ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE

CHIMBORAZO FACULTAD: CIENCIAS

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA
GUÍA DE LABORATORIO DE
TOXICOLOGÍA
PARALELO: B

PRÁCTICA No. 1- DETERMINACIÓN DE DOSIS LETAL MEDIA POR MEDIO DE

BIOENSAYOS SOBRE LOMBRICES DE TIERRA Lumbricus terrestris

1. DATOS GENERALES:

DOCENTE: Dra. Elizabeth Escudero Vilema, Mgs.

NOMBRE: estudiante(s) CÓDIGO(S): de estudiante(s)

● Katheryn Damián 3633
● Grace Guamán 3486
● Montserrat Merino 3862
● Cesar Ortiz 3833
● Lis Peñafiel 3892

GRUPO No.: ………….

NIVEL: OCTAVO PARALELO: “ B “

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2023-11-10 2023-11-17
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentración letal media (DL50) del CLORPILAQ 48 en muestras de
laboratorio por medio de bioensayos sobre lombrices de tierra Lumbricus terrestris.
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Determinar la sensibilidad de lombrices de tierra Lumbricus terrestris mediante el
bioensayo de DL50.
● Determinar la dosis letal DL50 de una muestra de laboratorio biológica utilizando
como reactivo analítico el CLORILAQ 48.
● Determinar la cantidad de reactivo necesaria para producir letalidad por gramo de la
lombriz.
● Determinar el efecto tóxico potencial del reactivo analítico CLORILAQ 48 dentro de
su aplicación en la industria y producción
3. MARCO TEÓRICO
Los pesticidas organofosforados constituyen el grupo de agroquímicos más utilizados
a nivel mundial, dentro de los organismos terrestres empleados para la evaluación de
la toxicidad de sustancias químicas, las lombrices de tierra han sido adoptadas por la
comunidad científica internacional como organismos centinelas, ya que son una
importante biota del suelo que puede mejorar la estructura del mismo (Cortesía et al,
2015).
La lombriz de tierra, Lumbricus terrestris vive aproximadamente 4 años, es
hermafrodita y en comparación con otras lombrices es poco prolífica, generalmente se
encuentra en terrenos con humedad de 40 a 45% y una temperatura entre 10 a 12°C,
su población es afectada por prácticas agrícolas como labranzas, rotación, retención
de rastrojos, uso de plaguicidas, entre otros. Clorpilat 45 Se trata de un insecticida
agrícola con ingrediente activo chlorpyrifos 480 g/l, perteneciente al grupo de los
organofosforados.
Actúa afectando el sistema nervioso de los insectos por inhibición de la enzima
acetilcolinesterasa, lo que provoca la muerte del insecto por sobreestimulación
colinérgica. Su uso se limita a cultivos de maíz, soya y cebolla, los cuales tienen
plagas como Gusano Cogollero, Falso medidor y Trips, respectivamente. Para ello, se
tiene que preparar una emulsión y agitar bien hasta obtener una solución homogénea
(Agripac, 2020).
Dosis Letal 50 (DL50)
 La prueba de DL50 se introdujo por primera vez en 1927 y sirve para estimar la dosis
de una sustancia de prueba que produce el 50% de muerte en una población de
animales de prueba a los que se administra por cualquiera de los métodos oral,
dérmico, inhalación o intravenoso. Generalmente, es la primera prueba que se realiza
para sustancias químicas antes de las demás pruebas de toxicidad. La determinación
de esta prueba examina la relación entre la dosis y la respuesta extremas como la
muerte. Cuanto más potente sea el químico, menor será la DL50 y menor la dosis
necesaria para causar la muerte (Noga et al, 2023).
Bioensayos de toxicidad
Los bioensayos con lombrices son reconocidos como prueba para evaluar la toxicidad
en suelos contaminados. Según Martínez-Morcillo et al. (2019), la mayoría de los
datos toxicológicos provienen de ensayos de laboratorio controlados que involucran
productos químicos individuales y poblaciones pequeñas de organismos de prueba. En
los bioensayos de toxicidad se intenta simular lo que sucedería en una gran población
observando 30 individuos o más por exposición o tratamiento. Dependiendo del
tiempo al cual sean expuestos los organismos de prueba los ensayos de toxicidad
pueden ser agudos o crónicos.Como cualquier instrumento analítico, necesitan ser
calibrados frente a una solución patrón de referencia, que constituye a la sustancia
orgánica o inorgánica utilizada en las pruebas de toxicidad con fines de control de
calidad analítica de los organismos a utilizar (Castañedo et al, 2019).

