Practica No.
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CITOLOGICO DE LÍQUIDO SEMINAL
Su análisis es a partir de una (ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA)
Introducción
La espermatobioscopía directa se le conoce también como espermograma,
espermiograma, espermatograma y seminograma, es un estudio que evalúa el
semen humano en características físicas macroscópicas como el volumen, ph y
características microscópicas como forma, movilidad y concentración de
espermatozoides y celularidad (citológico). Para el estudio de la presencia de la
celularidad se le llamara al tipo de examen Citológico de Líquido Seminal,
Citológico de Semen, citológico de esperma.
El semen es un líquido de color blanquecino, turbio, viscoso de olor
característico que se produce en los testículos y que contiene principalmente
espermatozoides suspendidos en un líquido llamado plasma seminal que
contiene: líquido prostático, proteínas (espermina y células).
El espermatozoide es la célula reproductora sexual masculina, es una célula
haploide por lo que solo contiene 23 cromosomas (1n), mide aproximadamente
50 um y está formado por tres regiones: cabeza, cuerpo o segmento intermedio
y cola o flagelo.
a) La cabeza contiene el núcleo haploide cubierto por el acrosoma y un par de
centriolos detrás del núcleo.
b) El segmento intermedio o cuerpo es una región que une la cabeza con la
cola y que contiene la cantidad mitocondrial que provee la energía
necesaria (ATP) para la movilidad del espermatozoide
c) La cola o flagelo le da movilidad al espermatozoide.
La cantidad de espermatozoides producida aumenta con la edad hasta un
nivel máximo que depende de cada individuo y luego disminuye a medida que
el varón envejece. No obstante se produce semen y espermatozoide durante
toda la vida adulta del varón. La espermatobioscopia se puede realizar en el
laboratorio utilizando técnicas manuales y automatizadas. Este estudio es el
más importante para evaluar la fertilidad masculina ya que el 40 % de las
causas de infertilidad obedecen a alteraciones del factor masculino, también
permite valorar el éxito de una vasectomía.
Objetivo
Aprender a realizar una espermatobioscopia, conocer como está formado el
líquido seminal, Hacer e interpretar el recuento de espermatozoides, evaluar su
morfología con niveles óptimos de calidad.
Equipo, material y reactivos
• Pipeta volumétrica de 10 ml
• Perilla o Aspirador manual
• Aplicadores de madera
• Papel indicador ph
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Microscopio
• Pipeta automáticas
• Puntillas para pipeta automáticas
• Tubos de ensaye
• Camara de neubauer
• Colorantes para tinción Wrigth
• Eosina 0.5 %
• Solución de Macoumber Sounders
Muestra:
Con un aseo adecuado, se requiere una muestra de semen, obtenida por
masturbación en un frasco proporcionado por el laboratorio después de un
periodo de abstinencia sexual no mayor de 7 días como promedio 4 días. Toda
la muestra de una sola eyaculación debe ser recolectada recientemente y
transportada al laboratorio en un lapso de tiempo no mayor de 40 min. La
muestra NO debe ser expuesta a temperaturas extremas ni recolectada en
preservativos ni por coito interrumpido. Registrar en el frasco la hora de
recolección de la muestra.
Procedimiento
EXAMEN MACROSCOPICO (Físico)
VOLUMEN: Con una pipeta volumétrica de volumen correcto medir la cantidad
de semen en la muestra
COLOR: A través de la observación directa cualificar el color de la muestra
ASPECTO: A través de la observación directa cualificar el aspecto de la
muestra
OLOR: A través del olfato cualificar el olor de la muestra
VISCOCIDAD: Introducir un aplicador de madera en la muestra y observar la
formación de un filamento o hilo por el semen de aproximadamente 1 a 2 cm
LICUEFACCIÓN: Introducir un aplicador de madera en la muestra y observar
que no se forme un filamento mayor de 1 cm
EXAMEN QUIMICO
PH: Introducir el papel indicador de ph y comparar con la escala indicadora
EXAMEN MICROSCOPICO
MOVILIDAD: En un portaobjetos previamente calentado a 37 ºC agregar 20 ul
de la muestra de semen previamente bien mezclada en forma manual, cubrir
con un cubreobjetos limpio y se observa al microscopio con objetivo 10 X y se
realiza la valoración con objetivo 40 X
MORFOLOGIA O CITOLOGICO: En un portaobjetos realizar un frotis delgado,
dejar secar y teñir con la técnica de Wright. Observar con objetivo de inmersión
100 X al menos 200 espermatozoides y reportar el porcentaje y la celuas
presentes, reportar cantidades.
