LABORATORISTA CLÍNICO

PRÁCTICA EXPERIMENTAL
Q.F.B. TERESA ADRIANA HERNÁNDEZ B.

Manejo y uso del microscopio óptico compuesto

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

FECHA DE ENTREGA:

INVESTIGACIÓN PREVIA
Investiga y menciona las partes de un microscopio óptico, menciona su uso y agrega
una imagen de un microscopio con nombres de sus componentes
Manejo del microscopio óptico
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que
se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de
corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de
ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo
se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y
repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la
preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de
inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y
el de x40.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. e. Terminar de
girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. f. Mirando
directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo
de inmersión y la preparación es mínima, aún menor que con el de 40x por lo que el
riesgo de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver
a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se marcharía de aceite. Por tanto, si desea
enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en
posición de observación.
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
Mantenimiento y precauciones
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso
se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y
pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona
(7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes
en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándo lo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

MATERIAL Y EQUIPO:

1. microscopio compuesto
2. laminillas (portaobjetos)
3. cubreobjetos
4. laminillas fijas
5. papel para lentes
6. papel absorbente
7. papa pequeña
8. Cebolla
9. Tomate
10. agua destilada
11. Tela de limpieza
12. goteros
13. tinte de yodo (Lugol)
14. Azul de Metileno
15. navaja de 1 filo
16. pinzas
17. Palillos de dientes

Procedimiento

A. Forma correcta de levantar, sostener y transportar el microscopio

 1. Sostenga el brazo del microscopio con una mano y levante en forma recta para que el
eje de este quede en posición vertical.
2. Ponga la palma de la otra mano directamente bajo la base del microscopio. 3. Debe
mantener el microscopio al frente suyo en una posición que considere cómoda.
4. Evite que éste se balancee mientras camina.
5. Si su microscopio tiene la iluminación integrada, no toque la bombilla después de
haberlo usado, pues estará caliente y puede quemarse.
6. Es necesario que siempre siga las instrucciones que se le han dado de cómo transportar
el microscopio de un sitio a otro, para evitar que accidentalmente éste pueda recibir
algún golpe o que sus lentes se puedan caer y romper.

1. Observación de una laminilla en menor aumento.

a. Coloque el microscopio en la mesa con el brazo hacia usted.

b. Utilizando el microscopio, localice las siguientes partes: la base, el brazo, los lentes
oculares, el botón micrométrico, el botón macrométrico, la montura tipo revólver con
los lentes objetivos, la platina con el carro mecánico, el diafragma, el condensador y
el iluminador (bombilla).
c. Dele vueltas a la montura tipo revolver hasta que el objetivo de menor aumento (4X)
esté en posición de observar. Escuchará un sonido (“click”) que le indicará que el
objetivo está en posición correcta. El aumento total de cualquier espécimen visto bajo
el microscopio se obtiene multiplicando la magnificación del objetivo usado por la
magnificación del lente ocular. Por lo tanto, con el ocular 10X y con el objetivo 10X,
la imagen del objeto es aumentada cien veces. d. Seleccione una de las diversas
laminillas de montaje fijo que le provea su profesor y colóquela correctamente en el
carro mecánico. Asegúrese de que el cubreobjetos quede hacia arriba.
e. Al mirar por el ocular mantenga siempre ambos ojos abiertos. Ajuste la distancia entre
los oculares y sus ojos siguiendo las instrucciones de su profesor. Mire por el ocular
mientras mueve el ajuste macrométrico. El ajuste macrométrico solo se utilizará con
el objetivo de 4X en posición de observar, nunca con objetivos de 10X, 40X o 100X.
Continúe haciendo esto hasta que el objeto quede en foco.

f. Una vez el espécimen o la laminilla esté enfocado en 4X, será necesario ajustar el
diafragma para obtener la mejor iluminación. Esto se logra abriendo y cerrando el
diafragma sin mover el condensador. No toque el condensador. Es necesario que
practique esta técnica para que logre su dominio.

g. De ser necesario utilice el botón del ajuste micrométrico para enfocar el objeto
claramente. Observe detenidamente.

h. Mueva la laminilla hacia la derecha. ¿Hacia qué lado se mueve el objeto visto por el
microscopio? (Es importante que recuerde esto.) Practique moviendo la laminilla
hasta que pueda hacerlo suavemente. Localiza algún punto o estructura en el campo
de visión, mueva la laminilla de tal modo que pueda seguir la estructura o punto
seleccionado según vaya moviendo el campo de visión. Esto es muy importante
cuando se está observando organismos vivos.

i. Mueva el botón del ajuste micrométrico mientras mueve la laminilla. ¿Por qué el
espécimen no desaparece inmediatamente de la vista cuando se mueve el ajuste
micrométrico?

