Universidad San Carlos de Guatemala

Centro Universitario Sur Occidente

Ingeniería en Gestión Ambiental Local
Msc. Karen Rebecca Cifuentes
Intepretación de Análisis Instrumental Ambiental

Informe
Cromatografía

Stephany Rocío Barrios Arriaga 201745826

María José de León Regil González 2018402747

mayo del 2024

 Índice General

I. Introducción...................................................................................................................4

II. Objetivos.....................................................................................................................5

1.1 General....................................................................................................................5

1.2 Específico.................................................................................................................5

III. Revisión De Literatura..............................................................................................6

3.1 Cromatografía:...........................................................................................................6

3.2 Clasificación................................................................................................................6

3.2.1 Cromatografía plana..............................................................................................6

3.2.2 Cromatografía en columna....................................................................................8

3.3 Fase Móvil...................................................................................................................8

3.4 Fase estacionaria........................................................................................................8

IV. Metodología................................................................................................................9

4.1 Materiales:..................................................................................................................9

4.2 Procedimiento.............................................................................................................9

V. Resultados / Discusión.............................................................................................11

5.1 Placa Cromatográfica..............................................................................................11

5.1.1 Zanahoria..............................................................................................................11

5.1.2 Espinaca................................................................................................................11

5.1.3 Tinta.......................................................................................................................12

1
5.2 Papel Filtro...............................................................................................................12

5.2.1 Zanahoria..............................................................................................................12

5.2.2 Espinaca................................................................................................................13

5.2.3 Tinta.......................................................................................................................13

5.3 Opinión profesional:................................................................................................14

VI. Conclusiones.............................................................................................................15

VII. Recomendaciones.....................................................................................................16

VIII. ANEXOS...............................................................................................................17

IX. Bibliografía...............................................................................................................19

Índice de Figuras

Figuras 1 Cromatografía Plana...............................................................................................6

Figuras 2 Referencia proceso cromatografía plana.................................................................6

Figuras 3 cromatografía de columnas.....................................................................................7

Figuras 4 Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos

momentos a lo largo de la elución..........................................................................................8

Figuras 5 Representación de la aplicación de la muestra......................................................10

Figuras 6 Cromatografía.......................................................................................................17

Figuras 7 Etanol al 60%........................................................................................................17

Figuras 8 Tolueno al 40%.....................................................................................................17

Figuras 9 Medición del formato del papel filtro y cromatográfico.......................................17

2
Figuras 10 Práctica Cromatográfica......................................................................................18

Figuras 11 Prácticas cromatográficas...................................................................................18

Índice de Tablas

Tabla 1 Materiales utilizados para desarrollo de práctica cromatográfica..............................9

Tabla 2 Representación del diseño para la FE........................................................................9

Tabla 3 Rf extracto de zanahoria placa cromatográfica........................................................11

Tabla 4 Rf extracto de espinaca, placa cromatográfica........................................................11

Tabla 5 Rf tinta lapicero bic, placa cromatográfica..............................................................12

Tabla 6 Extracto zanahoria, papel filtro................................................................................13

Tabla 7 Extracto de espinaca, papel filtro.............................................................................13

Tabla 8 Tinta de lapicero bic azul, papel filtro.....................................................................14

3
 I. Introducción

La cromatografía es una técnica analítica poderosa y versátil que se utiliza ampliamente en

diversos campos científicos, desde la química y la biología hasta la farmacología y la
medicina. En un laboratorio de cromatografía, se llevan a cabo una serie de procedimientos
para separar, identificar y cuantificar los componentes de una mezcla. Esta técnica se basa
en las diferencias en la distribución de los componentes de una muestra entre dos fases: una
fase estacionaria y una fase móvil.

En el laboratorio de Introducción al Análisis Instrumental Ambiental del Centro

Universitario del Suroccidente San Carlos de Guatemala, se utilizan diversos tipos de
cromatografía, pero la utilizada fue la cromatografía de soporte que contiene a la fase
estacionarias de tipo plana, cada uno de estos métodos plana y de columnas tiene sus
propias aplicaciones específicas y ventajas, lo que permite a los investigadores seleccionar
la técnica más adecuada para sus necesidades analíticas.

La práctica de laboratorio de cromatografía suele abordar los principios básicos de la

técnica, los equipos utilizados fueron una tira de placa cromatográfica y extracto de
zanahoria, espinaca y tinta de lapicero color azul.

