Universidad Latina de Panamá sede David

Facultad de ciencias de la salud Dr. Williams C. Gorgas

Lic. Tecnología médica

Microbiología Clínica

Laboratorio N8

Coprocultivo

Profesor: Ricardo Saldaña

Presentado por: Idamis Araúz 4-817-1346

22 de Mayo de 2024
1. RESUMEN
El coprocultivo es una técnica microbiológica utilizada para identificar los agentes
etiológicos responsables de infecciones gastrointestinales a partir de muestras fecales. Este
procedimiento es esencial en el diagnóstico de diarreas infecciosas, que pueden ser
causadas por una variedad de microorganismos patógenos. Entre los principales agentes
etiológicos se encuentran las bacterias como Salmonella, Shigella, Campylobacter y
Escherichia coli (especialmente las cepas enteropatógenas, enterotoxigénicas,
enterohemorrágicas y enteroinvasivas).
Salmonella es un patógeno importante debido a su capacidad para causar infecciones
sistémicas y gastroenteritis, mientras que Shigella es conocido por causar disentería,
caracterizada por diarrea con sangre y mucosidad. Campylobacter es una causa común de
diarrea bacteriana y se asocia con el síndrome de Guillain-Barré. Escherichia coli tiene
diversas cepas patogénicas, siendo la Escherichia coli O157:H7 notable por su asociación
con el síndrome urémico hemolítico. Además de las bacterias, los coprocultivos también
pueden detectar parásitos como Cryptosporidium hominis que es un coccideo que causa
inflamación inestinal y diarrea.
El proceso comienza con la recolección de una muestra de heces del paciente, la cual se
siembra en medios de cultivo selectivos y diferenciales. Estos medios están diseñados para
inhibir el crecimiento de la flora normal y favorecer el crecimiento de patógenos
específicos. Tras la incubación, las colonias que crecen son examinadas y subcultivadas en
medios adicionales para su identificación. Las infecciones gastrointestinales pueden variar
desde cuadros leves hasta enfermedades graves, especialmente en poblaciones vulnerables
como niños, ancianos e individuos inmunocomprometidos. Por lo tanto, el diagnóstico
preciso y oportuno mediante coprocultivo es fundamental para prevenir complicaciones y
reducir la propagación de enfermedades. En casos de diarreas persistentes, hemáticas o
acompañadas de fiebre alta, el coprocultivo puede identificar la causa bacteriana
subyacente, lo que no solo facilita el tratamiento específico, sino que también ayuda a
evitar el uso innecesario de antibióticos.
2. PALABRAS CLAVES
1. Coprocultivo: Procedimiento de laboratorio que consiste en el cultivo de muestras de
heces para identificar y aislar microorganismos patógenos presentes en el tracto intestinal,
como bacterias, virus, y parásitos, con el fin de diagnosticar infecciones gastrointestinales.
2. Heces: Materia fecal excretada del cuerpo a través del recto, compuesta por restos de
alimentos no digeridos, bacterias, células epiteliales del intestino, secreciones, y agua, que
reflejan la función y salud del tracto gastrointestinal.
3. Flora bacteriana intestinal: Conjunto de microorganismos, principalmente bacterias,
que residen de manera natural y en equilibrio en el intestino, desempeñando roles cruciales
en la digestión, síntesis de vitaminas, y protección contra patógenos.
4. Disentería: Enfermedad infecciosa caracterizada por inflamación del intestino,
especialmente del colon, que causa dolor abdominal, diarrea severa con presencia de sangre
y moco, y en algunos casos fiebre.
5. Bacterias entéricas: Grupo de bacterias que habitan el tracto intestinal de humanos y
animales, algunas de las cuales pueden causar infecciones gastrointestinales y otras
enfermedades cuando se introducen en otros entornos del cuerpo.
6. Diarrea: Condición médica caracterizada por la evacuación frecuente de heces líquidas
o semilíquidas, que puede estar acompañada de dolor abdominal, urgencia para defecar y,
en algunos casos, deshidratación.
7. Fiebre entérica: Enfermedad sistémica grave causada por infecciones bacterianas,
especialmente por Salmonella Typhi y Salmonella Paratyphi, que se caracteriza por fiebre
alta, dolor abdominal, malestar general y, en algunos casos, complicaciones severas.
8. Gastroenteritis: Inflamación del revestimiento del estómago y los intestinos causada por
infecciones virales, bacterianas o parasitarias, que provoca síntomas como náuseas,
vómitos, diarrea, y dolor abdominal.
9. Tracto gastrointestinal: Sistema de órganos que incluye la boca, esófago, estómago,
intestinos delgado y grueso, y el ano, encargado de la digestión, absorción de nutrientes y
eliminación de desechos del cuerpo.
3. MARCO TEORICO
3.1 Enfermedad diarreica
Las infecciones del tracto gastrointestinal representan un grave problema de salud pública.
La diarrea es la manifestación más común de esas infecciones, las cuales constituyen una
de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad en lactantes y niños menores de
cinco años, con el mayor número de casos en los países en vías de desarrollo de Asia, áfrica
y Latinoamérica.
La terapia de rehidratación oral, se ha identificado como la medida más eficaz para la
reducción de la mortalidad por diarrea. Una mayor reducción de la misma se alcanzará al
lograr el tratamiento integral de los casos, particularmente en los cuadros de disentería y de
diarrea persistente.
3.2 Etiología
La etiología de la enfermedad diarreica es diversa y numerosos esfuerzos se han realizado
para tratar de explicarla, observándose que el factor infeccioso continua siendo el más
importante, sin duda, por su carácter transmisible. De los agentes infecciosos, los