2. Observación de una laminilla en mayor aumento.

 Cuando crea que puede operar el microscopio con éxito usando el lente de menor
aumento, proceda a utilizar el de mayor aumento (40X). Cuando se usa este lente, el objeto
a ser observado debe estar en el centro del campo de visión, ya que este objetivo aumenta
sólo una pequeña porción de lo que se ve con el objetivo de menor aumento.

a. El objeto debe enfocarse primero con el objetivo de menor aumento (4X)

b. Luego mueva la montura revólver hasta poner en posición el objetivo de 10X. Enfoque
utilizando el botón micrométrico. Una vez enfocado pase al de mayor aumento 40X.
c. Ahora, para enfocar mejor, tiene que utilizar el botón micrométrico, moviéndolo como se
le ha indicado anteriormente. El ajuste macrométrico no debe usarse con el objetivo
de mayor aumento.
d. Regule la cantidad de luz con el diafragma.
e. Mueva la laminilla poco a poco. Trate de seguir una misma área de la preparación
alrededor del campo de visión.

3. Observación de preparaciones frescas o fijas.

Confección de preparados para observación en fresco: técnica de montaje en fresco

La forma más simple de examinar microorganismos vivos es suspenderlos en agua u otro líquido,
colocar una gota de esta suspensión en un portaobjetos y encima un cubreobjetos, utilizando para su
observación al microscopio los objetivos secos (10 x a 40x). Para realizar preparaciones
microscópicas, los portaobjetos y cubreobjetos deben limpiarse antes de usarse; un buen método es
guardarlos en alcohol, y antes de utilizarlos, secarlos con un paño limpio y libre de grasa.

cuando prepares cualquier muestra, tienes que tener en cuenta tres cosas:

● Menos es más: la muestra tiene que ser MUY transparente, ya que la

iluminación (que viene de debajo) tiene que atravesar. ¡Pon poca cantidad y
aplastala al máximo!
● Menos es más (otra vez): no por poner más aumentos vas a ver mejor. Para casi
todas las preparaciones microscópicas de este artículo, con el objetivo de 4x y
10x tienes de sobra. Empieza con el de 4x y cuando tengas enfocada la muestra,
pasa al de 10x.
● Tiene que estar totalmente plana: si hay arrugas o dobleces, verás cosas raras que
no sabrás identificar o no dejarás que pase la luz correctamente. Además que el
cubreobjetos no la podrá cubrir bien. Para ayudarte a aplanarla, tira una gota de
agua encima y ayúdate de las pinzas o palillos para que quede bien plana.
● No te emociones antes de tiempo: es posible que aparezcan círculos perfectos de
borde muy negro o que se muevan cosas cuando en teoría no se tiene que mover
nada. Los círculos son gotas de aire y lo que se mueve es que el agua se va
secando con el calor de la iluminación (o te has pasado de agua y se mueve por la
inclinación de la mesa). Para evitar que salgan muchas gotas de aire, apoya el
cubre en un lado formando 45º con el porta y déjalo caer poco a poco ayudándote
de las pinzas, una aguja o un palillo.

1. Epitelio de cebolla
 1. Separa con las pinzas o las uñas esa piel tan fina que tiene la cebolla entre capa
y capa.
2. Pon un trozo pequeño en el centro del portaobjetos.
3. Añade una gota de agua para estirarla bien, pon el cubreobjetos encima ¿y a
observar! Si quieres que la hagan los niños sin peligro, puedes sustituir el cubre
por otro portaobjetos, a modo de tapa.
4. Antes de cubrirla, puedes añadir una gota de colorante y esperar un minuto.
Luego retira el exceso de colorante con una gota de agua y ya puedes observar.

2. Hoja de vegetal

puede ser lechuga, pero también te vale hoja de puerro, acelga, espinaca, plantas del
acuario, de la terraza etc.

1. Corta un trozo pequeño de la hoja, mejor de color claro.

2. Añade gota de agua para aplanar, pon el cubreobjetos
3. También puedes teñirla con azul de metileno u otro colorante. Sigue el paso 4
explicado en la muestra de cebolla.

