UNIVERSIDAD NACIONAL “JORGE BASADRE GROHMANN DE TACNA”
FACULTAD DE EDUCACIÓN, COMUNICACIÓN Y HUMANIDADES
JLP. LIC. NANCY BOLAÑOS CRUZ
PRACTICA N°03
USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO.
INTRODUCCIÓN:
Algunos seres vivos pueden observarse a simple vista. Sin embargo, existen organismos tan
pequeños (alrededor de 0.1 mm) que a simple vista no los percibimos, por lo que se recurre a
instrumentos ópticos como la lupa o el microscopio ya sea para organismos pequeños de menos de
0.1 mm o partes de organismos; y además, ayuda a superar esta limitación. El microscopio
compuesto escolar es un aparato de observación de cuerpos transparentes. El ojo humano tiene una
capacidad de resolución relativamente alta, pero objetos y organismos pequeños no son visibles a
simple vista. Los microscopios tienen un poder de resolución mucho más alto que el ojo humano, y
el poder de resolución es: la propiedad que se tiene para poder ver dos puntos muy juntos con toda
claridad.
El microscopio es una de las herramientas más valiosas que nos permite descifrar parte de los
misterios de la vida en general. Es un instrumento delicado. Mediante la práctica de montaje, enfoque
y observación, es posible determinar las características cualitativas y cuantitativas de estructuras
muy pequeñas y transparentes con el fin de penetrar al micro mundo que era casi inexistente hasta
antes de su invención.
Como los microscopios son instrumentos ópticos, es necesario obtener el aumento total de la
combinación del aumento del ocular y el aumento del objetivo, y se obtiene de la siguiente manera:
el ocular tiene un determinado aumento, que generalmente es de 10 aumentos o de 10X, los objetivos
tienen diferente poder resolución que puede ser: 4X, 10X, 40X y 100X, el resultado final de número
de aumentos se da multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo que se está
utilizando; ejemplo: ocular 10X y el objetivo es de 40X, el resultado será 400 aumentos o 400X.
OBJETIVO:
• Identificar las partes y funcionamiento del microscopio óptico.
LUGAR:
• Práctica de laboratorio de Biología Segundo piso.
MATERIAL Y EQUIPO
• Microscopio óptico
• Cubre objetos
• Porta objetos
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GRAFIQUE LOS MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
La práctica, consiste dar a conocer a los alumnos las partes que conforman un microscopio óptico
compuesto, mencionando la parte mecánica y de soporte, la parte óptica y la de iluminación.
También se indicará el uso de cada una de las partes así como su cuidado y transporte.
Conocimiento del microscopio.
Para su estudio, se pueden distinguir tres partes: una mecánica, óptica y de iluminación.
1.- Parte mecánica: Constituye el soporte de la parte óptica y consta de:
• El estativo: formado por el pie o base del microscopio y el brazo o asa, ambos constituyendo
un solo cuerpo.
• La platina: placa cuadrada o circular en la que se apoya la preparación a observar.
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• Dispone de unas pinzas que permiten sujetar la preparación. La platina se halla perforada en el
centro para dejar paso a los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz.
• El tubo: pieza cilíndrica y hueca en cuya parte superior se sitúa una lente (el ocular) y en la inferior
se encuentra una pieza giratoria llamada revólver que lleva enroscadas otras lentes (los objetivos)
que, en este caso, son tres, aunque en otros modelos de microscopio pueden ser más.
• Tornillos: de enfoque, que permiten el desplazamiento del tubo mediante una cremallera dentada,
de modo que, al acercar o alejar el tubo de la preparación se consigue el enfoque de la misma. Son
el tornillo macrométrico que hace un desplazamiento rápido y el tornillo micrométrico que hace un
avance fino.
2. Parte óptica: Comprende los sistemas de lentes que consta de las siguientes piezas:
• El ocular: Llamado así por ser la lente sobre la que se aplica el ojo del observador. Tiene
como misión aumentar la imagen producida por el objetivo. Su aumento viene señalado por una
cifra y el signo X (5X, 10X, 20X, etc.)
