INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELAS SUPERIOR DE INGENIERÍA QUÍMICA E
INDUSTRIAS EXTRACTIVAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA QUÍMICA
INDUSTRIAL
LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA
OPTATIVA II
ESPECTROSCOPIA MOLECULAR Y ATÓMICA
PRÁCTICA 2
ANÁLISIS CUANTITATIVO DE UN SOLO COMPONENTE DE CAFEÍNA EN
REFRESCOS DE COLA
Profesor Luis Enrique Camacho Camacho
GRUPO 3IM6B
Sección A
Neri Guerrero Tania
Fecha: 26 – Marzo – 2024
Periodo 2024-2
Objetivos
Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problema por
medio de una curva de calibración, aplicando la Ley de Lambert-Beer.
Introducción teórica
De acuerdo con la Ley de Lamber - Beer, la absorbancia es directamente proporcional
a la concentración de las especies absorbentes (C) y a la longitud de la trayectoria (b) del
medio absorbente, como se expresa en la ecuación:
En la ecuación ε es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Debido a que
la absorbancia es una cantidad adimensional, la absortividad debe tener unidades que
cancelen las unidades de b y c. Si, por ejemplo, C tiene unidades de g/L y b tiene unidades
de cm, la absortividad tendrá unidades de L/g*cm.
Limitaciones de la ley de Beer
• La ley de Beer describe de forma correcta el comportamiento de absorción de un
medio que contiene concentraciones de analito relativamente bajas; en este sentido,
es una ley limite
• A concentraciones altas (generalmente > 0,01 M), la distancia media entre las
moléculas responsables de la absorción disminuye hasta el punto en que cada
molécula altera la distribución de carga de las moleculares vecinas
• Esta interacción, a su vez, puede alterar la capacidad de las moléculas para
absorber la radiación de una determinada λ
• Como, la magnitud de la interacción depende de la concentración, la aparición de
este fenómeno da lugar a desviaciones de la linealidad entre la absorbancia y la
concentración
La cafeína (1,3,7-trimetilxantina), es un compuesto químico que pertenece al grupo de las
xantinas, y que se puede encontrar en más de 60 tipos diferentes de plantas. El compuesto
está constituido, en la forma de un polvo blanco, soluble en agua caliente, no tiene olor y
su sabor es muy amargo. Dentro del grupo de las xantinas, la cafeína, que es la que actúa
sobre el sistema nervioso central, mediante la activación y, lo que aumenta la energía y el
metabolismo del cuerpo, por lo que esta considerada como un psicoestimulantes.
Material y reactivos
• Celdas para espectrofotómetro UV-Visible de 1cm
• Matraces aforados de 10ml
• Piseta con agua destilada
• Piseta con etanol
• Pipeta graduada de 1ml y 5ml
• Pipeta Pasteur
• Tapones ciegos
• Vasos de precipitados de 20 ml
• Etanol al 10%
• Cafeína a 100 ppm
• Refrescos de cola
Desarrollo experimental
• Preparación de los estándares
• Preparación de las muestras
• Obtención de los espectrogramas para los estándares y muestras.
Encendido del equipo y
apertura del programa.
Ajustar de las condiciones de operación.
Colocar el blanco, para esta experimentación en ambas celdas se colocará etanol al 10%
Ingresar cada uno de los estándares preparados y obtener su espectrograma colocando en
la parte delantera el estándar y en la parte trasera el blanco (etanol al 10%)
