UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA
FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE ECOLOGIA Y CONSERVACION
UNIDAD I
MANUAL DE PRÁCTICAS
BIOQUIMICA
INTEGRANTES:
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ALUMNO (A):
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IQUITOS – PERU
DOCENTE: Blgo. CARLOS ROBERTO DAVILA FLORES, Dr.
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VISION DE LA FCF
“Institución Educativa referente por la formación integral de sus actores y
la generación permanente de aportes científicos y tecnológicos en el marco
de los principios del desarrollo sustentable. Reconocida por su calidad
institucional, construida desde la más amplia participación y pluralidad e
involucrada con la realidad socio-productiva de la región”
MISION DE LA FCF
“Somos una institución cuya misión es formar profesionales con una visión
global de conocimiento en distintas áreas, a través de un proyecto
educativo amplio, inspirado en la realidad socio-productiva de la región.
Nos caracterizamos por la búsqueda permanente de la excelencia en la
formación de profesionales comprometidos con el medio ambiente, la
sustentabilidad, la investigación tecnológica de vanguardia y con
capacidad de desempeñarse como actores del desarrollo en ámbitos
diversos.
Asumimos la tarea de difundir de manera efectiva nuestras acciones y
establecer alianzas estratégicas que contribuyan al pleno desarrollo de los
objetivos institucionales.
Nos guían valores de compromiso social, pluralidad de ideas, integridad y
respeto hacia las personas y su entorno”.
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PRESENTACION
Bienvenidos al curso de BIOQUIMICA, el cual ha sido diseñado para ustedes por la
Universidad Nacional de la Amazonia Peruana a través de la Facultad de Ciencias
Forestales y el Departamento Académico de Ecologia y Conservación, como parte del
ciclo 2023-I de la carrera de Ingeniería En Ecologia de Bosques Tropicales.
Este curso, está orientada al conocimiento de comprender los fenómenos físicos,
químicos y biológicos básicos de los recursos naturales de los bosques tropicales para
analizar e interpretar los procesos ecológicos. A demás, constituye una disciplina que
junto con la Química Orgánica que permiten o facilitan sentar las bases para la
comprensión de los fenómenos que ocurren en los microorganismos y su papel en los
procesos bioquímicos. Esto, es una Asignatura de Formación Básica, de carácter
teórico – práctico, ubicada en el Quinto ciclo del Plan de Estudios.
Es así que, sobre la base de nuestra experiencia, hemos desarrollado el presente curso
virtual con la finalidad de que ustedes los estudiantes logren comprender y entender las
bases conceptuales de la Bioquímica, determinando la composición, estructura y
función de la bioenergética en la célula, enzimas, vitaminas y minerales. Asimismo,
comprende el metabolismo de los carbohidratos y lípidos en la célula. Al mismo tiempo
explicar el metabolismo de las proteínas y ácidos nucleicos en una célula.
En esta guía encontrarán información para conocer todo lo relacionado a la estructura
del curso, su dinámica y sobre las actividades a lo largo de las 16 semanas del
semestre.
Con la certeza de contar con el esfuerzo permanente de ustedes y mío, les reitero la
bienvenida.
Blgo. Carlos Roberto Dávila Flores, Dr.
Docente del curso de Bioquímica
Universidad Nacional de la Amazonia Peruana
Departamento Académico de Ecologia y Conservación
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PRACTICA Nº 01
TEMA: BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
INTRODUCCION:
BIOSEGURIDAD, debe entenderse como una norma de comportamiento encaminada
a lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo de los estudiantes que
participan de una sesión práctica en un laboratorio de ciencias.
La formación en bioseguridad es la clave en la eficacia de los programas de seguridad
del laboratorio y ésta debe ser facilitada a todas las personas que están expuestas a
estos riesgos.
La Bioseguridad pretende reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente que conlleva
la manipulación de material peligroso.