bacterianos se encuentran entre los más frecuentes en todos los países del mundo.
La utilidad del diagnóstico de la diarrea se enfoca fundamentalmente desde dos puntos de
vista:
1. El clínico, para la atención y seguimiento de pacientes, particularmente cuando está
indicado el tratamiento con antibiótico-terapia, como, por ejemplo, en la disentería.
2. Desde el punto de vista de salud pública: Control de brotes, vigilancia epidemiológica y
estudio sobre vacunas.
Definiciones operativas:
• Diarrea aguda: incremento en el número o volumen de las heces de 72 horas o me- nos
de duración.
• Diarrea crónica o persistente: incremento en el número o volumen de las heces de más
de 14 días de duración.
• Disentería: historia de moco o sangre en las heces con tenesmo o dolor al defecar y
temperatura axilar de 38,5 oC.
• Gastroenteritis: diarrea líquida de color amarillo verdosa o no, acompañada con vómito
y fiebre en algunas oportunidades.
• Fiebre entérica: fiebre, cefalea, dolor abdominal, bradicardia relativa, esplenome- galia y
leucopenia. Ej: Fiebre tifoidea.
El estudio de la material fecal, para el aislamiento e identificación de las bacterias
productoras de diarrea se denomina: coprocultivo.
3.3 Flora bacteriana intestinal
En el intestino delgado, el duodeno es estéril, en el yeyuno aparecen enterococos,
lactobacilos y difteroides, en el íleon se suman algunos miembros de la familia
Enterobacteriaceae y anaerobios gramnegativos, en una proporción de aproximadamente
105 por gramo de heces.
En el intestino grueso, la flora habitual constituye el 50% del peso seco de las heces.
Las bacterias anaerobias que se encuentran en mayor proporción son las siguientes:
Bacteroides 100%, Peptococcus, Fusobacterium, Peptostrepotococcus, Lactobacillus y
Clostridium.
Las bacterias anaerobias facultativas o aerobias son las siguientes: Escherichia coli 100%,
Klebsiella y Enterobacter 40 – 80%, Proteus 5-50%, Citrobacter sp., Pseudomonas sp.,
Enterococccus sp. 100%, Staphylococcus 30-50%.
Esta flora se mantiene en equilibrio por diferentes mecanismos tales como: produc- ción de
bacteriocinas y sustancias tóxicas como ácidos grasos, entre otras.
3.4 Patogenia
En la trascendencia del proceso diarreico, interviene no solo la patogenicidad del agente,
sino la respuesta particular del huésped y de su propio ecosistema microbiano, esto trae
como consecuencia que el espectro de respuestas clínicas varíe de un individuo a otro,
manifestándose en unos, con enfermedades clínicas graves, en otros, con síntomas leves, y
en otros, con infección intestinal subclínica, de allí que algunas veces al realizar
coprocultivos en personas sin diarrea, se aislen enteropatógenos.
ECET: Escherichia coli enterotoxigénica; ECEP: Escherichia coli enteropatógena; ECEH:
Escherichia coli enterohemorrágica; ECEI: Escherichia coli enteroinvasiva; PMn:
Leucocitos polimorfonucleares; gr: glóbulos rojos.
3.5 Etapa pre-analítica
Muestra: La muestra de heces o hisopado rectal debe ser recolectada durante el período
agudo de la enfermedad, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano. Utilizar un envase
de boca ancha, tapa hermética, preferiblemente estéril, en caso de muestras líquidas se
recomienda recolectarla en un envase para recolección de orina.
Conservación y transporte de la muestra: Si la muestra no se cultiva de inmediato, antes
de las dos horas, se recomienda colocarla en un medio de transporte: Cary Blair y
mantenerla a temperatura ambiente por un lapso no mayor a 5 días.
Datos clínicos y epidemiológicos del paciente: Edad, síntomas, tiempo de evolución del
cuadro diarreico, tipo de alimentos ingeridos, contacto con animales y cuáles, procedencia,
ocupación.
3.6 Etapa analítica
Examen macroscópico: Consistencia, color, olor, presencia o ausencia de moco y/o
sangre.
Examen microscópico: Para determinar rápidamente la naturaleza de una enfermedad
diarreica es de gran ayuda y tiene un alto grado de confiabilidad la Investigación de
leucocitos fecales, que consiste en determinar el tipo de células inflamatorias presentes en
las heces; esta información orienta sobre la naturaleza del proceso infeccioso, ejemplo, en
la shigelosis hay abundancia de neutrófilos polimorfonucleares.
La presencia de 5 o más leucocitos por campo microscópico sugiere la presencia de un
agente enteroinvasor. La ausencia de células inflamatorias sugiere la presencia de un agente
toxigénico.
Aislamiento bacteriano
En las muestras de heces, las bacterias entéricas patógenas se encuentran siempre asociadas
a una gran variedad de bacterias comensales, es por ello, que para facilitar el aislamiento y
posterior identificación de estas bacterias, se emplean diferentes medios de
enriquecimiento, selectivos y selectivos diferenciales.
Medios selectivos y selectivos diferenciales
La muestra completa (Suspensión fecal en solución salina fisiológica) o conservada en Cary
Blair se siembra en los medios agar MacConkey (MK), agar xilosa-lisina-desoxicolato
(XLD), agar salmonella-shigella (SS), agar cefsulodin-irgasan-novoviocina (CIN), agar
desoxirribonucléico-ampicilina (ADN-AMP), agar tiosulfato-citaro-sales biliares (TCBS) y
agar preston modificado (PM). Todos los medios a excepción del CIN y PM, son incubados
a 36 °C durante 24 horas y luego a temperatura ambiente por 24 horas más. Los medios
CIN y PM se incuban durante 48 horas a temperatura ambiente (25 °C), 42 °C y en
microaerofilia, respectivamente.
Medios de enriquecimiento: Se utiliza el caldo selenito (para enterobacterias) y agua
peptonada alcalina (APA) pH 8,4, para Vibrio, los cuales después de transcurridos 6-8
