Universidad Nacional Agraria La Molina

INFORME N°01

TINCIÓN SIMPLE

ASIGNATURA: Microbiología General

DOCENTE: Roberto Ramos Chaupin

ESTUDIANTES:

● 20180095- Arteaga Chacón Linda Rosemery

● 20181200 - Jacinto Chavez Anais Briggit
● 20221274- Salazar Allccaco, Sofía Patricia
● 20200149 - Salvatierra Montes Andrea Soar

MESA N°: 2

LIMA-PERÚ
2024
 I. INTRODUCCIÓN

La microbiología es una disciplina científica que se ocupa del estudio de los

microorganismos, entidades biológicas pequeñas que requieren de técnicas especializadas
para su observación y análisis. La importancia de estos organismos es vasta, abarcando
desde roles ecológicos esenciales hasta aplicaciones en la salud, la industria y la
investigación científica. Dada la naturaleza invisible de estos seres al ojo humano, la
microbiología depende de métodos como la microscopía y la tinción para visualizar y
estudiar las características físicas y biológicas de los microorganismos (García, 2022).

La tinción es una técnica primordial en el estudio de la microbiología que facilita la

observación de microorganismos bajo el microscopio. Este método mejora el contraste entre
los microorganismos y su entorno, permitiendo la identificación de sus formas, tamaños y
estructuras de agrupación. Estos datos son cruciales para la clasificación y el estudio más
detallado de los microorganismos, proporcionando una base para entender su biología y su
interacción con el entorno (López & Hernández, 2023).

Las prácticas de laboratorio son componentes clave del aprendizaje, ofreciendo una
oportunidad para aplicar conceptos teóricos en un contexto práctico y desarrollar
habilidades técnicas esenciales. La realización de técnicas de tinción es una introducción
fundamental a la microbiología experimental y una herramienta valiosa para el desarrollo
profesional futuro (Martínez, 2021).

Con estos antecedentes, el objetivo de nuestra práctica se centró en explorar las diversas
formas, tamaños y agrupaciones de los microorganismos mediante un método simple de
tinción. Este enfoque no solo refuerza la comprensión de los principios microbiológicos, sino
que también mejora las competencias prácticas necesarias para el manejo de técnicas
microbiológicas en el laboratorio, preparando a los estudiantes para futuras investigaciones
y aplicaciones en el campo.
II. MARCO TEÓRICO

1. La Microbiología y su Importancia

La microbiología, el estudio sistemático de los organismos microscópicos y su

interacción con otros seres vivos y el ambiente, es un pilar fundamental en la
comprensión de procesos biológicos esenciales. Esta ciencia trasciende la simple
identificación y clasificación de microorganismos; se adentra en el análisis de su
funcionamiento genético, metabólico y ecológico. Su aplicación es crucial en la
industria alimentaria, en la producción de antibióticos, en la depuración de aguas
residuales y en el diseño de estrategias de biorremediación. En el campo médico, la
microbiología ofrece herramientas indispensables para el diagnóstico, tratamiento y
prevención de enfermedades infecciosas, resaltando la relevancia de una detección
rápida y precisa de patógenos (García, 2022; López, 2023).

2. Preparación de Muestras Fijas

La preparación de muestras para análisis microbiológico comienza con la fijación, un

paso crítico que conserva la morfología celular. La elección entre fijación química o
térmica depende de la naturaleza de la muestra y los objetivos del estudio. Mientras
que la fijación térmica es adecuada para muestras que serán observadas mediante
microscopía óptica, la fijación química es preferible para preparaciones que
requieren una resolución más alta, como en la microscopía electrónica de
transmisión, donde se busca preservar ultraestructuras celulares con un alto grado
de detalle. La elección correcta de la técnica de fijación es crucial para evitar
artefactos que podrían llevar a interpretaciones erróneas de la estructura y la función
celular (Martínez et al., 2023; Hernández & Rodríguez, 2024).

3. Técnicas de Tinción

La tinción microbiana es una herramienta indispensable en microbiología,

permitiendo la observación y diferenciación de células y estructuras celulares bajo el
microscopio (Gómez & Martínez, 2024). Entre las diversas técnicas de tinción
disponibles, la tinción simple destaca por su simplicidad y utilidad en la observación
de la morfología celular.

