1) Si se pone en contacto un alambre de Cu con solución de AgNO3 ¿Ocurre una reacción redox?

En caso
afirmativo diga el sentido de la misma 𝜀𝐶𝑢+2 = 0.34𝑣 ; 𝜀𝐴𝑔+ = 0.81𝑣
𝐶𝑢 𝐴𝑔

𝑆𝑒𝑚𝑖𝑟𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐶𝑢 ⇆ 𝐶𝑢+2 + 2𝑒 − 𝜀 = −0.34𝑣

𝑆𝑒𝑚𝑖𝑟𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑑𝑢𝑐𝑐𝑖ó𝑛 2𝑥( 𝐴𝑔+ + 𝑒 − ⇆ 𝐴𝑔 𝜀 = 0.81𝑣)

𝐶𝑢 + 𝐴𝑔+ ⇆ 𝐶𝑢+2 + 2𝐴𝑔 𝜀 = 0.47𝑣

𝐿𝑎 𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝑠𝑖 𝑜𝑐𝑢𝑟𝑟𝑒 𝑦 𝑠𝑒 𝑑𝑒𝑠𝑝𝑙𝑎𝑧𝑎 ℎ𝑎𝑐𝑖𝑎 𝑙𝑎 𝑑𝑒𝑟𝑒𝑐ℎ𝑎

2) Muestreo: Que entiende por errores sistemáticos y errores aleatorios?Explique detalladamente en qué
consiste el método patrón externo.

● ERROR SISTEMÁTICO: tiene un valor definido y una causa asignable, son de la misma magnitud para
mediciones repetidas que se efectúan de la misma forma. Estos errores llevan a un sesgo en el resultado
de la medición. Cuando se obtienen resultados repetidos en el análisis de muestras idénticas por 2 métodos
A y B, si el método A carece de sesgo (es decir que uA es el valor verdadero) el método B tendrá sesgo.
Así el sesgo afecta a toda la medición. Sesgo= uB-uA
Estos errores pueden ser de 3 tipos:

*Instrumentales: son originados por el mal funcionamiento de los instrumentos, por calibraciones defectuosas o
mal hechas o por el uso en condiciones inapropiadas de equipos e instrumentos. Por ejemplo: las pipetas,
buretas y matraces aforados pueden contener y entregar volúmenes distintos de aquellos indicados por su
graduación. También pueden ser provocados por los instrumentos electrónicos por ejemplo cuando el voltaje
de una batería disminuye con su uso.
*Personales: son el resultado de la falta de cuidado, la falta de atención o por limitaciones personales por parte
del experimentador. Por ejemplo: al detectar el color de una solución en el punto final de una valoración o
determinar el nivel de un líquido en la graduación de una pipeta o bureta.
*De método: aparecen como conse cuencia del comportamiento quimico o fisico no ideal de los reactivos y de
las reacciones en las que se basa su análisis. Por ejemplo: por la lentitud de algunas reacciones, por reacciones
incompletas, por la inestabilidad de algunas especies químicas.

● ERROR ALEATORIO: provocan que los datos se distribuyan de manera más o menos simétrica alrededor
de la media. Este error en una medición está reflejado por su precisión.
Es aquel que es constante a lo largo de todo el proceso de medida y, por tanto, afecta a todas las medidas
de un modo definido y es el mismo para todas ellas.

PATRÓN EXTERNO: Un estándar o patrón externo se prepara por separado de la muestra. Los estándares
externos se usan para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de interferencia de la
matriz de componentes sobre la disolución del analito. Pasos:

1) Se preparan varios patrones o estándares con concentración conocida de analito.Lo ideal es usar tres o
más de las disoluciones en el proceso de calibración. No obstante, se puede confiar en calibraciones de
dos puntos en algunos análisis de rutina.
2) Se mide la señal de cada patrón.
3) Se construye la curva de calibración: la señal (absorbancia, altura del pico, área del pico) en función de
la concentración conocida del analito.
1
 4) Se obtiene la ecuación de la recta: y=mx + b donde: Y= la señal medida; X= la concentración del analito;
m= es la pendiente; b= es la ordenada al origen.
5) Se obtiene la pendiente y la ordenada por el método de los mínimos cuadrados: m=Sxy/Sxx b= y-mx
6) Se mide la señal de la muestra cuya concentración de analito se desea conocer.
7) La concentración que se desea conocer se obtiene con la curva de calibración y aplicando los
correspondientes factores de dilución convenientes tomados de los pasos que se siguieron para preparar
la muestra.

3) Enuncie la ley de Beer. Explique el fundamento de la respuesta, que consecuencias tendrán sobre el
cumplimiento o cuantificación del analito:
a) El analito se disocia en dos especies absorbentes.
b) La curva de calibración se constituye con valores de A>1 (por no fijar valores entre 0 y1)
c) Elegir anchura de trabajo como una anchura que se encuentra en la zona del espectro de la
sustancia, donde la absorbancia presenta un valle (minimo)

LEY DE BEER, TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA.

La ley de Lambert y Beer es una expresión matemática que nos dice cómo la materia absorbe la luz. Esta ley
afirma que la cantidad de luz que atraviesa una muestra es disminuida por tres fenómenos físicos:

2
1. La cantidad de material de absorción en su trayectoria (concentración)

2. La distancia que la luz debe atravesar a través de la muestra (distancia de la trayectoria óptica)

3. La probabilidad de que el fotón de esa longitud de onda sea absorbido por el material (absortividad específica
o absortividad molar).

A medida que un haz de luz atraviesa un medio absorbente, la cantidad de luz absorbida en cualquier volumen
es proporcional a la intensidad de luz incidente multiplicado por la absortividad (ε o a). Consecuentemente, la
intensidad de un haz incidente decae exponencialmente a medida que pasa a través del medio absorbente.
Esta relación, cuando se expresa como ley de Beer y Lambert, es: T = 10 – εb[c]

(T: Transmitancia; ε: absortividad molar en unidades de L/mol*cm; b: distancia que recorre el haz de luz en el
medio absorbente en unidades de cm; [c]: concentración en unidades de mol/L)

En un enfoque simplificado, la transmitancia se expresa como el cociente entre la intensidad de la radiación

incidente sobre la solución de la muestra (P0) y la intensidad de la luz emergente de esta solución (P), es decir
que: T = P/P0

La transmitancia puede ser graficada en función de la concentración, pero la relación no es lineal. Sin embargo
puede obtenerse una relación lineal al aplicar el logaritmo decimal negativo a la expresión de la transmitancia.
De esta manera, la absorbancia (A) se define como: A = -log (I/I0) = -log (T) = εb[c] = ab[c]

(a: absortividad específica en unidades de L/g*cm)

Si varias especies interaccionan con una REM de determinada λ, la A es una magnitud aditiva y puede
expresarse como: Aλ = ε1b[c1] + ε2b[c2] + ε3b[c3 ]…. + εnb[cn ] = ∑εib[ci ]

❖ LEY DE LAMBERT: Predice el efecto que produce el ESPESOR del medio sobre la fracción de radiación
que se absorbe.
❖ LEY DE BEER: Predice el efecto que produce la CONCENTRACIÓN del medio sobre la fracción de
radiación que se absorbe.

LIMITACIONES DE LA LEY DE BEER.

● Limitaciones reales: La ley de Beer describe el comportamiento de absorción de medios que contienen
concentraciones de analito relativamente bajas; a concentraciones altas (casi siempre _0.01 M), el grado de
las interacciones soluto-solvente, soluto-soluto, o los puentes hidrógeno pueden afectar el ambiente del
analito y su capacidad de absorción.

3
*La concentración: la ley es aplicable a disoluciones diluidas (<10-2 M); en disoluciones concentradas la
distancia entre las partículas absorbentes es tan pequeña que se produce una modificación en la distribución
de cargas de las mismas, lo que se traduce en una alteración en la capacidad de absorción a una longitud de
onda determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilución.

● Desviaciones instrumentales: las desviaciones instrumentales siempre conducen a errores negativos en la

absorbancia.

*Desviaciones instrumentales debidas a la radiación policromática: La ley de Beer sólo se cumple en forma
rigurosa cuando las mediciones se efectúan con radiación monocromática. En la práctica, las fuentes
policromáticas que tienen una distribución continua de longitudes de onda se usan junto con una red o un filtro
para aislar una banda más o menos simétrica de longitudes de onda que rodean a la longitud de onda que se
quiere usar.
La relación entre Absorbancia de una mezcla y la concentración deja de ser lineal cuando las absortividades
molares difieren entre sí. Además, cabe esperar una mayor desviación de la linealidad a medida que se
incrementa la diferencia entre las absortividades molares. Si la banda de longitudes de onda seleccionada para
mediciones espectrofotométricas corresponde a una región del espectro de absorción en el que la absortividad
molar del analito es en esencia constante, las desviaciones respecto a la ley de Beer son mínimas. Muchas
bandas moleculares en la región UV-visible se ajustan a esta descripción. En estos casos, la ley de Beer. Por
otro lado, algunas bandas de absorción en la región UV-visible y muchas en la región infrarroja (IR) son muy
angostas, por lo que las desviaciones respecto a la ley de Beer son comunes. Por tanto, con el fin de evitar
desviaciones se recomienda seleccionar una banda de longitud de onda cercana a la longitud de onda de
absorción máxima, en la cual la absortividad del analito cambia poco con la longitud de onda.

*Desviaciones instrumentales originadas por radiación parásita: Por lo regular, la radiación que emerge del
monocromador está contaminada con pequeñas cantidades de radiación dispersa o parásita llamada luz
parásita, y se define como la que proviene de un instrumento que está fuera de la banda de longitud de onda
seleccionada para la determinación. Con frecuencia, esta radiación parásita es resultado de la dispersión y
reflexión desde superficies de redes, lentes o espejos, filtros y ventanas. La luz parásita hace que la absorbancia
aparente sea menor que la absorbancia verdadera.

● Desviaciones químicas:
*Debidas a reacciones del absorbente con el disolvente.
*Desviaciones químicas aparentes: Se producen cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con un
solvente para originar un producto con un espectro de absorción diferente al del analito. Las soluciones acuosas
de los indicadores ácido/base son un ejemplo característico de este comportamiento.
*Falta de uniformidad de la muestra o presencia de impurezas.

● Celdas desajustadas: Si la longitud de trayectoria de las celdas que contienen las soluciones del analito y
del blanco no son iguales ni tienen características ópticas equivalentes, habrá una ordenada al origen k en
la curva de calibración y A= ebc + k será la ecuación real en lugar de la ecuación de la ley de Beer. Para
que no ocurra este error se utilizan celdas cuidadosamente ajustadas o se aplica un procedimiento de
regresión lineal para calcular tanto la pendiente como la ordenada al origen de la curva de calibración.

4) Describa un monocromador y detector de tubos fotomultiplicadores.

4
● MONOCROMADORES: son instrumentos encargados de la dispersión de la luz policromática separando
sus diferentes longitudes de onda. Varían en forma continua y en un amplio intervalo de longitud de onda
de radiación. Se diseñan para realizar barridos espectrales.

Componentes:

1) una ranura o rendija de entrada que proporciona una imagen óptica rectangular.
2) una lente o espejo colimador que produce un haz paralelo de radiación.
Su función se basa en direccionar el haz de luz, con el objetivo de que esta incida en el elemento óptico, en la
muestra y luego en el detector para que sean paralelas entre sí.
3) un prisma o una red que dispersa la radiación en las longitudes de onda que la componen.
Existen dos diseños de dispersores en los monocromadores, los de redes, la dispersión angular de la longitudes
de onda es el resultado de la difracción, se presenta en la superficie reflectora, y los de prisma de reflexión, la
refracción en las dos cara da como resultado la dispersión angular de la radiación, en ambos diseños de
dispersión la radiación se va a dispersar en el plano focal formado por la rendija de salida, la cual aparecerá
como dos imágenes rectangulares de la rendija de entrada.
4) un elemento de enfoque que reforma la imagen de la ranura de entrada y la enfoca sobre una superficie
plana denominada plano focal.

5) una rendija de salida en el plano focal que aísla la banda espectral deseada.
Cuando se quiere un análisis cuantitativo se recomienda usar rendija con mayor anchura y si se requiere un
análisis cualitativo, en el que son importante los detalles del espectro, la anchura de la rendija debe ser un poco
más angosta.
6) Recipientes para las muestras.
El recipiente donde se coloca la muestra que se quiere analizar debe ser de un material transparente a la
radiación en la región del espectro (cuarzo o sílice, los contenedores de plásticos también se pueden usar en
la región visible).
Además, la mayoría de los monocromadores posee ventanas de entrada y de salida diseñadas para
proteger a los componentes del polvo y las emisiones corrosivas del laboratorio.