horas de incubación a 36°C, del caldo selenito se toma una muestra con el asa en aro de la
parte más superficial del caldo y se inoculan los medios agar MK, XLD y SS, y del mismo
modo a partir del APA al agar TCBS, luego estos medios se incuban en las condiciones
anteriormente señaladas.
3.7 Identificación
Escherichia coli diarreogénicas:
Se investigan cuatro tipos: Escherichia coli enteropatógena (ECEP), Escherichia coli
enteroinvasiva (ECEI) Escherichia coli enterotoxigénica productora de la toxina termolábil
(ECET-TL), Escherichia coli enterohemorrágica o:157 H:7 (ECEH). Para ello se
seleccionan del agar MK, de la siembra directa con la materia fecal, 5 colonias
fermentadoras de la lactosa sugestivas de Escherichia coli, las colonias seleccionadas se
identifican como Escherichia coli mediante las pruebas de: oxidasa, Kligler, Indol-
motilidad, citrato. A esta bioquímica inicial se le adiciona el medio lisina-hierro-agar
(LIA), cuando se sospecha de ECEI (particularmente cuando el recuento de leucocitos es
superior a 5 x campo microscópico), la cual no decarboxila la lisina. Cuando se sospecha de
ECEH serotipo o:157 H:7, se adiciona caldo sorbitol, la cual no fermenta el sorbitol,
también se recomienda el uso de agar MK con sorbitol para la recuperación de este
serotipo.
Luego en el caso de ECEP, ECEI y ECEH, se procede a realizar la identificación
serológica, utilizando antisueros comerciales anti “o” y la determinación de la toxina
termolábil en el caso de ECET-TL.
En la actualidad, la identificación definitiva de estas categorías de Escherichia coli se
realiza mediante técnicas de biología molecular, detectando genes que codifican
fundamentalmente factores de virulencia.
Géneros Salmonella y Shigella
La recuperación e identificación de estos géneros, se realiza seleccionando colonias no
fermentadoras de la lactosa de los medios MK, XLD y SS, de la siembra directa y a partir
de la siembra en estos medios del caldo selenito. También se seleccionan como colonias
sospechosas de Salmonella, las no fermentadoras de la lactosa y con producción de H 2S que
han desarrollado en los medios XLD y SS. La identificación bioquímica se realiza mediante
las pruebas de oxidasa, kligler, LIA, motilidad-indol-ornitina (MIO), citrato, urea y otras
que se consideren necesarias.
La identificación serológica se realiza con antisueros polivalente anti ”o” para los grupos A,
B, C y D en el caso de Shigella y antisueros anti ”o” para los grupos A,B, C, C1-2, D, E y F
en el género Salmonella.
Género Yersinia
Se investiga fundamentalmente en el medio CIN. Después de 48 horas de incubación a
temperatura ambiente (22 °C), se seleccionan colonias fermentadoras del manitol, la
identificación bioquímica se realiza mediante las pruebas de: oxidasa, kligler, urea,
motilidad a 36 y 22 °C.
Género Aeromonas
La búsqueda de este género bacteriano se realiza en los medios MK, XLD, y SS, sembrados
directamente con la materia fecal o a partir del caldo selenito. En algunas oportunidades se
puede recuperar del agar TCBS. En los primeros medios se recupera como una colonia no
fermentadora de la lactosa, pero algunas especies son fermentadoras de este carbohidrato.
Del medio TCBS, puede aislarse como fermentadora o no de la sacarosa. En el caso del
ADN-AMP, la búsqueda se facilita porque además del carácter selectivo del medio, la
mayoría de las cepas hidrolizan el ADN, lo cual se evidencia por el viraje del indicador de
pH azul de toluidina, de azul a rosado. La identificación bioquímica se realiza mediante las
pruebas de oxidasa (positiva), fermentación de glucosa y se debe realizar la diferenciación
con el género Vibrio y Plesiomonas shigelloides.
Plesiomonas shigelloides
Se investiga en los medios MK, XLD y SS de la siembra directa o a partir del caldo
selenito. Se seleccionan colonias no fermentadoras de la lactosa que deben ser positivas a
las pruebas de oxidasa y fermentación de la glucosa; al igual que en el género Aeromonas,
realizar diferenciación con los géneros relacionados.
Vibrio cholerae
Del medio TCBS de la siembra directa o a partir del APA, se seleccionan colonias
fermentadoras de la sacarosa. Con la coloración de gram de las colonias sugestivas se
confirma que sean bacilos gramnegativos para continuar la identificación. Luego se
comprueba que sean oxidasa positiva, fermentadoras de la glucosa, no productoras de gas,
crecimiento en caldo nutritivo con cloruro de sodio 1% pero no al 6,5%. Se deben realizar
otras pruebas bioquímicas para diferenciar a Vibrio cholerae de otros géneros relacionados.
Luego se realiza la tipificación serológica, con antisueros “O1” y “O139”. En el caso de
“O1”, se debe realizar la serotipificación para determinar si es el serotipo owaga o Inaba, y
la biotipificación si se trata del biotipo Clásico o El Tor. En los laboratorios de referencia se
debe determinar si la cepa aislada es productora o no de la toxina termolábil.
Campylobacter sp.
A partir del medio PM, después del período de incubación durante 48 horas a 42 °C en
microaerofilia (frasco con la vela), se investigan las campilobacterias termotolerantes, las
colonias sospechosas son de color gris, brillantes, con aspecto de gota de agua, algunas
pueden seguir la línea de siembra, adherentes, a las cuales se les practica una coloración de
gram con el fin de observar bacilos gramnegativos curvos, en forma de coma o con
apariencia de alas de gaviota. La identificación de las especies más involucradas en
trastornos diarreicos se realiza mediante la prueba de oxidasa (positiva) y otras pruebas
descritas anteriormente.