Igual que en la muestra anterior, además de la pared celular, según la especie que hayas
utilizado podrás ver:

Cloroplastos: son los orgánulos donde se guarda la clorofila para hacer la fotosíntesis, de
aspecto circular en el microscopio óptico.

Estomas: son un par de células puestas de manera que recuerdan a una boca (la raíz
griega y latina stoma, de hecho, significa «boca»). Cuando están turgentes dejan un
agujero entre ellas (ostíolo) y es por donde la hoja hace el intercambio de gases.
3. Pulpa de tomate

1. Con las pinzas, coge un pellizco MUY PEQUEÑO de la pulpa de tomate. Evita
las pepitas y la piel (bueno, la piel también puedes, pero haz una muetras
distinta).
2. Aplástalo al máximo (sin romper el cubre, que nos conocemos -puedes utilizar
otro porta en lugar de cubre-) y quita los restos que sobresalgan con papel de
cocina.
3. Los que ves de color rojo son los cromoplastos, que dan ese color rojo al
tomate.

Preparaciones microscópicas animales

4. Epitelio bucal

1. Con un palillo que esté limpio, frótate suavemente la cara interna de la

mejilla. «Frótate suavemente»
2. Reparte lo que tienes en la punta del palillo por el centro del
portaobjetos, como si estuvieras untando una tostada. No escupas
encima del portaobjetos.
3. Tiñe la muestra con azul de metileno: pon una gota, déjalo durante un
minuto para que el colorante actúe y luego lávalo con una gota de agua
para quitar el exceso de colorante. UNA O DOS GOTAS, tiradas
suavemente. si creas una cascada te llevarás toda la muestra por
delante.
4. Pon el cubreobjetos y observa
5. Gota de agua de charca verdosa
¿Sabes ese agua estancada que huele mal de lo verde que está y te mueres de asco cuando
la ves? Éste es el Santo Grial que buscas para ver un mix en movimiento de algas,
bacterias, protozoos y animales microscópicos.

1. Pon una gota en el portaobjetos. Si tienes portaobjetos con concavidad, mejor

que mejor.
2. Cúbrelo con el cubreobjetos… ¡y a observar! Si te has pasado de agua, recógela
con papel absorbente.
3. Recuerda que una gota es como una piscina bajo el microscopio y él solo se
puede enfocar en un plano (a una profundidad). Juega con el micrométrico para
enfocar a distintas profundidades y ve moviéndote por la muestra con los
mandos de la platina a ver qué encuentras.

3. OBSERVACIONES
1.¿Qué observa en cada una de las preparaciones? Imagen y descripción. cada una 4X, 10X y
40X (LABORATORISTA CLINICO)
2. De las observaciones que realizaste, anexa imagen o dibujo de cada tipo de célula que
identificaste. (Procariota y eucariota)
3. Anexa imagen o dibujo donde identifiques cuales son células animales y/o vegetales que
observaste.
4. Anexa imágenes o dibujos donde identifiques los componentes celulares como Membranas,
citoplasma, núcleo o algún otro organelo observado.

4. PREGUNTAS. LABORATORISTA CLINICO

1. ¿Qué ve con el objetivo de mayor aumento que no le fue posible ver con de menor
aumento?

2. ¿Qué magnificación se obtiene con el objetivo de 40X y el ocular de 10X?

3. Conteste sobre la línea, las preguntas del 1 al 5 seleccionando la mejor contestación entre
las alternativas “a”, “b” o “c”.

a. lente objetivo de menor aumento (4X)

 b. lente objetivo de mayor aumento (40X)
c. lente objetivo de inmersión de aceite (100X)

___ l.¿Qué lente objetivo debe estar sobre el centro de la platina, tanto cuando se empieza a
enfocar como cuando se guarda el microscopio?
___ ll. Al enfocar, ¿cuál de los lentes objetivos queda a mayor distancia de la laminilla?
___ lll. Si se utiliza un lente ocular 5X, ¿qué lente objetivo debe usarse para obtener un
aumento de 20X?
___ lV.¿Qué lente objetivo produce un aumento de 400X cuando se usa un ocular de 10X?
___ V. ¿Qué lente objetivo transmite la mayor cantidad de luz por razón de tener un diámetro
mayor?
___ VI. usados para la observació n de objetos muy pequeñ os, como las bacterias
individuales y aplicaciones de alta resolució n.

5.- CONCLUSIONES.

6. FUENTES BIBLIOGRÁFICAS CONSULTADAS