Dos tipos de monocromadores: a) monocromador Czerney-Turner de red y b) monocromador Bunsen de

prisma.

a)

5
 b)

En el monocromador de rejilla típico la radiación procedente de una fuente entra al monocromador a través
de una estrecha rendija. Entonces, la radiación es colimada por un espejo cóncavo, el cual produce un rayo
paralelo que incide en la superficie de una rejilla de reflexión. La radiación que entra al monocromador se
muestra como si estuviese formada solo por 2 longitudes de onda, en donde la 1 es más larga que la 2, y la 2
se refleja con un ángulo más agudo. Es decir, la dispersión angular de la radiación tiene lugar en la superficie
de la rejilla. Las 2 longitudes de onda se enfocan por otro espejo cóncavo sobre el plano focal del
monocromador, donde aparecen como 2 imágenes, una para la 1 y otra para la 2. Al hacer girar la rejilla,
cualquiera de esas imágenes puede enfocarse en la rendija de salida.

El “Ancho de banda efectiva del monocromador” depende del tamaño y la calidad del elemento dispersor, de la
anchura de la rendija y de la longitud focal del monocromador. Para la mayoría de la aplicaciones el ancho de
banda efectiva de un monocromador es de 1 a 20 nm.

● TUBOS FOTOMULTIPLICADORES: Son superficies fotoemisoras que emiten una cascada de e-. Son muy
sensibles a la radiación UV-Vis. Esta sensibilidad viene limitada por su emisión de corriente oscura.Puesto
que la emisión térmica es la principal fuente de electrones de corriente residual u oscura, el rendimiento de
un fotomultiplicador puede aumentar si se le enfría. Los tubos fotomultiplicadores se limitan a medir
radiación de baja potencia, debido a que la luz intensa causa un daño irreversible en la superficie
fotoeléctrica. Por esta razón, el dispositivo está siempre alojado en un compartimiento hermético a la luz, y
se toman todas las medidas precautorias para eliminar la posibilidad de que quede expuesto aunque sea
sólo un instante a la luz del día u otro tipo de luz intensa mientras está activado.

5) Espectrofotómetros de doble y simple haz para la espectroscopia de absorción atómica y para la de

absorción molecular.

ESPECTROFOTOMETROS DE ABSORCION MOLECULAR.

Instrumentos de haz sencillo

Consta de una lámpara de tungsteno o de deuterio, un filtro o un monocromador para seleccionar la longitud de
onda, cubetas ajustadas que pueden interponerse de manera alternada en el haz de radiación, un transductor,
un amplificador y un dispositivo de lectura. Por lo regular, un instrumento de haz sencillo necesita una fuente
de alimentación estabilizada para evitar errores como resultado de los cambios en la intensidad del haz durante
el tiempo que se requiere para efectuar la medición de 100% de T y determinar el %T del analito. Entre los
instrumentos de haz sencillo hay grandes diferencias en cuanto a su complejidad y características de
funcionamiento. El más sencillo y más barato consta de una bombilla de tungsteno conectada a una batería,
como fuente de radiación, un conjunto de filtros de vidrio para la selección de la longitud de onda, tubos de
6
ensayo donde se coloca la muestra, una celda fotovoltaica como transductor y un pequeño medidor analógico
como dispositivo de lectura. En el otro extremo están los instrumentos complejos, controlados mediante
computadora, que funcionan en un intervalo de longitudes de onda de 200 a 1000 nm o más. Estos
espectrofotómetros utilizan como fuentes intercambiables lámparas de tungsteno o de deuterio, celdas de sílice
rectangulares y están equipados con un monocromador de red de alta resolución y rendijas variables. Como
transductores se emplean tubos fotomultiplicadores y la señal de salida, a menudo, se digitaliza, se procesa y
se almacena en una computadora para que pueda imprimirse o registrarse de diversas formas

Instrumentos de doble haz

Muchos fotómetros y espectrofotómetros modernos se basan en un diseño de haz doble, en el cual se forman
dos haces mediante un espejo en forma de V llamado divisor de haz. Un haz pasa a través de la solución de
referencia y continúa hasta un fotodetector. En forma simultánea, el segundo rayo atraviesa la muestra hasta
un segundo detector ajustado. Las dos señales de salida se amplifican y su cociente, o bien, el logaritmo de su
cociente, se determina de manera electrónica y se representa mediante un dispositivo de lectura. En el caso de
los instrumentos manuales, la medida consta de dos etapas, a saber, primero el ajuste del cero mediante un
obturador entre el selector y el divisor de haz, en segundo lugar ocurre la apertura del obturador y la lectura
directa de la transmitancia o absorbancia en el sistema de medición. Los instrumentos de doble haz ofrecen la
ventaja de que compensan todo menos la mayoría de las fluctuaciones cortas en la salida radiante de la fuente,
así como la deriva en el transductor y el amplificador. También compensan las grandes variaciones de
intensidad de la fuente con la longitud de onda. Además, el diseño de doble haz permite el registro continuo de
espectros de transmitancia o absorbancia.

7
ESPECTROFOTOMETROS DE ABSORCION ATOMICA

Instrumentos de un solo haz

Este consta de varias fuentes de cátodo hueco (sólo se muestra uno), un cortador o un suministro de potencia
por pulsos, un atomizador y un espectrofotómetro de rejilla simple con un transductor fotomultiplicador. El ajuste
de transmitancia de 100% se hace mientras se aspira un blanco en la llama o se quema en un atomizador sin
llama. Por último, la transmitancia se obtiene con la muestra en lugar del blanco.

Instrumentos de doble haz

El haz que sale de la fuente de cátodo hueco se divide mediante un cortador reflectante, una mitad pasa por la
llama y la otra la rodea. Los dos haces se recombinan después mediante un espejo semiplateado y pasan a un
monocromador de red, un tubo fotomultiplicador hace las veces del transductor. La salida de este último es la
entrada a un amplificador de cierre que se sincroniza con el movimiento del cortador. La relación entre la
referencia y la señal de la muestra se amplifica y alimenta al dispositivo de lectura, que puede ser un medidor
digital o una computadora. Se debe notar que el haz de referencia en los instrumentos de doble haz atómicos
no pasa por la llama y, por consiguiente, no corrige la pérdida de potencia radiante debida a la absorción o la
dispersión por la llama.

INSTRUMENTACIÓN DE LA EAA

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En esencia el equipo de absorción atómica consta de tres partes: una fuente de radiación, un medio para la
obtención de átomos libres y un sistema para medir el grado de absorción de la radiación.

Fuentes de radiación

La fuente de radiación característica debe poseer tres propiedades fundamentales:

● Monocromaticidad: la línea de resonancia se debe poder seleccionar con toda precisión exactamente a la
longitud de onda del elemento a determinar.
● Intensidad: deber ser lo suficientemente intensa a la longitud de onda de interés.
● Estabilidad: suficiente como para poder realizar las medidas sin fluctuaciones considerables.

Actualmente hay varias fuentes de radiación utilizables: las de emisión continua, que abarcan el espectro desde
el ultravioleta lejano hasta el visible y las fuentes de emisión discontinua, que emiten únicamente a longitudes
de onda muy concretas.

Las más utilizadas son las fuentes de emisión discontinua, entre las que se pueden distinguir las lámparas de
cátodo hueco y las lámparas de descarga sin electrodos. Tanto unas como otras requieren un período de
calentamiento antes de comenzar las mediciones.

Atomizadores con llama

Su función es convertir los átomos combinados de la muestra en átomos en estado fundamental, para ello es
necesario suministrar a las muestras una cantidad de energía suficiente para disociar las moléculas, romper
sus enlaces y llevar los átomos al estado fundamental.

Los componentes necesarios para obtener los átomos en estado fundamental son:
● Nebulizador: cuya misión en convertir la muestra aspirada en una nube de tamaño de gota muy pequeño.
● Cámara de premezcla: donde penetra la muestra una vez se ha nebulizado. En ella se separan las pequeñas
gotitas que forman la niebla mezclándose la muestra nebulizada con el oxidante y el combustible
íntimamente.
● Mechero: Se sitúa sobre la cámara de premezcla, y por él sale la llama con temperatura suficiente para
poder comunicar a la muestra la energía suficiente para llevar los átomos a su estado fundamental.
● La llama es el medio de aporte de energía a la muestra. Entre las llamas se diferencia entre la de aire-
acetileno y la de óxido nitroso-acetileno.

Monocromadores

Tienen como función seleccionar la línea de absorción, separándola de las otras líneas de emisión emitidas por
el cátodo hueco. Los aparatos comerciales suelen venir equipados con monocromadores del tipo de prima o
red de difracción.

Detectores

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Miden la intensidad de la radiación antes y después de la absorción por la muestra. A partir de los valores
obtenidos se podrá calcular la radiación absorbida. En los aparatos comerciales se emplean tubos
fotomultiplicadores.

Modulación

La llama emite energía continuamente a longitudes de onda no deseadas, produciendo interferencia y una gran
inestabilidad en las lecturas. Los detectores que se utilizan son sensibles a determinadas frecuencias, ignorando
las señales continuas ocasionadas por la llama. Por ello, se modula el sistema de alimentación de las lámparas
a la misma frecuencia que el tubo fotomultiplicador.

Sistema óptico

Su función es conducir las radiaciones emitidas por la lámpara a través del sistema de obtención de átomos en
estado fundamental y el monocromador hasta llegar al detector. De acuerdo con el sistema óptico, los aparatos
de absorción atómica pueden ser de doble haz y de haz simple. En los aparatos de doble haz parte de la
radiación pasa a través de la muestra y otra parte va directamente al detector.

6) Ionizaciones del espectro de masas.

♦ ESPECTROS DE MASAS POR IMPACTO DE ELECTRONES (EI)

El ensayo mediante impacto electrónico es una técnica dura que produce fragmentación en el espectrómetro
de masas generando iones fragmento que proporcionan información estructural del compuesto.
Esta técnica produce la ionización de la molécula mediante la pérdida de un electrón de la misma, generando
un catión‐radical M+ que lleva la información de la masa molecular del compuesto.
Una muestra se somete a una elevada temperatura, se produce un vapor molecular, este se ioniza por un haz
de e-: M + e----------M* + 2e- luego, los iones son enviados hacia el acelerador de masas. Las pequeñas
masas y la alta energía de los e- resultantes produce una elevada energía translacional de las moléculas con
las que chocan. Las moléculas poseen mayores estados rotacionales y vibracionales. La relajación se
produce por la fragmentación, dando lugar a iones hijos.

Ventajas e inconvenientes de las fuentes por impacto de electrones

Estas fuentes son adecuadas para el uso y producción de corrientes de iones elevadas, con lo que se obtienen
buenas sensibilidades. La extensa fragmentación y la consecuente elevada cantidad de picos son también una
ventaja. Pero esta extensa fragmentación puede ser también un inconveniente cuando da lugar a la
desaparición del pico del ion molecular, porque no se puede establecer con facilidad la masa molecular del
analito. Otra limitación de este tipo de fuentes es la necesidad de volatilizar la muestra.

IONIZACIÓN QUÍMICA

Estas fuentes reciben el nombre de fuentes IE-IC. En la ionización química, los átomos gaseosos de la muestra
se ionizan al chocar con los iones que se producen al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo.
Por lo regular se utilizan iones positivos, aunque la ionización química de iones negativos se utiliza a veces en
aquellos analitos que contienen átomos muy electronegativos.

Se utiliza como agente ionizante un ion que va a transferir su carga a la molécula de la muestra por medio de
una reacción bimolecular. Para producir la ionización química se introduce un gas en la fuente de iones a una
presión de 1 mm de Hg. Los e- ionizan a las moléculas de gas originándose la reacción bimolecular:

10
CH4+ + CH4 ------- CH5+ + CH3

La especie CH5, metonio, será la que reaccione ahora con las moléculas de la muestra ionizándolas:

CH5+ + ABC ------- CH4 + ABSCH+

Al ion generado se lo denomina cuasimolecular, este ion se origina casi sin exceso de energía por los cual no
presentará tendencia a descomponerse, y en el espectro, la señal más intensa corresponde al pico
cuasimolecular.

¿Los espectros obtenidos por ionización química son similares a los obtenidos por ionización de e-?

