UNIVERSIDAD DE LAS AMÉRICAS PUEBLA
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Laboratorio de Microbiología (LBC2022-1)
Departamento de Ciencias Químico Biológicas
PRÁCTICA 10:
DETERMINACIÓN DE LA SENSIBILIDAD A UN AGENTE
ANTIMICROBIANO
Dra. Tania Castillo Marenco
Integrantes del equipo:
Joanna Zilli González - 178032
Brenda Esmeralda García Pantle - 177862
María Fernanda Romero Torres - 177004
Rania Naella Velázquez Codemo - 177650
Fecha de entrega
26 de abril de 2024
Periodo primavera 2024
Introducción
Desde el siglo XVII se ha hecho uso de fármacos en el tratamiento de enfermedades
infecciosas, sin embargo, la quimioterapia como ciencia comenzó a principios del siglo XX,
al empezar el conocimiento sobre la toxicidad selectiva, las relaciones químicas entre los
agentes patógenos microbianos y los fármacos, el desarrollo de la drogorresistencia y el papel
de la terapia combinada, y fue hasta 1940 cuando se demostró la penicilina como una
sustancia terapéutica eficaz. La investigación sobre agentes quimioterapéuticos se basó
principalmente en las sustancias de origen microbiano conocidas como antibióticos, las
cuales se aislaron de medios filtrados en los que habían crecido sus mohos y bacterias
filamentosas respectivamente. La modificación sintética de dichos fármacos antes, ha sido de
suma importancia en el desarrollo de nuevos agentes antimicrobianos y su uso, ha permitido
la selección de variantes resistentes a los mismos (Riedel et al, 2020).
Existen varios mecanismos de acción de los fármacos antimicrobianos, ya sea por toxicidad
selectiva, por inhibición de la síntesis y función de la membrana celular, por inhibición de la
síntesis de proteínas o por inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos (Riedel et al, 2020).
Sin embargo, también están los mecanismos por los cuales los microorganismos cambian su
sensibilidad hacia los antimicrobianos ya sea por mutación o por intercambio genético dando
paso a la resistencia a los antimicrobianos que se produce cuando microorganismos cambian
a lo largo del tiempo y dejan de responder a los medicamentos, lo que dificulta el tratamiento
de infecciones y aumenta el riesgo de propagación de enfermedades, esto se puede manifestar
como decremento de la permeabilidad al medicamento, modificación de su receptor,
inactivación enzimática de la droga, alteración del blanco del antimicrobiano, entre otros
(Organización Mundial de la Salud, s. f.).
Las pruebas de sensibilidad o antibiogramas determinan la susceptibilidad de un
microorganismo frente a los medicamentos antimicrobianos, esto mediante la exposición de
una concentración estandarizada del germen a estos fármacos. Estas se realizan in vitro y
están indicadas para determinar los fármacos de elección en infecciones producidas por
microorganismos cuya sensibilidad es impredecible o que no responden al tratamiento
inicialmente elegido. Algunos microorganismos que suelen desarrollar resistencia a los
antimicrobianos son Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus
influenzae, entre otros (Vazquez, 2022).
Algunas pruebas de sensibilidad antimicrobiana realizadas en los laboratorios clínicos son:
» Concentración mínima inhibitoria (MIC) en caldo.
» Producción de beta-lactamasa.
» Detección de resistencia a oxacilina (metacilina).
» Dilución en caldo para bacterias anaerobias.
» Inducción de beta-lactamasa para bacilos Gram negativos.
» Cloranfenicol acetiltransferasa.
» MIC por dilución en agar para bacterias anaerobias.
» MIC por microdilución en caldo para micobacterias de crecimiento rápido y
Nocardia.
»Dilución en agar (método de las proporciones, modificado para microbacterias de
crecimiento lento).
» Radiométricas (BACTEC) para microbacterias de crecimiento lento.
Otra prueba de sensibilidad antimicrobiana más comúnmente usada y, en la cual se centra
esta práctica, es la difusión en disco o también conocida como prueba de Kirby-Bauer. Esta
técnica es un procedimiento simple que emplea el agar Müeller-Hinton, es cualitativa,
reproducible, económica, no requiere de equipo especial y está estandarizada para probar
bacterias de crecimiento rápido. Se basa en colocar discos de papel filtro impregnados con
antibióticos en placas de agar inoculadas con el microorganismo que está probándose y se
incuba generalmente de 16 a 18 h. Los discos absorben agua del medio, la droga se disuelve y
difunde en el medio, las células bacterianas que no son inhibidas por el agente antibacteriano
serán capaces de crecer en la zona alrededor del disco, mientras que, en aquellas bacterias
sensibles a la droga, no se observa crecimiento en el área donde las concentraciones
inhibitorias de la droga estén presentes (Vazquez, 2022).
Objetivos
● Identificar el efecto antibacteriano de los fármacos en un cultivo de bacterias.
● Demostrar la utilidad de la prueba de sensibilidad antimicrobiana por difusión en
disco.
● Identificar la utilidad de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en la
clínica.
Material y equipo
» 1 agitador magnético pequeño
» 1 asa bacteriológica
» 1 espátula
» 1 gasa no estéril
» 1 matraz Erlenmeyer 250 ml
» 1 mechero Fisher
» 1 parrilla con agitación
» 1 pedazo papel aluminio
» 1 pescador
» 1 pinzas de disección
» 1 pipeta graduada 10 ml
» 1 probeta 100 ml
» 1 vaso de precipitado 500 ml
» 2 bolsa cajas Petri (material para toda la sección)
» 2 propipetas
» 2 tubos con tapa de rosca
» 10 hisopos estériles
Material biológico: Cultivos de 18 a 24 h de cepa problema en caldo nutritivo.
