CÓDIGO:
UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA FDOC-090
VERSIÓN: 01
EMISIÓN:
02/03/2020
GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO PÁGINA
1 DE 12
FACULTAD: CIENCIAS BÁSICAS
DEPARTAMENTO: QUÍMICA
PROGRAMA: QUÍMICA
NOMBRE DEL CURSO: INORGANICA II
NOMBRE DE LA PRÁCTICA: QUIMICA BIOINORGÁNICA- LAS CLOROFILAS
1. OBJETIVOS
Serán realizados por loa estudiantes en las actividades complementarias.
2. INTRODUCCIÓN
Existe una gran variedad de biomoléculas en las cuales se encuentra un ión metálico incrustado en
una cavidad molecular. Algunas de éstas son enzimas o pigmentos como ocurre con la hemoglobina.
En este experimento se extraen los pigmentos conocidos como clorofilas, de hojas verdes, luego se
reemplaza el Mg2+ por otros iones metálicos tales como Cu 2+ y el Zn2+.Las clorofilas son un grupo muy
importante de biomoléculas metálicas y tienen la función en las plantas de atrapar energía solar
convirtiéndola en carga química. Se encuentran en los organelos llamados cloroplastos. La estructura
básica de la clorofila es la siguiente:
Figura 3. Estructura básica de la clorofila.
El átomo de Mg se encuentra rodeado por un sistema tetrapirrólico y los pirroles se unen entre sí por
puentes metinos: =C=. El anillo tetrapirrólico se caracteriza por tener un sistema conjugado de dobles
enlaces. Es posible unir algunos grupos al macrociclo, en los carbonos del 1 al 8 o en los carbonos
,βy de los puentes metino. La clorofila más abundante es la llamada clorofila a.
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Figura 4. Estructura de la clorofila a.
Las clorofilas tienen un enlace saturado entre los carbonos 7 y 8 y un quinto anillo, además tiene una
cadena larga unida por un éster al grupo ácido propiónico del carbono 7.
Ácidos y bases duros y suaves
El intercambio con otros metales del ión central Mg 2+ es interesante por su relación con la teoría de
Pearson de los ácidos y bases duros y suaves (ABDS). Se definen como ácidos duros, aquellos iones
de tamaño pequeño y alta carga positiva y que no contienen pares electrónicos sin compartir en su
capa de valencia. Similarmente se definen como bases duras, aquellos iones electronegativos muy
poco polarizables y difíciles de oxidar. Los ácidos y las bases suaves presentan un comportamiento
opuesto: baja electronegatividad, mayor densidad electrónica y mayor polarizabilidad. La importancia
práctica de la teoría se basa en la premisa: los ácidos duros prefieren unirse con las bases duras,
mientras que los ácidos suaves prefieren unirse con las bases suaves. Esta teoría se aplica muy bien a
las reacciones de la clorofila que se estudia en este experimento. El nitrógeno en una molécula
saturada, es una base fuerte, pero la presencia de una nube electrónica deslocalizada en forma
extensa, como ocurre en el sistema insaturado de las clorofilas (conjugación extendida), permite que
el nitrógeno se vuelva más suave y se sitúe en la línea divisoria. El Mg 2+ se clasifica como ácido duro:
ión pequeño de carga alta. Desde luego que este complejo formado por un ácido y una base suave es
lo suficientemente estable para existir, sin embargo las clorofilas con un ión central con características
de ácido suave, tal como Cu(II) o Zn(II), formará un complejo más estable que con el magnesio. Por
esta razón el magnesio ión central es fácil de extraer del anillo tetrapirrólico, mientras que el Cu y el
Zn forman complejos análogos de los cuales son muy difíciles de retirar. Se encuentra que una
solución de ácido acético al 10% o HCl 1,0 x10 -3N son suficientes para retirar el Mg(II) y formar la
feofitina.
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Figura 5. Reacción de remoción del Mg (II) en la clorofila por el HCl.
Sin embargo se requiere ácido clorhídrico concentrado para extraer el ión Zn 2+ y para retirar el Cu2+ se
necesita un ácido más fuerte, que a menudo destruye primero la clorofila. Además de las relaciones
ácido base, es importante considerar el radio iónico (ver tabla 4). Puede verse que el Mg (II) tiene un
radio iónico de 0,65 Ǻ. Es de esperarse que otros iones para encajar en la cavidad deban tener un
tamaño similar. De la tabla 4 puede concluirse que los iones Co 2+, Co3+, Cu2+, Fe2+,Fe3+, Ni2+, Pt2+ y
Zn2+ tienen la posibilidad de inserción.