4. OBJETIVOS
4.1 General
 Aplicar los métodos convencionales para el diagnóstico microbiológico de la Enfer-
medad Diarreica Aguda (EDA).
4.2 Específicos
1. Describir las condiciones adecuadas para la toma y transporte de la muestra de heces.
2. Aislar los agentes etiológicos bacterianos involucrados en la EDA.
3. Identificar los agentes etiológicos bacterianos involucrados en la EDA.
4. Analizar los resultados obtenidos.
5. Reportarlosresultadosobtenidos.

5. MATERIALES
5.1 Materiales • Láminas portaobjeto
• Tapaboca • Asa
• Quemador de alcohol • Tubo de ensayo
• Solución salina fisiológica 5.2 Reactivos
• Placa Petri doble • Agar Salmonella-Shiguella
• Placa Petri • Agar MacConkey
• Jeringa • Agar XLD
• Agar Hektoen • Materiales para la tinción de Kinyoun
5.3 Biológico
• Caldo de selenito • Muestra de heces.

6. PROCEDIMIENTO
6.1 Primer período
1. Realizar el examen macroscópico y microscópico (leucocitos fecales) de una muestra de
heces y describir lo observado en cada caso.
6.2 Segundo período
1. Preparar una emulsión de 0,5 gramos de heces en 1 ml de solución salina fisiológica.
2. Inocular un medios sólidos distintos: Salmonella-Shiguella, XLD, Hektoen y
MacConkey.
3. Tomar 0,4 a 0,5 gramos de heces e inocular en el caldo de selenito.
4. Incuban en aerobiosis a 37 °C. Los medios sólidos deben examinarse a las 24 y 48 horas
y revisar el caldo si esta positivo o negativo.