Tinción Simple y sus Colorantes Básicos

La tinción simple implica el uso de colorantes básicos para resaltar las
características morfológicas de los microorganismos sin clasificarlos
específicamente por su composición bioquímica. Los colorantes básicos más
comúnmente utilizados en la tinción simple incluyen:

Cristal Violeta: Es un colorante de color púrpura intenso que se une a las estructuras
celulares, como la pared celular de las bacterias, resaltando su morfología general.
El cristal violeta es particularmente útil para la observación de bacterias
grampositivas, ya que estas retienen el colorante durante el proceso de tinción (Díaz
& Pérez, 2023).
 Fucsina: También conocida como fucsina básica, es un colorante rojo que se utiliza
para teñir microorganismos ácido-alcohol resistentes, como Mycobacterium
tuberculosis, que no se tiñen fácilmente con otros colorantes. La fucsina penetra la
pared celular y se mantiene incluso después del lavado con alcohol, lo que permite
su visualización (González & Ramírez, 2021).

Azul de Metileno: Este colorante de tono azul se utiliza comúnmente como contraste
en la tinción simple. Aunque no se adhiere selectivamente a estructuras celulares
específicas, ayuda a resaltar la morfología general de las células y a mejorar el
contraste bajo el microscopio (Hernández & Gutiérrez, 2022).

Estos colorantes básicos se aplican a las muestras microbianas, seguidos de un

proceso de lavado para eliminar el exceso de colorante y luego se observan bajo el
microscopio óptico. La tinción simple es una técnica rápida y sencilla que
proporciona información preliminar sobre la morfología y el arreglo celular, sirviendo
como punto de partida para técnicas de tinción más avanzadas (González &
Ramírez, 2021).

4. Observación de Formas, Tamaños y Agrupaciones

El estudio morfológico de bacterias a través de la microscopía y la tinción revela la

diversidad y complejidad del mundo microbiano. La morfología bacteriana,
incluyendo la forma, el tamaño y las agrupaciones, es más que una característica
taxonómica; refleja adaptaciones evolutivas a nichos ecológicos específicos,
estrategias de supervivencia y mecanismos de patogenicidad. Las variaciones en la
morfología y la agrupación pueden indicar cambios en el entorno o en el estado
fisiológico de las bacterias, tales como la respuesta a estrés o la entrada en estados
de dormancia. Esta información es invaluable en la interpretación de cultivos clínicos
y ambientales, así como en el diseño de intervenciones terapéuticas y medidas de
control (Pérez, 2019; García, 2022).

III. MATERIALES Y MÉTODOS

1. Preparación de una muestra fija de bacterias para tinción
a) Materiales
 - Muestra contenido de bacterias

Fig. 1. Muestras de Staphylococcus sp, Bacillus sp

(La otra muestra utilizada fue E. coli)
- Asa de kolle
- Lámina portaobjetos
- Mechero de alcohol
- Piseta con agua destilada
b) Procedimiento
- Se desengrasó la lámina portaobjetos con un algodón con
alcohol.
- Se colocó una pequeña gota de agua destilada con la piseta.
- Se encendió el mechero, para trabajar en un ambiente
esterilizado.
- Con ayuda del asa de kolle, previamente esterilizada, se
extrajo una porción muy pequeña de la muestra y se distribuyó
correctamente en la lámina.
- Se secó la lámina a una distancia razonable sobre la llama del
mechero (con cuidado de no quemar la muestra).

2. Tinción simple con colorantes básicos

a) Materiales
- Láminas fijadas de microorganismos
- Aceite de inmersión
- Colorantes básicos
 Fig. 2. Azul de metileno y cristal violeta
(También se utilizó el colorante fucsina)
- Papel secante
- Piseta de agua
- Soporte para tinción
b) Procedimiento
Es importante resaltar que cada colorante tiene un tiempo de
actividad. El colorante, azul de metileno, requiere de 60 segundos
para hacerse efectiva la coloración. El cristal violeta, 10 segundos; y
la fucsina, cuyo efecto es más rápido, tan solo 5 segundos.
- Se vertió suficiente colorante para cubrir la muestra fijada y se
esperó el tiempo correspondiente.
- Se lavó el exceso de tinte con agua destilada.
- Se dejó secar al aire o cerca del mechero para un resultado
más rápido.
- Al estar seco, se añadió el aceite de inmersión para su
correcta visualización en el microscopio.
IV. RESULTADOS

Cuadro N° 1. Tinción simple de bacterias con aleatoriedad de colorantes básicos .

Muestra Descripción

G.A. =1000X
Forma: Cocos
Agrupación: Racimos
Género:
Staphylococcus sp
Colorante: Cristal
violeta

A.

G.A. =1000X
Forma: Alargada,
bacilada
Agrupación: En
cadena
Género: Bacillus sp
Colorante: Azul de
metileno

B.