OBJETIVO:
OBJETIVO GENERAL:
✓ Contribuir al fortalecimiento de la bioseguridad, poniendo a la disposición del
estudiante en los laboratorios de la Facultad de Ciencias Forestales,
procedimientos estandarizados para minimizar los riesgos que se presentan
durante el trabajo diario en el Laboratorio.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
✓ Ofrecer al estudiante en los laboratorios, prácticas seguras que determinen su
propia seguridad, la de sus compañeros y la del ambiente del laboratorio.
✓ Proteger la salud del conjunto de estudiantes que efectúan prácticas en el
laboratorio, siguiendo procedimientos de descarte seguros.
✓ Minimizar el riesgo de accidentes laborales haciendo tomar conciencia en el estudiante
sobre la importancia de adoptar en la rutina de trabajo los procedimientos aquí
recomendados.
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MATERIALES:
- Lápiz
- Guía de práctica.
- Imágenes y/otros.
PROCEDIMIENTO:
Para llevar a cabo esta práctica, es necesario el conocimiento teórico previo de las
condiciones de bioseguridad que deben cumplirse en el laboratorio de Bioquimica.
Los materiales a ser utilizados en la práctica son:
• Mandil blanco manga larga
• Guantes de látex
• Mascarilla
• Gorro o cofía
• Botiquín de primeros auxilios: con todos los elementos médicos
• Basurero con identificación
• Bolsas de basura rojas
• Lápiz
• Guía de practica
• Entre otros.
Los equipos requeridos para realizar esta práctica son:
• Computadora con proyector y conexión a internet
Los recursos a utilizarse son:
• Laboratorio de Bioquímica.
Seguridad en el laboratorio de Bioquímica
La seguridad de los alumnos que realizan las prácticas de laboratorio es primordial, por
lo que se deben seguir las siguientes normas de seguridad e higiene:
• Nunca trabajar sin la supervisión del profesor.
• Colocar fuera de las mesas de trabajo cualquier material ajeno al protocolo a
realizar. Limpiar el espacio de trabajo antes y después de utilizarlo. Mantener
libres los espacios comunes.
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• Dentro del laboratorio no está permitido comer, tomar bebidas o fumar. Debe
mantenerse el orden, no correr, empujarse o realizar actividades ajenas al
desarrollo de la práctica.
• Siempre usar bata dentro del laboratorio. Usar guantes para las actividades que
se indiquen.
• Conocer, mediante una investigación previa, las propiedades, el manejo y el
almacenamiento adecuado de todas las sustancias que se van a utilizar en un
protocolo antes de iniciarlo.
• Manejar con cuidado todas las sustancias que se utilicen durante el desarrollo
del protocolo. En casos necesarios utilizar lentes de protección y guantes
apropiados. Manejar los solventes dentro de una campana de extracción. Nunca
pipetear con la boca.
• Todas las sustancias que se utilicen, así como las que se preparen, deben estar
perfectamente etiquetadas.
• Si tiene contacto directo con alguna sustancia, acudir inmediatamente con el
encargado de la seguridad en el laboratorio
• Informarse y acatar los procedimientos para desechar sustancias químicas y
biológicas.
• Tomar precauciones al manejar las fuentes de poder y cámaras de electroforesis
para evitar incendios y choques eléctricos.
• Lavar el material utilizado. Guardarlo limpio y seco. Ante una situación de
urgencia, dar aviso inmediatamente a sus profesores. En caso necesario se
deberá mantener la calma y abandonar las instalaciones en orden.
Reactivos en el laboratorio de Bioquímica
En todos los experimentos se utilizarán soluciones tampón, soluciones reguladoras o
soluciones amortiguadoras de pH (en este texto usaremos este último término), que
son la mezcla acuosa de un ácido débil y su base conjugada y tienen la propiedad de
mantener estable el pH de una solución frente a la adición de ácidos o bases fuertes.
Mantener constante el pH de una solución bioquímica, es de vital importancia, ya que
un cambio pequeño en la concentración de hidrogeniones o hidroxilos puede alterar las
propiedades de las biomoléculas en solución, en particular las proteínas. En muchos
casos estas soluciones amortiguadoras, contienen agentes reductores (para evitar la
formación de enlaces S-S no deseados), inhibidores de proteasas (para evitar la
proteólisis de la proteína purificada), colorantes (para hacer las determinaciones de la
concentración de proteína, así como para teñir los geles), y otros reactivos para
determinar la catálisis enzimática.