7. RESULTADOS
7.1 Fresco o frotis
Resultado: No se observan leucocitos.

7.2 Morfología colonial

Resultado: No desarrolla Salmonella, Shigella ni Campylobacter. La ausencia de flora
intestinal sugiere que el paciente está bajo tratamiento antibiótico.
 Siembra en Agar Salmonella- Agar XLD Agar MaCConey
medios de cultivo Shiguella| Agar
Hektoen

Tamaño ----------- ------------- ------------- -------------

Forma ----------- ------------- ------------- -------------
Borde ----------- ------------- ------------- -------------
Superficie ----------- ------------- ------------- -------------
Aspecto ----------- ------------- ------------- -------------
Elevación ----------- ------------- ------------- -------------
Consistencia ----------- ------------- ------------- -------------
Hemólisis ----------- ------------- ------------- -------------

7.3 Caldo de Selenito

Resultado: Positivo

8. DISCUSION DE RESULTADOS
En el caso descrito, el coprocultivo mostró la ausencia de leucocitos en el frotis y no hubo
crecimiento bacteriano en los medios de cultivo específicos, incluyendo Agar Salmonella-
Shigella (SS), XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato), Hektoen y MacConkey.
La ausencia de leucocitos en el frotis sugiere que no hay una respuesta inflamatoria
significativa en el tracto gastrointestinal del paciente. Esto puede ocurrir en infecciones
leves o en casos donde la infección no ha desencadenado una respuesta inmune
considerable.
Sin embargo, la falta de crecimiento bacteriano en los medios de cultivo específicos es más
notable y puede tener varias explicaciones.
Una posibilidad es que el paciente haya estado bajo tratamiento antibiótico antes de la
recolección de la muestra. Los antibióticos pueden reducir o eliminar la presencia de
bacterias patógenas en el tracto gastrointestinal, impidiendo su crecimiento en los medios
de cultivo. Esto es particularmente relevante si los antibióticos administrados son efectivos
contra las bacterias que normalmente se buscarían en un coprocultivo, como Salmonella,
Shigella, y otras enterobacterias.

9. CUESTIONARIO
1. Mencionar en orden de frecuencia los microorganismos productores de EDA.
R. 1. Virus
• Rotavirus: Es la causa más común de diarrea grave en niños menores de 5 años en todo
el mundo.
• Norovirus: Afecta tanto a niños como a adultos y es una causa principal de brotes de
gastroenteritis en comunidades cerradas como cruceros y residencias de ancianos.
• Adenovirus: Asociado principalmente con infecciones en niños.
• Astrovirus: Común en niños y causa diarrea leve.
2. Bacterias
• Escherichia coli: Incluye varias cepas patogénicas como Escherichia coli
enterotoxigénica (ETEC), Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC), y Escherichia coli
enteropatogénica (EPEC).
• Salmonella spp.: Incluye múltiples serotipos que causan gastroenteritis y fiebre entérica.
• Shigella spp.: Produce disentería bacilar, con Shigella dysenteriae siendo una de las más
virulentas.
• Campylobacter jejuni: Frecuentemente asociado con el consumo de alimentos
contaminados, especialmente aves de corral.
• Vibrio cholerae: Causa el cólera, caracterizado por diarrea acuosa severa.
• Yersinia enterocolitica: Asociada con gastroenteritis, especialmente en climas fríos.
3. Parásitos
• Giardia lamblia: Provoca giardiasis, que puede resultar en diarrea crónica.
• Entamoeba histolytica: Causa amebiasis, que puede llevar a disentería y abscesos
hepáticos.
• Cryptosporidium spp.: Produce criptosporidiosis, una causa importante de diarrea en
inmunocomprometidos.
Estos patógenos varían en prevalencia dependiendo de factores como la geografía, la edad
del paciente, y las condiciones de saneamiento e higiene. Los virus, particularmente
rotavirus y norovirus, son las causas más comunes de EDA en niños pequeños, mientras
que las infecciones bacterianas y parasitarias tienden a ser más prevalentes en adultos y en
áreas con condiciones sanitarias deficientes.
2. Señalar las condiciones de conservación y transporte de una muestra de heces para
coprocultivo.
R. Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en cuenta los
protocolos establecidos por la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y
Microbiología Clínica.
La muestra de elección para cultivo de agentes bacterianos productores de gastroenteritis es
una porción de heces diarreicas, nunca heces formes. A partir del cuarto día de
hospitalización no debe realizarse coprocultivo para determinación de gérmenes
enteropatógenos habituales salvo en situaciones especiales. Las muestras de heces se
procesarán para cultivo dentro de las 4-6 horas siguientes a su emisión. Si esto no es
posible, es conveniente su conservación en un medio de transporte adecuado
manteniéndose en refrigerador hasta su siembra.
Si se remite muestra para estudio de toxina Clostridium difficile es mejor congelarla a (-
20°C) hasta que se realice la prueba. Los escobillones rectales son aceptables sólo para
cultivos de muestras de niño con diarrea aguda. Los escobillones deben mostrar heces.
No se recomienda el cultivo sistemático de meconio o heces de recién nacido para
diagnóstico de infección neonatal.
3. Mencionar la importancia del examen directo de una muestra de heces en el
coprocultivo.
R. El examen directo de una muestra de heces es un paso crucial en el coprocultivo debido
a su capacidad para proporcionar información inmediata sobre la presencia de patógenos y
la naturaleza de la infección. A través de técnicas como la microscopía de luz y la tinción,
el examen directo puede detectar elementos como leucocitos, eritrocitos, parásitos, huevos
de helmintos y formas trofozoítas de protozoos. La identificación de leucocitos y eritrocitos
puede sugerir una infección bacteriana invasiva, mientras que la visualización de parásitos
permite un diagnóstico rápido de infecciones parasitarias. Además, la evaluación de la
consistencia y apariencia de las heces puede ofrecer pistas diagnósticas importantes, como
la presencia de moco o sangre.
4. Explicar la utilidad de cada uno de los medios utilizados en el coprocultivo.
R. El agar entérico Hektoen es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento
directo de patógenos entéricos de las heces y para el aislamiento indirecto a partir del caldo
de enriquecimiento selectivo. Los ingredientes selectivos son las sales biliares a
concentraciones que no solo inhiben el crecimiento de las bacterias Gram-positivas, sino
que también inhiben el crecimiento de muchos organismos Gram-negativos que forman
parte de la microbiota intestinal normal. Los ingredientes diferenciales incluyen la lactosa,
la salicina y la sacarosa para determinar los patrones de fermentación, detectados por el
indicador de pH azul de bromotimol y las sales férricas (tiosulfato de sodio, citrato férrico
de amonio) para detectar la producción del gas sulfuro de hidrógeno
Este medio no se debe colocar en autoclave y se debe evitar el sobrecalentamiento. Las
placas con el medio se deben inocular, estriar para aislamiento e incubar aeróbicamente (sin
CO2.) a 35°C por 18 a 24 horas. La mayoria de los no patógenos fermentan uno o ambos
azúcares y las colonias aparecen de color naranja brillante o rosado salmón a causa de la
interacción del pH bajo con los colorantes incorporados. Los no fermentadores, como la
Salmonella y la Shigella spp., tipicamente producen colonias de color verde a verde
azulado. La producción del gas sulfuro de hidrogeno se observa como un precipitado negro
que se acumula dentro de las colonias.