Continuar con las muestras preparadas y obtener su espectrograma colocando en la parte
delantera la muestra y en la parte trasera el blanco (etanol al 10%)
Etiquetar los picos para obtener la absorbancia en la longitud de onda máxima
(teóricamente en los 272nm
Ya que se observó una gran desviación para la muestra de vive 100 se repitió el proceso,
pero teniendo una muestra con 0.1ml de vive 100 aforado a 10 ml con etanol al 10%
Ajuste de las condiciones de operación,
preparación de la nueva muestra,
corrida del blanco y obtención de su
espectrograma para el vive 100
Tabla de datos experimentales
Estándar Absorbancia
5ppm 0.27435
10ppm 0.55257
15ppm 0.84842
20ppm 1.0931
Muestra Volumen (ml) Absorbancia
Coca-Cola light 0.4 ml 0.56512 𝜆𝑚á𝑥 = 273.68 𝑛𝑚
Red cola 0.4 ml 0.53576 𝜆𝑚á𝑥 = 273.68 𝑛𝑚
Vive 100 0.1 ml 0.77083 𝜆𝑚á𝑥 = 264.76 𝑛𝑚
Cálculos
• Preparación de los estándares
Necesitamos 4 estándares de 10ml con una concentración de 5ppm, 10ppm, 15ppm
y 20ppm de cafeína
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
𝐶2 𝑉2 (5𝑝𝑝𝑚)(10𝑚𝑙)
𝑉1 = = = 0.5𝑚𝑙
𝐶1 100𝑝𝑝𝑚
𝐶2 𝑉2 (10𝑝𝑝𝑚)(10𝑚𝑙)
𝑉1 = = = 1𝑚𝑙
𝐶1 100𝑝𝑝𝑚
𝐶2 𝑉2 (15𝑝𝑝𝑚)(10𝑚𝑙)
𝑉1 = = = 1.5𝑚𝑙
𝐶1 100𝑝𝑝𝑚
𝐶2 𝑉2 (20𝑝𝑝𝑚)(10𝑚𝑙)
𝑉1 = = = 2𝑚𝑙
𝐶1 100𝑝𝑝𝑚
Concentración en molaridad
𝑚𝑔 1𝑔 1𝑚𝑜𝑙
5𝑝𝑝𝑚 = 5 ( )( ) = 2.5748 × 10−5 𝑀
𝐿 1000 𝑚𝑔 194.19 𝑔
𝑚𝑔 1𝑔 1𝑚𝑜𝑙
10𝑝𝑝𝑚 = 10 ( )( ) = 5.1496 × 10−5 𝑀
𝐿 1000 𝑚𝑔 194.19 𝑔
𝑚𝑔 1𝑔 1𝑚𝑜𝑙
15𝑝𝑝𝑚 = 15 ( )( ) = 7.7244 × 10−5 𝑀
𝐿 1000 𝑚𝑔 194.19 𝑔
𝑚𝑔 1𝑔 1𝑚𝑜𝑙
20𝑝𝑝𝑚 = 20 ( )( ) = 10.2992 × 10−5 𝑀
𝐿 1000 𝑚𝑔 194.19 𝑔
• Coeficiente de absorción
𝑨
𝑨 = 𝜺𝒃𝑪 ∴ 𝜺 =
𝒃𝑪
Donde
𝑨 = 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂
𝜺 = 𝑪𝒐𝒆𝒇𝒊𝒄𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆 𝒅𝒆 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒄𝒊ó𝒏 𝒎𝒐𝒍𝒂𝒓
𝒃 = 𝑨𝒏𝒄𝒉𝒐 𝒅𝒆 𝒄𝒆𝒍𝒅𝒂 (𝒑𝒂𝒔𝒐 ó𝒑𝒕𝒊𝒄𝒐) = 𝟏𝒄𝒎
𝑪 = 𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏
0.27435
𝜀5𝑝𝑝𝑚 = −5
= 10655.1965
(1𝑐𝑚)(2.5748 × 10 𝑀)
0.55257
𝜀10𝑝𝑝𝑚 = −5
= 10730.3480
(1𝑐𝑚)(5.1496 × 10 𝑀)
0.84842
𝜀15𝑝𝑝𝑚 = −5
= 10983.6363
(1𝑐𝑚)(7.7244 × 10 𝑀)
1.0931
𝜀20𝑝𝑝𝑚 = −5
= 10613.4457
(1𝑐𝑚)(10.2992 × 10 𝑀)
10655.1965 + 10730.3480 + 10983.6363 + 10613.4457
𝜺𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 =
4
𝜺𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 = 𝟏𝟎𝟕𝟒𝟓. 𝟔𝟓𝟔𝟔 𝑴−𝟏 𝒄𝒎−𝟏
0.27435
𝜀5𝑝𝑝𝑚 = = 0.05487
(1𝑐𝑚)(5𝑝𝑝𝑚)
0.55257
𝜀10𝑝𝑝𝑚 = = 0.05526
(1𝑐𝑚)(10𝑝𝑝𝑚)
0.84842
𝜀15𝑝𝑝𝑚 = = 0.05656
(1𝑐𝑚)(15𝑝𝑝𝑚)
1.0931
𝜀20𝑝𝑝𝑚 = = 0.05466
(1𝑐𝑚)(20𝑝𝑝𝑚)
0.05487 + 0.05526 + 0.05656 + 0.05466
𝜺𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 =
4
𝜺𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 = 𝟎. 𝟎𝟓𝟓𝟑𝟒 𝒑𝒑𝒎−𝟏 𝒄𝒎−𝟏
1.2
y = 0.0553x
1 R² = 0.9998
0.8
Absorbancia
0.6
0.4
0.2
0
0 5 10 15 20 25
Concentración (ppm)
𝑨 = 𝟎. 𝟎𝟓𝟓𝟑 𝑪
Comparando con la Ley de Lamber-Beer 𝐴 = 𝜀𝑏𝐶
0.0553
𝜀𝑏 = 0.0553 ∴ 𝜀 = = 0.0553
1 𝑐𝑚
• Concentración de cafeína en cada refresco
𝑨𝑹𝒆𝒇𝒓𝒆𝒔𝒄𝒐 𝑽𝒂𝒇𝒐𝒓𝒐
𝑪𝑹𝒆𝒇𝒓𝒆𝒔𝒄𝒐 = ×
𝒃𝜺𝒑𝒓𝒐𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 𝑽𝒂𝒍𝒊𝒄𝒖𝒐𝒕𝒂
0.56512 10𝑚𝑙
𝐶𝐶𝑜𝑐𝑎 = × = 255.2945 𝑝𝑝𝑚
(1𝑐𝑚)(0.05534𝑝𝑝𝑚−1 𝑐𝑚−1 ) 0.4𝑚𝑙
0.53576 10𝑚𝑙
𝐶𝑅𝑒𝑑 𝐶𝑜𝑙𝑎 = × = 242.0311 𝑝𝑝𝑚
(1𝑐𝑚)(0.05534𝑝𝑝𝑚−1 𝑐𝑚−1 ) 0.4𝑚𝑙
0.77083 10𝑚𝑙
𝐶𝑉𝑖𝑣𝑒 100 = −1 −1
× = 1392.8984 𝑝𝑝𝑚
(1𝑐𝑚)(0.05534𝑝𝑝𝑚 𝑐𝑚 ) 0.1𝑚𝑙
𝑨𝑹𝒆𝒇𝒓𝒆𝒔𝒄𝒐 𝑽𝒂𝒇𝒐𝒓𝒐
𝑪𝑹𝒆𝒇𝒓𝒆𝒔𝒄𝒐 = ×
𝟎. 𝟎𝟓𝟓𝟑 𝑽𝒂𝒍𝒊𝒄𝒖𝒐𝒕𝒂
0.56512 10𝑚𝑙
𝐶𝐶𝑜𝑐𝑎 = −1
× = 255.4792 𝑝𝑝𝑚
0.0553𝑝𝑝𝑚 0.4𝑚𝑙
0.53576 10𝑚𝑙
𝐶𝑅𝑒𝑑 𝐶𝑜𝑙𝑎 = −1
