Práctica 1: Identificación de aminoácidos

Monica Gisella Cupitre Mojica 1

1
programa de Química, Facultad de Ciencias, Universidad de la amazonia, Florencia, Caquetá

Resumen
Palabras clave

Aminoácidos, muestras y colores.

Abstract
In the laboratory, various chemical tests were performed with substances including distilled
water, wheat flour, rictilla, albumin, alanine, phenylalanine and tyrosine. The results showed that
ninhydrin produced a purple color in most of the samples. In the Xanthoprotein and [Link]
assays, most of the samples changed to yellow and pink, respectively. In addition, Hopkins cole,
lead acetate and Ehlrich reactions were carried out with specific combinations of amino acids,
generating various colors such as yellow, red, brown, black, orange and Vinotinto. These tests
made it possible to identify the presence of different amino acids in the samples analyzed.

Key words

Amino acids, simples and colors.

Introducción

Se realizaron diversas reacciones para detectar aminoácidos en muestras diferentes. Cada

reacción tiene un propósito de identificación cualitativa especifico. Hopkins-Coles se utiliza para
triptófano, manifestándose con un color amarillo o rojizo en caso positivo. El acetato de plomo
alcalino cuantifica cisteína y metionina, con un cambio de color a negro o marrón si están
presentes. Ehlrich identifica anillos fenólicos como tirosina e histidina en color naranja o
vinotinto (Eleazar Barboza-Corona et al., 2016). La ninhidrina forma complejos azules o
violentas con aminoácidos. Millón genera un color rojo o rosa para detectar tirosina, y por
último Xantoproteico detecta tirosina, fenilamina y triptófano mediante nitroderivados amarillos
o narajas (H. Robert Horton, 2008).

Los aminoácidos son las unidades básicas de la proteína, con un grupo amino (NH2) en un
extremo y un grupo carboxilo (COOH) en el otro. Se unen mediante enlaces peptídicos,
liberando agua en el proceso. Los péptidos, formados por dos o más aminoácidos, tienen
diversas funciones biológicas, como participar en el metabolismo, regular la presión osmótica,
transmitir señales nerviosas, sintetizar proteínas y contribuir al desarrollo corporal. Además de
los péptidos, existen polipéptidos (más de diez aminoácidos) y oligopéptidos (diez o menos
aminoácidos) (Martínez Augustin y E. Martínez de Victoria Muñoz, 2006).

Esta investigación busca avanzar en el análisis de aminoácidos en hojas de té. Se desarrollo un

método que utiliza infusiones de té, intercambio iónico SPE y HPLC quiral CHIOROBIOTICT
para analizar 11 pares de aminoácidos. Se utilizaron 19 hojas de té, destacando él te oscuro por
influencia microbiana. Se observo un aumento en la concentración de aminoácidos en forma D
y las proporciones S/L con el tiempo, variando según el tipo de aminoácidos. Esto demuestra
la evolución continua de la ciencia en el estudio de componentes en alimentos como el té (Xu et
al., 2020).

Según lo mencionado previamente, la práctica se lleva a cabo con el propósito de adquirir

conocimientos sobre la hidrólisis de triglicéridos. Se extraen triglicéridos de huevo cocido con el
fin de cuantificar lípidos totales.

Metodología

Ensayo con ninhidrina

Se rotulo cinco tubos de ensayo y se introdujo en cada uno una muestra distinta: agua destilada
(blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb) y alanina (Ala). Luego, se añidio 1
mL de ninhidrina a cada tubo y se calentaron en un baño maría durante 10 minutos. Por último,
se observaron los colores resultantes para cada tubo de ensayo.

Ensayo de [Link]
Se etiquetaron seis tubos de ensayo y se colocó una muestra diferente en cada uno: agua destilada
(blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb), fenilalanina (Phe) y tirosina (Tyr).
Luego, se agregó 1 mL de [Link] a cada tubo y se calentaron en un baño maría durante 10
minutos. Para concluir, se observaron los colores resultantes en cada tubo de ensayo.

Ensayo de Xantoprotéico
Se rotulo seis tubos de ensayo y se introdujo en cada tubo una muestra diferente: agua destilada
(Blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb), fenilalanina (Phe) y tirosina (Tyr).
Posteriormente, se añadió 1 mL de NHO 3 (concentrado) a cada tubo y se procedió a calentar en
un baño maría, hasta la aparición de un color amarillo en los tubos. Se dejo enfriar y se agregó
1mL de NaOH 40%. Finalmente, se observó los colores resultantes para cada tubo de ensayo.

Reacción de Hopkins Cole

Se rotulo seis tubos de ensayo y se introdujo en cada tubo una muestra diferente: agua destilada
(Blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb), cisteína (Cis) y tirosina (Tyr).
Posteriormente, se añadió 1 mL de Hopkins-Cole a cada tubo, se procedió a mezclar y se agregó
0,5 mL HNO3 (concentrado). Finalmente, se observó los resultados de colores y un anillo en los
tubos de ensayo.