• El objetivo: Es la lente que se encuentra sobre el objeto (preparación) a observar.
Es el elemento óptico más importante, puesto que es el que produce la imagen
aumentada del objeto, esta imagen, además, la observamos invertida (el objetivo
funciona como una cámara fotográfica) de ahí que, lo que observamos a la
derecha de la preparación se encuentre realmente a la izquierda y viceversa. Los
aumentos de los objetivos vienen indicados sobre los mismos y son, para este
microscopio, 4X, 10X y 40X. El aumento total del microscopio se obtiene multiplicando
los aumentos del ocular por los del objetivo con el que se está realizando la
observación.
3.-Iluminación: Esta formado por una lámpara que ilumina directamente el objetivo. Existe también
un diafragma que se puede abrir o cerrar mediante una palanquita regulando así la intensidad
luminosa.
Cuidado del microscopio
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para prote- gerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para, óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier
caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en
exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revolver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo
por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. –
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
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9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
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PRÁCTICA Nº 3
EL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
1. OBJETIVOS
✓ Conocer e identificar las diferentes parles del microscopio compuesto y susrespectivas
funciones.
✓ Aprender a manejar correctamente el microscopio.
✓ Adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, células yorganismos.
2. FUNDAMENTO TEORICO
El microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los objetos. En los últimos
tres siglos ha permitido ampliar el campo de las investigaciones biológicas y se ha convertido en
el instrumento básico para abre nuevas fronteras enla biología.
Antoni Van Leeuwenhoek. Hans y Zacharias Jansen fueron tres holandeses que contribuyeron
significativamente al desarrollo de la microscopía a principios del siglo XVII. Leeuwenhoek fue
uno de los primeros en dejar constancia de sus observaciones, describiendo bacterias,
protozoarios, glóbulos rojos yespermatozoides.
El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular,montados
en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varías lentes que crean
una Imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios están
dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a
través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real.
El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un soporte que sostiene
el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la
muestra. Los especímenes o muestras que se examinan con unmicroscopio son transparentes y
se observan con una luz que los atraviesa; se suelencolocar sobre un rectángulo fino de vidrio. El
soporte tiene un orificio por el que pasala luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja
la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz
eléctrica que dirige laluz a través de la muestra.
El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura interna
de células, tejidos y organismos, hacer mediciones y estimar el tamaño de una población de
microorganismos.
3. MATERIALES:
• Microscopios compuestos
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Papel delgado con letras impresas
• Goteros
• Papel milimetrado
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4. PROCEDIMIENTO
DESCRIPCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE LAS PARTES DEL
MICROSCOPIO
DEFINICIÓN: Etimológicamente la palabra microscopio proviene de dos vocesgriegas:
MICROS = pequeño y SCOPIUM = ver u observar.
Se divide en dos partes:
1. SISTEMA OPTICO
1. OCULAR: Lente situado cerca del ojo del observador. Consta de un sistema delentes
planas convexas, dispuestas en un tubo cilíndrico de metal, con un diafragma
intermedio. ambos lentes presentan tas caras planas hacia el ojo del observador y las
caras convexas hada el objeto. La lente que va cerca del ojo delobservador se denomina
ocular propiamente dicho y la lente inferior se le conoce como lente de campo o
colectora, el cual recibe la imagen ya formada por el objetivo, siendo una imagen
luminosa y corregida de aberraciones. En la parte lateral o superior del tubo cilíndrico
lleva una numeración (4X. 5X, 10X, 15X. etc.), que indica el número de aumentos
propios del ocular. El ocular da laimagen virtual y derecha, y se forma a la altura del
diafragma.
2. OBJETIVOS: Lente situada cerca de la preparación. Un objetivo está constituido por
un tubo metálico cilíndrico, que lleva en su interior un sistema de lentes destinados a
dar una imagen real e invertida del objeto. La lente de la parte inferior se denomina
Lente Frontal. En la parte lateral del tubo metálico, lleva inscrita una numeración (4X,
10X. 40X, 60X, 95X. 100X, etc.), que indicael número de aumentos propios del objetivo,
y la apertura numérica (AN), es decir la capacidad de reunión de la luz de objetivo,
siendo de 0,30 para el objetivo de 10X de 0,65 para el de40Xy de 1,30 para el de 100X.