» 1 tubo MacFarland de 0.5
» 2 discos impregnados con antibióticos para Gramnegativos y Grampositivos
» 2 tubos con solución salina estéril cada uno con 3 mL
» 14.8 g de Müeller-Hinton agar
Metodología
Cuestionario post-laboratorio
1. ¿Qué significa sensibilidad y resistencia cuando se interpreta un antibiograma?
Se emplea el término sensibilidad en el antibiograma para describir aquella situación
en la que los microorganismos, como bacterias u hongos, no son capaces de crecer en
presencia de uno o varios fármacos antimicrobianos.
2. ¿En qué casos las pruebas de susceptibilidad requerirían de medios de cultivos
distintos al de Mueller Hinton?
A pesar que el medio de Mueller es el más empleado, en ocasiones las condiciones del
microorganismo delimitara cual es el más conveniente para la susceptibilidad, por
ejemplo, para Haemophilus influenzae es el HTM (Haemophilus Test Media) por las
características que posee, otro aspecto que no podemos dejar de lado es el pH, ya que
debe ser el adecuado dependiendo el hongo o bacteria.
Resultados
Con la metodología empleada pudimos obtener los siguientes resultados:
Figura 1. E. coli gram (-) Müller Hinton
Figura 2. Staphylococcus gram (+) delantera
Figura 3. Staphylococcus gram (+) trasera
Discusión de resultados
Se pudo notar que, E.coli Müller Hinton se contaminó. Se sospecha por las pinzas que no
esterilizamos correctamente y no hubo crecimiento esperado. Además, Staphylococcus gram
(+) se hicieron microorganismos esperados y en ciertos antibióticos no creció, pues en esos
los antibióticos fueron resistentes antibióticos eficientes a este microorganismo: TE30, OF6,
PI101,CI5, XM30,CF230, A215, CT y teniendo a antibióticos ineficientes: AMC,
AMX10,P10,EM15,BXT25.
Figura 4. antibióticos para bacterias gram +
Figura 5. antibióticos para bacterias gram -
Conclusiones
Los mecanismos de acción de los fármacos antimicrobianos son variados e incluyen la
inhibición de funciones vitales de los microorganismos, como la síntesis de proteínas y ácidos
nucleicos o la función de la membrana celular. Paralelamente, los microorganismos
desarrollan mecanismos de resistencia que pueden alterar drásticamente su sensibilidad a
estos tratamientos, lo que representa un desafío constante en la medicina moderna. Este
fenómeno de resistencia puede manifestarse de múltiples formas, como la modificación de
receptores de drogas, inactivación enzimática o cambios en la permeabilidad celular,
complicando así el tratamiento de infecciones previamente manejables.
La detección y el manejo de la resistencia a los antimicrobianos son críticos, y para ello se
utilizan pruebas de sensibilidad como los antibiogramas, que ayudan a seleccionar el
tratamiento más efectivo frente a microorganismos específicos. Estas pruebas son esenciales
en entornos clínicos para guiar la terapia antimicrobiana, especialmente en casos de
infecciones por patógenos con patrones de resistencia conocidos o en respuesta a tratamientos
iniciales ineficaces.
Finalmente, la continua evolución de la resistencia antimicrobiana subraya la importancia de
la investigación y desarrollo de nuevos agentes quimioterapéuticos, así como la necesidad de
estrategias de manejo más sofisticadas, incluyendo la combinación de fármacos y el uso
juicioso de los mismos para minimizar la emergencia de resistencia. La práctica de la
difusión en disco, por ejemplo, sigue siendo una herramienta valiosa y económica para la
evaluación rápida de la susceptibilidad antimicrobiana y es un testimonio de la necesidad de
mantener técnicas simples pero efectivas en el arsenal contra la resistencia a los fármacos. El
enfoque debe ser siempre dinámico y adaptativo, integrando avances científicos.
Referencias
Organización Mundial de la Salud. (s. f.). Resistencia a los antimicrobianos.
https://www.who.int/es/health-topics/antimicrobial-resistance#:~:text=La%20resisten
cia%20a%20los%20antimicrobianos%20se%20produce%20cuando%20bacterias%2C
%20virus,enfermedades%2C%20enfermedades%20graves%20y%20muerte.
Riedel, S., Hobden, J.A., Miller, S., Morse, S.A., Mietzner, T.A., Detrick, B., Mitchell, T.G.,
Sakanari, J.A., Hotez, P. & Mejia, R. (2020). Quimioterapia antimicrobiana. Jawetz,
Melnick & Adelberg Microbiología Médica, 28e. McGraw-Hill Education.
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=2955§ionid=24974
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Vazquez, M. T. (2022). Pruebas de sensibilidad o antibiogramas. MANUAL MSD.
https://www.msdmanuals.com/es/professional/enfermedades-infecciosas/diagn%C3%
B3stico-de-laboratorio-de-las-enfermedades-infecciosas/pruebas-de-sensibilidad-o-ant
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Labtestsonline. (2019). Antibiograma.https://www.labtestsonline.es/tests/antibiograma
Herrera, M. (1999). Pruebas de sensibilidad antimicrobiana Metodología de laboratorio.
Revista Médica del Hospital Nacional de Niños. 34(1).
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