Estos espectros difieren a los que pueden obtenerse por ionización electrónica, porque en la ionización
electrónica, la energía que toman las moléculas es muy alta y pueden sufrir fragmentaciones 2rias y 3rias, por
lo cual presentan varias líneas que se corresponden a las diversas fragmentaciones, en cambio, en las
ionizaciones químicas casi no hay fragmentaciones 2rias y 3rias y se ven pocas líneas, además, en la ionización
por e- la línea de m/z es la del ion molecular (la molécula cuando pierde un H) y en la ionización química la línea
de mayor m/z es la del ion cuasimolecular (la molécula gana un H).

FUENTES DE IONIZACIÓN POR CAMPO.

En las fuentes de ionización de campo, los iones se forman bajo la influencia de un campo eléctrico elevado
(108 V/cm). Tales campos se producen al aplicar altos voltajes (10 a 20 kV) a emisores que consisten en
numerosas puntas finas que tienen diámetros menores que 1 µm. Estos emisores adquieren la forma de un fino
hilo de tungsteno (10 µm de diámetro) en el cual se han hecho crecer agujas microscópicas.

FUENTES DE DESORCIÓN: (No volátiles)

Éstas se utilizar para tratar muestras no volátiles o termodinámicamente inestables. Estas técnicas prescinden
de la volatilización y de la posterior ionización y en su lugar se suministra energía a la muestra sólida o líquida
de diversas maneras, de modo que se provoca la formación directa de iones gaseosos. Como consecuencia se
obtienen espectros muy simplificados.

❖ Fuentes de desorción por campo (FD).

Esta fuente de ionización usa un emisor con múltiples puntas. En este caso el electrodo se coloca sobre una
sonda que puede retirarse y recubrirse con una disolución de la muestra, después de reinsertarla la ionización
se produce tras proporcionar un potencial elevado a este electrodo. En ocasiones es necesario calentarlo
haciéndole pasar una corriente pero puede ocurrir una degradación térmica antes de completarse la
degradación.

❖ Desorción/ionización por láser asistida por una matriz (MALDI).

Esta técnica permite calcular pesos moleculares exactos de extractos de biopolímeros polares en un intervalo
de masas moleculares de varios cientos de miles de Daltons. En esta técnica se mezcla una disolución
acuoso/alcohólica de la muestra con un exceso de una sustancia matriz que absorbe la radiación. La disolución
resultante se evapora en la superficie de una sonda metálica que se utiliza para la introducción de la muestra.
La mezcla sólida se expone a la acción de un haz de láser pulsante, provocando la sublimación del analito a
iones que son introducidos en un espectrómetro de tiempo de vuelo para el análisis de masas. Un EJEMPLO:
es el análisis de anticuerpos monoclonales de una masa de 150.000 Daltons. La sustancia matriz es el ácido
nicótico y el láser de 266nm de longitud de onda.
11
 IONIZACIÓN POR ELECTRONEBULIZACIÓN (ESI/MS). ELECTROSPRAY.

Esta técnica se utiliza para el análisis de biomoléculas de pesos superiores a 100.000 Daltons. Se realiza en
condiciones atmosféricas de presión y temperatura. La disolución de la muestra se bombardea a través de una
aguja capilar de acero inoxidable a un flujo de algunos microlitros por minuto. La niebla de finas gotitas cargadas
resultantes pasa a través de un capilar de desolvatación donde se produce la evaporación del disolvente y de
las moléculas del analito y donde estas adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven más pequeñas
por la evaporación del disolvente, su densidad aumenta produciéndose la desorción de los iones en la atmósfera
gaseosa.

Funcionamiento.

● Se introduce el analito (que será ionizado) disuelto en un solvente más volátil por un capilar de metal
muy pequeño y cargado.
● Debido a la repulsión de las cargas eléctricas, el líquido se sale del capilar y forma un aerosol, una nube
de pequeñas gotas (10 μm) altamente cargadas.
● Conforme el solvente se evapora, las moléculas de analito se aproximan, se repelen y finalmente,
cuando la repulsión de las cargas positivas vence la tensión superficial, estallan las gotas (Explosión de
Coulomb).
● El proceso se repite hasta que el analito está libre de solvente, de modo que no quedan más que iones.
● Los iones se mueven hacia el analizador de masa.

FUENTES DE BOMBARDEO CON ÁTOMOS RÁPIDOS (FAB).

Con este tipo de fuentes, las muestras en un estado condensado, se ionizan por bombardeo con átomos de
xenón o argón de elevada energía. Tanto los iones positivos como negativos del analito son expulsados de la
superficie de la muestra por un proceso de desorción. El haz de átomos rápido se obtiene pasar iones
acelerados de argón o xenón de una fuente de iones a través de una cámara que contiene átomos de argón o
xenón a una presión de unos 10-5 torr. Se experimenta una reacción de intercambio de electrones en resonancia
con los átomos obteniéndose un haz de átomos de alta energía.

7) ¿Cuál es el principio del analizador de masas de cuadrupolo?

● ESPECTROMETRO DE MASA CUADRUPOLARES: éstos son menos caros, más toscos y más compactos
que los del sector magnético. Poseen la ventaja que emplea tiempos de barrido pequeños (menor a 100ms)
lo cual es útil para realizar barridos de picos cromatográficos en tiempo real.
La parte principal de un elemento cuadrupolar son las 4 barras cilíndricas paralelas que conforman los electrodos.
Las barras opuestas están conectadas eléctricamente, un par está conectado al polo (+) de una fuente
variable y el otro par se conecta a una terminal (-). Para obtener un espectro de masas con este dispositivo
los iones se aceleran en el espacio entre las barras mediante una diferencia de potencial de 5 a 10 V. Todos
los iones, excepto los que tengan un determinado valor de m/z chocan contra las barras y se convierten en
moléculas neutras. Por lo tanto, solo los iones cuyos valores de m/z estén dentro de un intervalo limitado de
valores llegan al transductor. Los elementos cuadrupolares separan con facilidad los iones cuya masa difiere
en una unidad.

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El analizador de masas cuadrupolo consta de 4 rodillos. Estos analizadores son básicamente filtros de masas
que permiten solo el paso de iones de cierta relación m/z. El movimiento del ion en el campo eléctrico es la base
de separación. Los rodillos opuestos se conectan con voltajes de corriente continua y radiofrecuencias. El
espectro de masa se obtiene al barrer los voltajes aplicados a los rodillos. Estos analizadores tienen alto
rendimiento de procesado pero carecen de buena resolución.

8) ¿Qué entiende por potencial de unión química o liquida?, ¿Cómo se genera y como se corrige?, ¿Qué indica
un potencial positivo?, ¿un potencial negativo en semirreaccion?

● POTENCIALES DE UNION LIQUIDA: estos potenciales se desarrollan a través de la interfase entre 2

disoluciones electrolíticas con diferentes composiciones. “Es la diferencia de potencial resultante de la
separación de cargas”. Se generan en tabiques porosos que separan 2 soluciones (analito y electrodo de
referencia). Proviene de la desigual distribución de aniones y cationes en la superficie de contacto debido a
las diferencias de velocidades a las que difunden estas especies. Los potenciales de unión alcanzan hasta
30 mV. Se reduce al introducir una solución eléctricamente concentrada entre las soluciones (puente salino).
Se reduce si la movilidad de los iones es similar.

El signo del potencial de electrodo indica si la reducción es o no espontánea con respecto al electrodo estándar
del hidrógeno. Por lo tanto, el signo positivo del potencial evolucionará hacia la derecha en condiciones
normales. Por el contrario, el potencial negativo del electrodo no se produce de forma espontánea a menos que
se la fuerce mediante la aplicación de un potencial externo.

9) Describa la doble capa eléctrica

Es la estructura que comprende la región de interfase entre 2 fases. Contiene una distribución compleja de
carga eléctrica que proviene de la transferencia de carga entre las fases, adsorción de los iones positivos y
negativos, orientación de las moléculas con un momento dipolar y polarización de la carga eléctrica de las
moléculas. Uno de los principales efectos de la existencia de la doble capa en la interfaz electrodo-solucion es
la acumulación de carga o capacidad, superpuesta a una actividad faradaica.

10) Electrodos indicadores de membrana.

Están construidos con membranas que responden de forma selectiva a iones, es decir su potencial es
dependiente de forma selectiva de la concentración de uno solo de los iones presentes en la muestra

Se denominan electrodos selectivos de iones ESIs o ISEs. Son los electrodos más utilizados en la actualidad
para determinaciones potenciométricas.

13
Los electrodos de membrana son diferentes de los metálicos tanto por su diseño como por su principio de
funcionamiento. Un ejemplo del electrodo de membrana es el electrodo de vidrio para la medida del pH

❖ ELECTRODOS DE MEMBRANA CRISTALINA: se fabrican a partir de un compuesto iónico o mezcla de

estos. Para formar un electrodo, la membrana se sella al final de un tubo de plástico inerte como el teflón.
Este cristal se hace conductor por la presencia de iones monovalentes en el interior de su red cristalina.

❖ ELECTRODOS DE MEMBRANA NO CRISTALINA: son los de vidrio, liquido inmovilizado por un polímero
rígido y líquido. Se forman a partir de liquidos inmiscibles que se unen selectivamente con algunos iones.
Permiten la determinación potenciométrica directa de las actividades de varios cationes polivalentes y
también de algunos aniones y cationes monovalentes. Para la determinación de iones divalentes, el tubo
interno contiene una disolución acuosa patrón de MCl2, donde M+2 es el catión cuya selectividad se quiere
medir.

14
15
16
● Propiedades de las membranas selectivas de iones: Todas las membranas selectivas de iones poseen
porpiedades comunes que proporcionan la selectividad y la sensibilidad de los ESI hacia ciertos iones. Estas
propiedades son:

a) Mínima solubilidad: es una propiedad necesaria de un medio selectivo de iones que su solubilidad en las
disoluciones del analito sea lo más próxima posible a cero. Es por esta razón que muchos compuestos
inorgánicos iónicos de baja solubilidad, como por ejemplo los haluros de plata, pueden convertirse en
membranas.

b) Conductividad eléctrica: Por lo general, esta conducción se debe a la migración en el interior de la membrana
de iones con una sola carga.

c) Reactividad selectiva con el analito: la membrana o alguna de las especies contenida en la matriz de la
membrana deben ser capaces de unirse selectivametne con los iones del analito. Se pueden distinguir tres
tipos de uniones:*Por intercambio iónico *Por cristalización *Por complejización.

ERROR ÁCIDO Y ERROR ALCALINO

● ERROR ÁCIDO: se genera con un pH menor de 5. El error es positivo, es decir, los valores de pH medidos
son mayores que los verdaderos.
● ERROR ALCALINO: en disoluciones básicas los electrodos de vidrio responden tanto a la concentración de
iones hidrógeno como a la de iones metálicos alcalinos. El error es negativo, es decir, los valores de pH
medidos son menores que los verdaderos. Todos los cationes monovalentes inducen un error alcalino cuya
magnitud depende del catión en cuestión y de la composición de la membrana de vidrio.

❖ ELECTRODO BIOSENSOR-BIOCATALÍTICO: combina la selectividad de las reacciones catalizadas por

enzimas y los transductores electroquímicos para dar biosensores altamente selectivos para la
determinación de compuestos de interés biológico y bioquímico. En estos dispositivos la muestra se pone
en contacto con una enzima inmovilizadora donde el analito experimenta una reacción catalítica para dar

17
 especies tales como amoníaco, CO2, H2 o H2O2. La concentración de este producto, que es proporcional
a la concentración del analito, se determina mediante el transductor. Los transductores más comunes en
estos dispositivos son los electrodos de membrana, las sondas sensibles a gases y los dispositivos
voltamperométricos.

La principal limitación de los procedimientos enzimáticos es el elevado costo de las enzimas, sobre todo cuando
se utilizan para mediciones de rutina o continuas.

La inmovilización de las enzimas se puede efectuar de diversas maneras, como la captura física en un gel de
polímero, la adsorción física en un soporte inorgánico poroso como la alúmina, el enlace covalente de la enzima
a una superficie sólida, tal como cuentas de vidrio o a un polímero, o la copolimerización de la enzima con un
monómero adecuado.

11) Explique las características que debe presentar una sustancia patrón primario.