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SUSTANCIAS PELIGROSAS
Dado que la seguridad de los usuarios se asume primariamente como personal, es
obligación para los alumnos que realicen las prácticas del laboratorio de bioquímica,
investigar las propiedades físicas, químicas, toxicológicas y de adecuado manejo de
todos los reactivos a utilizar.
Como una guía rápida, a continuación, se enlistan algunas sustancias peligrosas que
se utilizan en las prácticas del Laboratorio de Bioquímica.
Ácido bórico. Puede ser peligroso por inhalación, ingestión o absorción por la piel.
Utilizar guantes apropiados, lentes de protección y manipular en la campana de
extracción.
Ácido acético. Puede ser nocivo si se inhala o se traga. Extremadamente destructivo
para los tejidos de las membranas mucosas y las vías respiratorias superiores. Provoca
quemaduras en la piel y en los ojos. Evitar respirar los vapores. Retirar todas las fuentes
de ignición.
Ácido clorhídrico. Tóxico por inhalación. Dañino si se ingiere. Corrosivo.
Acrilamida. Potente neurotóxico que se absorbe por la piel (con efecto acumulativo),
evitar inhalar el polvo, usar guantes y mascarilla de protección cuando se pesa y
preparar las soluciones en campana de extracción. En principio la poliacrilamida no es
tóxica, pero debe manejarse con precaución ya que puede contener restos de
acrilamida no polimerizada.
Azul de bromofenol. Puede ser peligroso por inhalación, ingestión, o absorción por la
piel. Utilizar guantes apropiados y lentes de protección y manipular en la campana de
extracción.
Azul de Coomassie. Puede ser peligroso por inhalación, ingestión, o absorción por la
piel. Utilizar guantes apropiados y lentes de protección y manipular en la campana de
extracción.
Ditiotreitol (DTT). Puede ser nocivo si se inhala o es absorbido por la piel. Provoca
irritaciones en el tracto respiratorio, piel y ojos. Es tóxico si se ingiere y genera náuseas,
dolor de cabeza y vómitos. En general se debe trabajar en un lugar con buena
ventilación.
Dodecil sulfato de sodio. Sólido inflamable, es dañino si se ingiere, es tóxico por
absorción de la piel, es irritante. Afecta gravemente los pulmones. Etanol. Puede ser
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peligroso por inhalación, ingestión o absorción por la piel. Utilizar guantes apropiados y
lentes de protección y manipular en la campana de extracción.
Fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF). Puede ser nocivo si se inhala.
Extremadamente destructivo para los tejidos de las membranas mucosas y las vías
respiratorias superiores. Puede ser nocivo si es absorbido por la piel. Provoca
quemaduras en la piel y en los ojos. Tóxico si se ingiere. Utilizar guantes apropiados y
lentes de protección.
Fosfato de sodio. Puede producir irritación cutánea, así como lesiones oculares
graves, su ingestión es tóxica en determinados órganos.
β-Mercaptoetanol. Líquido combustible, tóxico si se inhala, extremadamente
destructivo para los tejidos de las membranas mucosas y las vías respiratorias
superiores. Rápida absorción a través de la piel, puede provocar una reacción alérgica
en ella. Provoca quemaduras en la piel y en los ojos. Puede dañar hígado y corazón
por exposición prolongada o repetida en caso de ingestión. Puede ser mortal si se
absorbe por la piel. Evite respirar los vapores. Llevar guantes y lentes de protección.
Metanol. Líquido inflamable, es tóxico por inhalación, tóxico por ingestión, tóxico por
absorción de la piel. Afecta ojos, riñón, hígado, corazón, sistema nervioso central.
NAD. Su ingesta produce irritación en el hígado y los riñones, provoca irritación ocular
grave. Sulfato de amonio. Su ingestión es tóxica.