2. Clases de objetivos
Objetivos a seco: Son aquellos que entre el tente frontal y el preparado a observar, no
existe sustancia alguna, excepto el aire. Se utilizan generalmente para observaciones
de preparados en fresco. Por el número de aumentos son de tres clases:
Pequeño aumento: mayor de 0 y menor de 10x
Mediano aumento: mayor de 10 y menor de 30x
Gran aumento: mayor de 30 y menor de 90x
Objetivos de Inmersión: Son aquellos que entre la lente frontal y el preparado a
observar, se interpone una sustancia liquida, comúnmente el aceite de cedro, cuyo
índice de refracción es de 1.5. Se utilizan generalmente para observaciones en
preparado en seco. De acuerdo a la procedencia lleva una franja o una raya negra para
facilitar su identificación.
3. Características de los objetivos
ESCALA DE REPRODUCCIÓN: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y
su imagen, por ejemplo. 4:1,40:1, 65:1, etc. (donde 1 representa el tamaño del objeto y
4, 40, y 65 representa el aumento de su imagen).
PODER DEFINIDOR: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos
nítidos.
LÍMITE DE RESOLUCIÓN: es la menor distancia que debe existir entre dosobjetos
para que puedan-visualizarse por separado.
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PODER DE RESOLUCIÓN: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles más
finos. Está en relación inversa con el límite de resolución.
PODER DE PENETRACIÓN: es la propiedad de permitir la observación simultánea de
varios planos del preparado. Es inversamente proporcional a la escala de reproducción
o aumento.
DISTANCIA FRONTAL: es la distancia de la lente frontal al preparadocolocado en
la platina, cuando está enfocado. Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción
del objetivo.
Pequeño aumento: entre 0.5 y 3 cm.
Mediano aumento, entre 3 mm y 0.5cm.
Gran aumento: entre 1 mm y 3 mm.
Inmersión: entre 0.8 mm y 1.20 mm.
AUMENTO TOTAL: Debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo
tanto el aumento total de la imagen que observamos es el producto entre el aumento
del objetivo y el del ocular. Ejemplo: si tenemos colocado el objetivo cuya escala de
reproducción es 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces el aumento
total será 40 x 10 = 400.
4. DISTANCIA FOCAL
Distancia entre el foco y el centro óptico de una lente o la superficie de un espejo
cóncavo.
Objetivo Aumento Aumento total
Distancia de
(distancia Objetivo (para
Ocular x5 Ocular x10 Ocular x15 trabajo (mm)
focal en mm) L=16 cm)
50 3,2 16 32 48 30
25 6,4 32 64 96 14
16 10 50 100 150 8
8 20 100 200 300 2
4 40 200 400 600 0,5
2 80 400 800 1200 0,2
5. SISTEMA DE ILUMINACIÓN
Se encuentra ubicado en la parte inferior de la platina, y comprende:
A) ESPEJO O LAMPARA DE ILUMINACIÓN: Tiene dos caras: unacóncava y otra
plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La caracóncava se emplea
de preferencia con iluminación artificial, y la plana, para iluminación natural (luz
solar). Modernamente se prescinde del espejo en lafabricación de microscopios,
ya que éstos traen incorporada una lámpara colocada en el eje del microscopio.
Dirige los rayos luminosos hacia el preparado.
B) DIAFRAGMA: Es un dispositivoconstituido por un sistema de láminas metálicas
dispuestas concéntricamente, regulando de esta manera la entradade luz emitida
por el espejo o lámpara.
C) CONDENSADOR: Dispositivo constituido por un sistema de dos o más lentes
montadas dentro de un cilindro cónico truncado de metal. Está situadopor debajo de
la platina. Sirve para concentrar o condensar los rayosluminosos emitidos por la
lámpara. Funciona accionado por un tomillo.