Una SUSTANCIA PATRON PRIMARIO es un compuesto de elevada pureza que sirve como material de
referencia en valoraciones gravimétricas y volumétricas. La exactitud del método depende sobre todo de las
propiedades de este compuesto. Los requisitos para ser un patrón primario son:

1) Alto grado de pureza. Deben contarse con métodos para confirmar la pureza.
2) Estabilidad atmosférica.
3) Ausencia de agua de hidratación, para que la composición del sólido no cambie con las variaciones de
humedad.
4) Coste moderado.
5) Solubilidad razonable en el medio de valoración.
6) Masa molar razonablemente grande de modo que se minimice el error relativo al pesar el patrón.

12) Como se detecta el punto final de una valoración ácido base.

● Indicadores químicos: son sustancias que cambian de color en respuesta a un cambio químico. Un indicador
A-B cambia de color dependiendo del pH del medio.
● PHmetro: es un instrumento que mide el pH de una disolución, y sirve para detectar el punto final de una
valoración ácido-base. Consta de un electrodo de plata-cloruro de plata, de potencial constante, en una
disolución 0,1 M de HCl dentro de una membrana de vidrio que mide la actividad de los iones H+ capaces
de atravesarla, y de una unidad lectora que hace una medida directa del potencial eléctrico del electrodo y
señala en una pantalla el valor del pH.

13) Como se detecta el punto final de una valoración redox.

Una valoración redox en un método o técnica analítica por medio de la cual se puede conocer la concentración
de una disolución o sustancia que puede actuar como oxidante o reductor. Para conocer el punto final es
necesario el uso de un indicador redox que sufra un cambio de color y/o potenciómetro. Con esta valoración se
mide el potencial eléctrico (en V) como una medida de como ocurre la transferencia entre el reductor y el
oxidante, para ello se emplean electrodos específicos conectados a un potenciómetro y cerca del punto final se
observará un cambio brusco de potencial.

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14) Demuestre como llega a valores límites de pH y cuyos valores son: -1,74 y 15,74.

15) Menciones las principales similitudes y diferencias entre las reacciones A-B y las REDOX.

Las reacciones A-B no presentan cambios en los estados de oxidación de la especies intervinientes, y en las
REDOX si hay cambios en los estados de oxidación.

En la reacciones A-B se intercambian iones tanto + como -, lo cual no cambia el estado de oxidación. En
cambio, en las REDOX hay un intercambio de e-, habiendo un cambio en el estado de oxidación.

16) Defina ácidos y bases de Bronsted y ácidos y bases de Lewis.

● Según BRONSTED: los ácidos son sustancias capaces de ceder protones (iones hidrógeno H+) y las
bases sustancias capaces de aceptarlos.
● Según LEWIS: una base sería una especie que puede donar un par de electrones, y un ácido la especie
que los puede aceptar.

17) Describa la lámpara de Deuterio, lámpara de cátodo hueco, lámpara de tungsteno, filtro.

19
 ♦ LÁMPARA DE CÁTODO HUECO:
Este tipo de lámpara consta de un ánodo de
tungsteno y un cátodo cilíndrico sellado en
un tubo de vidrio lleno con gas neón a una
presión de 1 a 5 torr. El cátodo está
construido del metal cuyo espectro se desea
obtener, o sirve para soportar una capa de
ese metal. La ionización del gas inerte
ocurre cuando una diferencia de potencial
del orden de 300 V se aplica en los
electrodos, lo cual genera una corriente de
unos 5 a 15 mA cuando los iones y electrones migran a los electrodos. Si el voltaje es suficientemente
grande, los cationes gaseosos adquieren suficiente energía cinética para disolver algunos de los átomos
metálicos de la superficie del cátodo y producir una nube atómica en un proceso llamado chisporroteo. Una
parte de los átomos metálicos desprendidos están en estados excitados y, por tanto, emiten su radiación
característica cuando vuelven al estado basal. Para finalizar, los átomos metálicos se difunden de nuevo a
la superficie del cátodo o a las paredes de vidrio del tubo y son redepositados.

♦ LAMPARA DE DEUTERIO E HIDROGENO: La excitación eléctrica del deuterio o hidrógeno a baja presión
produce un espectro continuo en la región ultravioleta. El mecanismo por el cual se produce dicho espectro
requiere la formación inicial de una especie molecular excitada y luego su disociación para dar dos especies
atómicas más un fotón ultravioleta. La mayor parte de las lámparas modernas de este tipo contienen deuterio
y son de bajo voltaje; en ellas se forma un arco entre un filamento caliente recubierto de óxido y un electrodo
metálico. El filamento caliente suministra electrones para mantener una corriente continua cuando se aplica
un voltaje de alrededor de 40 V entre el filamento y el electrodo. Tanto las lámparas de deuterio como las
de hidrógeno producen salidas de entre 160 y 800 nm. En la región UV (190-400 nm) existe un espectro
continuo. A longitudes de onda (400 nm), más largas, los espectros de estas lámparas dejan de ser
continuos, y están formados de líneas de emisión y bandas que se superponen sobre el espectro continuo
débil. En muchas aplicaciones, la emisión de líneas o bandas es un inconveniente. Las lámparas de deuterio
e hidrógeno deben tener ventanas de cuarzo, ya que la absorción del vidrio es muy fuerte a longitudes de
onda menores de alrededor de 350 nm.

♦ LÁMPARAS DE FILAMENTO DE TUNGSTENO. Es la fuente más común de radiación visible y del infrarrojo
cercano. La distribución de energía de esta fuente se aproxima a la del cuerpo negro, por lo que depende
de la temperatura. La lámpara de filamento de tungsteno es útil para la región de longitudes de onda
comprendida entre 350 y 2500 nm. Las lámparas de tungsteno/halógeno, contienen una pequeña cantidad
de yodo dentro de la envoltura de cuarzo en la que se aloja el filamento de tungsteno. El cuarzo permite que
el filamento trabaje a una temperatura de casi 3500 K, lo cual ocasiona intensidades superiores y amplía el
intervalo de la lámpara hasta dentro de la región UV. El tiempo de vida de una lámpara de
tungsteno/halógeno es más del doble que la de una lámpara normal. Este aumento de vida se debe a la
reacción del yodo con el tungsteno gaseoso que se forma por sublimación y que, por lo regular, limita la vida
del filamento. Las lámparas de tungsteno/halógeno tienen mayor rendimiento y amplían el intervalo de
longitudes de onda de salida hasta adentro de la región ultravioleta.

♦ FILTRO: Existen 2 tipos para seleccionar la longitud de onda: *Los de interferencia que operan en la región
UV-vis y en el IR. y *Los de absorción que operan en la región visible del espectro.

20
18) De acuerdo con la longitud de onda de trabajo en UV-Vis ¿de qué material estan fabricadas las cubetas?

Las cubetas deben tener ventanas que sean transparentes a la región del espectro que se desea detectar. De
esta manera el cuarzo o el sílice fundido con necesarios para la región UV (longitudes de onda menores a
350nm). También se emplean cubetas de plástico en la región visible.

El vidrio de silicato se emplea para la región que va desde 375 a 2000 nm porque su costo es bajo en
comparación con el cuarzo. El material más común para la región del IR es el cloruro de sodio cristalino ya que
es soluble en agua y en otros disolventes.

Las mejores cubetas tienen ventanas perpendiculares a la dirección del rayo a fin de minimizar las pérdidas por
reflexión. La longitud más común en las celdas es de 1cm. La calidad de los datos espectroscópicos depende
de la manera en la que son utilizadas y conservadas las cubetas. Las huellas digitales, la grasa y otros depósitos
en las paredes alteran la transmisión en la cubeta. Con lo cual re recomienda una buena limpieza antes y
después de utilizarlas.

19) Proponga una fragmentación para el 3-metil-1-butanol y sugiera el pico base fundamentando su elección.

20) Defina: Apantallamiento electrónico, Desplazamiento químico, Constante de acoplamiento y Frecuencia de

Larmor.

⮚ APANTALLAMIENTO ELECTRONICO: En cualquier molécula la nube electrónica que existe alrededor del
núcleo actúa como una corriente en movimiento que, como respuesta al campo magnético externo, genera
una pequeña corriente que se opone a dicho campo. El resultado de esto es que el campo que realmente
le llega al núcleo es menor que el campo magnético externo, por lo tanto, se dice que el núcleo está
apantallado o protegido. Este apantallamiento es importante desde el punto de vista experimental, ya que

21
 el campo magnético efectivo (Hef) que siente un protón dentro de una molécula es siempre menor que el
campo externo, y por lo tanto, para que el núcleo entre en resonancia el campo externo debe ser mayor,
Por ejemplo, en el metanol, el átomo de oxigeno retira densidad electrónica del entorno electrónico que rodea al
protón del grupo hidroxilo, quedando este átomo de hidrogeno menos protegido que los del grupo metilo.

⮚ DESPLAZAMIENTO QUIMICO: es una medida de cuan alejada esta la señal de la señal de referencia. Es
causado por pequeños campos que se generan a partir del movimiento de los e- alrededor del núcleo. Por
lo general, estos campos se oponen al campo aplicado. Como consecuencia, los núcleos están expuestos
a un campo efectivo un poco menor que el campo externo.

El compuesto de referencia más común es el tetrametilsilano (TMS, (CH3)4 Si). Como el silicio es menos
electronegativo que el carbono, los grupos metilo del TMS son relativamente rico en e-, es decir, sus portones
están fuertemente apantallados. Como consecuencia de este apantallamiento, estos protones absorben a una
intensidad de campo mayor que el resto de los protones enlazados al carbono o a otros elementos, de manera
que casi todas las señales de resonancia magnética nuclear aparecen a campos más bajos (hacia la izquierda
de la señal del TMS).

La escala más común del desplazamiento químico es la escala DELTA, en la que la absorción del TMS se
define como 0,00. La mayoría de las señales de protones (1H) varían de 0 a 12, y las del 13C de 0 a 250.

⮚ CONSTANTE DE ACOPLAMIENTO: es la distancia entre los picos de un multiplete (medida en herzios),

se da entre los protones magnéticamente acoplados. Se simboliza como Jab donde Ha y Hb son los
protones que se acoplan entre sí.

⮚ FRECUENCIA DE LARMOR: si sobre el núcleo actúa un campo magnético externo de intensidad B, el dipolo
magnético nuclear experimenta un par de fuerzas r, donde r=u x B, que tiende a alinear el dipolo con el
campo magnético. Como el dipolo magnético no puede alinearse con el campo magnético, el sistema no es
capaz de disipar esta energía y describe un movimiento de PRESECION, denominado PRESECION DE
LARMOR, en torno a la dirección del campo aplicado. La frecuencia de esta precesión se llama
FRECUENCIA DE LARMOR, con un valor de

22
21) Como introduce la muestra en el espectro de RMN.

El método dependerá del estado físico en el que se encuentra la muestra. Para GASES o LIQUIDOS se emplean
microjeringas con controladores de volumen. Para la inyección de una muestra GASEOSA se usa una jeringa
con un tampón de goma que expulsa la muestra. A los SOLIDOS y LIQUIDOS VISCOSOS se los introduce en
una precámara de vaporización, al tomar contacto con el gas portador son arrastrados a la cámara de inyección
o se disuelve en un solvente adecuado para luego inyectar la muestra con una microjeringa. Para muestra con
FRACCIONES NO VOLATILES se debe introducir un accesorio que retenga el residuo.

✔ INSERCION INDIRECTA (Vaporizacion Directa)

● Aplicable a gases, liquidos y solidos con elevada Pv.
● Las muestras gaseosas se ingresan entre 2 válvulas y luego se expanden-
● Las muestras liquidas se ingresan en un contenedor mediante una jeringa y luego se vaporizan.

✔ INSERSION POR SONDA DIRECTA

● Introduce liquidos y solidos de baja Pv.
● La T° es mayor que la de la vaporización directa.
● La muestra se coloca sobre un soporte y se introduce mediante un sistema de vacío.
● Permite insertar carbohidratos, esteroides, polímeros de baja Masa molar, especies
organometálicas.

22) Tiempo de relajación transversal y longitudinal

⮚ RELAJACIÓN ESPÍN-RED (Longitudinal): Es un proceso de disminución exponencial de primer orden

caracterizado por un tiempo de relajación T1, que es una medida del tiempo de vida promedio de los núcleos
en el estado de mayor energía. T1 se ve fuertemente afectado por la movilidad de la red. En los sólidos
cristalinos y en los líquidos viscosos, donde las movilidades son bajas, T1 es grande. Al aumentar la
movilidad, por ejemplo a temperaturas elevadas, también se incrementan las frecuencias de vibración y de
rotación y, por tanto, T1 disminuye. Por otra parte, con movilidades muy altas, las frecuencias de fluctuación
también aumentan y se distribuyen en un intervalo muy amplio. El resultado es un mínimo en la relación
entre T1 y la movilidad de la red.

