ELECTROFORESIS

INTRODUCCIÓN A LA ELECTROFORESIS

La electroforesis es una técnica fundamental en biología molecular y bioquímica que

se utiliza para separar moléculas como ácidos nucleicos (ADN y ARN) y proteínas en
función de su tamaño y carga eléctrica.

PRINCIPIOS DE LA ELECTROFORESIS

 Migración de moléculas cargadas eléctricamente a través de un medio poroso

(como un gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.
 Migración de moléculas cargadas eléctricamente a través de un medio poroso
(como un gel) bajo la influencia de un campo eléctrico.
 Las moléculas con carga negativa migran hacia el polo positivo (ánodo),
mientras que las moléculas con carga positiva migran hacia el polo negativo
(cátodo).
 Las moléculas más pequeñas migran más rápido que las más grandes a través
de los poros del gel, lo que permite separarlas por tamaño.
 Para proteínas, se les confiere carga negativa con el detergente SDS para que
todas migren hacia el ánodo y se separen únicamente por tamaño.
 Los ácidos nucleicos (ADN y ARN) tienen carga negativa natural y migran
hacia el ánodo durante la electroforesis.
 Los elementos clave son: una cámara con electrodos, una fuente de
alimentación eléctrica, un gel, tampones y las muestras a separar.

TIPOS DE ELECTROFORESIS

1. Electroforesis en acetato de celulosa: Utiliza papel como soporte y permite la

separación rápida de proteínas.
2. Electroforesis en gel de agarosa: Emplea gel de agarosa como soporte y se
usa para separar moléculas de gran tamaño, como ácidos nucleicos.
3. Electroforesis en gel de poliacrilamida: Utiliza gel de poliacrilamida como
soporte, considerado uno de los mejores, pero con la desventaja de ser
neurotóxico.
4. Electroforesis capilar: Se realiza en un tubo de sílice fundida y requiere un
dispositivo para detectar la migración de moléculas.
5. Isoelectroenfoque: Separa moléculas por un gradiente de pH, aumentando la
resolución de la técnica.
6. Electroforesis bidimensional: Combina isoelectroenfoque y electroforesis en gel
para una separación más precisa de moléculas.

APLICACIONES DE LA ELECTROFORESIS

Abarcan diversos campos y técnicas especializadas.

1. Electroforesis en el diagnóstico clínico: Se utiliza para analizar suero, orina

y LCR, permitiendo la detección de proteínas y la identificación de
componentes monoclonales en gammopatías.
 2. Proteómica bacteriana: La electroforesis en 2D se emplea en proteómica
bacteriana para el análisis de muestras y la separación de proteínas según su
movilidad y naturaleza.
3. Análisis de ácidos nucleicos y proteínas: La electroforesis se utiliza en
biología molecular, bioquímica y proteómica para separar y analizar ácidos
nucleicos y proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica.
4. Estudio de células sanguíneas, esperma y tejidos: La electroforesis se
aplica en el estudio de células sanguíneas de humanos y animales, esperma,
tejidos animales, levaduras, entre otros, permitiendo analizar la frecuencia de
ruptura del ADN y la migración de moléculas hacia el ánodo.
5. Investigación genética y proteómica: La electroforesis en gel de agarosa,
electroforesis de campo pulsado, electroforesis en gel con gradiente de
desnaturalización, electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS y
electroforesis bidimensional son técnicas comunes utilizadas en la
investigación genética y proteómica para separar y analizar biomoléculas.

