PRACTICA DE LABORATORIO N°5

Separación de Aminoácidos por Cromatografía de Papel en Dos Dimensiones

y Cromatografía en Capa Fina
Juan Miguel Yosa Manchola ˡ
Luis Felipe Ortiz Trujillo ²
Universidad Surcolombiana,
[email protected] ˡ
[email protected] ²

Resumen
Este laboratorio tiene como objetivo separar una mezcla de algunos aminoácidos utilizando la
técnica de cromatografía bidireccional de capa fina. En tres sencillos procedimientos realizados en
el laboratorio, uno de los cuales fue un examen físico, observar colores y detectar diversos
aminoácidos como triptófano, tirosina, glutamina, glicina y arginina, en una muestra problema
como lo es las carnes de hamburguesas los cuales han demostrado tener grupos funcionales al
reaccionar con sustancias o reactivos específicos para detectarlos.

Palabras clave: procedimiento, cromatografía, bidimensional, aminoácidos, detectar.

Abstract

This laboratory aims to separate a mixture of some amino acids using the bidirectional thin layer
chromatography technique. In three simple procedures carried out in the laboratory, one of which
was a physical examination, observing colors and detecting various amino acids such as
tryptophan, tyrosine, glutamine, glycine and arginine, in a problem sample such as hamburger
meats, which have been shown have functional groups when reacting with specific substances or
reagents to detect them.

Keywords: procedure, chromatography, two-dimensional, amino acids, detect.

Introducción:

En 1906, el botánico Ruso M. Tswett realizó, un experimento que condujo al descubrimiento de

lo que hoy conocemos como cromatografía. Colocó un extracto de pigmentos vegetales en la
parte superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio (𝐶𝑎𝐶𝑂3). Al agregar éter,
observó que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que descendían a través
de la columna a diferentes velocidades. (Olivares, 2018)

La cromatografía, es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentes

velocidades con que son arrastradas cada una de ellas a través de un medio poroso por un
disolvente en movimiento. A medida que el agua (el disolvente) va desplazándose por el papel de
filtro (el medio poroso), arrastra consigo los pigmentos que contiene la mancha de tinta. Como no
todos son arrastrados con la misma velocidad, al cabo de un rato se forman unas franjas de
colores que corresponden a los componentes de la tinta del rotulador. (Olivares, 2018)

La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.
La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el disolvente.
Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. La separación
se realiza en función de la afinidad de los solutos con las dos fases, las más solubles en agua se
quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más
solubles en el disolvente llegarán más lejos. Las sustancias separadas se identifican
mediante diversos procedimientos físicos o químicos. Como medida en cromatografía sobre
papel se emplea el 𝑅𝑓 (Retention factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido
de la sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el centro de la
mancha (𝑋) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el frente del disolvente (𝑆).
(Olivares, 2018)

Figura 1. Separación en dos dimensiones de una mezcla de aminoácidos en

papel Whatman. Plummer, 1981.

La carne de cerdo es una fuente de proteína esencial, dado que presenta un alto contenido de
aminoácidos esenciales. Como media, un 40 % de los aminoácidos de la carne son esenciales.
Dentro de estos, es destacable su alto contenido en valina, leucina, isoleucina, metionina,
triptófano, fenilalanina y lisina, así como de histidina y arginina. (Ardila, 2022)
Análisis de Resultados:
Para la obtención de estos resultados, tomaremos en cuenta una muestra problema y cinco
aminoácidos; los resultados son los siguientes.

Ilustración 1. Cámara cromatografía 1. Butanol, ácido acético glacial, agua

Tomada por Yosa & Ortiz, 2024
Ilustración 2. Cámara cromatografía 2. Fenol, agua y aminoácidos. Tomado por Yosa & Ortiz,
2024

Ilustración 3. Cromatografía bidimensional de aminoácidos (Valina, Triptófano, Tirosina,

Alanina, Arginina, Glutamina, Glicina, Cistina, Asparagina, Serina) Tomado por Yosa & Ortiz,
2024

Cromatografia bidimensional
Val

Tr
Butanol, ácido acético glacial, aguae

p
Tir
Al
Gli a
Glu
Asp
Ar
g
Cis

Fenol, agua y aminoácidos

Figura 2. Grafica de cromatografía bidimensional de aminoácidos

Ilustración 4. Cromatografía cámara 2. Aminoácidos Trp, Tir, Glu, Gli, Arg y la muestra
problema. Tomado por Yosa & Ortiz, 2024

Cromatografia Camara 2
Trp Tir Glu Gli Arg Muestra problema

Fenol, agua y aminoácidos

Figuran 3 cromatografías en la cámara 2.

Ilustración 5. Cromatografía cámara 1. Aminoácidos Trp, Tir, Glu, Gli, Arg y la muestra
problema. Tomado por Yosa & Ortiz, 2024

Cromatografia Camara 1

Trp Tir Glu Gli Arg Muestra problema

Butanol, ácido acético glacial, agua

 Figuran 4 cromatografías en la cámara 1.

