UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y RECURSOS
NATURALES
FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES
TINCIÓN
INTEGRANTES:
Baltazar Lima Margiory
Quinte Sanchez Renzo
Saenz Andagua Luis miguel
Flores Julca Kenny
Asignatura: Laboratorio de microbiología general
Callao-Perú
2023
INTRODUCCIÓN 3
Objetivos 4
Objetivo general 4
Marco Teórico 4
PROCEDIMIENTOS 7
1. Tinción simple 7
2. Tinción de Gram 9
INTRODUCCIÓN
Las tinciones bacterianas son de gran importancia en la microbiología, debido a que permiten
conocer las propiedades y características de las bacterias. Esta práctica tuvo como objetivo
conocer los diferentes tipos de tinciones, simples y compuestas.
Se Reconoce la importancia de realizar tinciones, para demostrar la muestra de
microorganismos, así como la morfología de cualquier célula presente determinada la prueba
Las tinciones serán siempre uno de los aspectos más importantes y el primer paso para la
detección de microorganismos, pues una vez identificados sus características como
morfología (cocos, bacilos, etc.) y agrupación (tétradas, cadenas, etc.), así como su
clasificación (Gram positivos, Gram negativos, etc.), será posible proceder a realizar las
pruebas ,Cuando se dispone de un microscopio de luz, se pueden teñir las bacterias para
facilitar su visualización. Si se tiñe una muestra del cultivo extendida y fijada en una lámina
portaobjeto con un colorante dado, las células adquirirán el color del colorante añadido y
podrá observarse la forma, tamaño y el arreglo de las mismas. Este tipo de coloración se
conoce con el nombre de coloración simple, también diferenciar
entre algunas estructuras bacterianas especiales, mediante de técnicas de coloración
apropiadas ya sean naturales o sintéticos, tinciones compuestos para luego realizar el
procedimiento.
Objetivos
Objetivo general
- Determinar la influencia de las tinciones sobre los microorganismos
Objetivos específicos
● Analizar los tipos de tinciones para la identificación de diferentes microorganismos
● Especificar la composición física de los microorganismos obtenidos por medio del
microscopio.
● Relacionar las diferentes tinciones con respecto a los microorganismos
Marco Teórico
En la mayoría de las células bacterianas el tamaño es tal que resultan difíciles de ver con el
microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el
medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún
tratamiento previo (Santambrosio et.al,2009). Sin embargo, el modo más simple de aumentar
el contraste es la utilización de colorantes.
Si se desea simplemente aumentar la nitidez de las células para observar a través del
microscopio, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de
tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas
las células, es el proceso denominado tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y
clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas. Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día,
sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico,
sencillo y eficaz que resulta. (López, et al., 2014).
Células bacterianas
Las bacterias son microorganismos unicelulares procariotas. En este reino,según criterios
evolutivos, diferenciamos el grupo de las eubacterias y el de las arqueobacterias. Este
último comprende bacterias sin peptidoglicano como las anaerobias que viven en
condiciones ácidas calientes, las que viven en condiciones salinas. Por lo tanto éstas viven en
las profundidades del mar, en las aguas saladas y en las fuentes ácidas. Las bacterias , en
cambio, viven en el suelo, el agua y los organismos vivos; entre ellas se encuentran las
bacterias de interés médico, las bacterias verdes fotosintetizadoras, las cianobacterias o algas
verdeazules y las bacterias púrpuras fotosintetizadoras. (Mota, 2011)
La forma de las bacterias al microscopio está determinada por la rigidez de su pared celular.
Básicamente, se diferencian según su forma en cocos (esférica u ovalada), bacilos (cilíndrica
o de bastones; rectos o curvos) y espirales (espiral).
Clasificación de las bacterias en base a sus flagelos
Los flagelos son los responsables de la motilidad de la mayoría de las
bacterias. Existe una correlación entre la forma de la bacteria y la presencia de flagelos. Casi
todos los espirilos, la mitad de los bacilos y casi ningún coco son móviles a través de
flagelos.
Importancia de la pared celular en la Tinción Gram
Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular
de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. La
pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de
peptidoglucano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram
positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido de
peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas
explica y determina las características tintoriales (figura 2) (Lopez, et al., 2014)
La tinción de Gram se basa en colocar como colorante primario cristal
violeta(C24H28N3Cl), mismo que tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared
bacteriana.Posteriormente, se coloca lugol (I2 + I- →I3-), el cual sirve como mordiente e
impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal violeta-yodo que
satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca una
mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la
misma, también destruye la membrana externa de las bacterias Gramnegativas debido a que
ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol- acetona
(Lopez, et al., 2014)Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad
de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas
no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano .
Por Último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo. Hay bacterias de un mismo género que pueden observarse en la misma muestra
como Gram positivas y como Gram negativas, a este evento se le llama tinción Gram variable
y es secundaria a alteración en nutrientes, temperatura,pH o concentración de electrolitos
(universidad tecnológica nacional, 2009).No todas las bacterias se pueden teñir por esta
técnica, ya que carecen de pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una
composición química diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad de ácidos
micólicos).Las muestras útiles para su uso son líquidos estériles, biopsias para
cultivo,abscesos, hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo.
Lasbacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro a morado, mientras quelas
Gram negativas se observan de color rosa a rojo (Figura 3) (Lopez, et al., 2014)
PROCEDIMIENTOS
1. Tinción simple
● Se esteriliza el asa de siembra para que no se contamine nuestra muestra.
● Después se fijó la muestra con ayuda del mechero de bunsen
● se coloca azul de metileno en la placa que contiene la muestra y se deja
reposar por un minuto.
● Luego se enjuaga agua destilada
● Finalmente, se observa en el microscopio
2. Tinción de Gram
● Primero se fija la muestra con ayuda del mechero de bunsen.
● Se coloca el cristal violeta y se deja reposar 1 minuto.
● Luego se coloca el lugol sobre la muestra para que se fije el tinte durante un
tiempo de 1 minuto.
● Se coloca el decolorante teniendo en cuenta que solo nos podemos demorar
de 5 a 10 segundos por si no podríamos perder todo el primer tinte de cristal
violeta.
● Finalmente, ponemos la safranina, el cual es el tinte que tiñe las bacterias
gram negativas, durante un tiempo de 50 segundos.
