Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Departamento de Bioquímica
Laboratorio de Sistemas de Control de Calidad en el Laboratorio Clínico
Verificación de la precisión y el sesgo de un método analítico
Alumno: Rosales Ocampo Iván
Equipo: 3 Sección: 1
Grupo: AQM2
Docentes:
• Carreño Duran Luis Ramón
• Colin Tovar María del Carmen Mercedes
• Hernández Olicon Aura Patricia
• Quiroz González Héctor Javier
Fecha de realización: 13 de mayo del 2024
Fecha de entrega: 20 de mayo del 2024
Introducción
En la actualidad, los laboratorios clínicos presentan una mayor necesidad de evaluar el
desempeño de sus métodos analíticos empleados para la realización de exámenes de
laboratorio. Para ello se emplean herramientas estadísticas para el calculo de la precisión
y el sesgo (Bias). (Zamora, 2011)
Dichas herramientas se encuentran en distintos documentos, tales como el documento
EP15 del CLSI y la Guía para la Validación y la Verificación de los Procedimientos de
Exámenes Cuantitativos Empleados por el Laboratorio Clínico, el cual es publicado por
la Entidad Mexicana de Acreditación (EMA).
En contraste, el protocolo EP15 es muy riguroso el cual se centra en asegurar la
integridad de los resultados emitidos por el laboratorio. Por otro lado, la Guía emitida por
la EMA es mas flexible y práctico que se basa en información publicada por otras
autoridades,
La EMA acepta los ensayos con ambos protocolos, sin embargo, corresponde al
profesional de laboratorio tomar en cuenta los costos y complejidad de ambos protocolos
al decidir el enfoque a utilizar. (Hernandez-Olicón, 2024).
Objetivos
• Verificar y evaluar la precisión y el sesgo de un método analítico empleando
muestra de pacientes
Fundamento
Para la evaluación del sesgo e imprecisión hay dos métodos principales: el protocolo
CLSI EP15 y la Guía para la Validación y Verificación de Procedimientos de Exámenes
Cuantitativos de la Entidad Mexicana de Acreditación (EMA).
Para evaluar la imprecisión, el CLSI propone el uso de distintos protocolos como el EP15
y EP05.
Los protocolos para imprecisión proponen dos opciones:
Realizar el análisis de un material, conocido o desconocido, al menos 20 veces en una
sola serie o durante un mismo día (intraserie o intradía).
Utilizar 20 valores obtenidos en días diferentes de la misma muestra de un paciente o de
una curva de un programa de control de calidad interno del mismo lote (interserie o
intercorrida).
En ambos métodos, se deben calcular la media, la desviación estándar y el coeficiente
de variación expresado en porcentaje. (Hernandez-Olicón, 2024).
Métodos
Bitácora de resultados Fecha: 13 de mayo del 2024
Determinación de: Glucosa Método: Glucosa oxidasa
Unidades: mg/dL
Blanco utilizado: Reactivo de Glucosa Oxidasa
Longitud de onda seleccionado: 505 nm
Tabla 1. Resultados obtenidos de las repeticiones realizadas
para la muestra SCB
Día Repetición 1 Repetición 2 Repetición 3
1 383 353 385
2 349 341 394
3 411 311 393
4 378 352 437
5 453 406 435
Cálculos realizados
• Calcular promedio (c), desviación estándar (S) y varianza (S2) por repetición
Tabla 2. Resultados obtenidos de x, S y S2
Repetición Repetición Repetición
Día Promedio DE Varianza
1 2 3
1 383 353 385 373.67 17.93 321.33
2 349 341 394 361.33 28.57 816.33
3 411 311 393 371.67 53.30 2841.33
4 378 352 437 389 45.55 1897
5 453 406 435 431.33 23.71 562.33
• Sacar promedio de las x diarias
Día Promedio
1 373.67
2 361.33
3 371.67
4 389
5 431.33
𝑋 𝑑𝑖𝑎𝑟𝑖𝑎𝑠 = 385.40
• Sacar promedio de las S2 diarias (Sr2 intracorrida = Vr=Sr)
Día Varianza
1 321.33
2 816.33
3 2841.33
4 1897
5 562.33
𝑆 2 = 𝑉𝑟 = 1287.67
• Raíz cuadrada de la varianza intracorrida (Sr intracorrida)
S = √1287.67 = 35.88
• Sacar S de las x diarias (Vb=Sb entrecorrida)
Día Promedio
1 373.67
2 361.33
3 371.67
4 389
5 431.33
S = 27.52
• Elevar al cuadrado la S entrecorrida (Sb2=Vb2)
𝑆𝑏 2 = 𝑉𝑏 2 = 757.08
• Obtener S2 total
𝑛−1
𝑆 2 total = Vr + 𝑉𝑏
𝑛
15 − 1
𝑆 2 total = 1287.67 + 757.08
15
𝑆 2 = 1615.52
• Obtener la raíz cuadrada de S2 total (S intralaboratorio)
S total = √1615.52 = 40.19
• C.V Intralaboratorio
𝑆 𝑖𝑛𝑡𝑟𝑎𝑙𝑎𝑏𝑜𝑟𝑎𝑡𝑜𝑟𝑖𝑜
C. V intralaboratorio = ∗ 100 = 10.43
𝑋 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜𝑠
40.19
C. V intralaboratorio = ∗ 100 = 𝟏𝟎. 𝟒𝟑
385.40
Tabla 3. Valores dados por el fabricante
Intraserie Interserie
2 3 2 3
X 96.8 241 98.4 248
S 0.81 1.43 1.55 3.73
CV 0.83% 0.59% 1.58% 1.50%
n 20 20 20 20
La repetibilidad y la desviación estándar son mayores a las indicadas por el fabricante,
por lo que se requiere verificar el método.
