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Medios de Cultivo Microbiológicos

Este documento describe los pasos para esterilizar materiales de laboratorio y preparar muestras de agar MacConkey y agua peptonada. Explica cómo calcular las cantidades necesarias y los procedimientos para disolver y esterilizar las muestras. Luego resume brevemente las características del agar MacConkey.

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Medios de Cultivo Microbiológicos

Este documento describe los pasos para esterilizar materiales de laboratorio y preparar muestras de agar MacConkey y agua peptonada. Explica cómo calcular las cantidades necesarias y los procedimientos para disolver y esterilizar las muestras. Luego resume brevemente las características del agar MacConkey.

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Agar Descripción Selectivo Diferencial Foto

Contiene sales biliares y cristal violeta,


inhibiendo el crecimiento de bacterias
grampositivas y permitiendo el crecimiento
Agar de bacterias gramnegativas. También
Si
MacConkey contiene lactosa y un indicador de pH para Si
diferenciar entre bacterias fermentadoras y
no fermentadoras de lactosa. (Allen, M. E.
2005).
El agar manitol salado (MSA, por sus
siglas en inglés) es un medio de cultivo
utilizado principalmente para la selección
y diferenciación de estafilococos,
Agar manitol
especialmente Staphylococcus aureus. Este Si Si
salado
medio contiene manitol (un tipo de
azúcar), una alta concentración de sal
(7.5% NaCl), y el indicador de pH rojo
fenol. (Durán Vila, A., 2004).
El agar Chapman TTC, también conocido
como agar sal manitol con cloruro de
trifeniltetrazolio (TTC), es un medio de
cultivo utilizado para la detección y
diferenciación de estafilococos,
Agar Chapman especialmente Staphylococcus aureus. Este
Si Si
TTC medio es una modificación del agar
manitol salado (MSA) y contiene manitol,
una alta concentración de sal (NaCl), y el
indicador de pH rojo fenol, además de
TTC que se utiliza como un indicador
redox. (Bonadonna, L. 2007).
El agar glucosa Sabouraud, también
conocido simplemente como agar
Sabouraud o Sabouraud Dextrose Agar
(SDA), es un medio de cultivo utilizado
Agar glucosa principalmente para el aislamiento y el
Si
Sabouraud crecimiento de hongos y levaduras. Fue No
desarrollado por Raymond Sabouraud y es
particularmente eficaz para el cultivo de
especies de dermatofitos, hongos y algunas
bacterias acidófilas.
El agar base sangre es un medio de cultivo
utilizado para el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos,
especialmente bacterias, en el laboratorio
de microbiología. Este medio es llamado
Agar base
"base" porque puede ser modificado con No Si
sangre
adiciones de sangre y otros suplementos
para diferentes propósitos, como la
diferenciación de microorganismos basada
en su capacidad para hemolizar o digerir la
sangre.
El agar cerebro-corazón, conocido como
Brain Heart Infusion Agar (BHI), es un
medio de cultivo nutritivo utilizado para el
crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos, incluidos bacterias,
Agar cerebro-
hongos y algunos tipos de patógenos no no
corazon
fastidiosos. Este medio es rico en
nutrientes debido a su contenido de
Allen, M. E. (2005). MacConkey agar plates protocols. American Society for Microbiology,
1-4.

Durán Vila, A., Zhurbenko, R., & Viera Oramas, D. R. (2004). Propuesta de una
modificación en la formulación del medio agar manitol salado utilizado en el aislamiento
de estafilococos de importancia clínica. Revista Cubana de Medicina Tropical, 56(3), 172-
177.

Bonadonna, L., Cataldo, C., & Semproni, M. (2007). Comparison of methods and
confirmation tests for the recovery Escherichia coli in water. Desalination, 213(1-3), 18-23.

Método:

6.1 Esterilización de materiales

1. Preparación de materiales

a) Lavar y enjuagar con agua destilada todos los materiales a esterilizar tales como
matraz, tubos, Placas Petri, etc.
b)Secar en el horno los materiales lavados por 15 min.
c) Trozar algodón en pequeñas porciones e introducirlas a las pipetas, tubos de
ensayos, matraces.
d)Envolverlas con gasa y asegurarlas con el pabilo, por último, envolverlas con
papel Kraft.
e) Envolver las placas Petri y los tubos con tapas con papel Kraft por separado.

2. Esterilizar por vía húmeda


a) Con los materiales listos se introdujeron a la autoclave para su esterilización,
este se configuro a 121⁰C por 15 min.
3. Retiro de materiales y secado
a) Después de el tiempo de espera de la autoclave se procedió a retirar el material
b) Los materiales pasaron a la estufa ya que contenían humedad aun presente
c) Ya con el material secado se procedió con la practica

6.2 Cálculo de los gramos necesarios de medio

Para la practica de consideraron medidas para preparar la muestra de Agar Macconkey y de


Agua peptonada

a) Calculo para la preparación del agar MacConkey


Prepararemos en este caso 500 ml de agar, del cual en la etiqueta del agar
MacConkey indica agregar 51,55g en 1000ml de agua destilada, entonces para ello
aplicaremos la siguiente ecuación.

51 ,55( 500)
51 ,55 g−1000 ml x= =25,775 g
1000
x−500 ml

En caso de Agar macconkey se consideró una medida para cada grupo de 12,887g.,
ya que se pesó para dos grupos

b) Calculo para la preparación de agua peptonada


Necesitaremos preparar 400 ml de agua peptonada, del cual en la etiqueta de
peptona indica agregar 25,5g en 1000 ml, de igual forma aplicaremos la anterior
ecuación.