N, N, N’, N’-Tetrametiletilendiamina (TEMED). Extremadamente destructivo para
mucosas y tracto respiratorio superior, ojos y piel. Su inhalación puede ser fatal. El
contacto prolongado puede causar severa irritación y quemaduras. Utilizar guantes
apropiados y lentes de protección y manipular en campana de extracción. Altamente
inflamable, mantener lejos del calor, chispas y flamas.
Persulfato de amonio. Extremadamente destructivo para mucosas y tracto respiratorio
superior, ojos y piel. Su inhalación puede ser fatal. El contacto prolongado puede causar
severa irritación y quemaduras. Utilizar guantes apropiados y lentes de protección y
manipular en campana de extracción.
Reactivo de Bradford. Muy tóxico por inhalación. Tóxico por ingestión. Tóxico por
absorción de la piel. Afecta el hígado, la sangre, la médula, los ojos, los riñones, el
corazón y el sistema nervioso central.
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Equipos en el laboratorio de Bioquímica
Se utiliza para la separación, purificación y detección de biomoléculas como proteínas,
polipéptidos y polinucleótidos por medio de una cromatografía líquida en la que la
velocidad del solvente se controla a través de bombas de flujo continuo y columnas
cromatográficas con las que es posible realizar separaciones por intercambio iónico,
afinidad, exclusión, etc. Se pueden utilizar diferentes tipos de columnas, dependiendo
del tipo de separación requerida. La muestra se introduce a través de un inyector y
eluye a través de la columna con el flujo del solvente. La solución resultante de la
columna pasa a través de una o más celdas de flujo para medir la concentración de
biomoléculas en la solución, utilizando absorción de luz UV. Cuenta además con celdas
que miden la conductividad del amortiguador, con lo que es posible monitorear el
progreso del gradiente. El cromatógrafo utiliza un software con capacidad para manejar
los datos obtenidos.
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La microcentrífuga es un aparato de uso frecuente para separar las sustancias de
diferente densidad o tamaño de partícula, las cuales se encuentran suspendidas en un
fluido, al someterlas a fuerzas de aceleración que obligan a las moléculas a migrar al
fondo del envase utilizado, separándolas del medio en que se encuentran. La velocidad
de sedimentación de las partículas en un fluido es mucho mayor en un campo centrífugo
que en un campo gravitacional. En un campo gravitacional las fuerzas de dispersión
originadas por el movimiento browniano son mucho mayores que las fuerzas
gravitacionales, en una centrífuga las fuerzas centrífugas superan los efectos de las
fuerzas de dispersión por lo que la sedimentación es más rápida.
Un espectrofotómetro UV-visible en general está compuesto por una fuente de luz
(lámpara), un selector de longitud de onda (monocromador), una celda y un detector.
La fuente de luz es una lámpara o combinación de lámparas que tienen un espectro de
emisión entre 190 y 1100 nm. Existen lámparas de deuterio, tungsteno y halógenos
(como el xenón). El monocromador permite separar y direccionar un intervalo estrecho
de longitudes de onda sobre la muestra. Después de pasar por el monocromador, la luz
incide sobre la muestra, que se coloca en una celda que tiene la particularidad de tener
al menos dos caras paralelas y pulidas de tal forma que no haya efectos ópticos
indeseables; puede ser de plástico, vidrio o cuarzo. La intensidad de la luz transmitida
se mide con un detector que convierte el número de fotones que inciden sobre él
durante un intervalo de tiempo en una señal eléctrica.