Los tipos de muestras analizadas nos permiten obtener la relación de forma que es el factor
que se encuentra en una cromatografía plana. Además, se enfatiza la importancia de la
precisión, la reproducibilidad y la validación de los resultados obtenidos mediante
cromatografía.

La práctica de laboratorio influye en la adquisición de conocimientos del estudiante para el

análisis científico como, la separación de las mezclas de aminoácidos, mezclas de
proteínas, mezcla de aminoácidos, pigmentos como análisis de restos de pesticidas en un
vegetal.

4
 II. Objetivos

I.1 General
 Comprender los principios básicos de la cromatografía
I.2 Específico
 Realizar una cromatografía plana con FE sólida y FM líquida.
 Calcular el factor de relación de frente de la cromatografía plana.
 Interpretar y analizar los resultados de la cromatografía practicada en el extracto de
zanahoria, espinaca y tinta de lapicero.

5
 III. Revisión De Literatura

III.1 Cromatografía:
Técnica de separación en la cual, los componentes de la muestra, se distribuyen entre dos
fases de diferente naturaleza, como consecuencia de la variación de velocidad que se
establece al ser arrastrados por una fase móvil, líquida o gaseosa, a través de una fase
estacionaria, sólida o líquida. (Pasto y Johnson, 2008)

Los componentes de las muestras se distribuyen en el interior del lecho cromatográfico al

ser arrastrados por la fase móvil. Las especies individuales quedan retenidas en la fase
estacionaria en función de las interacciones que tienen lugar tales como: Adsorción
superficial Solubilidad carga ( High Performance Liquid Chromatography)

La aplicación práctica de la cromatografía consiste en hacer pasar la fase móvil a través de

la columna cromatográfica que contiene la fase estacionaria, donde están retenidos los
solutos. (Pérez-Madruga, Y., López-Padrón, I., & Reyes-Guerrero, Y.2020)

III.2 Clasificación

III.2.1 Cromatografía plana

Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse en capa fina o en capa delgada
porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido. (Ruiz, V. V., Gamboa, G. T.
G., Rodríguez, E. D. V., Cota, F. I. P., Santoyo, G., & de los Santos Villalobos, S.2020)

Cromatografía plana

 Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en
capa delgada” porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido.
 Cromatografía ascendente en capa fina
 Disposiciones experimentales para realizar una cromatografía en papel descendente
(izqda.) y ascendente (dcha.).

6
Figuras 1 Cromatografía Plana

Figuras 2 Referencia proceso cromatografía plana

Cromatografía ascendente en capa fina: colocación de una muestra (con 3 componentes),

desarrollo de la cromatografía y revelado del cromatograma. Rf es el factor de retardo o
retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al máximo
posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil. (Freifelder-193)

 Componente 1: Rf = a / D
 Componente 2: Rf = b / D
 Componente 3: Rf = c / D

Figuras 3 cromatografía de columnas

 aplicación de la muestra
 se sumerge el extremo inferior en la fase móvil
 la fase móvil asciende por capilaridad y se va produciendo la separación de los
componentes
 se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa
 revelado de los componentes ya separados y medida de su avance

7
 III.2.2 Cromatografía en columna
F.M. líquida, F.E. sólida: columnas de varios mm de diámetro y varios cm de longitud.
F.M. gas, F.E. sólida: columnas de unos 5 mm de diámetro y 1-20 m de longitud.
F.M. gas, F.E. líquida: columnas “capilares”, con menor diámetro y 30-100 m (incluso
más) de longitud. (Gutierrez-Poveda, E.201)

Figuras 4 Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos momentos a lo largo de la
elución

 Muestra depositada sobre el lecho cromatográfico

 La muestra penetra en el lecho
 Se añade fase móvil
 Comienza la separación de los componentes de la muestra
 Eluye el primer componente
 Eluye el segundo componente

III.3 Fase Móvil

El estado físico de la fase móvil determina la primera gran división de los métodos
cromatográficos. En esencia, algún tipo de fluido puede ser usado como fase móvil.
Históricamente, los líquidos fueron los primeros en ser usados dando lugar a un amplio
rango de métodos clasificados como cromatografía líquida (CL). (Muñoz Gutiérrez,
A.2020)