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

La preparación adecuada de las muestras es crucial para obtener resultados

confiables en la electroforesis. Algunos pasos importantes en la preparación de
muestras incluyen:
Ácidos nucleicos (ADN y ARN)
1. Extracción y purificación: Extraer y purificar los ácidos nucleicos de la muestra,
eliminando contaminantes como proteínas y sales.
2. Cuantificación: Determinar la concentración de los ácidos nucleicos mediante
espectrofotometría u otros métodos.
3. Desnaturalización: Desnaturalizar las muestras de ADN o ARN, por ejemplo,
mediante calor o tratamiento con formamida, para asegurar una migración
uniforme.
Proteínas
1. Extracción y solubilización: Extraer las proteínas de la muestra y solubilizarlas
en un tampón adecuado.
2. Desnaturalización: Desnaturalizar las proteínas con agentes como el SDS, que
les confiere carga negativa uniforme.
3. Reducción de puentes disulfuro: Romper los puentes disulfuro entre cisteínas
mediante agentes reductores como el β-mercaptoetanol.
4. Cuantificación: Determinar la concentración de proteínas en la muestra, por
ejemplo, mediante el método de Bradford.
Consideraciones generales
 Mantener la integridad de las muestras: Evitar la degradación de ácidos
nucleicos y proteínas durante la preparación.
 Eliminar contaminantes: Remover sales, detergentes, lípidos u otros
compuestos que puedan interferir con la electroforesis.
 Ajustar la carga: Asegurar que las muestras tengan la carga adecuada para
migrar hacia el electrodo correspondiente.
 Controlar la concentración: Ajustar la concentración de las muestras para
obtener una separación óptima.

Una preparación cuidadosa de las muestras es fundamental para obtener resultados

confiables y reproducibles en la electroforesis.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
El procedimiento experimental para la electroforesis en gel de agarosa incluye los
siguientes pasos:
1. Preparación del gel: Preparar el gel de agarosa en el soporte, siguiendo las
instrucciones del kit de electroforesis EDVO-Kit n° 101.
2. Preparación de las muestras: Colocar cada muestra en un pocillo
consecutivo, asegurándose de que estén bien distribuidas y no sobrepasen el
nivel del gel.
3. Inserción del gel en la cámara de electroforesis: Sumerjar el gel en el
tampón dentro de la cámara de electroforesis, asegurándose de que esté bien
sujeto.
4. Conexión de la fuente de corriente: Conectar el enchufe con la fuente de
corriente y realizar la electroforesis.
5. Análisis del gel: Analizar el gel después de la electroforesis utilizando un
transiluminador de luz blanca.
6. Visualización del gel: Transferir el gel para la visualización, que puede incluir
técnicas como la tinción con bromuro de etidio o la detección de fluorescencia.
7. Interpretación de los resultados: Interpretar los resultados, incluyendo la
separación de las moléculas según su tamaño y carga eléctrica, y compararlos
con las hipótesis iniciales.

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Análisis de resultados:

1. Migración de las muestras: Observar la migración de las muestras a lo largo

del gel durante la electroforesis.
2. Comparación de bandas: Identificar y comparar las bandas formadas por las
muestras en función de su posición y densidad en el gel.
3. Patrones de bandeo: Observar patrones de bandeo que pueden indicar la
presencia de diferentes moléculas o variantes.
4. Tamaño de las moléculas: Determinar el tamaño relativo de las moléculas
separadas en base a su migración en el gel.
Interpretación de resultados:
1. Identificación de muestras: Asociar las bandas con las muestras originales
para identificar las moléculas presentes.
2. Comparación con estándares: Comparar las bandas de las muestras con
patrones de tamaño conocido para estimar el tamaño de las moléculas.
3. Anomalías o resultados inesperados: Investigar y explicar cualquier
anomalía en la migración de las muestras, como bandas adicionales o
ausencia de bandas.
4. Conclusiones científicas: Extraer conclusiones científicas sobre la
composición y características de las muestras analizadas.
Documentación y presentación:
1. Registro de resultados: Registrar los resultados de manera precisa y
detallada, incluyendo condiciones de electroforesis, muestras utilizadas y
observaciones relevantes.
2. Elaboración de gráficos: Crear gráficos o representaciones visuales de los
resultados para una presentación clara y concisa.
3. Informe o presentación: Preparar un informe o presentación que resuma los
resultados, interpretaciones y conclusiones obtenidas.
CONSIDERACIONES ÉTICAS Y DE SEGURIDAD

Consideraciones éticas:

1. Responsabilidad profesional: Los laboratorios y profesionales deben

mantener la reputación de la profesión y actuar bajo la responsabilidad de
personal debidamente calificado.
2. Atención centrada en el paciente: Los laboratorios deben ofrecer sus
servicios de manera eficiente y capaz, con plena conciencia de su
responsabilidad profesional hacia los pacientes.
3. Cumplimiento normativo: Los laboratorios no deben realizar prácticas reñidas
con la ley y deben seguir los códigos de ética establecidos.