4. INSTRUCCIONES
4.1 MATERIALES
EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS
Contenedor plástico Erlenmeyer 250-500 ml Agua destilada
Termómetro Pipeta de 10 ml
Balanza analítica Atomizador
Tela Varilla de agitación
Cinta adhesiva Ligas elásticas
Guantes
Mascarilla

5. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR

 5.1 PROCEDIMIENTO

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
6.1 CONCENTRACIÓN MADRE (SIN DILUIR) / CAJA 1

CONCENTRACIÓN

 C = 480 𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°1
Se observan lombrices de coloración ladrillo-oscuro en la parte
OBSERVACIONES central de su estructura anatómica y en cada extremo una
PRE-ENSAYO coloración más clara. Su comportamiento es normal, presenta
movimientos recurrentes de tipo peristáltico
 Ilustración 1: lombrices
Concentración: 480𝒈/𝑳
Muertes: 6
Durante los primeros 3 minutos, se observan movimientos
continuos y bruscos por parte de las 4 lombrices, estos se
OBSERVACIONES detienen bruscamente a los 8-9 minutos confirmando su
POST - ENSAYO muerte. A finalizar el tiempo se observan a todas las lombrices
en estado de intoxicación terminal, estos, presentan una
coloración blanquecina en su contextura, una textura blanda y
deformidad
en ciertas partes de su estructura externa.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.2 DILUCIÓN 1 / CAJA 2

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN

 C1 = 480 𝑔/𝐿 𝐶1 × 𝑉 1 = 𝐶2 ×
 V1 = 𝐼𝑚𝑙 𝑉2
 C2 = x
𝐶2 =
𝐶1 × 𝑉 1
⁄𝑉
 V2 = 10𝑚𝑙 2
480 𝑔/𝐿 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 48 𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°2
Su comportamiento es un poco diferente a la caja anterior debido a la
OBSERVACIONES inquietud que se presenta en este frasco, presenta movimientos recurrentes
PRE-ENSAYO e intensos de tipo peristáltico y su contextura es proporcional a su longitud
en las 4 lombrices.
 Ilustración 2: lombrices

Concentración: 𝟒𝟖 𝒈/𝑳
Muertes: 6
Durante los primeros 8 minutos, se observan movimientos continuos y
bruscos por parte de las 6 lombrices, estos se detienen paulatinamente a
OBSERVACIONES los 9-11 minutos confirmando su deceso debido al nulo movimiento. Se
POST - ENSAYO observan a todas las lombrices en estado de intoxicación terminal como en
la primera dilución.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.3 DILUCIÓN 2 / CAJA 3

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN

 C1 = 48𝑔/𝑚𝑙 𝐶1 × 𝑉 1 = 𝐶2 ×
 V1 = 𝐼𝑚𝑙 𝑉2
 C2 = x 𝐶 × 𝑉1
𝐶2 = 1 ⁄𝑉
 V2 = 10𝑚𝑙 2
48 𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 4,8 𝑔/𝐿
RESULTADO
Tabla N°3
La coloración es similar a sus anteriores cajas. Su
OBSERVACIONES comportamiento es normal, presenta movimientos recurrentes
PRE-ENSAYO de tipo peristáltico y su contextura es proporcional a su
longitud.

Ilustración 3: lombrices
 Concentración: 𝟒, 𝟖 𝒈/𝑳
Muertes: 1
Estos no presentan una coloración blanquecina en su
contextura, sino que se caracterizan por verse más anchas, con
OBSERVACIONES más contextura, igualmente se presenta la textura blanda y se
POST - ENSAYO observa claramente su estructura externa.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.4 DILUCIÓN 3 / CAJA 4

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN 48

 C1 = 4,8 𝑔/𝐿 𝐶1 × 𝑉 1 = 𝐶2 × 𝑉 2
 V1 = 𝐼𝑚𝑙 𝐶 ×
𝐶2 = 1
 C2 = x 2
𝑉1
 V2 = 10𝑚𝑙 ⁄𝑉
4,8 𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.48𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°4
Su comportamiento es normal, presenta movimientos
OBSERVACIONES recurrentes de tipo peristáltico y su contextura es proporcional
PRE-ENSAYO a su longitud en las 4 lombrices.