III.4 Fase estacionaria

El estado de la fase estacionaria puede ser sólido o líquido. Cuando la fase estacionaria es
sólida no se plantea ningún problema conceptual, pues se entiende que una fase móvil
puede moverse a través de una fase sólida más o menos porosa. (Esp, J. A. V. R. M.2020)

8
 IV. Metodología

IV.1 Materiales:
Tabla 1 Materiales utilizados para desarrollo de práctica cromatográfica

Extracto de Espinacas Placa cromatográfica

Extracto de Zanahoria Lapiceros

Tinta de lapicero Etanol

Baker Tolueno

Tape Probeta

Lapicero y Lápiz Adhesivo

IV.2 Procedimiento
 Se obtuvo el extracto de zanahoria, espinaca y tinta de lapicero.
 Se recorto el papel filtro en la misma medida de la placa cromatográfica.
 Se marcó una línea con un lápiz (Para evitar que se riegue la tinta) desde el inicio
hasta 0.5cm hacía arriba y de arriba hacia abajo se marcó una línea de 3mm.

Tabla 2 Representación del diseño para la FE

Papel filtro Placa Cromatográfica

9
  Luego se procedió a aplicar una gota uniforme de cada muestra a analizar en una

distancia considerable en las dos Fases Estacionarias que fueron el papel filtro y en

la placa cromatográfica.

Figuras 5 Representación de la aplicación de la muestra

Preparación de la fase móvil:

 fue preparada en estado líquido, de estanol al 60% y 40% midiendo con una probeta

y mezclando en un Baker para lograr su homogeneidad.

 El Baker se utilizó un lapicero y adhesivo para sujetar la FE de la práctica,

quedando al ras de la mezcla para que la muestra pudiera ser empujada por la FM.

Primero se procedió a la separación del soporte y fase estacionaria. Posteriormente fue la

aplicación de la muestra en este caso fueron 3 que consta del extracto de zanahoria,
espinaca y tinta de lapicero, seguidamente se procede a la observación del cromatograma
que es el desarrollo de la muestra siendo la distancia recorrida desde el inicio de la muestra
la fase móvil que recorre durante un tiempo determinado al momento de dejarla sobre el
soporte por varios minutos donde se aplicaron diferentes sustancias para la revelación de la
muestra. Como último paso se calculó la relación de frente siendo la distancia recorrida por
el analito y la distancia o distancia recorrida por la fase móvil

10
 V. Resultados / Discusión

V.1 Placa Cromatográfica

V.1.1 Zanahoria
Tabla 3 Rf extracto de zanahoria placa cromatográfica
A) Etanol 60% B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
Tolueno 40% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%

5 3 Distancia analito 7 5.7

Rf = =0.54 Rf = =0.32 Rf = Rf ==¿ =¿0.76 Rf = =¿ 0.38
9.2 9.1 Distancia del cuadro 9.2 9.7

V.1.2 Espinaca
Tabla 4 Rf extracto de espinaca, placa cromatográfica

A) Etanol 60% B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
Tolueno 40% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%

6 5 Distancia analito 6.8 3.7

Rf = =0.65 Rf = =0.54 Rf = Rf ==¿ =¿0.73 Rf = =0.58
9.2 9.1 Distancia del cuadro 9.2 9.7

11
 V.1.3 Tinta
Tabla 5 Rf tinta lapicero bic, placa cromatográfica
E) Etanol B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
60% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%
Tolueno 40%

6 6 Distancia analito 4.5 0.7

Rf = =0.65 Rf = =0.65 Rf = Rf = =¿ =¿ 0.48 Rf = =0.07
9.2 9.1 Distancia del cuadro 9.2 9.7

V.2Papel Filtro
V.2.1 Zanahoria
Tabla 6 Extracto zanahoria, papel filtro
E) Etanol B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
60% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%
Tolueno 40%

5.5 3.3 Distancia analito 8.4 5.8

Rf = =0.60 Rf = =0.36 Rf = Rf ==¿ =¿1 Rf = =0.60
9.2 9 Distancia del cuadro 8.4 9.6

12
 V.2.2 Espinaca
Tabla 7 Extracto de espinaca, papel filtro
E) Etanol 60% B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
Tolueno 40% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%

