ojo humano, la fluorescencia emitida desde la muestra es
separada de la excitación más brillante con un segundo filtro, esto funciona
gracias a que la luz emitida es de una energía menor y con una longitud de onda
mayor que la utilizada para la iluminación.

Para realizar un diagnóstico FISH (Fluorescence In Situ Hibridation) se utilizan

moléculas con un fluoróforo determinado, para que, al momento de iluminar la muestra,
ésta se pueda ver de un color determinado.2 Para ello, se utilizan filtros específicos,
llamados filtros de excitación, y así seleccionar e iluminar la muestra con una zona
determinada del espectro visible.

Imagen 1. Estructura de un microscopio de fluorescencia.

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¿Cuáles son sus principales aplicaciones?

Son numerosas las aplicaciones de la microscopía de fluorescencia, notablemente en

biología y medicina:

• Marcaje de moléculas en células y tejidos para su caracterización e

identificación.
• Estudio de células normales y patológicas.
• Estudios inmunológicos.
• Mineralogía.

PARTES DEL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA.

Imagen 2. Microscopio de fluorescencia.

c) Estereoscopios:

El estereoscopio es un dispositivo que permite ver imágenes en 3D, creando una ilusión
de profundidad. Funciona mostrando una imagen diferente a cada ojo, lo que nuestro
cerebro fusiona en una sola imagen tridimensional. Este concepto fue introducido por
Sir Charles Wheatstone en el siglo XIX.

El estereoscopio utiliza espejos para dirigir las imágenes a cada ojo, lo que evita que la
persona tenga que cruzar los ojos para lograr el efecto tridimensional. Los espejos están
posicionados de manera específica para ajustar la separación de las imágenes,
permitiendo verlas como una sola imagen 3D. Este método es la base de muchas
demostraciones y tecnologías de visualización en tres dimensiones actuales.

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Los estereoscopios, también conocidos como microscopios de disección, son
instrumentos ópticos que permiten estudiar objetos y especímenes demasiado
pequeños para ser vistos a simple vista, pero demasiado grandes para ser observados
bajo un microscopio compuesto. Su magnificación va desde 5x hasta más de 60x y
típicamente usan luz reflejada sobre la superficie del objeto bajo estudio.

CARACTERÍSTICAS PRINCIPALES DE LOS ESTEREOSCOPIOS:

• Crean la ilusión de profundidad y relieve de una imagen al presentar dos

imágenes ligeramente diferentes, una para cada ojo.
• Constan de cuatro pequeños espejos ubicados de forma que desvían las
imágenes correspondientes a cada ojo, montándolas una sobre otra para dar el
efecto tridimensional
• Tienen un eje o pivote para ajustar el grado de separación de las imágenes
según el tamaño

USOS:

• Permiten realizar disecciones y separar partes de especímenes para

examinarlos con otros tipos de microscopía.
• Se utilizan ampliamente en estudios científicos para observar muestras de forma
ortogonal a una distancia focal de aproximadamente 25 cm.
• Son indispensables en fotogrametría y cartografía geológica, permitiendo
visualizar estructuras como pliegues y fallas en fotografías aéreas.
• Facilitan la inspección de imágenes de grandes conjuntos de datos
multidimensionales provenientes de experimentos.
• Tienen aplicaciones en visión artificial, navegación, entretenimiento, telecirugía
y simuladores de vuelo.

IMPORTANCIA

La importancia de los estereoscopios radica en su capacidad para proporcionar una

visión tridimensional de objetos y especímenes, permitiendo una observación detallada
y en profundidad que no es posible con la visión bidimensional:

1. Investigación Científica:

Los estereoscopios son esenciales en estudios científicos para observar muestras

de forma tridimensional, lo que facilita la visualización de estructuras complejas
como pliegues y fallas en fotografías aéreas, siendo especialmente útiles en
cartografía geológica. 3/5.

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 Permiten la observación detallada de objetos pequeños, como sellos, monedas,
rocas, minerales, fósiles y especímenes arqueológicos, lo que contribuye al avance
de la investigación en diversas disciplinas.

2. Educación:

En el ámbito educativo, los estereoscopios son valiosos para mejorar la experiencia

de aprendizaje de los estudiantes, ofreciendo una visión tridimensional de muestras
microscópicas que fomenta una comprensión más profunda de diversos temas.

Desde la educación básica hasta niveles más avanzados, los microscopios

estereoscópicos son utilizados para estudiar especímenes en biología, química,
geología y otras ciencias, permitiendo a los estudiantes explorar y comprender mejor
el mundo que les rodea.