25 ,5 (400)
25 , 5 g−1000 ml x= =10 , 2 g
1000
x−400 ml

Para el agua peptonada el peso fue único por ambos grupos


6.3 Preparación de las muestras

6.3.1. Preparación de agar MacConkey

a) Se utiliza una probeta de 100ml y un matraz Erlenmeyer de 250ml


b) Se mide 250 ml de agua destilada y se pesa 12,8875g de agar MacConkey
deshidratado.
c) Luego verter poco a poco el agar con junto al agua destilada para mezclar
adecuadamente y así la mezcla sea homogénea.
d) Solubilizar la mezcla del agar en el microondas con calor durante 4 min dividido en
4 tiempos, cada 1 min retirar la mezcla y mover constantemente hasta que este se
haya disuelto totalmente.
e) Colocar la mezcla en la autoclave para esterilizar a 121°C por 15 min

6.3.2. Preparación de agua peptonada

a) Se utiliza una probeta de 100ml y un matraz Erlenmeyer de 250ml


b) Se mide en este caso 400 ml de agua destilada y se pesa 10,2 de agua peptona
deshidratada.
c) Luego verter la peptona con junto al agua destilada para mezclar adecuadamente y
así la mezcla sea homogénea.
d) Colocar la solución de agua peptonada conjunto a la mezcla de agar MacConkey en
la autoclave para esterilizar a 121°C por 15 min
e) Finalmente retirar la solución de la autoclave y colocarlo en la refrigeradora para
previo uso de análisis.

Resultados:

el agar macconkey se puso en el autoclave y

Como primera parte se tuvo que esterilizar materiales como matraz, tubos de ensayo y
placas pertri que utilizaríamos, esto con el fin de mantener nuestras muestras libres de
una contaminación cruzada, además de tener resultados que sean precisos.

Después de tomo en cuenta las medidas de Agar Macconkey y el Agua Peptonada que
se iban a utilizar para la práctica, la practica se dividió en dos grupos sobre el Agar
macconey se tomó una única medida por grupo, y de la el agua peptonada se tomó una
sola medida para ambos grupos, a continuación, las medidas a considerar

Agar MacConkey Agua peptonada

51,55g 1000ml 25,5g 1000ml


25,775g 500ml 10,2g 400ml

Con la medida de muestra extraída de Aga macconkey y Agua peptonada

1. Agar MacConkey

 Descripción: Contiene sales biliares y cristal violeta, inhibiendo el


crecimiento de bacterias grampositivas y permitiendo el crecimiento de
bacterias gramnegativas. También contiene lactosa y un indicador de pH
para diferenciar entre bacterias fermentadoras y no fermentadoras de
lactosa.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: Sí

2. Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)

 Descripción: Contiene eosina y azul de metileno para inhibir el crecimiento


de bacterias grampositivas y permitir el crecimiento de bacterias
gramnegativas. También contiene lactosa y un indicador de pH para
diferenciar entre bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: Sí

3. Agar Salmonella-Shigella (SS)

 Descripción: Contiene sales biliares y fucsina básica para inhibir el


crecimiento de bacterias grampositivas y permitir el crecimiento de
Salmonella y Shigella. También contiene lactosa y un indicador de pH para
diferenciar entre bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: Sí

4. Agar CLED (Cystine Lactose Electrolyte Deficient)

 Descripción: Contiene lactosa y sales inorgánicas. Es un medio de cultivo


urinario que permite el crecimiento de bacterias urinarias mientras inhibe la
formación de cristales.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

5. Agar Sabouraud

 Descripción: Contiene peptona y glucosa, utilizado para el cultivo de


hongos y levaduras.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

6. Agar TCBS (Tiosulfato Citrato Sales Biliares Sacarosa)

 Descripción: Contiene sales biliares y sacarosa, selectivo para Vibrio


cholerae y diferencial para la fermentación de sacarosa.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: Sí

7. Agar Chapman

 Descripción: Contiene sales de mannitol y fucsina básica para inhibir el


crecimiento de organismos no estafilococos. Utilizado para el recuento de
Staphylococcus aureus en alimentos.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: No

8. Agar Mueller-Hinton
 Descripción: Contiene peptona, almidón y fosfatos para el cultivo de una
amplia variedad de microorganismos. Es utilizado principalmente para
realizar pruebas de sensibilidad a los antibióticos.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

9. Agar Lowenstein-Jensen

 Descripción: Contiene huevo y malta, utilizado para el cultivo de


Mycobacterium tuberculosis.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

10. Agar Rogosa

 Descripción: Contiene peptona y extracto de levadura, utilizado para el


cultivo de bacterias lácticas, especialmente Lactobacillus spp.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

11. Agar Middlebrook

 Descripción: Contiene suero bovino, glicerol y malta, utilizado para el


cultivo de micobacterias.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

12. Agar Pseudomonas (Pseudomonas Agar F)

 Descripción: Contiene cetrimida y fucsina básica, selectivo para


Pseudomonas spp.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: No

13. Agar Rappaport-Vassiliadis (RV)

 Descripción: Contiene magnesio y sales de citrato, selectivo para


Salmonella spp.
 Selectivo: Sí

 Diferencial: No

14. Agar XLD (Xylose Lysine Desoxycholate)

 Descripción: Contiene xilosa, lisina y desoxicolato, selectivo para


Salmonella y Shigella.

 Selectivo: Sí

 Diferencial: Sí

15. Agar BHI (Brain Heart Infusion)

 Descripción: Contiene extracto de cerebro y corazón de ternera, utilizado


como medio general de cultivo para una amplia variedad de
microorganismos.

 Selectivo: No

 Diferencial: No

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