𝐶 1/2
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑆𝑑𝑒𝑐𝑙𝑎𝑟𝑎𝑑𝑎 ∗ 1/2
𝑇
Donde
((𝑛 − 1) ∗ 𝑆𝑟 2 + (𝑛 ∗ 𝑆𝑏 2 ))2
𝑇=
𝑛−1 𝑛2 ∗ (𝑆𝑏 2 )2
( 𝐷 ) ∗ 𝑆𝑟 4 + ( 𝐷 − 1
((15 − 1) ∗ 35.882 + (15 ∗ 757.08))2
𝑇=
15 − 1 152 ∗ (757.08)2
( ) ∗ 35.884 + ( )
5 5−1
𝑇 = 23.41
• C es obtenido de los valores de Chi cuadrada donde v= 4 y α=0.05
Figura 1. Valor de C de Tablas
• S declarada es la proporcionada por el fabricante (3.73)
Por lo tanto:
9.4881/2
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 3.73 ∗
23.411/2
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 2.37
Si el CV intralaboratorio es < Valor de verificación, entonces se concreta la verificación
de la especificación del fabricante
10.43 > 2.37 → No cumple con verificación el método
Reporte Ejecutivo
Fecha de entrega: 20 de mayo del 2024
Locación: Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Análisis del método: Glucosa oxidasa
Curva de calibración
Ecuación obtenida: mg/dL glucosa = (y + 0.2182) / 0.0049
Coeficiente de correlación: 0.9880
Linealidad
Pendiente: 0.5911
Ordenada al origen: 1.3069
Coeficiente de correlación: 0.9871
Límite de detección: 0.015
Límite de cuantificación: 0.0026
Intervalo lineal de trabajo: 0.026 – 0.671
Coeficiente de variación Intralaboratorio
10.43%
Dictamen
El método, según los datos analizados, no cumple con los requisitos de calidad para la
emisión de resultados confiables.
Discusión
La evaluación del método de glucosa oxidasa mediante el protocolo del CLSI EP15-A2
se realizó comparando el coeficiente de variación Inter-laboratorio contra el coeficiente
de variación reportado por el fabricante del reactivo empleado. De esta manera, al
obtener un CV de 10.43% comparado contra el del fabricante (CV 1.5%), se puede inferir
que los resultados obtenidos dentro del laboratorio presentan errores sistemáticos que
eleven ese porcentaje de coeficiente de variación. Dichos errores sistemáticos van desde
la calidad de los materiales y equipos empleados hasta la técnica de pipeteo empleada
por el analista.
Así mismo, el valor de verificación, siendo esta una “segunda oportunidad” para la
verificación del método, resultó ser un valor menor al del CV interlaboratorio, de manera
tal que el método no cumple para ser verificado debido a la gran diferencia entre el CV,
siendo así un método del cual no se puede asegurar que los resultados sean confiables
y no podrían ser emitidos.
Esta práctica utiliza en conjunto los resultados obtenidos en las prácticas pasadas de
calibración, linealidad ya que con los resultados obtenidos de estas se puede realizar un
análisis en conjunto sobre el método y dictaminar si este es un método aceptable. Siendo
así que el dictamen al que se llegó sobre el método de glucosa oxidasa empleado dentro
del laboratorio de sistemas de gestión de calidad es que el método no cumple con
precisión y sus resultados no será confiables.
Conclusiones
• El método de glucosa oxidasa no cumple con la verificación de método al ser
comparado contra el fabricante
• El CV del método es mayor comparado con el valor de verificación, de esta manera
se imposibilita su validación.
• La curva obtenida para la calibración no es útil para la obtención de valores
muestra reales.
• La linealidad dada por la ley de Lambert-Beer no se cumple en este método.
Referencias
• Hernandez-Olicón, A; Martínez-Reyes, C; Carreño-Duran, L; Colín-Tovar, M.
(2024) Manual de Prácticas de Sistemas de Control de calidad en el laboratorio
clínico. 85-91
• Zamora, A. (2011). Verificación de la imprecisión empleando dos protocolos. Rev
Mex Patol Clin, Vol.58, Núm. 4, pp 180-185.
[Link]