Ilustración 4: lombrices
Concentración: 𝟎. 𝟒𝟖 𝒈/𝑳
Muertes: 0
Durante los primeros minutos, se observan movimientos
continuos y bruscos por parte de las 6 lombrices, estos se
OBSERVACIONES detienen lentamente hasta llegar a los 14 minutos
POST - ENSAYO aproximadamente donde a pesar de no tener mucho
movimiento siguen vivas.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.5 DILUCIÓN 4/ CAJA 5

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN
  C1 = 0.48 g/L
 V1 = 1 mL
 C2 =?
 V2 = 10 mL
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
𝐶 × 𝑉1
𝐶2 = 1 ⁄ 2
0.48 𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄ 𝑉
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.048 𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°5
Las 6 lombrices presentan movimientos peristálticos,
OBSERVACIONES contextura y longitud normal.
PRE-ENSAYO

Ilustración 5: lombrices𝑔
Concentración: 0.048
𝐿
Muertes: 0
Al momento de colocar las 6 lombrices no se observaron
cambios en su morfología ni en su comportamiento. Después
OBSERVACIONES de transcurrir 16-17 minutos se pudo evidenciar movimientos
POST - ENSAYO repentinos, no hubo muertes.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.6 DILUCIÓN 5/ CAJA 6

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN
 C1 = 0.048 g/L
 V1 = 1 mL
 C2 =?
 V2 = 10 Ml
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
𝐶 × 𝑉1
𝐶2 = 1 ⁄𝑉
2
 0.048 𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.0048 𝑔/𝐿
RESULTADO
Tabla N°6
Su coloración es rojiza en el centro y presenta colores más
OBSERVACIONES claros. Presenta movimientos peristálticos, contextura y
PRE-ENSAYO longitud proporcional.

Ilustración 6: lombrices 𝑔
Concentración: = 0.0048
𝐿
Muertes: 0
No se observan cambios al momento de que las lombrices
entran en contacto con la sustancia toxica, sin embargo, al
OBSERVACIONES pasar 20 minutos se evidenció cierto cambio en el
POST - ENSAYO comportamiento, tampoco se evidencio muertes.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.7 DILUCIÓN 6 / CAJA 7

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN
 C1 = 0.0048 g/L
 V1 = 1 mL
 C2 =?
 V2 = 10 mL
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
𝐶 × 𝑉1 2
𝐶2 = 1 ⁄𝑉
0.0048𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄10𝑚𝑙
𝐶2 = = 0.00048𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°7
 Las lombrices presentan un tamaño homogéneo en esta caja.
OBSERVACIONES Su color es igual a las cajas anteriores, de color rojizo y en sus
PRE-ENSAYO extremos presenta un color más claro.

Ilustración 7: lombrices
𝑔
Concentración: = 0.00048
𝐿
Muertes: 0
Al ser esta solución más diluida, las lombrices no sufrieron
OBSERVACIONES cambios en su comportamiento ni en su color y forma. Al paso
POST - ENSAYO de 30 minutos no se evidencio ninguna muerte.

Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.8 DILUCIÓN 7/CAJA 8

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN
 C1 = 0.00048 g/L
 V1 = 1 mL
 C2 =?
 V2 = 10 mL
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
𝐶 × 𝑉1
𝐶2 = 1 ⁄ 2
0.00048𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄ 𝑉
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.000048𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°8
Las lombrices presentan un tamaño homogéneo en esta caja.
OBSERVACIONES Su color es igual a las cajas anteriores, de color rojizo y en sus
PRE-ENSAYO extremos presenta un color más claro.
 Ilustración 8: lombrices 𝑔
Concentración: = 0.000048
𝐿
Muertes: 0
No se observó muertes en esta caja al paso de 30 minutos, su
OBSERVACIONES color y forma fueron la misma que al inicio.
POST - ENSAYO

Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.9 DILUCIÓN 8 / CAJA 9

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN


C1 = 0.000048𝑔/𝐿 𝐶1 × 𝑉 1 = 𝐶2 × 𝑉 2

V1 = 𝐼𝑚𝑙 𝐶 ×
 𝐶2 = 1
C2 = x 2
𝑉1

V2 = 10𝑚𝑙 ⁄𝑉
0.000048𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.0000048𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°9
Su comportamiento es normal, presenta movimientos
OBSERVACIONES recurrentes de tipo peristáltico y su contextura es proporcional
PRE-ENSAYO a su longitud en las 4 lombrices.
 Ilustración 9: lombrices
Concentración:0.0000048 𝒈/𝑳
Muertes: 0
Una vez llegado a los 30 minutos y con movimientos lentos
por parte de las lombrices se llega a un conteo de 6 lombrices
OBSERVACIONES vivas es decir ninguna murió. En estas se observan una
POST - ENSAYO coloración
ladrillo-claro muy similar a su color inicial, sin otros cambios
perceptibles a simple vista.
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.10 DILUCIÓN 9 / CAJA 10

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN


C1 = 0.0000048𝑔/𝐿 𝐶1 × 𝑉 1 = 𝐶2 × 𝑉 2

V1 = 𝐼𝑚𝑙 𝐶 × 𝑉1
 𝐶2 = 1 ⁄𝑉
C2 = x 2

V2 = 10𝑚𝑙 0.0000048𝑔/𝑚𝑙 × 𝐼𝑚𝑙⁄
𝐶2 = 10𝑚𝑙 = 0.00000048𝑔/𝐿

RESULTADO
Tabla N°10
Su comportamiento es normal, presenta movimientos
OBSERVACIONES recurrentes de tipo peristáltico y su contextura es proporcional
PRE-ENSAYO a su longitud en las 4 lombrices.
 Ilustración 10: lombrices
Concentración: 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟎𝟎𝟒𝟖 𝒈/𝑳
Muertes: 0
Al llegar a los 30 minutos y con movimientos lentos por parte
de las lombrices se llega a un conteo de 4 lombrices vivas es
OBSERVACIONES decir ninguna murió.
POST - ENSAYO
Fuente: Damián, Guamán, Merino, Peñafiel, Ortiz de la Cátedra de Toxicología. (2023)

6.11 Gráfica: Concentración vs Letalidad

Nú mero de muertes
 Lombrices
Lombrices % de Dosis
muertas %de
N° de caja Dosis Unidades Logarítmic Probit (30 m
letalidad superviven
utilizadas 30 min a
cia
1 480 g/L 6 6 100 0 2,6812412
2 48 g/L 6 6 100 0 1,6812412

3 4,8 g/L 6 1 16,667 83,33 0,6812412

4,03257843

4 0,48 g/L 6 0 0 100 -0,3187588

5 0,048 g/L 6 0 0 100 -1,3187588

6 0,0048 g/L 6 0 0 100 -2,3187588

7 0,00048 g/L 6 0 0 100 -3,3187588

8 0,000048 g/L 6 0 0 100 -4,3187588

9 0,0000048 g/L 6 0 0 100 -5,3187588

10 0,00000048 g/L 6 0 0 100 -6,3187588

DETERMINACIÓN DL50_ MÉTODO LOGARÍTMICO:30 min

% de Supervivencia
 Ensayo de Toxicidad aguda 30 min
140

y = -10,202x + 59,778
120
% de Supervivencia R² = 0,551
100

80

60

40

20

-8 -6 -4 -2 0 2 4
Dosis g/L en escala logarítmica

Dl50_30 min (y-b/m)