⮚ RELAJACIÓN ESPÍN-ESPÍN (Transversal): El tiempo de relajación transversal o espín-espín T2. Los

valores de T2 suelen ser tan pequeños para sólidos cristalinos o líquidos viscosos (unos 10-4 s). Cuando
dos núcleos vecinos del mismo tipo tienen la misma velocidad de precesión pero se hallan en diferentes
estados cuánticos magnéticos, sus campos magnéticos interactuan entre sí produciendo un intercambio de
estados cuánticos. Es decir, uno de los núcleos en el estado de espín más bajo se excita, y el núcleo en el
estado excitado se relaja hasta el estado de menor energía. Así no disminuye la saturación, pero se acorta
el tiempo de vida promedio de un núcleo excitado. El resultado es un ensanchamiento de las líneas.

● Para experimentos de RMNH1 se emplea un disolvente deuterado como el CDCL3 (Triclorometano

deuterado) para así mantener la estabilidad del campo magnético que emplea la resonancia del deuterio.

23
23) Proponga la multiplicidad y los desplazamientos relativos para los espectros del 3-metil-ciclohexanol y del
2,3-diclorobutano.

24) ¿Qué utilidad tiene la relación S/N? ¿Qué entiende por ruido químico e instrumental?

Cada medición analítica está constituida por dos componentes. El primero, la SEÑAL, lleva información
acerca del analito de interés para el científico. El segundo, llamado RUIDO, es información extraña que no se
desea porque degrada la exactitud y precisión de un análisis y también coloca un límite inferior en la cantidad
de analito que se puede detectar.

El efecto del ruido en una señal es el registro de una gráfica de franjas de una corriente directa pequeña de 10
a 15A. En la mayor parte de las mediciones, la intensidad promedio del ruido N es constante e independiente
de la magnitud de la señal S. Así, el efecto del ruido en el error relativo de una medición se vuelve cada vez
mayor a medida que la cantidad que se mide disminuye en magnitud. Por esta razón, la relación señal/ruido
(S/N) es una cifra de mérito mucho más útil que el ruido solo para describir la calidad de un método analítico o
el desempeño de un instrumento.

❖ Ruido químico: surge de una serie de variables incontrolables que afectan las características químicas
del sistema que se analiza. Entre los ejemplos están las variaciones no detectadas en la temperatura o la
presión que afectan la posición de los equilibrios químicos, fluctuaciones en la humedad relativa que
causan cambios en el contenido de humedad de las muestras, vibraciones que ocasionan la estratificación
de sólidos pulverizados, cambios en la intensidad de la luz que afectan a los materiales fotosensibles y
vapores de laboratorio que interactúan con las muestras o reactivos.

❖ Ruido instrumental: se relaciona con cada componente de un instrumento; es decir, con la fuente, el
transductor de entrada, los elementos que procesan la señal y el transductor de salida. Además, el ruido
de cada uno de estos elementos puede ser de varios tipos y puede surgir de varias fuentes. Así, al final se
observa que el ruido es un compuesto complejo que, por lo común, no se puede caracterizar por completo.
Ciertas clases de ruido instrumental son reconocibles: 1) ruido térmico o de Johnson; 2) ruido de disparo;
3) ruido fluctuante y 4) ruido ambiental.

25) Ion molecular y pico base ¿son lo mismo? ¿Por qué?

El valor m/z del ion molecular indica la masa molecular del compuesto. Los picos con menores valores de
m/z, que se llaman picos de fragmento de ion, representan fragmentos de la molécula con carga positiva.

El pico base es el pico más alto porque denota la máxima abundancia. Al pico base se le asigna la
abundancia relativa de 100% y la abundancia relativa de cada uno de los demás picos aparece como
porcentaje del pico base. Se pueden mostrar los espectros de masas como gráficas de barras o en forma
tabular.

24
26) Proponga una fragmentación para el 3-metil-1pentanol.

27) Ecuación de VAN DEMTER

H = A + B/u + Cu

donde u es la velocidad lineal media de la fase móvil (u=L/tM; L=longitud de la columna; tM=tiempo muerto).

Termino H: Altura del plato.

Término A (difusión por turbulencia)

Este primer factor surge de la multitud de trayectorias de distintas longitudes que toma la fase móvil que fluye a
través de la columna, que está empacada con partículas de diferentes tamaños y formas acomodadas de
manera irregular.

El término A es independiente de la velocidad de la fase móvil, pero es función del tamaño de las partículas de
la fase estacionaria.

Término B (difusión longitudinal)

Corresponde a la difusión longitudinal del soluto en la fase móvil. Se produce debido a que la concentración de
soluto es menor en los bordes de la banda que en el centro, por lo que una banda de soluto que se mueva a lo
largo de la columna se ensanchará cuando las moléculas se difundan hacia las zonas de menos concentración,
hacia adelante y hacia atrás de la banda.

Término C (resistencia a la transferencia de masa)

El término C está relacionado con el hecho de que el equilibrio para la distribución del soluto entre las fases
móvil y estacionaria se establece tan lentamente que una columna cromatográfica siempre opera en condiciones
lejos del equilibrio.

En realidad, el término C puede descomponerse en dos, CS y CM, según se considere la transferencia de masa
en la fase estacionaria y en la fase móvil.

A partir de la ecuación de van Deemter pueden deducirse las condiciones experimentales que minimicen el
valor de H. Así, el valor de H disminuye con el tamaño de partícula (dp) y con un empaquetamiento uniforme
(λ), así como operando con capas finas de fase estacionaria líquida (df 2) de baja viscosidad y a temperatura
elevada (para incrementar DS).

28) Factores que dan origen al ensanchamiento de líneas.

25
EFECTO INCERTIDUMBRE:

● Las líneas espectrales atómicas siempre tienen un ancho finito, porque los tiempo de vida de uno o ambos
estados son finitos, lo que origina incertidumbre en los tiempos de transición.
● La energía de una partícula se puede conocer con incertidumbre = “0”, solo si se observa durante un período
infinito.
● En el caso de períodos finitos la medición de E nunca puede ser más precisa que h/Δt.
● Las amplitudes de líneas son por lo general en el orden de 10-5nm/10-4Å.

EFECTO DOPPLER

● La λ de la radiación emitida o absorbida por un átomo que se mueve disminuye si el movimiento es hacia el
detector y aumenta si el átomo se aleja del mismo.
● La magnitud del ensanchamiento Doppler aumenta con la velocidad que las especies que absorben o emiten
se aproximen o alejen del detector.
● El efecto Doppler origina líneas cuya anchura es 2 órdenes de magnitud mayor a las amplitudes naturales

ENSANCHAMIENTO DE PRESIÓN

● Es resultado de coaliciones de las especies que emiten o absorben con otros átomos o iones presentes en
el medio calorífico/atomizador.
● Dichas coaliciones provocan pequeños cambios en los niveles de E del estado fundamental y por lo tanto
generan una dispersión de λ emitidos o absorbidos.
● Las coaliciones en las llamas se dan entre el analito y diversos productos de combustión y combustible.
● El ensanchamiento en las lámparas de cátodo hueco y las de descarga es resultado de la coalición entre
los átomos emisores y otros de la misma clase.

EFECTOS PRODUCIDOS POR CAMPOS ELÉCTRICOS Y MAGNÉTICOS.

● La presencia de campos eléctricos o magnéticos origina ciertas perturbaciones en las líneas de absorción
o emisión, si bien, únicamente se ponen de manifiesto al operar en presencia de campos muy intensos o
cuando el medio está muy ionizado, como en un plasma.
● El efecto Zeeman, es descrito como la división de una línea espectral en varias componentes cuando el
elemento se coloca en presencia de un campo magnético.
● El efecto Stark, describe el desplazamiento y desdoblamiento de las líneas espectrales de los átomos y
moléculas debido a la presencia de un campo eléctrico estático.

EFECTO DE LA T EN LOS ESPECTROS ATÓMICOS

● En un atomizador la T tiene un gran efecto entre el nro. de partículas excitadas y no excitadas.

● La magnitud del efecto se puede deducir de la ecuación de Boltzman
● Los métodos analíticos basados en la medición de
● emisión necesitan un riguroso control de T de atomización. Los métodos de abs. y fluoresc. Son menos
dependientes de la T debido a que se basan en átomos que inicialmente no están excitados.

29) Estructura de la llama en el método de atomización.

ATOMIZACIÓN DE LLAMA

26
En un atomizador de llama, una solución de la muestra se nebuliza mediante un flujo de oxidante gaseoso
mezclado con un combustible también gaseoso y se lleva hacia una llama donde ocurre la atomización. En la
llama ocurre un conjunto complejo de procesos interconectados. El primero es la desolvatación, en la que el
disolvente se evapora para producir un aerosol molecular finamente dividido. Luego, éste se volatiliza para
formar moléculas de gas. La disociación de la mayor parte de dichas moléculas produce un gas atómico.
Algunos de los átomos del gas se ionizan para formar cationes y electrones. Otras moléculas y átomos se
producen en la llama como resultado de las interacciones del combustible con el oxidante y con las distintas
especies de la muestra.

Estructura de la llama

Las regiones importantes de una llama incluyen la zona de combustión primaria, la región interzona y la zona
de combustión secundaria. La apariencia y tamaño relativo de estas regiones varía en forma considerable con
la relación entre combustible y oxidante, así como con la
naturaleza de cada uno de ellos. La zona de combustión
primaria en una llama de hidrocarburo es reconocible por la
luminiscencia azul que surge de la emisión de banda de C2, CH
y otros radicales. El equilibrio térmico no se alcanza por lo
general en esta región y, por tanto, rara vez se usa en la
espectroscopía de llama.

El área interzona puede alcanzar varios centímetros de altura en

fuentes de acetileno- oxígeno o de acetileno-óxido nitroso ricas
en combustible. Debido a que en la región interzona
predominan átomos libres, es la parte de la llama que más se usa
para la espectroscopía. En la zona de reacción secundaria los
productos de núcleo interno se convierten en óxidos
moleculares estables que son dispersados después hacia los
alrededores.

30) Definir atomización electrotérmica.

Los atomizadores electrotérmicos se usan para medir la absorción y la fluorescencia atómicas, pero en general
no se aplican en la producción directa de espectros de emisión. No obstante, se usan para evaporar muestras
en la espectroscopía de emisión de plasma acoplado de manera inductiva. En los atomizadores electrotérmicos,
unos cuantos mililitros de la muestra se evaporan primero a una temperatura baja y luego se convierten en
cenizas a una temperatura un poco más alta en un tubo de grafito que se calienta eléctricamente. Después de
convertirlos en ceniza, la corriente se incrementa con rapidez a varios cientos de amperes, que hacen que la
temperatura se eleve de 2000 a 3000ºC.

31) Porque en el espectro de absorción molecular se producen bandas y en el espectro de absorción atómica
se producen líneas.

❖ Absorción Atómica: la radiación policromática UV-Vis ocurre a través de un medio que contiene partículas
de un solo átomo. Los espectros son sensillos porque hay pocos posibles estados de energía de las

27
 partículas que absorben. La excitación solo ocurre mediante un proceso electrónico en el cual los átomos
son llevados a un nivel de energía superior.

⮚ ESPECTROS DE LINEAS: las partículas atómicas individuales estan bien separadas y tienen
comportamientos diferentes. Estos espectros son producidos por transiciones electrónicas.

❖ Absorción Molecular: la radiación policromática UV-Vis ocurre a través de un medio que contiene
partículas poliatómicas. La cantidad de estados de energía es enorme. La energía asociada con las
bandas de una molécula está formada por 3 componentes:
E= E electrónica + E vibracional + E rotacional
*E electrónica: surge de los estados energéticos de los diferentes e- del enlace.
*E rotacional: energía que se produce por los diferentes movimientos de rotación de una molécula.
*E vibracional: vibraciones interatómicas.
La cantidad de niveles de energía posibles para una molécula es mayor que para un átomo.

⮚ ESPECTROS DE BANDAS: Las bandas son el resultado de numerosos niveles vibracionales.

32) IR: tratamiento de muestras.