El agar MacConkey es un medio principal, selectivo y diferencial. Se selecciona para

Enterobacteriaccae y otros bacilos Gram-negativos en presencia de una microbiota mixta y
las distingue entre fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Las sales biliares y el
cristal violeta inhiben a la mayoria de los organismos Gram-positivos, pero permiten el
crecimiento de bacilos Gram-negativos. La lactosa sirve como única fuente de carbono. Los
bacilos Gram-negativos que fermentan la lactosa producen colonias rosadas o rojas, que
pueden estar rodeadas por bilis precipitada. La producción de ácido de la fermentación de
la lactosa provoca que el colorante rojo neutro absorbido por las colonias cambie a rojo y
también puede causar que las sales biliares se vuelvan insolubles. Los bacilos Gram-
negativos no fermentadores de lactosa producen colonias transparentes. Las placas se
estrian para el aislamiento y se incuban en aire ambiente, no en una incubadora de CO2, por
18 a 24 horas a 35°C. Los fermentadores de lactosa débiles, lentos o tardios producen
colonias incoloras a las 24 horas o se presentan ligeramente rosadas a las 24 a 48 horas. Las
placas no deben ser incubadas por más de 4% horas debido a que pueden llevar a resultados
confusos.
Algunos bacilos Gram-negativos pueden dejar de crecer en este medio, mientras que, con la
incubación prolongada, las Gram-positivas como Enterococcus spp. pueden producir
colonias diminutas. La incubación a temperatura ambiente puede incrementar la
recuperación de la Yersinia enterocolítica. Se puede aumentar la concentración del agar
para prevenir los enjambres de Proteus spp. Una formulación de MAC sin el cristal violeta
se utiliza para ayudar a identificar a las micobacteras.

El agar Salmonella-Shigella (SS) se utiliza para seleccionar a la Salmonella y algunas