DL50_30min (50-59,778) /-10,202
DL50_30min 0,9584

Dl50_ transformada 9,08739742 g/L

6.12 DISCUSIÓN

Se realizaron nueve diluciones seriadas para poder disminuir la toxicidad de Clorpilaq 48 y

evidenciar el efecto que causan en las lombrices (6 lombrices por caja) al exponerlas a
diferentes concentraciones, se evidencio que en la primera caja al tener el insecticida sin
disolución la mitad de las lombrices mueren a los 3 minutos, mientras que a los 5 minutos no
se evidencia ninguna viva, en la segunda caja con disolución 1/10 transcurridas los 30
minutos todas han muerto y en las siguientes disoluciones aún están vivas pero poseen
movimientos lentos esto debido a que el Clorpilaq 48 posee como principio activo al
clorpirifos, insecticida organofosforado que causa parálisis, convulsiones, desmayos,
debilidad muscular y muerte. (ASTDR, 2016)

Según (Jeyaprakasam, Muniyandi, James, Karmegam , & Ponnuchamy, 2020) nos menciona
se observaron anomalías morfológicas como levantar el cuerpo, enrollarse y rizarse en todos
los individuos expuestos a las concentraciones más altas durante 24 y 48 h, después de 24 h
de exposición, los gusanos murieron en concentraciones de 0,75 y 1,0 ml y después de 48 h
de exposición, los gusanos murieron en todas las concentraciones excepto 0,1 ml, lo que se
pudo
reiterar al identificar que la mayor parte de las lombrices se murieron en las placas que tenían
mayor concentración.

7. CONCLUSIONES
- Se determinó que la sensibilidad de las lombrices mediante el bioensayo DL50
frente al insecticida depende de la concentración del mismo y del tiempo, ya que en
concentraciones más bajas (4.8 x10 -4 g/mL a 4.8x10 -8 g/mL) las lombrices
presentaron resistencia hasta los 30 min; mientras que en las concentraciones 0.48
g/mL y 4.8x10 - 2 fueron bastantes sensibles.
- Se determinó que la dosis letal DL50 del insecticida CLORPILAQ fue de 0.48 g/mL y
4.8x10 -2 g/mL provocando una muerte casi instantánea de las lombrices.
- Se determinó que la cantidad necesaria de reactivo para producir letalidad por gramo
de lombriz fue de 1mL tomando en cuenta también las concentraciones que fueron
de 0,48 y 4.8x10 -2 g/mL.
- Se determinó que al tratarse dicho reactivo de un organofosforado puede ser
altamente tóxico como insecticida, de tal manera que afecta el sistema nervioso de los
insectos por inhibición de la enzima acetilcolinesterasa, con la subsecuente
acumulación del neurotransmisor acetilcolina, lo que provoca la muerte del insecto
por sobreestimulación colinérgica.

8. RECOMENDACIONES

- Leer la etiqueta del envase del insecticida agrícola Clorpilaq para tomar
las medidas preventivas correspondientes.
- Manipular de manera adecuada los gusanos y pesticidas.
- Emplear equipo de protección personal para evitar riesgo de
exposición directa.
- Para el diseño experimental, seleccionar lombrices de tierra en buen
estado, para garantizar resultados fiables

9. CUESTIONARIO
¿Cuál es la variabilidad de muestra que puede presentarse dentro de las lombrices de
tierra?
Las lombrices como muestra, pueden presentar diferente tamaño, edad, coloración y peso,
que pueden influir en el cálculo de la DL50, también presentarse variabilidad por el tiempo
de vida de la lombriz, la duración de la exposición, la cantidad de concentración frente a la
exposición. Además, poseen variabilidad genotípica, evidenciándose en el comportamiento,
desarrollo, siendo la causa principal la calidad del suelo, el ambiente, y la alimentación, entre
varios ejemplos tenemos:

Tabla N° 11
Tipos de Lombrices y su variabilidad
Tipo de Lombriz Descripción Imagen
Lumbricus terrestris Conocida como lombriz de
tierra común, es una especie
grande y robusta que se
encuentra en muchas partes
de Europa, América del
Norte y otras regiones. Es
conocida por sus habilidades
de excavación y su
importancia en la mejora de
la estructura del suelo.
Eisenia fetida Conocida como lombriz roja
de California o lombriz roja
manzana, es una especie
pequeña y prolífica. Se
utiliza ampliamente en el
vermicompostaje debido a
su capacidad para
descomponer rápidamente
materiales orgánicos y
producir un
humus rico en nutrientes.
 Lumbricus rubellus Se encuentra en muchas
partes de Europa y América
del Norte. Es más pequeña
que la Lumbricus terrestris y
se caracteriza por su color
rojizo o marrón claro.
Aporrectodea caliginosa Conocida como lombriz de
tierra de noche o lombriz
gris, es una especie muy
común en muchas áreas del
mundo. Tiene una forma
más delgada y se encuentra
tanto en hábitats naturales
como en
áreas cultivadas.
Octolasion lacteum Se caracteriza por su color
blanco lechoso y es
conocida por su papel en la
formación de bioturbación,
que ayuda a mejorar la
estructura del
suelo.
Fuente: (Fragoso, 2014).