G.A. =1000X
Forma: Cocobacilo
Agrupación: -
Género: E. coli
Colorante: Fucsina

C.

V. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Según Corrales y Caycedo (2020).Los colorantes básicos son los más usados en
bacteriología, debido a que las bacterias, ricas en ácidos nucleicos, portan cargas
negativas en forma de grupos fosfato, los que se combinan con los colorantes
cargados positivamente. Dentro de éstos los más empleados son: tionina, azul de
toluidina, azul de metileno, fucsina, cristal violeta, violeta de genciana, verde metilo,
safranina y verde de malaquita

El cuadro 1 muestra resultados del método de tinción simple, de tres

microorganismos (bacterias) del género: Staphylococcus sp, Bacillus sp, E.coli, los
cuales fueron teñidos con un solo colorante basico cristal violeta,azul de metileno y
fucsina respectivamente de manera aleatoria para las dos primeras muestras.
Según González et al. (2020) Teñir microorganismos supone una reacción de
intercambio de iones de colorante a lugares activos de la superficie o interior de las
estructuras de la célula, lo cual permite contrastar mucho más el microorganismo
con respecto al medio que le rodea.
En la muestra A del genero Staphylococcus sp , se observaron forma de cocos
agrupados en racimos por lo cual se le denominó como estafilococos, asimismo
durante el proceso de tinción, el colorante cristal violeta requirió 10 segundos para
teñir su muestra debido a su reactividad.El cristal violeta corresponde al nombre
común asignado a un tipo de colorantes en los que se encuentra una mezcla de N-
tetra, N-penta y N-hexametil p-rosanilinas. Específicamente, el reactivo usado para
la prueba de Gram corresponde al derivado que tiene 6 sustituciones metílicas.
(Corrales y Caycedo, 2020). En esta práctica solo se utilizó con la finalidad de
diferenciar su forma , tamaño y agrupación del microorganismo.

Asimismo en la muestra B de Bacillus sp , se observaron bacilos con forma alargada

u abastonada, con una agrupación en cadenas denominado estreptobacilos, para
identificar estas características en la muestra se utilizó el colorante el azul de
metileno y junto a una correcta fijación previa ,se logró observar con nitidez todas las
características mencionadas.EI azul de metileno es un buen colorante simple que
actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan
intenso que oscurezca los detalles celulares. Esta coloración simple permite
observar la morfología celular, tamaño y agrupación de los microorganismos.
(Monteagudo et al,2021).

En la muestra C de E. coli , se realizó la tinción simple con colorante fucsina y se

observó en forma de cocobacilos ,sin agrupación ,donde todas las estructura se
tiñeron de una misma tonalidad..La bacteria E. coli tiene una carga negativa
conferida por el citoplasma y los ácidos nucleicos, mientras que la fucsina tiene una
carga básica (catiónica); por lo tanto, por atracción electrostática se atraen.(Corrales
y Caycedo, 2020).

Es muy importante que las técnicas de tinción sean llevadas a cabo adecuadamente,
ya que constituyen el primer paso para el estudio bacteriológico, dando paso a otras
pruebas más. Sin una adecuada tinción no existirá un buen diagnóstico, además son
muchos los factores que pueden alterar los resultados obtenidos entre ellos:la
pureza del colorante el pH ,la temperatura,limpieza de materiales y cantidad de
muestra, entre otros(González et al, 2020).Para esta tinción simple se realizó dos
 repeticiones para cada muestra debido a que se cometió errores al momento de
preparar la muestra o durante la tinción, por lo cual se espera mejorar en las
siguientes prácticas de laboratorio.

VI. CONCLUSIONES
1. La tinción simple nos permite conocer las diversas estructuras que pueden
tener las células de los microorganismos, en la práctica realizada se pudieron
observar diferentes tipos de formas, tamaños y agrupaciones.
2. Trabajar una tinción simple requiere de ciertos protocolos, en la práctica
aprendimos acerca de métodos de esterilización como el uso del mechero o
sobre el tiempo necesario para que los colorantes actuen sobre la muestra.
3. El uso del aceite de inmersión es de suma importancia para poder visualizar
correctamente las muestras a un aumento mucho mayor (1000X) debido a
que aporta una mayor claridad de la imagen.

VII. CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las asociaciones más frecuentes en bacterias?
Agrupaciones microscópicas:
Con agrupaciones microscópicas nos referimos a aquellas donde se puede
observar la tendencia de los grupos bacterianos a asociar sus células entre
sí. Entre ellas podemos tener:
- Diplococos
- Tétradas
- Estafilococos
- Sarcinas
- Estreptobacilos
- Diplobacilos

2. ¿En qué rango de tamaños se definen las bacterias?