Reacción con acetato de plomo alcalino

Se rotulo seis tubos de ensayo y se introdujo en cada tubo una muestra diferente: agua destilada
(Blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb), cisteína (Cis) y metionina (Met).
Posteriormente, se añadió 1 mL de NaOH a cada tubo, luego se agregó 1 mL acetato de plomo,
se llevó a calentar en un baño maría 5 min. Finalmente, se observó los colores resultantes para
cada tubo de ensayo.

Reacción Ehrlich
Se etiquetaron seis tubos de ensayo y se colocó una muestra diferente en cada uno: agua destilada
(Blanco), harina de trigo (HT), ricostilla (R), albumina (Alb), cisteína (Cis) y tirosina (Tyr). Luego,
se agregaron 1 mL de NH 4OH y 1 mL de NANO3 a cada tubo, se mezclaron y se dejaron reposar
durante 10 minutos. Después, se añadió 1 mL de C6H7NO3S. Por último, se observó los colores
resultantes en cada tubo de ensayo.
Resultados y discusión
Tabla 1, Indicando si la prueba es positiva (color) o negativa (X) según sea el caso.
Aminoácidos Proteínas

Prueba Tirosin Fenilalanin Alanin Metionin HT Cisteín Albumin Ricostill

a a a a a a a

Ninhidrina

Millón

Xantoprotei
ca

Ehlrich

Hopkins
Cole

Acetato de
plomo
alcalino

Ecuación 1.
Ecuación 1, la primera parte representa como el aminoácido se oxida resultando su
descarboxilación y la liberación de amoniaco. Al mismo tiempo, una de las moléculas de
ninhidrina se reduce y se convierte en hidrindantina. La segunda parte la hidrindantina forma
otra molécula de ninhidrina, reaccionando con el amoniaco formando un complejo de color
purpura (Tecnología Médica ULat.,2020).

Figura 1. Resultados obtenidos para el ensayo con ninhidrina

En la figura 1 se presenta los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio para el ensayo
con ninhidrina. Donde podemos observar que tubo formó el complejo de color purpura,
arrojado un resultado positivo para ricostilla, albumina y alanina. El blanco quedo translucido y
la harina de trigo lechosa, se le atribuye a su alto contenido de almidón.
Ecuación 2.

Ecuación 2, determina grupos fenólicos, lo que indica que la prueba R,Millon da positivo a
estructuras similares, un ejemplo, la tirosina. En la primera etapa de la reacción hay una nitración
del anillo fenólico reaccionando con el acido nítrico. La tirosina nitrada reacciona con los iones
de Hg(I) y Hg (II) del reactivo, dando lugar a la formación de un precipitado de color rojo o una
solución de tono rosado (Gallegos Tintoré, 2017).

Figura 2. Resultados obtenidos para el ensayo de [Link]

En la figura 2 se presenta los resultados obtenidos en la practica de laboratorio para el ensayo

[Link]. Donde podemos observar que tubo tiene la solución de color rosa, arrojando un
resultado positivo para presencia de grupos fenólicos en Tirosina, Harina de trigo y Albumina.
La fenilalanina dio una apariencia lechosa esto se debe a la falta de calentamiento según la
literatura (Gallegos Tintoré, 2017), y el blanco se observa translucido dando negativo para
presencia de aminoácidos.

Ecuación 3.
Ecuación 3, la reacción de xantoproteico lleva a la nitración del anillo bencénico al reaccionar
con el acido nítrico. Al ser positiva la presencia de anillos aromáticos derivados del benceno, se
observa la formación de un complejo amarillo (Gallegos Tintoré, 2017).

Figura 3. Resultados obtenidos para la reacción de Xantoproteico

En la figura 3, se presenta los resultados obtenidos en la practica de laboratorio para la reacción
de Xantoproteico. La formación del complejo amarillo se observó en la mayoría de los tubos
analizados, a excepción del tubo de agua (blanco). La reacción de Xantoproteico da positivo para
las siguientes muestras, tirosina, la fenilalanina (baja concentración), harina de trigo, la albumina
y la ricostilla. La ausencia de formación de complejo amarillos en el blanco da a conocer lo
especifica que es la reacción no generando falsos positivos. Además, la baja presencia en la
muestra de fenilalanina indica la sensibilidad de la prueba, que permite identificar trazas de la
sustancia en la muestra.
Ecuación 4

Ecuación 4, la reacción de Hopkins Cole es una prueba exclusiva para el grupo indol presente
en el triptófano. En esta prueba, el anillo del triptófano reacciona con el acido glioxílico en
presencia del ácido sulfúrico concentrado, lo que forma un compuesto de color rojo intenso
(Gallegos Tintoré, 2017).

Figura 4. Resultados obtenidos para la reacción de Hopkins Cole

En la figura 4, se presenta los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio para la reacción

de Hopkins Cole. La formación del complejo rojo solo se observó en un tubo que corresponde
a la tirosina. Los tubos Harina de trigo y Albumina formaron un complejo amarillo, que podría
indicar una reacción inusual por las condiciones experimentales. Es importante tener presente
que las reacciones se ven afectadas por reactivos, temperatura, y en el laboratorio utilizamos
ácido nítrico HNO3, remplazando al H2SO4.
Ecuación 5.