× = 242.2061 𝑝𝑝𝑚
0.0553𝑝𝑝𝑚 0.4𝑚𝑙
0.77083 10𝑚𝑙
𝐶𝑉𝑖𝑣𝑒 100 = × = 1393.9060 𝑝𝑝𝑚
0.0553𝑝𝑝𝑚−1 0.1𝑚𝑙
Tabla de resultados
Refresco Método por despeje Método de curva de calibración
Coca-Cola light 255.2945 255.4792
Red Cola 242.0311 242.2061
Vive 100 1393.9060 1392.8984
Análisis de resultados
Al realizar ambos métodos para obtener la concentración de la cafeína se puede
observar que tiene una pequeña variación en decimales por lo que ambos métodos son
correctos y se puede trabajar con cualquiera de ellos asegurando gran confiabilidad.
De igual manera el refresco que contiene más cafeína es él vive 100, seguido por la
Coca-Cola light y finalmente la Red Cola, lo cual lo podemos observar fácilmente en el
grafico del espectrofotómetro
Conclusiones
Realizar una medición de la concentración de cualquier sustancia en una muestra
resulta bastante exacto al hacer uso del espectrofotómetro, tomando en cuenta que la
muestra colocada deberá estar lo suficientemente diluida en algún solvente que no
interfiera con la medición, por lo que deberá ser incoloro para que no absorba la
radiación y no deberá reaccionar con la muestra. Tomando en cuenta estos aspectos el
etanol fue un buen disolvente para términos de práctica.
Por contraparte se observó la limitación de tener una concentración de la muestra
relativamente grande, como fue el caso del vive 100, ya que de primera instancia al
realizar la medición en el espectrofotómetro se mostró la curva muy distinta a lo
obtenido con los otros dos refrescos.
Finalmente he adquirido el conocimiento para determinar la concentración de la cafeína
en los refrescos, sin embargo, podría determinar la concentración de otros compuestos
empleando referencias para el tratamiento de la muestra (uso de disolvente especifico
y longitud de onda máxima para el compuesto a analizar) y las condiciones de
operación del espectrofotómetro.
Recomendaciones
Buscar el valor teórico que el refresco dice tener de cafeína, para así poder confirmar
que la medición fue correcta o que el refresco cumpla con lo que presenta ante el
consumidor, además de proponer algún otro método de desgasificación que pueda
traernos una mejor medición y una eficiencia en el tiempo de práctica, por otra parte
podría ser útil buscar el espectro de absorbancia de los patrones de la sustancia a
cuantificar (en este caso la cafeína) para visualizar la presencia de esta con mayor
facilidad y tal vez no solo tratar con refrescos, ya que la cafeína la podemos encontrar
en los cafés, tés y chocolates principalmente.
Bibliografía
⎯ García, E. M., Fuentes, A. L. & Fernández, I. S. (s/f). Extracción y cuantificación
cafeína mediante espectro UV-Visible en café, té y cacao. Universidad Politécnica
de Valencia. Recuperado el 24 de marzo de 2024, de
[Link]
s%3BFern%C3%A1ndez%20-
%20Extracci%C3%B3n%20y%20cuantificaci%C3%B3n%20de%20cafe%C3%ADna
%20mediante%20espectroscop%C3%ADa%20UV-Visi....pdf?sequence=1
⎯ Absortividad - Wikipedia, la enciclopedia libre
⎯ Transmitancia - Wikipedia, la enciclopedia libre
⎯ [Link] ([Link])
⎯ Aplicaciones y criterios de uso de la espectroscopía de absorción molecular y atómica
[Link]
espectroscopia-de-absorcion-molecul
⎯ Camacho. L. (2021, marzo 24). Determinación de Cafeína en bebidas refrescantes
Parte 2. YouTube [Link]