Tabla 3. Radios iónicos
Ión Ǻ Ión Ǻ
Ag+ 1,26 Fe3+ 0,64
Ba2+ 1,35 K+ 1,33
Ca2+ 0,99 Mg2+ 0,65
Cd2+ 0,97 Mn2+ 0,80
Co2+ 0,74 Na+ 0,95
Co3+ 0,63 Ni2+ 0,72
Cs+ 1,69 Pd2+ 0,96
Cu+ 0,96 Pt2+ 0,86
Cu2+ 0,69 Sr2+ 1,13
Fe2+ 0,76 Zn2+ 0,74
En la siguiente tabla se da el parámetro Y, que mide la dureza la dureza o suavidad, e indica cuáles
iones pueden candidatizarse para formar complejos estables. La secuencia de estabilidad de
metaloporfirinas relacionadas estructuralmente, se ha encontrado que llevan el siguiente orden:
Es de notarse que los complejos de Pd 2+ y Pt2+ son muy estables y es sorprendente que su tamaño es
mucho mayor que el Mg2+, pero son ácidos débiles y este factor parece que prima sobre el tamaño.
Tabla 4. Valores de Y de los iones metálicos
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Tipo Rango de Y Ión metálico
Ácidos duros <2,3 Li+ (0,36), Na+ (0,93), K+ (0,92), Mg2+ (0,87),
(clase A) Ca2+ (1,62), Mn2+ (3,03), Al3+ (0,70), In3+
(2,24), Fe3+ (2,37), Co3+ (2,56), Sr2+ (2,08),
Cr3+ (2,70)
En el límite 2,8 – 3,2 Fe2+ (3,09), Co2+ (2,96), Ni2+ (2,82), Zn2+
(2,34), Pb2+ (3,58), Sn2+ (3,70), Cu2+ (2,39)
Ácidos suaves >3,2 Cu+ (3,45), Ag+ (3,99), Au+ (5,95), Te+ (3,78),
(clase B) Hg2+ (4,25), Pt2+ (4,82), Cd2+ (3,04), Pd2+
(4,27), Te3+ (3,23), Ag3+ (3,90), Cs+(2,73)
Programa de trabajo
El reemplazo del Mg2+ por Zn2+ y Cu2+ puede realizarse directa o indirectamente. El método directo
consiste en los siguientes pasos: extracción de la clorofila en solvente orgánico, remoción del Mg 2+ y
la formación consecuente de la feofitina y finalmente la inserción del ión metálico en la feofitina, para
formar la clorofila modificada. Las clorofilas se pueden separar macerando las hojas con acetona al
80% seguida de decantación y filtración de la solución verde; también es posible hacer una
separación de las clorofilas por Cromatografía de capa delgada o de columna. Tanto la mezcla inicial
de la clorofila como las feofitinas formadas por adición de ácido (pH ≈3,0) emiten fluorescencia roja,
la cual puede verse con luz azul (≈ 410 – 440 nm), indicando transiciones de baja energía en los
niveles del sistema conjugado. Las feofitinas así formadas se tratan con soluciones concentradas de
sales de Zn2+ y Cu2+ o de otros metales para formar las clorofilas modificadas. El reemplazo directo de
Mg2+ por Cu y Zn es una demostración de lo que ocurre cuando se cocinan vegetales en olla de cobre
con vinagre. Las hojas se calientan en tubos de ensayo con ácido acético acuoso (10%) en presencia
de acetato de Cu o Zn. La reacción se verifica experimentalmente por comparación de colores o
espectralmente.
3. PROCEDIMIENTO
3.1. Extracción de clorofilas
3.1.1. Cortar las hojas de espinaca en tiras finas y macerarlas con un mortero con arena lavada y
acetona al 80%.
3.1.2. Recolectar por decantación, la solución verde en un tubo de ensayo. Aquí salen las
clorofilas a y b mezcladas. Observar el color y la fluorescencia.
3.2. Separación de pigmentos
3.2.1. Extraer los pigmentos a partir de las hojas verdes usando éter en lugar de acetona y filtrar.
3.2.2. Se concentra la solución etérea y se colocan franjas de 3 – 4 cm en un plato de
Cromatografía en capa fina (con cloruro).
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3.2.3. Los platos se colocan en un tanque de desarrollo que contenga una mezcla de: éter de
petróleo (60 – 30ºC), acetona y n – propanol en relación 90:10:0.45 en volumen. El
desarrollo se hace en la oscuridad por 30 minutos.