✔ LÍQUIDOS: Cuando la cantidad de una muestra líquida es pequeña o cuando no se dispone del solvente
apropiado, es habitual obtener los espectros del líquido puro. En este caso, sólo una película muy delgada
tiene una longitud de trayectoria lo suficientemente corta para producir espectros satisfactorios. Por lo
común, una gota del líquido puro se presiona entre dos placas de sal gema para obtener una lámina con un
espesor de 0.015 mm o menos. Las dos placas, que se mantienen unidas por capilaridad, se colocan en la
trayectoria del haz. Esta técnica no proporciona datos de transmitancia particularmente reproducibles, pero
por lo general, los espectros obtenidos son satisfactorios para las investigaciones cualitativas.
✔ GASEOSA: su espectro se obtiene permitiendo que su espectro se expanda en una cubeta cilíndrica en la
que se ha hecho vacío, equipada con las ventanas adecuadas. Los caminos ópticos de estas cubetas oscilan
entre pocos cm y 10 o más metros.
✔ SÓLIDOS: Los espectros se obtienen a menudo en dispersiones del sólido en una matriz líquida o sólida.
En estas técnicas, por lo general, la muestra sólida se debe pulverizar hasta que el tamaño de sus partículas
sea menor que la longitud de onda de la radiación para evitar los efectos de dispersión de la radiación.
✔ PASTILLAS: formación de pastillas de KBr. Las sales de haluros tienen la propiedad de flujo en frío, por la
cual cuando el material finamente pulverizado se somete a una presión suficiente manifiesta propiedades
transparentes o translúcidas como el vidrio. Con esta técnica, se mezcla un miligramo o menos de la
muestra, finamente pulverizada, con alrededor de 100 mg de polvo de bromuro de potasio desecado. La
mezcla se presiona la mezcla en un troquel especial hasta obtener un disco transparente. A continuación,
el disco se coloca en la trayectoria del haz del instrumento para el examen espectroscópico.
✔ SUSPENSIONES: Los espectros IR de sólidos insolubles en un solvente transparente al infrarrojo o que no
se prestan para la formación de pastillas con el KBr se obtienen al dispersar el analito en un aceite mineral
o una suspensión de hidrocarburo fluorado. Las suspensiones se preparan moliendo de 2 a 5 mg de la
muestra finamente pulverizada en una o dos gotas de un aceite de hidrocarburo pesado. La suspensión
resultante se estudia luego al colocar una delgada capa.

33) Definir Elusión por columna y Elusión por Gradiente.

28
● ELUSION POR COLUMNA: se construye a base de un tubo de acero inoxidable de diámetro uniforme,
posee una longitud de 10 a 30 cm, son rectos y se pueden alargar por acoples. El diámetro de las columnas
es de hasta 10mm y los tamaños de las partículas de relleno son de 5 o 15 um. Pueden estar rellenas de
un relleno peculiar o de partículas porosas.
● ELUSION POR GRADIENTE: consiste en un sistema donde la fase móvil se va variando para facilitar la
separación de un conjunto de sustancias que poseen diferentes polaridades, obteniendo así una mayor
resolución al favorecer la separación de cada uno de los componentes de la muestra.

34) Tipos de muestras liquidas y gaseosas en Cromatografía.

♦ CROMATOGRAFIA DE GASES:
1) Cromatografía GAS-LIQUIDO:
● Fase estacionaria: líquido absorbido o unido a una superficie sólida.
● Fase móvil: gas.
● Equilibrio: distribución entre un gas y un líquido.

2) Cromatografía GAS-SOLIDO:
● Fase estacionaria: sólido.
● Fase móvil: gas.
● Equilibrio: adsorción.

♦ CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS O HPLC:

3) Cromatografía LIQUIDO-LIQUIDO:
● Fase estacionaria: líquido adsorbido o unido a una superficie sólida.
● Fase móvil: líquido.
● Equilibrio: distribución de la muestra entre las fases.

4) Cromatografía LIQUIDO-SOLIDO:
● Fase estacionaria: líquido.
● Fase móvil: sólido.
● Equilibrio: adsorción.

5) Cromatografía DE INTERCAMBIO DE IONES:

● Fase estacionaria: resina de intercambio de iones.
● Fase móvil: líquido.
● Equilibrio: intercambio iónico.

6) EXCLUSION POR TAMAÑO:

● Fase estacionaria: liquido en los intersticios de un polímero sólido.
● Fase móvil: líquido.
● Equilibrio: distribución-exclusión.
7) AFINIDAD:
● Fase estacionaria: líquido específico unido a una superficie sólida.
● Fase móvil: líquido.

29
 ● Equilibrio: distribución entre el líquido de la superficie y el líquido móvil

35) ¿Qué es un cromatógrafo de gases? ¿Cuáles son sus funciones? Dé sus partes.

Un CROMATÓGRAFO es un equipo que separa sustancias presentes en una muestra. La separación permite
identificar y cuantificar los componentes de un análisis.

● Gas Portador: La fase móvil gaseosa debe ser químicamente inerte. El He es la fase móvil más común,
aunque también se emplea argón, nitrógeno e hidrógeno. Estos gases se suministran en tanques
presurizados. Se requieren reguladores de presión, calibradores y medidores de flujo para controlar la
velocidad de flujo del gas. El sistema de gas portador contiene a menudo un tamiz molecular para eliminar
el agua u otras impurezas. “Transporta los componentes y genera una matriz adecuada para el detector”.
Con un medidor de pompas de jabón se puede medir la velocidad de flujo. En la trayectoria del gas se forma
una película de jabón cuando se exprime un bulbo de caucho que contiene una solución de jabón, se mide
el tiempo requerido para que esta película se mueva entre dos graduaciones en la bureta y se convierte a
velocidad de flujo.

● Sistema de inyección de muestra: El método más común de inyección de muestra implica el uso de una
microjeringa para inyectar una muestra líquida o gaseosa a través de un diafragma de silicona, en una
cámara de vaporización instantánea situada en la cabeza de columna. El líquido pasa a gas en forma
explosiva.

● Columna y Horno: puede ser una columna rellena o abierta, de acero inoxidable, vidrio, sílice fundido o
teflón de 2 a 50m. de longitud y con empaquetamientos de 30 cm de diámetro. La columna se introduce en
un horno de T° controlada. La T° óptima depende del punto de ebullición y del grado de separación
requerida.

● Sistema de detección: sirve para detectar la aparición y para identificarlo. El ideal debe ser sensible,
estable y reproducible, con un amplio rango de T° de trabajo, tiempo de respuesta corto, sencillo y fiable, de
respuesta equilibrada y no destructivo de la muestra.

30
36) ¿Por qué se derivatizan los analitos en CG?

En algunos casos es conveniente transformar los componentes de una muestra en derivados antes, o a veces
después de realizar la separación cromatográfica. La ventaja de este proceso es la rapidez y el menor consumo
de la muestra. Puede ser necesario para:

✔ Reducir las polaridades de las especies y de este modo poder utilizar columnas de reparto.
✔ Aumentar la respuesta del detector y así la sensibilidad para todos los componentes de la muestra.
✔ Aumentar la selectividad de la respuesta del detector para determinados componentes de la muestra.

37) Dibujar y escribir las partes de un HPLC.

Los equipos de cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC) trabajan a grandes presiones, por lo que son
complejos y caros.

● SISTEMA DE SUMINISTRO Y ALMACENAMIENTO DE FASE MÓVIL:

Garantiza la disponibilidad de fase móvil al sistema en condiciones apropiadas, de modo que se evite la
contaminación y la degradación de la misma.

La fase móvil en HPLC está formada por un disolvente o por una mezcla de ellos, cada uno de los cuales está
contenido en un recipiente, generalmente de vidrio, aunque en ocasiones se emplean otros materiales, como el
politetrafluoroetileno. Los recipientes deben disponer de tapones que impidan la contaminación por gases o
partículas en suspensión presentes en el aire del laboratorio.

Para evitar flujos inestables, la formación de burbujas o la interferencia de partículas extrañas los disolventes
deben estar filtrados y desgasificados. Esto puede realizarse mediante un tratamiento previo que elimine los
gases y la materia en suspensión (filtros milipore) o bien integrando sistemas de filtrado y desgasificación en el
equipo de HPLC.

La elución se puede realizar de dos maneras:

♦ Elución isocrática: cuando se emplea un único disolvente o una mezcla de disolventes de composición
constante.

31
♦ Elución en gradiente: cuando se emplea una mezcla de disolventes cuya concentración se hace variar a
largo del proceso, con el fin de modificar la polaridad de la fase móvil y disminuir el tiempo de separación
(es un efecto semejante al que se produce cuando modificamos la temperatura en cromatografía de gases).

● SISTEMA DE BOMBEO

Todos los sistemas HPLC incorporan un sistema de bombeo, con las siguientes características:

- Debe ser capaz de gestionar altas presiones, de hasta 400 atm.

- Mantener un flujo libre de pulsos
- Proporcionar caudales constantes y reproducibles
- Permitir cambios de disolvente de modo simple y rápido
- Ser químicamente inerte y resistente a la corrosión

Las más empleadas son las bombas recíprocas, que consisten en una pequeña cámara en la que el disolvente
es impulsado por el movimiento de vaivén de un pistón accionado por un motor. Las entrada y salida del
disolvente se regula mediante dos válvulas antiretorno que se abren y cierran alternativamente, permitendo el
paso de fluido en un solo sentido.

Entre las ventajas que presentan se encuentran: pequeño volumen interno, altas presiones de salida, caudales
constantes y compatibilidad con la elución en gradiente. Sin embargo, generan un flujo pulsado, que se ha de
amortiguar para evitar la generación de ruido.

● SISTEMAS DE INYECCIÓN DE MUESTRA

La inyección de un volumen de muestra preciso, y muy pequeño (5-500 μL), debe hacerse a la entrada de la
columna en un breve periodo de tiempo para perturbar lo menos posible el régimen de circulación de la fase
móvil y evitar el ensanchamiento de banda. La reproducibilidad de la inyección va a condicionar la precisión de
las medidas.

El sistema de inyección está formado por válvulas rotatorias de alta presión de varias vías manuales o
automatizadas. Constan de un doble circuito, uno de los cuales está conectado al exterior y el otro al propio
sistema, pudiendo intercambiarse de forma rápida y simple entre las dos posiciones:

● COLUMNAS ANALÍTICAS EN HPLC

Son columnas rectas, fabricadas habitualmente de acero, aunque también se emplean columnas construidas
de vidrio y materiales poliméricos. La mayoría de ellas tienen una longitud entre 5 y 30 cm, y su diámetro interno
varía entre 3 y 10 mm. Los rellenos más comunes son de 5 a 10 μm y se mantienen en el interior del tubo
mediante cierres porosos de metal o de vidrio. Actualmente existen columnas de mayor eficacia y dimensiones
más reducidas, que superan los 100.000 platos/metro con un consumo mínimo de disolvente (lo cual abarata
considerablemente el proceso).

⮚ PRECOLUMNAS:

Las columnas son delicadas y caras, por lo que se emplean precolumnas, de composición similar a la de la
columna (aunque con un diámetro de partícula de mayor tamaño para minimizar la caída de presión). Las
precolumnas eliminan los contaminantes, la materia en suspensión y aquellos componentes que se unen de
manera irreversible a la fase estacionaria, de manera que cuando está muy contaminada, se vacía y se rellena
de nuevo o se reemplaza por otra nueva.

32
⮚ COLUMNAS TERMOSTATIZADAS:

En algunas ocasiones se obtienen mejores resultados calentando la columna, ya que la viscosidad del
disolvente disminuye (se consigue un mayor caudal o se reduce la presión requerida) y se acortan los tiempos
de retención. Sin embargo, un aumento de la temperatura también puede degradar la fase estacionaria y reducir
el tiempo de vida de la columna, por lo que se deben emplear hornos que controlen la temperatura de una
manera muy precisa (de décimas de grado).

⮚ RELLENO DE LA COLUMNA

El relleno empleado en las columnas de HPLC debe ser químicamente inerte, mecánicamente resistente y
poseer un tamaño de partícula bien definido. Habitualmente está formado por partículas esféricas microporosas
de sílice muy puro, que son permeables al disolvente y presentan una elevada área superficial (no puede
emplearse con fases móviles cuyo pH sea mayor que 8). También se emplean rellenos de alúmina (u otros
óxidos metálicos), grafito poroso o materiales poliméricos (como estireno-divinilbenceno).

El relleno puede actuar como mero soporte de una fase estacionaria líquida o, convenientemente tratado, puede
intervenir directamente en el proceso de separación.