Las bacterias son uno de los organismos de menor tamaño existentes en la
naturaleza, por lo que se mide en micrometros(μm) y en el caso de que sean
más pequeñas se mide en nanometros(nm)

3. ¿Cuáles son las formas bacterianas más frecuentes?

De forma general, las formas bacterianas son clasificadas en 4 tipos:
- Cocos
- Bacilos
- Espirilos
- Espiroquetas
Los cocos pueden variar ligeramente su forma en ovalada o esférica, a su
vez, se puede encontrar en pares, individuales o en un grupo más grande.
Por otro lado, en el caso de los bacilos, estos pueden ser totalmente rectos o
un poco curvados.

4. ¿Qué diferencia a una tinción directa de una tinción negativa?

Con tinción directa nos referimos a una coloración que se da sobre los tejidos
y células de los microorganismos, lo cual revela la afinidad que hay entre el
colorante usado con estas estructuras. Caso contrario pasa con la tinción
 negativa, donde se usan compuestos que no van a penetrar en las células,
sino en el medio, además se usa una solución nigrosina lo cual hará que los
microorganismos se puedan observar en un fondo oscuro.

5. ¿Qué importancia le atribuye a las diferencias en reactividad de los

colorantes empleados?
Estas diferencias nos ayudan a identificar los tipos de microorganismos que
tenemos enfrente ya que las diversas estructuras de estos reaccionan de
manera diferente a cada uno de los colorantes ya que estos aportan
contraste a determinados sectores, de esa forma, será más fácil notar su
presencia. Por otro lado, las diferencias en reactividad nos permiten darle
especificidad a la tinción ya que cada colorante será usado para un
propósito. Uno de los aportes más importantes es la determinación de la
presencia de enfermedades infecciosas.

VIII. BIBLIOGRAFÍA
- Corrales, L., & Caycedo, L. (2020). Principios físicoquímicos de los
colorantes utilizados en microbiología.Nova. Recuperado de
http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v18n33/1794-2470-nova-18-33-
73.pdf
- Díaz, J., & Pérez, M. (2023). Técnicas de Tinción Microbiana:
Principios y Aplicaciones. Editorial Microbiología Avanzada.
- García, A. (2022). Fundamentos de microbiología: De la teoría a la
práctica. Editorial Universitaria.
- González, A., & Ramírez, E. (2024). Avances en Métodos de Tinción
para Microbiología. Journal of Microbiology Techniques, 12(1), 30-45.
- Gómez, S., & Martínez, F. (2021). Microbiología Práctica: Guía de
Laboratorio. Editorial Científica Moderna.
- Gonzales et al.(2020). Las tinciones básicas en el Laboratorio de
Microbiología: Un enfoque gráfico.UNAM.Zaragoza.
- Hernández, D., & Rodríguez, E. (2024). Fijación y preparación de
muestras para microscopía electrónica. Microscopy Research, 11(1),
88-102.
- Hernández, R., & Gutiérrez, L. (2022). Técnicas Avanzadas en
Microbiología. Revista de Investigación Microbiológica, 8(2), 112-125.
- López, B. (2023). Aplicaciones de la microbiología en biotecnología.
Editorial Biotech.
- López, M., & Hernández, F. (2023). Técnicas de tinción en
microbiología. Ediciones Médicas.
- Martínez, D. (2021). La importancia de la práctica laboratorial en la
formación en ciencias de la salud. Revista de Educación en Biología,
17(1), 45-60.
- Martínez, E., Hernández, L., & González, M. (2023). Métodos de
fijación para el análisis microbiológico. Revista de Microbiología
Aplicada, 10(4), 56-72.
- Monteagudo et al. (2021). Examen Microscópico y tipo de tinciones.
Revista Sanitaria de investigación. Recuperado de
 https://revistasanitariadeinvestigacion.com/examen-microscopico-
tipos-de-t lo loinciones-bacterianas/
- Pérez, C. (2019). La importancia de la morfología bacteriana en la
investigación y medicina. Microbiology Insights, 7(1), 22-34.
- Rodríguez, A., & Sánchez, P. (2023). Técnicas avanzadas en tinción
bacteriana. Journal of Microbiological Methods, 15(2), 103-118.
- Torres, J., & Ramírez, F. (2022). Fundamentos de tinción en
microbiología. Ediciones Universitarias.