Consideraciones de seguridad:

1. Manipulación de sustancias peligrosas: La manipulación del bromuro de

etidio, un agente mutagénico, requiere precauciones especiales para evitar la
exposición por inhalación, contacto con la piel y los ojos.
2. Procedimientos adecuados: Es importante contar con procedimientos
estandarizados y equipos de protección personal apropiados para la
manipulación segura de sustancias químicas en la electroforesis.
3. Infraestructura adecuada: La presencia de campanas de extracción
localizadas y otros controles de ingeniería son cruciales para minimizar la
exposición a agentes químicos peligrosos.
4. Capacitación del personal: El personal debe estar debidamente capacitado
en las buenas prácticas de laboratorio y las medidas de seguridad relacionadas
con la electroforesis.

PREGUNTAS

¿Qué elemento es fundamental en la electroforesis para separar moléculas en

función de su tamaño y carga eléctrica?

A) Gel ✔

B) Papel

C) Agua

D) Plástico

E) Vidrio

¿Hacia qué polo migran las moléculas con carga negativa durante la
electroforesis?

A) Dependiendo del tamaño

B) No migran

C) Cátodo
D) Ánodo ✔

E) Neutro

¿Qué tipo de electroforesis utiliza gel de agarosa como soporte para separar
moléculas de gran tamaño?

A) Electroforesis en acetato de celulosa

B) Electroforesis en gel de agarosa ✔

C) Electroforesis capilar

D) Isoelectroenfoque

E) Electroforesis en gel de poliacrilamida

¿Qué técnica de electroforesis se emplea para separar moléculas por un

gradiente de pH?

A) Electroforesis capilar

B) Electroforesis en gel de agarosa

C) Electroforesis en gel de poliacrilamida

D) Electroforesis en acetato de celulosa

E) Isoelectroenfoque ✔

¿En qué tipo de electroforesis se utiliza tubos de sílice fundida para detectar la
migración de moléculas?

A) Electroforesis en gel de agarosa

B) Electroforesis en acetato de celulosa

C) Electroforesis en gel de poliacrilamida

D) Isoelectroenfoque

E) Electroforesis capilar ✔

¿En qué aplicación de la electroforesis se analiza suero, orina y LCR para

detectar proteínas y componentes monoclonales en gammopatías?

A) Proteómica bacteriana

B) Análisis de ácidos nucleicos

C) Diagnóstico clínico ✔
D) Estudio de células sanguíneas

E) Migración de moléculas

¿Cuáles son los tipos de electroforesis?

1. Electroforesis en acetato de celulosa

2. Electroforesis en gel de agarosa
3. Electroforesis en gel de poliacrilamida
4. Electroforesis capilar
5. Isoelectroenfoque
6. Electroforesis bidimensional

¿Qué es la electroforesis?

Es una técnica fundamental en biología molecular y bioquímica que se utiliza para

separar moléculas como ácidos nucleicos (ADN y ARN) y proteínas en función de su
tamaño y carga eléctrica.

¿Mencione alguna de las aplicaciones que tiene la electroforesis?

Electroforesis en el diagnostico clínico, investigación genética y proteómica.

¿Por qué es importante registrar los resultados de manera precisa y detallada en

la electroforesis en gel de agarosa?

Registrar los resultados de manera precisa y detallada es fundamental para

documentar el experimento, facilitar la interpretación de los resultados y garantizar la
integridad científica de la investigación.