cepas de Shigella de los especimenes de heces. El agar SS también es diferencial en
aquellos organismos que producen colonias características en el medio. El agar SS contiene
sales biliares, citrato de sodio y verde brillante, que inhiben el crecimiento de Gram-
positivos y muchos bacilos Gram-negativos fermentadores de lactosa, que se encuentran
normalmente en las heces. La lactosa es la única fuente de carbohidratos en el medio y el
rojo neutro es el indicador de pH. Si un organismo crece en el medio y fermenta la lactosa,
producirá ácido y cambiará el color del indicador a rosado-rojo. Se agrega tiosulfato de
sodio como fuente de azufre para la producción de H2S.
Si se produce H2S, reacciona con el citrato férico de amonio presente en el medio y forma
un precipitado negro en el centro de la colonia. Un inóculo de heces de gran tamaño puede
sembrarse en placas de agar SS debido a que la formulación es muy inhibitoria, empero, las
cepas de Shigella pueden no crecer en el agar SS y no se debe utilizar este medio como el
único medio sólido en placas cuando el aislado potencial sea Shigella. Las colonias de
Shigella aparecen incoloras en el agar SS debido a que estos organismos no fermentan
lactosa ni producen sulfuro de hidrógeno. Las colonias de Salmonella son incoloras con un
centro de color negro debido a que estos organismos generan H2S de manera usual pero no
fermentan lactosa. Colonias rosadas a rojas indican que el organismo fermenta lactosa, si
tienen un centro negro, también produce H2S. Si crece Proteus en este medio, la formación
de enjambres está inhibida.

El agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD) es principalmente un medio para placas selectivo

y diferencial utilizado para aislar Salmonella y Shigella spp. de las heces y otros
especimenes que contienen biota mixta. Las Salmonella y Shigella spp. producen colonias
características en XLD, lo que ayuda a su reconocimiento. El XLD contiene desoxicolato
de sodio, que inhibe a los cocos Gram-positivos y algunos bacilos Gram-negativos que se
encuentran en la biota normal de las heces. Debido a que el agar XLD tiene una
concentración más baja de sales biliares que otras formulaciones de medios entéricos, como
los agares SS y HE, es menos selectivo, aunque permite una mejor recuperación de las
Shigella. El agar XLD contiene tres carbohidratos fermentables sacarosa y lactosa, que
están presentes en altas concentraciones, y xilosa, que está presente en una concentración
más baja. El rojo fenol sirve como indicador de pH. Se incluye el aminoácido lisina para
detectar la descarboxilación de la lisina. El tiosulfato de sodio actúa como fuente de azufre
a partir del cual los organismos pueden producir sulfuro de hidrógeno. El H2S se combina
con el citrato ferrico de amonio para producir sulfuro ferroso, un precipitado negro.
En el agar XLD se producen cuatro tipos de colonias. Los organismos como la Escherichia
coli producen colonias amarillas que fermentan el exceso de carbohidratos para producir
gran cantidad de ácido y cambiar a amarillo el indicador de pH. Debido a que hay un
exceso de carbohidratos, estos organismos no descarboxilan la lisina, aun cuando poseen
lisina descarboxilasa. Las bacterias que solo fermentan xilosa y no descarboxilan lisina
también producen colonias amarillas. Las colonias amarillas con centros negros son
organismos que fermentan el exceso de carbohidratos y también producen sulfuro de
hidrogeno, como por ejemplo los Citrobacter y algunas Proteus spp. Las Shigella y
Providencia que no fermentan xilosa, lactosa ni sacarosa, y que tampoco producen H2S,
generan colonias incoloras o rojas. Las Salmonella y Edwardsiella producen colonias rojas
con centros negros. Las Salmonella y Edwardsiella fermentan xilosa para generar acido,
produciendo una colonia amarilla, pero debido a que la xilosa esta presente en
concentraciones limitadas y se consume, estos organismos descarboxilarán entonces la
lisina para producir cadaverina, un producto alcalino que hace que las colonias reviertan su
color de negro a rojo. El ennegrecimiento es causado por la producción de H2S. El agar
XLD se debe incubar a 35°C por 24 horas en aire ambiente. Algunos investigadores
recomiendan incubar las placas hasta por 48 horas para aumentar el ennegrecimiento en las
colonias de Salmonella. Cualquier prolongación de la incubación alteraria el delicado
balance de este medio y se volvería más dificil distinguir los patógenos potenciales de la
biota normal. En ocasiones, el medio XLD puede inhibir a la Shigella dysenteriae y la
Shigella flexneri. Algunas cepas de Salmonella pueden fallar en la producción de H2S y por
lo tanto, parecer colonias de Shigella. En este medio, es más probable que ocurra un
ennegrecimiento cuando existen condiciones de alcalinidad.

El caldo selenito es un caldo de enrriquecimiento utilizado para la recuperación de bajos

números de Salmonella y algunas cepas de Shigella de las muestras de heces y otros
especímenes que contengan grandes cantidades de bacterias mixtas. El selenito de sodio,
presente en este medio, inhibe el crecimiento de muchos bacilos Gram-negativos y
enterococos, pero permite la recuperación de Salmonella y algunas especies de Shigella. El
selenito es más efectivo a un pH neutro. La reducción del selenito durante el crecimiento
bacteriano genera un producto alcalino que puede inhibir el crecimiento de las salmonelas y
también reducir la toxicidad del selenio para otros organismos, de manera que la lactosa y
los amortiguadores fosfatos se incluyen en este medio para mantener el pH neutro. Los
fermentadores de lactosa producen ácido que neutraliza estos productos alcalinos y regresa
el medio a pH neutro. Se debe inocular aproximadamente 1 o 2 gramos de heces en el
caldo, que entonces es incubado a 15-32 °C. El caldo debe ser subcultivado a medios
entericos despues de 12 a 18 horas de incubación (algunas referencias sugieren 6 a 12
horas). Mas allá de este lapso de tiempo, es posible un sobrecrecimiento de la biota normal
debido a que los efectos inhibitorios del selenito disminuyen despues de 12 horas. Una
variacion de la formulacion del Caldo selenito incluve la adición de cistina para
incrementar la recuperacion de Salmonella.