3. Fotografía y Fotogrametría:

En fotografía, los estereoscopios son empleados para crear imágenes

tridimensionales que generan una ilusión de profundidad, lo que amplía las
posibilidades creativas y visuales en este campo. 1/3

También se utilizan en fotogrametría para la producción de estereogramas,

contribuyendo a la captura de información tridimensional visual de manera precisa.

4. PREPARACIONES EN EL LABORATORIO:
a) Preparación del material microbiológico para microscopía
La observación microscópica constituye la primera etapa del estudio de los
microorganismos y también del diagnóstico microbiológico ya que permite conocer
algunas características de los microorganismos, como: forma, disposición o agrupación,
presencia o ausencia de estructuras (cápsulas, esporas, flagelos), movilidad, etc.

El estudio "en fresco" se desarrolló cuando todavía no se habían inventado la fijación y

la tinción.

Un estudio “en fresco" es aquel que no precisa un tratamiento en el que se maten las
células, como es la fijación o la inclusión. Las preparaciones fijas y teñidas son de uso
casi universal, tanto a partir de especímenes recibidos como de colonias cultivadas. En
general una muestra del espécimen original puede ser colocada directamente sobre el
portaobjetos o bien ser recogida con un asa, recordando siempre tener una preparación
delgada y homogénea. Las películas secadas al aire son fijadas con calor suave sobre
la flama de un mechero y luego pasadas a través de ella. Debe tenerse cuidado para
evitar el calor excesivo, que puede alterar la forma bacteriana. El calor deseable es

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aquel en el que el portaobjetos sea apenas caliente para ser colocado sobre el dorso de
la mano.

Para observar una muestra al microscopio óptico podemos recurrirá a:

PREPARADOS EN FRESCO Y SECO:

Preparados en fresco:

• Tomar una muestra: sangre, o heces.

• Sujete una lámina portaobjetos por los bordes, en posición horizontal.
• Colocar una o dos gotas de aceite de inmersión.
• Con un gotero o pipeta Pasteur, coloque sobre la lámina una pequeña muestra
de heces, previamente agitada.
• Mezclamos el aceite de inmersión con la muestra.
• Cubrir con la laminilla, evitando derramar la muestra.
• Colocar la lámina en el centro de la platina sujetándola con la pinza.
• Abrir completamente el diafragma.
• Colocar el objetivo de 4 X en posición de observación.
• Accione el tornillo macrométrico hasta lograr la imagen en el campo
microscópico.
• Luego accionar el micrómetro para una imagen nítida
• Seguidamente colocamos el objetivo de 10 X, con el tornillo micrométrico
daremos nitidez de la imagen.
• Giramos el revolver al objetivo de 40 X, utilizamos el tornillo micrométrico para
dar nitidez a la imagen y tener una mejor observación.
• Observar, dibujar y describir lo que se visualiza en el microscopio.

Imagen 3. Preparación de muestra en fresco.

Preparación en seco

La preparación en seco es ideal para muestras que no necesitan hidratación.

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Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar primero una
sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en el microscopio mediante
luz transmitida.

Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos con la ayuda de
unas pinzas.

Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un cubreobjetos. Esto evita
también que el objetivo llegue a tocar la muestra en caso de cometer algún error durante
la manipulación del microscopio.

La ventaja de las muestras en seco es que no tienen problemas de deshidratación y

pueden mantenerse preparadas para una observación posterior.

Imagen 4. Preparación de una muestra para tinción. 1- Realización del extendido 2- Secado del
extendido 3- fijado en la llama.
Frotis de la muestra de sangre:

• Colocar una gota de sangre en la lámina portaobjetos y realizar la extensión

homogénea de la muestra, uniforme y sin grumos
• Fijar a calor moderado o medio ambiente.
• Agregar Giemsa hasta cubrir totalmente la muestra por espacio de 30 minutos.
• Lavar con agua tamponada pH 7,0.
• Secar al medio ambiente y observar con objetivo de inmersión.

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Coloración simple:

• Con un hisopo hacer una extensión de la mucosa bucal.

• Fijar la muestra al calor moderado o por aireación al medio ambiente.
• Cubrir la muestra con colorante ácido o básico por espacio de 1-3 minutos.
• Desechar el colorante sobrante y lavar con agua corriente a chorro moderado
• Secar al medio ambiente o al calor moderado del mechero (flameo). Observar,
utilizando.
• Primero los objetivos de pequeño y mediano aumento y luego con el objetivo de
inmersión.
• Dibujar y colorear la muestra observada.

Coloración doble:

• Extensión de la muestra examen: mucosa bucal. Fijación de la muestra.

• Colorear con hemateína cubriendo la muestra por un tiempo de 3-6 minutos
• Lavar con agua destilada, dos veces por 1 minuto cada vez.
• Colorear con eosina por un tiempo de 5-10 minutos.
• Lavar con agua corriente.
• Secar y observar con el objetivo de inmersión.
• Esquematizar la muestra examen.