3.2.4. La cromatografía se suspende cuando el frente del solvente se encuentre a 2 – 3 cm del
extremo superior del plato.
3.2.5. Tan pronto se extraigan los platos, se observan bajo la luz natural y UV. De las cinco
bandas únicamente las verdes, la cuarta banda es la clorofila b y la quinta clorofila a.
3.2.6. Se pueden separar las dos clorofilas raspando el vidrio y colocando el polvo en tubos de
centrífuga.
3.2.7. Se agregan 5,0 ml de éter etílico y se centrifuga la suspensión.
3.2.8. Después de centrifugar el líquido verde sobrenadante se separa y se toma un espectro
entre 320 y 750 milimicrones.
Figura 6. Espectro UV – VIS de la clorofila.
3.3. Extracción del ión Mg2+
3.3.1. Se toman 2,0 ml de extracto de clorofila y se agregan 0,2 ml de HCl 0,1N.
3.3.2. Se calienta el baño de María para acelerar la reacción. Nótese el cambio de color y la
fluorescencia. Tomar un espectro.
3.4. Introducción de Zn y Cu en la feofitina
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3.4.1. A la solución de feofitina, añádase una sal de Cu y Zn usando un volumen de solución
concentrada de la sal.
3.4.2. Calentar por 1 minuto en baño de María, hasta que la solución pasa a verde. Nótese los
cambios de color y fluorescencia. Tomar un espectro.
3.5. Reemplazo directo de Mg por Cu y Zn
3.5.1. Calentar unas tiras de hojas en solución diluida de ácido acético (10%).
3.5.2. Por aparte caliente otras tiras con ácido acético, en presencia de una sal de Cu y Zn.
Observe los cambios de color en las hojas.
3.6. Remoción de Cu2+ y Zn2+ de las clorofilas de Cu y Zn
3.6.1. Tome la solución de clorofila de Cu y de Zn y trate las soluciones con HCl de diferente
concentración. Observe cuando se obtiene la feofitina.
4. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS.
Tijeras Espectrofotómetro UV –Vis
Mortero Hojas de espinaca
5 tubos de ensayo Acetona
Equipo de Cromatografía de capa delgada Éter de petróleo
Equipo de centrifugación n – propanol
1 estufa Éter etílico
1 beacker de 400 ml Ácido clorhídrico 0,1N
1 pipeta de 1 ml Ácido acético 10%
1 pipeta de 5 ml Sal de cobre
1 espátula Sal de zinc
4. EQUIPOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y/O COLECTIVA.
Bata, guantes de nitrilo, gafas de seguridad.
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5. MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS.
Extracción de clorofilas
Cortar las hojas de Recolectar por decantación, Los pigmentos a
espinaca en tiras finas la solución verde en un tubo partir de las hojas
y macerarlas con un de ensayo. Aquí salen las Extraer verdes usando éter
mortero con arena clorofilas a y b mezcladas. en lugar de acetona
lavada y acetona al Observar el color y la y filtrar.
80%. fluorescencia.
Los platos se colocan en un
tanque de desarrollo que Se concentra la
contenga una mezcla de: éter solución etérea y se
La cromatografía se de petróleo (60 – 30ºC), colocan franjas de 3 –
suspende cuando el
acetona y n – propanol en 4 cm en un plato de
frente del solvente se
relación 90:10:0.45 en Cromatografía en capa
encuentre a 2 – 3 cm
volumen. El desarrollo se hace fina (con cloruro).
del extremo superior
en la oscuridad por 30
del plato.
minutos.
Tan pronto se extraigan los Se pueden separar las dos
platos, se observan bajo la luz Se agregan 5,0
clorofilas raspando el vidrio
natural y UV. De las cinco ml de éter etílico
y colocando el polvo en
bandas únicamente las verdes, y se centrifuga la
tubos de centrífuga.
la cuarta banda es la clorofila b suspensión
y la quinta clorofila a.
Después de centrifugar el
R1 líquido verde sobrenadante
se separa y se toma un
espectro entre 320 y 750
milimicrones
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Extracción del ion Mg2+
Se toman 2,0 ml de Se calienta el baño de
extracto de clorofila y se
Calentar María para acelerar la R2(Mg)
Introducción de Zn
agregan 0,2 ml ydeCu en la feofitina
HCl reacción. Nótese el
0,1N
Calentar unas tiras de
Calentar cambio
otras tiras de color
con ácido y la
acético, R3
fluorescencia.
en presencia de una sal de Tomar
hojas en solución
diluida de ácido Cu y unZn. espectro.