5. Explicar la importancia de la etiología y patogenia en el diagnóstico microbiológico

de la EDA.
R. La etiología se refiere a la identificación de los agentes causales de la EDA, como
bacterias, virus, parásitos o toxinas. Conocer el agente etiológico es esencial porque cada
tipo de patógeno puede requerir un enfoque diferente para el tratamiento y la prevención.
Por ejemplo, las infecciones virales como las causadas por rotavirus o norovirus
generalmente no se tratan con antibióticos, mientras que las infecciones bacterianas como
las producidas por Salmonella o Shigella sí pueden requerir tratamiento antibiótico
específico. Además, la identificación etiológica ayuda a rastrear y controlar brotes
epidémicos, implementando medidas de salud pública adecuadas para prevenir la
propagación.
La patogenia se refiere a los mecanismos mediante los cuales los patógenos causan
enfermedad. Comprender la patogenia de los diferentes agentes de EDA permite a los
médicos anticipar las manifestaciones clínicas, la gravedad de la enfermedad y las posibles
complicaciones. Por ejemplo, algunos patógenos como Escherichia coli enterohemorrágica
(EHEC) pueden producir toxinas que causan daño renal severo, mientras que otros como
Vibrio cholerae causan diarrea acuosa masiva debido a la secreción de enterotoxinas.
Conocer estos mecanismos ayuda en la selección de pruebas diagnósticas adecuadas y en la
implementación de terapias específicas y medidas de soporte. También orienta las
estrategias de prevención, como la vacunación contra rotavirus o la mejora de las prácticas
de higiene y saneamiento.
10. CONCLUSIONES
El coprocultivo es una herramienta esencial en el diagnóstico de infecciones
gastrointestinales, permitiendo la identificación de patógenos bacterianos presentes en las
heces. Esta técnica es especialmente relevante en el contexto de enfermedades diarreicas,
donde es crucial determinar el agente etiológico para orientar el tratamiento adecuado y
adoptar medidas de control epidemiológico.
La recolección y manejo adecuado de la muestra son pasos fundamentales para garantizar
la precisión del diagnóstico. El proceso de coprocultivo incluye el cultivo de la muestra en
medios selectivos y diferenciales, lo cual facilita la identificación de bacterias patógenas
como Salmonella, Shigella, Campylobacter y Escherichia coli, entre otras. La
identificación se complementa con pruebas bioquímicas y serológicas, que permiten
confirmar la presencia del patógeno específico. El coprocultivo no solo permite la
detección de patógenos bacterianos, sino que también puede incluir la búsqueda de
parásitos, aunque para estos últimos, generalmente se emplean métodos adicionales como
la PCR. En la práctica clínica, el coprocultivo es especialmente útil en casos de diarrea
aguda, diarrea persistente o crónica, y en situaciones de brotes epidémicos. El coprocultivo
también tiene limitaciones, entre las que se incluyen la necesidad de técnicas
complementarias para la detección de ciertos patógenos y la posibilidad de obtener
resultados falsos negativos si las muestras no se manejan adecuadamente o si los pacientes
han recibido tratamiento antibiótico antes de la recolección de la muestra.
11. BIBLIOGRAFIA
Marín, C., Taboada, A., & Benítez, G. (2015). Indicaciones y valoración clínica del
urocultivo y coprocultivo. Revista del Instituto de Medicina Tropical, 10(1), 37-47.
Trujillo, H. (1996). Coprocultivo y su papel en el diagnóstico de diarrea. Med. lab, 51-8.
Vila, J., Álvarez-Martínez, M. J., Buesa, J., & Castillo, J. (2009). Diagnóstico
microbiológico de las infecciones gastrointestinales. Enfermedades infecciosas y
microbiología clínica, 27(7), 406-411.
Comas, R. B. (2006). Indicaciones y valoración clínica del urocultivo y coprocultivo.
Medicine-Programa de Formación Médica Continuada Acreditado, 9(49), 3222-3229.
Velasco, J., & Longa, A. (2008). Diagnóstico microbiológico de la Enfermedad Diarreica
Aguda (EDA). Coprocultivo. Manual práctico de bacteriología clínica. 1ra ed. Mérida:
Universidad de Los Andes Vicerrectorado Académico, CODEPRE, 103-117.