¿Por qué es importante el uso de tela para cubrir el contenedor?

Los ensayos biológicos son herramientas de diagnóstico adecuadas para determinar el efecto
de agentes físicos y químicos sobre organismos de prueba bajo condiciones experimentales
específicas, para ello se debe considerar que el efecto tóxico sobre los sistemas biológicos es
ejercido por la acción combinada de todas las sustancias nocivas presentes en el medio,
incluso aquellas que no son tóxicas pero afectan a las propiedades químicas o físicas del
sistema (Romero et al, 2008), en el caso de las lombrices de tierra Lumbricus terrestres
carece de ojos y oídos, pero tiene en la epidermis, receptores sensitivos y luminosos,
sensibles al tacto, al sonido, a las vibraciones y a la luz, de tal manera, la exposición
prolongada a estos estímulos las mata (Arias, 1995).
Según nuestro criterio, el uso de tela es importante porque estamos trabajando con reactivos y
dosis letales, por lo que se requiere medir la mortalidad de las lombrices, se generan muertes
progresivas de las lombrices y los cambios cada vez más evidentes a medida que aumenta la
concentración del pesticida, además, cuando se cubre con una tela, evitamos que las
lombrices salgan del frasco.

¿Existen efectos adicionales del reactivo analítico aparte de la letalidad. ?

El clorpirifos es uno de los insecticidas organofosforados más utilizados, con actividad
anticolinesterasa no sistémica con acción de contacto, estomacal y respiratorio (Testai et al,
2010). Según Wesselin et al (2006) la exposición prolongada a clorpirifos se asocia a varios
efectos en la salud, entre los efectos que se presentan están:
● Inhalación: Tos, falta de respiración, ahogo, diarrea, vómito, debilidad.
● A nivel neurológico: ansiedad, convulsiones, hipertermia rectal, hipertonía.
● En el hígado: enzimas hepáticas alteradas.
● En el sistema renal: oliguria, anuria, hematuria.
● Edema pulmonar no cardiogénico: Acidosis metabólica.
Adicionalmente, los síntomas dependen de la cantidad y duración de la exposición, respirar o
ingerir clorpirifos puede producir una variedad de efectos sobre el sistema nervioso, desde
dolores de cabeza, visión borrosa, y salivación hasta convulsiones, coma y la muerte. Puede
ser muy irritante si se queda en la piel o los ojos. El desarrollo de efectos respiratorios es más
probable en trabajadores que usan grandes cantidades de productos con glifosato por mucho
tiempo, produciendo a largo plazo cáncer.

¿Cuál es la concentración mínima del reactivo que tiene el efecto letal?

Se evidenció en la práctica realizada, que la concentración mínima letal del reactivo en el que
se determinó un efecto letal a la concentración de 4,8 g/L E-03, que corresponde a la tercera
caja o placa Petri, misma que cuando transcurriendo los 30 minutos se observó que tan solo
una lombriz había muerto, mientras que las demás estaban un poco somnolientas, con
movimientos lentos, cabe mencionar que, en las concentraciones inferiores no se presentó
letalidad, es decir, ninguna otra lombriz murió.

Ilustración N°11
Tercera caja o placa Petri
Fuente: Damian, K; Guaman, G; Merino, M; Ortiz, C; Peñafiel, L. (2023).

Según la revisión bibliográfica la concentración mínima del reactivo que tiene el efecto letal
es de 216 g/L. Por otra parte, según Rao (2023), la letalidad se debe a la inhibición de la
actividad de la acetilcolinesterasa provocando neurotoxicidad y cambios morfológicos como
constricción e hinchazón.