𝑹 − 𝑺𝑯 + 𝟐𝑵𝒂𝑶𝑯 → 𝑹 − 𝑶𝑯 + 𝑵𝒂𝟐𝑺 + 𝑯𝟐𝑶

𝑵𝒂𝟐𝑺 + (𝑪𝑯𝟑 − 𝑪𝑶𝑶)𝟐 𝑷𝒃 → 𝟐 𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑵𝒂 + 𝑷𝒃𝑺 (𝒑𝒓𝒐𝒅𝒖𝒄𝒕𝒐)

Ecuación 5, la reacción con acetato de plomo alcalino se dirige a los aminoácidos que contiene
azufre en su estructura. En la reacción, el grupo sulfhídrico presente en la cisteína se somete a
una hidrolisis alcalina, lo que resulta en la formación de sulfuro de sodio. El plomo relacionado
con el sodio lleva a la formación de sulfuro de plomo, observando un precipitado de color gris
o negro (Gallegos Tintoré, 2017).

Figura 5. Resultados obtenidos para la reacción con acetato de plomo alcalino

En la figura 5, se presenta los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio para la reacción

con acetato de plomo alcalino. La formación del precipitado gris o negro dio positivo para
Harina de trigo, Albumina y cisteína. El tubo de ricostilla mostro un tono café, lo que sugiere
que el color podría haber sido por la naturaleza de la muestra. Por último, para la metionina, su
tono amarillo podría deberse por falta temperatura o posibles impurezas en la muestra.
Ecuación 6.
Ecuación 6, La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados se puede detectar
utilizando la reacción de Ehrlich con acido sulfanilico y nitrito de sodio, ya que esta reacción
conduce a la formación de sales de diazonio altamente coloreados. De esta manera, se puede
identificar la presencia de tirosina e Histidina (Barrera et al., 2017).

Figura 6. Resultados obtenidos para la reacción Ehrlich

En la figura 6, los resultados de la practica de laboratorio para la reacción de Ehrlich indican que
se obtuvo un resultado positivo, es decir, se observó la formación de sales de diazonio altamente
coloreadas. Esto ocurrió en presencia de Tirosina, Harina de trigo, Albumina, Cisteína y
Ricostilla, lo que sugiere la presencia de aminoácidos que contienen anillos fenólicos o
nitrogenados. Sin embargo, no se observó ninguna reacción en el blanco utilizado como control.

Los resultados se encuentran detallados en la tabla1, donde se evidencia la presencia de distintos

aminoácidos en las proteínas utilizadas, identificados mediante diversas reacciones de
laboratorio. En particular, se destaca que la muestra de albumina exhibe una mayor
concentración de aminoácidos como: (Alanina, tirosina, fenilalanina, cisteína, metionina), HT
(Alanina, tirosina, fenilamina, metionina) y Ricostilla: Alanina, fenilalanina, cisteína, metionina.

Conclusiones

Las seis reacciones empleadas en este laboratorio demuestran se altamente eficientes en la

identificación de aminoácidos en las muestras analizadas. Esta capacidad de determinar
aminoácidos es de gran importancia, ya que se identificación nos permite deducir la composición
y función de las proteínas estudiadas. De esta manera cumpliendo los objetivos de la practica al
identificar aminoácidos que presentan grupos característicos, como anillos fenólicos anillos
aromáticos o nitrogenados, lo que contribuye a nuestro conocimiento sobre estas biomoléculas.

Cuestionario
1: Indique según los resultados de la tabla ¿Qué aminoácidos están presentes en la albumina de
huevo y el caldo de ricostilla?

➢ Albumina: Alanina, tirosina, fenilalanina, cisteína, metionina.

➢ Ricostilla: Alanina, fenilalanina, cisteína, metionina.

2: Cuando el tetra péptido GLU-ASP-VAL-LYS, se somete a un campo eléctrico, ¿Hacia cuál

electrodo migrará y por qué?

➢ Como sabemos las cargas opuestas se atraen, en un campo eléctrico, La GLU-ASP

migrara al electrodo positivo (ánodo), debido Asus carga neta positiva.
➢ La LYS migrara hacia el electrodo negativo (Cátodo), debido a su cagar neta positiva.

La VAL, al no tener carga, no tendrá una respuesta al campo eléctrico.

3: Clasifique los AA según la polaridad de sus grupos –R y dibuje sus estructuras.

(Carlos Trujillo, 2017)

 ➢ Rojo: Apolares, Verde: Polares sin carga,
Morado: Ácidos, Azul marino: Básicos

4: Escriba la rección de formación de un enlace peptídico.

(Wilkipedia , 2023)

5: Cuál es la relación que existe entre la polaridad de una proteína y sus aminoácidos
constitutivos.

La relación que existe entre la polaridad de una proteína está definida mayoritariamente por la
naturaleza de sus aminoácidos, es decir, grupos funcionales y secuencia AA. Estos influyen en
cómo se pliegan, el comportamiento de la proteína en su entorno e interacciones.

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