6.1 3.5 Distancia analito 8.4 5.6

Rf = =0.66 Rf = =0.38 Rf = =¿=
Rf =1 Rf = =0.58
9.2 9 Distancia del cuadro 8.4 9.6

V.2.3 Tinta
Tabla 8 Tinta de lapicero bic azul, papel filtro
A) Etanol 60% B) Acetona 50% C) Alcohol 40% D) Tolueno 50% E) Hexano 60%
Tolueno 40% Etanol 50% Tolueno 60% Acetona 50% Acetona 40%

6 3.4 Distancia analito 8.4 5.7

Rf = =0.65 Rf = =0.37 Rf = Rf=¿
= =1 Rf = =0.59
9.2 9 Distancia del cuadro 8.4 9.6

13
 V.3Opinión profesional:
La cromatografía permite la separación de los componentes de una mezcla desde su

identificación y cuantificación, es una de las principales técnicas analíticas de separación de

distintas especies químicas en una mezcla y es capaz de proporcionar información

cualitativa y cuantitativa sobre su composición. El análisis cromatográfico tiene un papel

muy importante en diferentes en análisis y separación de muestras como por ejemplo en la

rama de la medicina que gracias a esta práctica se pueden realizar análisis de sangre para

identificar las sustancias contenidas en ella, así mismo en biología y química para

identificar enzimas, sustancias fotosintéticas clorofila etc.

Como método de análisis esta práctica fue bastante útil para observar la separación de los

eluyentes pues se logró apreciar el ascenso de la fase móvil justamente donde se va

produciendo la separación de los componentes

en las muestras para que se marque el frente de avance del disolvente y revelar los

componentes ya separados y medida de su avance, los resultados proporcionan cantidades

que mantienen en un número no mayo a 1 según el cálculo de Rf de cada muestra, el cual

debido a su peso y polaridad de estos cada uno es diferente.

14
 VI. Conclusiones

El objetivo fundamental es la comprensión los principios de separación en la cromatografía,

incluidos los conceptos de fase móvil, fase estacionaria, así como la clasificación de las
cromatografías.

La cromatografía según el estado de agregación de las fases fue de tipo CSL que significa
que para la elaboración de dicho práctico se utilizó una fase estacionaria solida que de
soporte plano, con una fase móvil líquido que fue una mezcla de 60% de etanol y el 40% de
tolueno de forma ascendente, permitiendo que la fase móvil arrastre ala muestra
recorriendo la fase estacionaria de abajo hacia arriba.

El cálculo de relación de frente representa la distancia que recorre un analito sobre la fase
estacionaria, mientras que cuanto más cercano sea a 0 el valor de Rf significa que el analito
tiene afinidad por la fase estacionaria y mientras que cuanto más cercano a 1 significa que
el analito tiene más afinidad por la fase móvil.

15
 VII. Recomendaciones

Antes de cargar la muestra, acondiciona el soporte para la fase estacionaria sólida,

equilibrándola y tratando que llegue al Raz de la fase móvil.

Aplica cuidadosamente la muestra en forma de pequeña mancha o banda en la parte inferior

de la placa, Asegúrate de que la aplicación sea uniforme y que la cantidad de muestra sea
controlada para evitar la sobrecarga.

Realizar la línea del formato con la ayuda de un lápiz para evitar que la FM empuje la línea
del formato de forma ascendente.

16
 VIII. ANEXOS

Figuras 6 Cromatografía

Figuras 7 Etanol al 60%

Figuras 8 Tolueno al 40%

Figuras 9 Medición del formato del papel filtro y cromatográfico

17
Figuras 10 Práctica Cromatográfica

Figuras 11 Prácticas cromatográficas

18
 IX. Bibliografía

(s.f.). High Performance Liquid Chromatography.

(s.f.). Esp, J. A. V. R. M.2020.

(s.f.). Freifelder-193.

(s.f.). Gutierrez-Poveda, E.201.

(s.f.). Muñoz Gutiérrez, A.2020.

(s.f.). Pasto y Johnson, 2008.

(s.f.). Pérez-Madruga, Y., López-Padrón, I., & Reyes-Guerrero, Y.2020.

(s.f.). Ruiz, V. V., Gamboa, G. T. G., Rodríguez, E. D. V., Cota, F. I. P., Santoyo, G., & de

los Santos Villalobos, S.2020.

19