10. BIBLIOGRAFÍAS
1) ATSDR. (2016). Resúmenes de Salud Pública - Clorpirifos (Chlorpyrifos).
Obtenido de ATSDR en Español:
https://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs84.html#:~:text=El%20clorpirifos%2
0es%20 un%20insecticida,collares%20antipulgas%20para%20animales
%20dom%C3
%A9stic os.
2) Agripac. (2020). Ficha técnica de plaguicida Clorpilaq 48. Recuperado de:
https://agripac.com.ec/wp-content/uploads/2021/02/CLORPILAQ-48_FT-
Rev.-04.pdf
3) Castañedo, Z., Águila, E., Marrero, O., Meneses-Marcel, A., Sifontes,
S., Seijo, M., & Santana, A. (2019). Bioensayo de toxicidad aguda en
tres biomodelos utilizando.
4) Compuestos de referencia . Revista de Toxicología, 36(2),128-133. ISSN:
0212-7113. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?
id=91967023007
5) Cortesía, C., Marcano, L., Marcano, E. & Zapata-Vívenes, E. (2015).
INMUNOTOXICIDAD DE MALATIÓN Y CLORPIRIFOS EN LA
LOMBRIZ DE TIERRA Eisenia sp. (ANNELIDA: OLIGOCHAETA).
Saber, 27(4), 530-536. Recuperado de: http://ve.scielo.org/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1315- 01622015000400003&lng=es&tlng=es
6) Fragoso, C. (2014). Biodiversidad de lombrices de tierra (Annelida:
Oligochaeta: Crassiclitellata) en México. Revista Mexicana de
Biodiversidad, 197-207. doi: 10.7550/rmb.33581
7) Martínez S, Rodríguez L, Míguez P, Soler F, Pérez M. Desarrollo del ensayo
de toxicidad estandarizado OECD nº 207 en lombriz de tierra expuesta al
pesticida. Revista de Toxicología. 2019; 36(2): p. 106-110. 7) Martínez-
Morcillo, S., Testón, J. R., Santiyán, M. M., Soler, F., & Pérez-López, M.
(2019). Desarrollo del ensayo de toxicidad estandarizado OECD nº 207 en
lombriz de tierra expuesta al pesticida organofosforado Dimetoato. Revista
de Toxicología, 36(2), 106-110. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/journal/919/91967023003/html/
8) Noga, M., Michalska, A., & Jurowski, K. (2023). Application of toxicology
in silico methods for prediction of acute toxicity (LD50) for Novichoks.
Archives of toxicology, 97(6), 1691–1700. https://doi.org/10.1007/s00204-
023-03507-2
9) Rao, J. (2003). Efectos tóxicos del clorpirifos sobre la morfología y la
actividad de la acetilcolinesterasa en la lombriz de tierra, Eisenia
foetida. Ecotoxicología y Seguridad Ambiental (296-301). Obtenido de
https://doi.org/10.1016/S0147-6513(02)00013-1
10) Testai, E., Buratti, F. M., & Di Consiglio, E. (2010). Chlorpyrifos. In Hayes'
Handbook of Pesticide Toxicology (pp. 1505-1526). Academic Press.
11)Wesseling, C., Aragón, A., Rojas, M., Blanco, L., López, L., Soto, A., &
López, I. (2006). Efectos del clorpirifos en la salud de trabajadores
bananeros de La Lima, Honduras.
11) ASTDR. (6 de Mayo de 2016). Resúmenes de Salud Pública - Clorpirifos
(Chlorpyrifos). Obtenido de
https://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs84.html#:~:text=La%20exposici%C3
%B3n%20oral%20de%20corta,%2C%20convulsiones%2C%20desmayos%20 y
%20muerte.
12) Jeyaprakasam, A., Muniyandi, B., James, A., Karmegam , N., & Ponnuchamy,
K. (2020). Evaluación de la diversidad de lombrices y toxicidad de pesticidas
en Eudrilus Eugeniae. Quimica Ambiental y Ecotoxicología, 23-30.
doi:https://doi.org/10.1016/j.enceco.2020.11.001