Coloración neutra:

• Frotis de la sustancia examen –sangre, tomada del pulpejo del dedo anular,
previamente esterilizado con alcohol medicinal. Utilizar para el pinchazo una
lanceta.
• Fijar al medio ambiente por espacio de 5 minutos o por ligeros flameos al calor
del mechero.
• Cubrir todo el frotis utilizando cualquiera de los colorantes neutros señalados.
Cuente las gotas del colorante utilizado.
• Agregar agua tamponada pH 7.2, o agua destilada, se agrega el doble del
número de gotas del colorante utilizado en el paso anterior.
• Dejar actuar el colorante por espacio de 3-5 minutos
• Eliminar el exceso de colorante y lavar con agua tamponada o destilada (la
lámina adquiere un color rosado débil).
• Secar al medio ambiente y observar con aceite de inmersión.
• Dibujar y describir lo observado.

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Coloración Gram:

• Esta es una coloración diferencial, mediante la cual algunas bacterias como:

estafilococos, diplococos, el bacilo del ántrax y del tétano etc.,
• Captan y retienen el colorante de GRAM (violeta de genciana o cristal violeta) y
no se decoloran con el simple lavado con agua, ni con un decolorante tan
enérgico como es el alcohol-acetona.
• A las bacterias de este grupo se les llama Gram positivas (G+) y son de color
azul.
• Otro grupo de bacterias como los cocos del género Neisseria, como los
gonococos, meningococos etc. y la mayoría de bacilos como la Salmonella,
Shigella, Escherichia, Pasteurella etc.
• Captan, pero no retienen el colorante e Gram, se pueden teñir, pero se decoloran
con el simple lavado o bajo la acción del alcohol-acetona, y se les llama Gram
negativos (G-) son incoloras para evidenciarlas se utiliza un colorante de
contraste como la safranina y las bacterias se ven de color rojo.

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5. CONCLUSIONES:
• Un manejo adecuado del microscopio es esencial para garantizar la precisión en
la observación de muestras. Manipular las partes móviles con cuidado y ajustar
los enfoques de manera precisa evita daños al equipo y mejora la calidad de las
imágenes obtenidas.
• La correcta utilización de la fuente de iluminación y el diafragma del microscopio
es fundamental para obtener imágenes claras y nítidas. La intensidad y el ángulo
de la luz deben ser ajustados según el tipo de muestra observada para evitar
deslumbramientos y sombras que dificulten la observación.
• Mantener el microscopio limpio y en buen estado prolonga su vida útil y garantiza
un rendimiento óptimo. La limpieza regular de las lentes con papel especial y
soluciones adecuadas, así como la revisión de las partes móviles, son prácticas
esenciales en su mantenimiento.
• La correcta calibración del ocular y el enfoque preciso de las lentes objetivas son
determinantes para obtener observaciones detalladas y precisas. La práctica
constante en el enfoque de diferentes niveles de profundidad en las muestras
mejora la destreza en el uso del microscopio.
• El uso seguro del microscopio implica seguir normas básicas de seguridad en el
laboratorio, como no comer ni beber cerca del equipo, evitar tocar las lentes con
los dedos y asegurarse de que el microscopio esté colocado en una superficie
estable y limpia.
• Llevar un registro detallado de las observaciones y hallazgos durante la práctica
de laboratorio es crucial para el análisis y comparación de resultados. La
documentación adecuada de los procedimientos utilizados y las condiciones de
observación facilita la reproducibilidad de los experimentos y la verificación de
datos.

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 6. REFERENCIAS:
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2024]. Disponible en: https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-electronico/
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30 de mayo del 2024]. Disponible en: https://www.microscopioelectronico.top/para-que-
sirve-el-microscopio-electronico/
3. Conoce Qué es un Microscopio Electrónico - Galileo Equipos [Internet]. Aprende en Nuestro
Blog de Laboratorio - Galileo Equipos. 2023 [citado el 30 de mayo del 2024]. Disponible en:
https://www.galileoequipos.com/blog/que-es-microscopio-electronico-como-funciona/
4. Calderón HA. Microscopía electrónica de transmisión para observar átomos: principios y
desarrollo. Mundo Nano Rev Interdiscip Nanociencia Nanotecnología [Internet]. 2020
[citado el 30 de mayo del 2024];13(25):133–56. Disponible en:
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5. CROMTEK. ASÍ FUNCIONA UN MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA [Internet]. Chile:
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9. ESTEREOSCOPIO [Internet]. Scribd. [citado el 30 de mayo del 2024]. Disponible en:
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MICROSCOPIA.pdf

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