Ilustración 6. Cromatografía bidimensional de la muestra problema Tomado por Yosa & Ortiz,
2024

Cromatografia bidimensional de la muestra

Butanol, ácido acético glacial, aguae

Fenol, agua y aminoácidos

Figura 5. Grafica de cromatografía bidimensional de la muestra problema

La distribución de aminoácidos en el papel depende de sus propiedades químicas. En este

caso, el segundo patrón de reacciones con amonio, fenol y agua está claramente mejor
definido en el artículo, lo que indica una menor movilidad dependiente del Ph. El reparto
que se obtiene es el siguiente: “los aminoácidos apolares son los que mejor interaccionan
con el solvente y son arrastrados por él” (Al, 2009); La cisteína, Asparagina y la Arginina
en la cromatografía bidimensional, la Glicina y la Arginina en la cámara 2 y la Glutamina
y la Glicina estos aminoácidos tiene baja movilidad al pH en los solventes donde se
 realizaron porque tiene dos grupos amino cargados positivamente. Por lo tanto,
generalmente no reacciona bien con disolventes apolares (n-butanol). Los aminoácidos
restantes se dividen en aminoácidos apolares y aminoácidos básicos.
Al sumergir el papel en ninhidrina y dejar secar nuevamente, se evidencia que “el
aminoácido con un mayor peso molecular y con una mayor afinidad a la fase
estacionaria quedó en la parte más baja de la tira de papel, mientras que el más ligero y
con mayor afinidad por la fase móvil logró alcanzar una mayor altura dentro de la
tira de papel”. (Olivares, 2018)
Este método de separación cromatografía es uno de los más sencillos porque monitorea la
reacción que produce la ninhidrina, permitiendo el análisis cualitativo de esta técnica.
Observando los resultados en cada una de las hojas podemos observar la presencia de
aminoácidos como Arginina, Glutamina, Tirosina, Triptófano solamente en la cámara 2
mientras en la cámara 1 se observa aminoácidos como Glutamina y Tirosina, y por último
en la cromatografía bidimensional de la muestra comparando con la de los aminoácidos
podemos decir que es probable que tenga Tirosina, Triptófano y Glicina pero si lo
comparamos con la literatura el cual nos indica que “contenido en valina, leucina,
isoleucina, metionina, triptófano, fenilalanina y lisina, así como de histidina y arginina”
(Ardila, 2022)

Conclusiones:

La cromatografía es un método analítico que permite la separación, aislamiento e identificación

de componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas. Además de que existen
diferentes tipos de cromatografía que utilizan fases móviles y estacionarias; Los tipos de
cromatografía incluyen cromatografía en papel, en capa fina, de gases, líquida, en gel y de
afinidad. El tipo de experimento realizado fue cromatografía en papel y el objetivo se logró ya
que los aminoácidos se separaron exitosamente y se pudieron observar distancias. Todos se
fueron de viaje. El sujeto entendió que en cromatografía, la separación de moléculas en una
mezcla depende de su tendencia relativa a unirse más fuertemente a la fase móvil o estacionaria.
Cuestiones

1. Construya un mapa de aminoácidos y compárelo con el de la figura 1.

Figura 1. Separación en dos dimensiones de una mezcla de aminoácidos en papel Whatman.

Plummer, 1981.
 Cromatografia bidimensional
Val

Butanol, ácido acético glacial, aguae Tr

p
Tir
Al
Gli a
Glu
Asp
Ar
g
Cis

Fenol, agua y aminoácidos

Figura 2. Grafica de cromatografía bidimensional de aminoácidos

2. Explicar las razones moleculares por las cuales, cada aminoácido se ubica de manera
específica en los cronogramas obtenidos.

Las razones por las cuales cada aminoácido se ubicó de manera específica en los cronogramas
se debe a las propiedades como:

 Diferencias en solubilidad en diferentes solventes, tanto orgánicos como acuosos.

 Diferencias en tamaño y forma.

 Diferencias en carga.

 Diferencias en afinidad por otras biomoléculas

Por tanto, las separaciones de diferentes compuestos están influenciadas por las condiciones
del medio de separación, pH, temperatura, fuerza iónica e hidrofobicidad. (Al, 2009)

Referencias Bibliográficas:
 Ardila, A. 2022. Valoración nutricional de la carne de cerdo y productos cárnicos. Aporte
proteico. Obtenido de https://interporc.com/2022/10/06/valoracion-nutricional-carne-de-
cerdo-aporte-proteico?cat=blog/vive-en-rosa#:~:text=Como%20media%2C%20un
%2040%20%25%20de,como%20de%20histidina%20y%20arginina.
 Olivares, E. L. (2018). Practica 6 separaciones de aminoácidos por cromatografía. Obtenido
de https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-autonoma-de-aguascalientes/
bioquimica/practica-6-separacion-de-aminoacidos-por-cromatografia-en-papel/11959101
 Al, J. V. (02 de 18 de 2009). Aminoácidos. Recuperado el 07 de 06 de 2022, de
http://www3.gobiernodecanarias.org/aciisi/cienciasmc/web/pdf/libro_completo.pdf