● DETECTORES EN HPLC

A diferencia de la cromatografía de gases, en la cromatografía de líquidos no hay detectores universales tan

fiables como lo son el detector FID o el TCD. Sus características (sensibilidad, estabilidad, reproducibilidad,
respuesta lineal, tiempo de respuesta corto, fácil manejo) son similares a éstos, aunque no es necesario que
sean sensibles en un intervalo de temperaturas tan elevado y deben tener un volumen interno mínimo para
reducir el ensanchamiento de banda extracolumna.

38) DESGASIFICACION EN HLPC.

Los recipientes que contienen la muestra a menudo estan equipados con un sistema para eliminar gases
disueltos como O2 y N2, que interfieren formando burbujas en la columna y en los sistemas de detección. Estas
burbujas provocan ensanchamiento de bandas y a menudo interfieren en el funcionamiento del detector. Un
desgasificador puede consistir en un sistema de bombeo por vacío, un sistema de destilación, dispositivos para
calentar y agitar disolventes o sistemas de purga.

39) Cromatografía líquida.

⮚ ELUSION ISOCRATICA: Separación que utiliza un solo disolvente de composición constante en la fase
móvil.
⮚ CROMATOGRAFIA EN FASE REVERSA: Permite separar moléculas en base a su polaridad. La fase
estacionaria es de partículas de sílica químicamente modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados
o aromáticos. Esto convierte a la fase estacionaria en una matriz apolar. Por lo tanto se emplean mezclas
de solventes polares como agua, acetona. Como fase móvil las moléculas se retienen en la columna en
virtud de las interacciones hidrofóbicas que se establecen con la sílica modificada. El componente más polar
se va a eluir primero. “La fase móvil es polar”.

La cromatografía en fase reversa (RPC) permite separar moléculas en base a su polaridad. La fase estacionaria
es de patículas de sílica químicamente modificadas con hidrocarburos saturados, insaturados o aromáticos de
diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria en una matríz apolar. Por lo tanto, para este tipo de

33
cromatografías se emplean mezclas de solventes polares, tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo,
acetona y alcoles alifáticos.

Las moléculas se retienen en la columna en virtud de las interacciones hidrofóbicas que establecen con la sílica
modificada. Aunque, las interacciones hidrofóbicas son en general bastante débiles, son también a menudo
muy numerosas y para eluír las moléculas es casi siempre necesario disminuir la polaridad del disolvente; para
ello se puede substituir el agua de la fase móvil con un solvente orgánico cuya concentración se va aumentando
gradualmente.

En la separación de aminoácidos y péptidos mediante fase reversa la resina más comúnmente empleada posee
una cadena lineal de 18 carbonos y se denomina como C18. |SiO2|-(CH2)17-CH3

La muestra se aplica a la columna en solución acuosa acidificada con ácido trifluoroacético, un ácido orgánico
volátil y que se requiere muy puro. Para mejorar la solubilidad de los péptidos formados por aminoácidos muy
apolares se añade al solvente un 10 a 20% de acetonitrilo.

El sistema C18-HPLC completo requiere una mezcladora de solventes, un inyector, y una bomba que inyectan
líquido a la columna. Generalmente las columnas de sílica requieren alta presión para que el flujo de líquido sea
adecuado, la mzcladora se requiere para variar la proporción de solvente en la fase móvil y el inyector permite
la aplicación de la muestra.

A la salida de la columna se coloca un detector (generalmente de absorción ultravioleta o de fluorescencia) y

si se desea recuperar las moleculas que eluyen de la columna, se requiere un colector.

La HPLC de fase inversa (RP-HPLC) consiste en una fase estacionaria apolar y una fase móvil de polaridad
moderada. Una de las fases estacionarias más comunes de este tipo de cromatografía es la silica tratada con
RMe2SiCl, donde la R es una cadena alquil tal como C18H37 o C8H17. El tiempo de retención es mayor para
las moléculas de naturaleza apolar, mientras que las moléculas de carácter polar eluyen más rápidamente.

⮚ INYECCION DE LA MUESTRA: el método más simple y antiguo es introducir la muestra por jeringa a través
de un elastómero.

40) Cromatograma.

Es un gráfico útil para realizar un análisis cuali y cuantitativo. La posición de los picos en el eje del tiempo
sirve para identificar los componentes de la muestra. Las áreas bajo los picos proporcionan una medida
cuantitativa de la cantidad de cada componente.

Los detectores más usados en CG son:

✔ D. de ionización de llama (FID).

✔ D. de conductividad térmica (TCD).
✔ D. de captura de e- (ECD)
✔ D. Termoiónico de llama.
✔ D. de espectroscopía de masas.
✔ D. de emisión atómica.

Inconvenientes: el agua y los alcoholes no suelen utilizarse ya que absorben intensamente en IR y atacan a
los haluros de metales alcalinos, que son los materiales utilizados en las ventanas de las cubetas.

34
41) ¿Porque se producen interferencias en el IR en presencia de un polímero?

No se debe a las vibraciones de los átomos, sino a los fenómenos de inflexión y reflexión de la luz.cuando se
hace incidir una radiación sobre la muestra, una parte de la misma va para la película y otra se refleja. Lo que
se refleja se puede incidir de nuevo sobre la muestra pero ya puede estar desgastada. Si es en fase se trata de
una interferencia constructiva, pero si es desfasada se trata de una interferencia destructiva.

42) Sonda sensible a gases (Electrodo de gases)

♦ Sondas sensibles a gases: son dispositivos notablemente selectivos y sensibles a gases disueltos o de iones
que pueden ser convertidos en gases disueltos ajustando el pH.

♦ Sondas sensible al CO2: El corazón de la sonda es una membrana delgada y porosa que separa la disolución
del analito de una disolución interna que contiene Bicarbonato de Na+ y NaCl. Un electrodo de vidrio sensible
al pH que tiene una membrana plana se coloca de modo que la disolución interna quede entre él y la
membrana permeable a gases. También se coloca en la disolución interna un electrodo de Ag/AgCl. El pH
medido en el extremo del electrodo de vidrio proporciona la medida de concentración del CO2.

43) Definir Calibración Metodológica y Calibración Instrumental.

● CALIBRACION METODOLOGICA: es la operación que permite relacionar la señal analítica con la

concentración/composición de la/s sustancia/s que se está analizando. Se realiza con estándares que
tengan el analito para establecer una relación entre las características fisicoquímicas del analito y las
señales del instrumento.

● CALIBRACION INSTRUMENTAL: mediante esta calibración se asegura el funcionamiento correcto del

instrumento. Se realiza, en general, fuera de línea de generación de resultados en una operación discontinua
manual con un estándar que no contiene el analito.

44) Absorbancia en UV-Vis.

La espectroscopia de absorción molecular UV-Vis utiliza la luz para medir las concentraciones de las sustancias
químicas, mide la fracción de la radiación electromagnética absorbida por radiación UV-Vis. En esta región del
espectro las moléculas se someten a transiciones electrónicas. Se basa en la medida de la transmitancia de
disoluciones que se encuentran en cubetas transparentes que tienen un camino óptico b en cm. La
concentración de un analito absorbente está relacionada linealmente con al absorbancia:

A = -Log T = Log P0/P = E.b.C

La potencia del haz disminuye de P0 a P, la T es la fracción de radiación transmitida y no absorbida.

T = P/P0 %T = P/P0x100

45) Estado de agregación de muestras para EM.

En el sistema de entrada se introduce una pequeña cantidad de muestra en donde sus componentes se
convierten en iones gaseosos. A menudo este sistema contiene un medio de volatilización de muestras sólidas
o liquidas.

46) Temperatura en cromatografía gaseosa.

35
La temperatura es una variable muy importante, ya que de ella va a depender el grado de separación de los
diferentes analitos. Para ello debe ajustarse con una precisión de décimas de grado. Dicha T° depende del
punto de ebullición del analito, como también de la máxima T° de funcionamiento de la columna (fase
estacionaria), ajustando a un valor igual o ligeramente mayor a él. Si hay varios componentes con diferentes
punto de ebullición se ajusta la “Rampa de T°” con lo cual esta va a aumentar, ya sea de forma continua o por
etapas. En muchos casos si se ajusta bien la rampa va a depender si se separan bien o mal los analitos. Es
recomendable utilizar T° bajas para la elusión, ya que, aunque a mayores T° la elusión sea más rápida se corre
el riesgo de descomponer el analito.

47) Tiempo de retención, Factor de capacidad, Factor de Selectividad.

❖ TIEMPO DE RETENCION: Como la constante de distribución no se puede medir con facilidad, se lleva a
cabo la medición del tiempo de retención que es una función de Kc. Para ver cómo se hace esto se tiene en
cuenta un cromatograma sencillo de dos picos. El pico pequeño de la izquierda es para la especie que no
es retenida por la columna El tiempo tM necesario para que la especie no retenida alcance el detector en
algunas ocasiones se denomina tiempo muerto y proporciona una medida de la velocidad promedio de
migración de la fase móvil, por lo que es un parámetro importante para identificar los picos del analito. El
pico más grande es el de una especie del analito. El tiempo requerido para que esta zona llegue al
detector después de la inyección de la muestra se denomina tiempo de retención.

❖ FACTOR DE CAPACIDAD (k´): es la cantidad más importante en cromatografía en columna. Relaciona el

equilibrio de distribución de la muestra dentro de la columna con las propiedades termodinámicas de la
columna y con la temperatura. Para un conjunto dado de parámetros, k´ es una medida del tiempo
transcurrido en la fase estacionaria en relación con el tiempo transcurrido en fase móvil. Se define como el
cociente de los moles de un soluto en la fase estacionaria entre los moles en la fase móvil. El factor de
capacidad es el tiempo adicional que una banda de soluto requiere para eluir, en comparación con un soluto
no retenido (para el cual k´=0), dividido entre el tiempo de elución de una banda no retenida.

❖ FACTOR DE SELECTIVIDAD: se define como α=Ka/Kb, donde K es la constante de distribución, a es la

sustancia más retenida y b es la sustancia menos retenida. Entonces α es siempre menor a 1.

48) PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS.

Resolución de la columna.

La resolución proporciona una medida cuantitativa de la capacidad de la columna para separar dos analitos. La
resolución de cada columna se define como

Factor de retención.

36
El comportamiento de retención refleja la distribución del soluto entre la fase móvil y estacionaria. El volumen
de fase móvil necesario para transportar la banda de soluto desde el punto de inyección a través de la columna,
hasta el detector (en el máximo del pico del soluto) se define como volumen de retención: VR = tR·Fc

El factor de retención mide la relación entre el tiempo que las moléculas del analito están en la fase estacionaria
y el que están en la fase móvil. Se usa para comparar las velocidades de migración de los solutos, y no depende
de la forma de la columna o de la tasa de flujo volumétrico.

Lo ideal es que el valor de los factores de retención de los solutos de una muestra oscilen entre 1 y 10. Valores
muchos menores que la unidad indican que el analito sale de la columna en un tiempo próximo al tiempo muerto.
Valores mucho mayores indican un tiempo de elución excesivamente largo.

Factor de selectividad.

Factor de simetría (T)

Este factor es también conocido como factor de asimetría o factor de cola de un pico, se calcula por: T= W0,05/2f
donde W0,05 es el ancho del pico al 5% de la altura y f es la distancia del máximo del pico hasta el borde inicial
del pico, midiendo la distancia en un punto ubicado al 5% de la altura desde de la línea base.

49) Explique qué cubeta utilizaría (¿Por qué?) para medir espectros de solución coloreada
Las soluciones coloreadas trabajan en el rango visible (de 400 a 780), se utiliza cubetas desechables, como
plásticos y se trabaja a temperatura controlada.

50) Explique transiciones cuánticas y el espectro de los espectros al interaccionan el analito con la radiación:
a) Espectroscopia de absorción molecular UV-Vis.
b) Espectroscopia IR
c) Espectroscopia de absorción atómica

37
51) Interacción de una partícula (UV-Vis, IR, absorción atómica y RMN)

● UV-Visible: La absorción de radiación ultravioleta o visible por parte de una especie atómica o molecular
M se puede considerar como un proceso de dos etapas. La primera de ellas consiste en una excitación
electrónica, como lo muestra la ecuación: M + hv-------M*

El producto de la absorción del fotón hv por la especie M es una especie excitada electrónicamente
simbolizada por M*. El tiempo de vida de la especie excitada es breve. Varios procesos de relajación ocasionan
que M* salga del estado de excitación. La relajación puede ocurrir por medio de un proceso fotoquímico, como
la descomposición de M* para dar lugar a nuevas especies. Por lo general, la absorción de radiación
ultravioleta o visible es resultado de la excitación de los electrones de enlace.