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Una molécula con una carga eléctrica neta se desplaza en un campo eléctrico, en un
fenómeno conocido como electroforesis. En general, una cámara de electroforesis
vertical tiene los siguientes componentes: dos placas de vidrio del mismo grosor y
anchura de acuerdo al fabricante (el tamaño de los vidrios es variable dependiendo de
la dimensión de la cámara); dos espaciadores que son dos placas largas de iguales
dimensiones hechas de un material flexible pero resistente generalmente poliestireno o
teflón (la función de los espaciadores es determinar el grosor del gel); un peine, cuyos
dientes pueden variar en número, tamaño y grosor (tiene el mismo grosor de los
espaciadores y está confeccionado del mismo material, sirve para moldear los pocillos
donde se colocarán las muestras); un soporte o base que es un dispositivo que sirve
para permitir el ensamblaje de los vidrios con los espaciadores (una serie de prensas
que ejercen presión y mantiene fijo todo el sistema); y el tanque de electroforesis, que
es el recipiente que contiene el amortiguador de corrida superior e inferior. En algunos
sistemas, este tanque contiene electrodos permanentes a lo largo de sus bases, listos
para ser conectados. En otras cámaras existe una tapa que contiene los electrodos, de
tal manera que el investigador ya no tiene contacto directo con el amortiguador durante
el proceso de electroforesis. Es importante señalar que la cámara de electroforesis ya
ensamblada deberá estar ubicada sobre una superficie totalmente plana y nivelada.
Este paso es importante en el momento en el que se vierte la solución del gel dentro de
la cámara, ya que se evita el derrame de la solución y la generación de matriz
desnivelada. Esta última podría generar la distorsión del perfil de las bandas de las
proteínas al final de la electroforesis.
La fuente de poder es un aparato que tiene por función proveer de energía eléctrica a
la cámara de electroforesis. El voltaje, el amperaje y el tiempo, pueden ser regulados
de acuerdo a las necesidades del investigador. Esta fuente de poder provee voltaje,
corriente o poder constante para la electroforesis (funcionando con el valor especificado
para el parámetro constante).
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Las micropipetas son instrumentos que permiten medir pequeños volúmenes de
líquidos. Los volúmenes que pueden ser tomados por las micropipetas dependen de la
marca, pudiendo ser de volumen fijo o de volumen variable (entre 0.1 y 1000 μL). En
todos los casos el principio es a través de pistones que generan vacío, lo que permite
que el volumen de líquido deseado ingrese a la punta desechable. El uso correcto de
las micropipetas permite medir con exactitud, en forma repetida y tomar de distintas
soluciones simplemente cambiando las puntas de plástico, que habitualmente se
utilizan en forma estéril. El tipo de puntas empleadas depende del tipo de micropipeta
y por lo general se sigue un código de colores entre el instrumento y la punta, siendo
de color azul para el rango de 200-1000 μL, de color amarillo para el de 2-200 μL y
blancas para el de 0.1 a 10 μL. Como recomendaciones generales de uso se sugiere
no mover el ajustador de volumen por arriba o por abajo del intervalo especificado, no
usar la micropipeta sin la punta desechable y no invertir la posición de la micropipeta
cuando haya líquido en la punta desechable. Para evitar contaminar las soluciones es
importante utilizar puntas nuevas y diferentes para cada solución.
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CUESTIONARIO
1. ¿ Q u e b u s c a l a b i o s e g u r i d a d ?
2. ¿Qué es riesgo y que tipos de riesgos pueden existir en un laboratorio?
3. Mencione los principales agentes de riesgo a que generalmente estamos
expuestos en el laboratorio.
4. Mencione los accidentes mas comunes que se producen en el laboratorio
5. ¿Cuál es la diferencia entre normas de bioseguridad y normas de higiene?
6. ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio
de bioquímica?
7. Elabore un plan de manejo para el uso de las practicas en el laboratorio, que sea
que minimice todo riesgo de accidente.
8. Investigue otros equipos y materiales que se usen en el laboratorio de bioquímica,
ilustra o pegue imágenes y determine las características de su uso.
9. Elabore otras propuestas que ayuden a mejorar la seguridad en cuanto a equipos
y uso del laboratorio de bioquímica.
10. Clasifique los niveles de laboratorio e identifique en cual se encuentra el
laboratorio de bioquímica.
11. Porque se usa el mandil color blanco.
12. Que es un pictograma de bioseguridad, como se elabora e ilústralo
13. Que son sustancias peligrosas, clasifícalas e ilustralo
14. Que significa EPP de laboratorio, ilustralos y defina brevemente su uso.
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