VITALIDAD: En un portaobjetos previamente calentado a 37 ºC agregar 20 ul
de la muestra de semen previamente bien mezclada en forma manual, agregar
20 ul de colorante eosina al 0.5 %, cubrir con un cubreobjetos limpio y se
observa al microscopio con objetivo 10 X y se realiza la valoración con objetivo
40 X
RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES: En un tubo de ensaye realizar una
dilución 1:20 de la muestra colocando: 0.05 ml de muestra de semen + 1.0 ml
de solución de Macoumber Sounders, mezclar suavemente. Llenar la cámara
de Neubauer y realizar el recuento de espermatozoides en la cuadricula central
(Contar 5 cuadros). El número de espermatozoides contados multiplicar por
1, 000,000 y se obtendrá el número de esperamatozoides totales
No. espermatozoides X 20 X 10 X 400 = No. espermatozoides X 1,000 en
mm3
80
Para pasar a cm multiplicar por 1,000 por lo tanto queda:
3
No. espermatozoides X 1,
000,000 Dónde:
20 es por la dilución
10 por la altura de la cámara (entre cubre-hematímetro y cámara)
400/80 número de cuadros (leer 5 cuadriculas centrales que son 80
cuadritos) 1,000 para pasar de mm3 a cm3
RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES POR EYACULADO: Multiplicar el
recuento de espermatozoides por el volumen de eyaculado
DIFERENTES TIPOS DE ESPERMATOZOIDES
ANORMALES
Valores de referencia
PARAMETRO VALOR DE VALOR DE
REFERENCIA REFERENCIA OMS
Examen físico
Volumen de eyaculado: 2.5 – 5.0 ml 2.5 – 5.0 ml
Color: Blanquecino 1: Normal
Aspecto: Opalino lechoso 1: Normal
Olor: Característico 1: Normal
Viscosidad 0.5 1: Normal
pH 7.2 – 8.5 7.2 – 8.5
Tiempo de licuefacción: Menor de 30 min 1: Normal
Examen microscópico
Movilidad Mayor de 50 % movilidad Mayor de 50 % movilidad
tipo a (rápido y tipo a (rápido y
progresivo) progresivo)
Movilidad tipo b Movilidad tipo b
(moderados) (moderados)
Movilidad tipo c (lento en Movilidad tipo c (lento en
su lugar) su lugar)
Movilidad tipo d (inmóvil) Movilidad tipo d (inmóvil)
Morfología Mayor a 50 % normales Mayor a 50 % normales
Reportar predominio de Reportar predominio de
anormalidades anormalidades
Vitalidad 70 – 80 % vivos 70 – 80 % vivos
20 – 30 % muertos 20 – 30 % muertos
Recuento de 20 – 100 millones/ml >20 millones/ml
espermatozoides
Recuento de
espermatozoides por
eyaculado
Observaciones: Células
Procesar la muestra obtenida previamente por masturbación (de no más de
20 minutos de extraída), no se deberán usar condones, ni recipientes sucios,
mal lavados o con residuos de detergentes.
Resultados
FORMATO DE REPORTE DE ESPERMATOBIOSCOPÍA
PARAMETRO VALOR DE REFERENCIA
Examen físico
Volumen de eyaculado:
Color: 1: Normal
Aspecto: 1: Normal
Olor: 1: Normal
Viscosidad 1: Normal
pH
Tiempo de licuefacción: 1: Normal
Examen microscópico
Movilidad Tipo a Mayor de 50 %
Tipo b
Tipo c
Tipo d
Morfología Normales: Mayor a 50 %
Anormales:
Vitalidad Vivos: Vivos: 70 – 80 %
Muertos:
Recuento de Mayor de 20 millones/ml
espermatozoides
Recuento de
espermatozoides por
eyaculado
Observaciones:
Referencia
Blaquier Jorge A. & Blaquier Catalina M. Manual de laboratorio para el examen
del semen humano. Editorial Médica Panamericana. 4ª. Edición (2001).
Consulta el 20 de Enero del 2014