Observe los
acético (10%). cambios de color en las
hojas.
Remoción de Cu2+ y Zn2+ de las clorofilas de Cu y Zn
Tome la solución de
clorofila de Cu y de Observar cuando se R4
Zn y trate las obtiene la
soluciones con HCl de feofitina.
diferente
concentración.
Una vez identificado los puntos donde se generan residuos en el proceso, se procede a
determinar las características de peligrosidad e información que se deben tener en cuenta
para el manejo interno de estos residuos los cuales se reportan en la siguiente tabla:
Clasificación
Código de las
Tipo de Característica de según Etiqueta de
Naciones Unidas
Residuo Peligrosidad según SGA Decreto transporte (UN)
(UN)
4741/2005
Residuo 1 Tóxico N/A 2291
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Residuo 2 Toxico N/A 2291
Residuo 3 Toxico N/A 2291
Residuo 4 Toxico N/A 2291
Tipo de tratamiento y disposición final in situ
En esta experiencia se reportan cuatro tipos de residuos, los cuales deben ser depositado
en el bidón de metales pesados ya que se obtiene una sal de metales pesados.
6. CUESTIONARIO O ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
6.1. RESULTADOS
6.1.1. Defina los objetivos de la práctica.
6.1.2. Espectros de los complejos.
6.2. CUESTIONARIO
6.2.1 Con respecto al aparte 3.1, ¿en qué parte o partes del espectro visible están las frecuencias
absorbidas?
6.2.2. Con respecto al aparte 3.3, ¿con cuál metal se obtiene la mejor modificación?
6.2.3. Con respecto al aparte 3.3, ¿cómo podría medirse esta variable?
6.2.4. ¿Qué otros metales (además del Zn y Cu) se pueden introducir en la feofitina para formar
clorofilas modificadas?
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6.2.5. ¿Qué otros ácidos se pueden usar para retirar el magnesio de la clorofila y formar las clorofilas
modificadas?
7. BIBLIOGRAFÍA
7.1. PÁEZ, M. Edgar. Curso de Química Inorgánica. Parte II. Departamento de Química. UIS. 1995.
7.2. E. Dudanjin, P. Lazlo y D. Sacks. J. Chem. Ed. 52, 743. 1975.
7.3. R.B. Woodart et al. J. Am. Chem. Soc. 32, 3800. 1960.
7.4. R. Pearson. Hard and Soft Acids and Bases. John Wiley. 1973.
7.5. R. Pearson. J. Chem. Ed. 45, 584. 1963.
7.6. R. Pearson. J. Chem. Ed. 45, 643. 1968.
7.7. J.N. Phillips. Com. Biochem. 9, 70. 1963.
7.8. BEYER, L; FERNÁNDEZ, V. Química Inorgánica. Editorial Ariel S.A. Barcelona. 2000.
7.9. D.A. Skoog; D. M. West. Fundamentals of Analytical Chemistry. Holt. 1963.
7.10. J. Lingane. Analytical Chemistry of selected metallic elements. Van Nostrand. 1966.
7.11. J. Kolthoff. Textbook of Quantitative Inorganic Analysis. Macmillan. 1959.
7.12. Dyer. Applications of Absorption Spectroscopy of Organic Compounds. Prentice – Hall. 1965.
7.13. F. Cotton. “The infrared Spectra of Transition Metal Complexes” in “Modern Coordination
Chemistry”. Ed. J. Lewis and R. Wilkins. Wiley. 1960.
7.14. K. Nakamoto. Infrared Spectra of Inorganic and Coordination Compounds. Wiley. 1963.
7.15. R. Deago. Physical Methods in Inorganic Chemistry. Van Nostrand. 1965.
7.16. K. Nakamoto and P. McCarthy. Spectroscopy and Structures of Metal Chelate Compounds. John
Wiley and sons. 1968.
7.17. DUFFY, J.A. Química Inorgánica General. 2ª edición. Editorial Compañía Editorial Continental.
México. 1976.
7.18. LARSEN, E. Elementos de Transición. Editorial Reverté. Barcelona. 1972.
7.19. ORGEL, L. Introducción a la Química de los Metales de Transición – Teoría del Campo Ligando.
Editorial Reverté. Barcelona. 1975.
DATOS
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8. RECOMENDACIONES
. Utilice todos los elementos de protección personal
. No manipular ni hacer reacciones diferentes a las asignadas a las prácticas.
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9. ANEXOS
https://youtu.be/3ybSzAw5Ci8
https://youtu.be/QSzQHS-T-iw
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