Esta se utiliza para identificar grupos funcionales en una molécula. Existen 3 tipos de transiciones electrónicas:
las de lectores pi, sigma y n, electrones d y f y electrones de transferencia.

● IR: para absorber radiación en el IR una molécula debe sufrir un cambio neto en el momento dipolar como
consecuencia de su movimiento de vibración o de rotación. Solo en estas circunstancias el campo eléctrico
alterno puede interaccionar con la molécula y provocar cambios en la amplitud de sus movimientos. Si la
frecuencia de radiación coincide con la frecuencia de vibración natural de la molécula hay una transferencia
neta de energía que origina un cambio en la amplitud de la vibración molecular, en donde la consecuencia
es la absorción de radiación. En el caso de especies homonucleares como el O2, el momento dipolar no
sufre un cambio neto durante la vibración o rotación y como consecuencia este tipo de compuestos no
absorbe en el IR.
● RMN: la absorción se produce por la interacción de un campo con el núcleo del átomo en cuestión. Los
núcleos poseen un spin, el cual tiene 2 posibles estados cuánticos magnéticos y se hallan en la misma
proporción, cuando se les aplica un campo magnético estos se alinean respecto al campo, invirtiendo su
estado en caso de estar desalineado con él y de esta forma se produce la absorción. Luego, una vez que
el campo aplicado se retira, el núcleo se relaja de una de las 2 formas posibles, relajación spin-spin o
relajación spin-red.

● ABSORCION ATOMICA: cuando llega radiación a un medio que tiene partículas monoatómicas, estas va
a absorber la energía, por lo tanto se va a ocasionar transiciones electrónicas donde los átomos van a
pasar de un estado fundamental a uno de mayor energía y por lo tanto se va a producir un espectro de
líneas.

52) Realice un esquema del equipo de RMN y describa sus partes.

38
El espectrómetro de RMN consta de cuatro partes:

1) Un imán estable, con un controlador que produce un campo magnético preciso.

2) Un transmisor de radiofrecuencias, capaz de emitir frecuencias precisas.
3) Un detector para medir la absorción de energía de radiofrecuencia de la muestra.
4) Un ordenador y un registrador para realizar las gráficas que constituyen el espectro de RMN.

Para obtener un espectro de RMN, se coloca una pequeña cantidad del compuesto orgánico disuelto en medio
mililitro de disolvente en un tubo de vidrio largo que se sitúa dentro del campo magnético del aparato. El tubo
con la muestra se hace girar alrededor de su eje vertical. En los aparatos modernos el campo magnético se
mantiene constante mientras un breve pulso de radiación rf excita a todos los núcleos simultáneamente. Como
el corto pulso de radiofrecuencia cubre un amplio rango de frecuencias los protones individualmente absorben
la radiación de frecuencia necesaria para entrar en resonancia (cambiar de estado de espín). A medida que
dichos núcleos vuelven a su posición inicial emiten una radiación de frecuencia igual a la diferencia de energía
entre estados de espín. La intensidad de esta frecuencia disminuye con el tiempo a medida que todos los
núcleos vuelven a su estado inicial. Un ordenador recoge la intensidad respecto al tiempo y convierte dichos
datos en intensidad respecto a frecuencia, esto es lo que se conoce con el nombre de transformada de Fourier
(FT-RMN). Un espectro FT-RMN puede registrarse en 2 segundos utilizando menos de 5 mg de muestra.

53) IMANES de RMN y sus ventajas.

Los imanes son el componente principal en el espectro de RMN, en donde la sensibilidad y resolución se dicho
espectro dependen de sus imanes. Se utilizan 3 tipos de imanes: *Imanes permanentes: son muy sensibles a
la T° y como consecuencia requieren de un buen aislamiento y una eficaz termostatización; *Elecetroimanes
convencionales: se utilizan en instrumentos de alta resolución; y *Solenoides superconductores: para que
se mantengan superconductores debe estar sumergido en helio líquido a 4 K.

54) Esquema del Espectro de masas.

Esta técnica tiene la aptitud de proporcionar información acerca de 1) la composición elemental de las
muestras de materia; 2) la estructura de las moléculas inorgánicas, orgánicas y biológicas; 3) la composición
cualitativa y cuantitativa de mezclas complejas; 4) la estructura y composición de superficies sólidas y 5) las
relaciones isotópicas de átomos en las muestras.
39
COMPONENTES:

1. SISTEMA DE ENTRADA: su objetivo es introducir una pequeña cantidad de muestra en el

espectrofotómetro de masas. A veces, contiene un medio para la volatilización de muestras sólidas o
líquidas.
2. FUENTE DE IONIZACION: convierte los componentes de la muestra en iones. Esto puede conseguirse
con bombardeo con e-, moléculas o fotones. También puede lograrse con energía térmica o eléctrica. Si
se emplean fuentes de fase gas la muestra primero es volatilizada y después ionizada, si se emplean
fuentes de desorción la energía se transmite directamente a la fase sólida o líquida, produciéndose la
ionización y la transferencia de los iones al estado gaseoso.
3. DETECTOR: convierte al haz de iones en una señal eléctrica que puede ser procesada y almacenada. El
detector más empleado es el de multiplicador de e-.
4. ALMACENAMIENTO Y PROCESADO DE DATOS: los espectros de masas se almacenan y procesan en
un ordenador.

55) ¿Qué entiende por atomización electrotérmica?

Los atomizadores electrotérmicos se usan para medir la absorción y la fluorescencia atómicas, pero en
general no se aplican en la producción directa de espectros de emisión. También, se usan para evaporar
muestras en la espectroscopía de emisión de plasma. En los atomizadores electrotérmicos, unos cuantos
mililitros de la muestra se evaporan primero a una temperatura baja y luego se convierten en cenizas a una
temperatura un poco más alta en un tubo de grafito que se calienta eléctricamente. Después de convertirlos
en ceniza, la corriente se incrementa con rapidez a varios cientos de amperes, que hacen que la temperatura
se eleve de 2000 a 3000ºC.

56) Filtro pasa banda.

40
El filtro pasa banda cumple la función de dejar pasar ciertas frecuencias localizadas dentro de un ancho de
banda determinado, y atenúa las que se encuentran fuera de este ancho.

57) Vaporización electrotérmica.

Es la técnica analítica para la determinación de metales, basada en la absorción de la radiación

electromagnética por parte de átomos libres en estado gaseoso. La atomización de la muestra se realiza
mediante el suministro de energía aportado por una cámara de grafito GF-AAS.

Se aplica esta técnica de Absorción Atómica para la determinación de metales en muestras de agua, rocas,
suelos, sedimentos, vidrios, aleaciones, plantas, sangre, suero, tejidos biológicos etc.

58) Fundamento de los métodos de conductimetría.

Los métodos conductimétricos están basados en la conducción eléctrica de los iones en una disolución.
La técnica conductimétrica es una técnica electroanalítica en la que se mide la conductancia de la disolución
problema y se relaciona la medida con la concentración de las especies en disolución.

La conducción de la corriente eléctrica a través de la disolución de un electrolito supone la migración de las

especies con carga positiva hacia el cátodo y las de carga negativa hacia el ánodo. Todos los iones contribuyen
al proceso de conducción, pero la fracción de corriente transportada por una especie dada está determinada
por:

● Su concentración relativa.
● Su movilidad intrínseca en ese medio.

La conductividad es una medida de la concentración iónica total que tiene una disolución.
La conducción de la corriente eléctrica a través de las disoluciones iónicas se realiza por los iones de la
disolución, los cuales se mueven en distintos sentidos (de acuerdo con el signo de su carga) bajo la acción del
campo eléctrico producido por la diferencia de potencial aplicada entre dos electrodos en ella introducidos.

Para estas disoluciones es válida la Ley de Ohm: V = I • R

• R: es la resistencia del conductor (en Ohm, W),
• V: es la diferencia de potencial aplicada (en voltios, V )
• I: es la intensidad de corriente que circula a través de la disolución (en amperios, A).

Una forma de conocer la capacidad conductora de una disolución es poner dos electrodos en la disolución,
aplicar una diferencia de potencial entre ambos y medir la resistencia, que depende de los siguientes factores:
a) el área de la superficie de los electrodos,
b) la forma de los electrodos,
c) la posición de los electrodos entre sí en la disolución,
d) el tipo de especies en la disolución entre ellos su carga,
e) la concentración de las especies
f) la temperatura.

59) Características de las moléculas UV-Vis.

Las moléculas que absorben en la zona UV-Vis son moléculas que contienen electrones pi, sigma y n y
pueden ser iones, moléculas orgánicas e incluso iones orgánicos. Todos los compuestos orgánicos absorben
radiación porque contienen e- de valencia que pueden ser excitados a niveles superiores. Esta absorción está
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restringida por un número limitado de grupos funcionales llamados “Cromoforos” que contienen e- de valencia
con energía de excitación relativamente baja. El espectro obtenido suele ser debido al solapamiento de
transiciones, produciéndose bandas de absorción que parecen ser contínuas.

60) Cubetas para IR.

Las cubetas para IR suelen ser más estrechas que las empleadas en la región UV-Vis. Con frecuencia son
desmontables, con espaciadores de teflón para variar el camino óptico. Las ventanas de cloruro de sodio son
las más utilizadas.

61) Un compuesto posee un spin de 5/2. ¿Cuántos estados magnéticos tiene? ¿Cuál es el n° cuántico de
cada uno?
Compuesto X de spin 5/2.

CONCEPTOS.

● QUIMICA ANALITICA: es el conjunto de técnicas, leyes y procesos que proporcionan información acerca
de la estructura y composición química de los compuestos. Es una ciencia metrológica que desarrolla,
optimiza y aplica herramientas de amplia naturaleza para obtener información química de calidad acerca de
compuestos o sistemas y poder resolver problemas técnicos, científicos, económicos o sociales.
● DATOS PRIMARIOS: información obtenida de las muestras o estándares (masa, absorbancia, potencial,
intensidad).
● DATOS SECUNDARIOS: se refieren a las características técnicas de los procesos y herramientas analíticas
( rpm de una centrifuga, T° de un baño termostático)
● MESURANDO: cantidad sometida a medida basada en una comparación que proporciona la información
requerida.
● LIMITE DE DETECCION (LOD): se refiere a la mínima concentración de analito que se puede detectar para
un nivel de confianza dado, mediante la aplicación de un método de análisis. Matemáticamente se define
como el cociente de 3 veces la desviación estándar de la medida del blanco entre la pendiente de la curva
de calibración.
● LIMITE DE CUANTIFICACION (LOQ): se refiere a la mínima concentración de analito con la que se puede
realizar una medida precisa. Matemáticamente, se define como el cociente de 10 veces la desviación
estándar de la medida del blanco entre la pendiente de la curva de calibración.
● LIMITE DE LINEALIDAD (LOL): se refiere a la concentración de analito a partir de la cual la curva de
calibración deja de presentar un comportamiento lineal con respecto a la señal analítica.
● INTERVALO DINAMICO: corresponde desde la concentración mínima a la cual pueden efectuarse medidas
cuantitativas (LOQ) hasta la concentración a la cual la curva de calibración se desvía de la linealidad (LOL).
Una desviación del 5% se considera como el límite superior.

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● SELECTIVIDAD: grado en el cual el método analítico está libre de interferencia de otras especies contenidas
en la matriz.
● SENSIBILIDAD: capacidad para distinguir entre pequeñas diferencias de concentración de un analito.
Parámetros de calidad: *Sensibilidad analítica; *Sensibilidad de calibración.
● PRESICION: es el grado de concordancia entre los datos que se obtuvieron de la misma forma. Parámetros
de calidad: *Desviación estándar (s); *Desviación estándar relativa (RSD); *Error estándar de la media (sm);
*Coeficiente de variación (CV); *Varianza (S2).
● EXACTITUD: es el grado de concordancia entre los datos obtenidos experimentalmente y el valor de
referencia (aceptado como verdadero). Parámetros de calidad: *Error absoluto (E); *Error relativo % (Er)
● ANCHO DE BANDA EFECTIVA: es la anchura de la banda de radiación en unidades de longitud de onda a
la mitad de la altura de un máximo.

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