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D) PORTAFILTRO: Es un dispositivo que permite colocar filtros de diferentes colores,
los que facilitan la observación;
6. PARTE MECÁNICA
A) EL PIE: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangular.
B) LA COLUMNA O BRAZO: llamada también asa o brazo, es una pieza colocada
en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el
extremo inferior se adapta al pie.
C) LA PLATINA: Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u
objeto que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que
permite el paso de los rayos luminosos a la preparació[Link] platina puede ser fija,
en cuyo caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir,
mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
D) EL TUBO OPTICO: Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para
evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior
se colocan los oculares.
E) EL REVÓLVER: Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se
enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el ejedel tubo y
se colocan en posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo
fija.
F) CARRIL: Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
G) EL TORNILLO MACROMÉTRICO. Girando este tornillo, asciende o desciende el
tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera.
Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
H) EL TORNILLO MICROMÉTRICO. Mediante el movimiento casi imperceptible que
produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la
preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que
se utiliza para precisar sus movimientos y puedemedir el espesor de los objetos.
7. CUIDADOS Y PRECAUCIONES DURANTE EL USO DEL MICROSCOPIO
1. Por ser el microscopio un instrumento de precisión y de elevado valor económico, se
recomienda tener cuidado en la conservación de sus lentes, evitando una manipulación
que pueda rayar los lentes y empleando el material adecuado para su limpieza.
2. Para transportar el microscopio utilizar las dos manos, tomar el brazo del mismocon una
mano y con la otra sostener su base. Nunca transportar el microscopio invertido ni muy
inclinado ya que la lente ocular no está fija y puede caer al piso.
3. Al colocar el microscopio sobre la mesa, colocarlo a unos 10 o 15 cm. del borde.
4. Nunca hay que tocar los lentes con las manos. Si se ensucian no utilizar pañueloo los
dedos para limpiar las lentes ya que puede rayar la superficie óptica. Siempre usar el
papel para lentes que provea el laboratorio.
5. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
6. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda
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en el objetivo con pañuelos especiales para óptica. En cualquier caso se pasará el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse
y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol- acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes
en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
7. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
8. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se estáobservando a
través del ocular.
9. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algúnlíquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en
xilol.
10. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del
borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Nunca deje el microscopio con el
objetivo de mayor aumento en la posición de observación.
11. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucie y dañe las lentes. Si no se va a usar de formaprolongada, se
debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo delpolvo.
12. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica
y, al acabar el curso, encargar a un técnico para un ajuste y revisión general de los
mismos.
8. MANEJO DEL MICROSCOPIO
A) ILUMINACIÓN
Para realizar una buena observación microscópica, lo primero que se debe tener es
una buena iluminación y la observación del campo microscópico. Para iluminar se
procede de la siguiente manera:
1. Verificar que el diafragma del condensador esté abierta.
2. Utilizar el espejo cóncavo o encender la lámpara y observar a través del
ocular que el campo microscópico esté totalmente iluminado.
3. Considerar al tubo óptico a uno o tres centímetros de la platina.
B) PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1. Utilizando las tijeras, recortar un trozo de papel de alrededor de 3x3 mmque
incluya una letra "e" ó “3”.
2. Colocar la letra “e" ó “3” en el centro de un portaobjeto agregando unagota
de agua.
3. Luego colocar el cubreobjeto sobre la muestra.
4. Por último, colocar el preparado sobre la platina.
C) ENFOQUE DE LA MUESTRA
1. Colocar el portaobjeto con el cubreobjeto sobre la platina del [Link]
el portaobjeto de modo que la letra quede en el centro de la abertura
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de la platina.
2. Con ayuda del tornillo macrométrico, baje lentamente el tubo hasta que elextremo
inferior esté aproximadamente a 1 mm do la muestra.
3. Observar a través del ocular y eleve lentamente el tubo hasta que la letra se haga
visible.
4. Cuando se observe la imagen, mover el tornillo micrométrico hasta obtenerel mejor
foco posible. Un ajuste adicional del diafragma, en muchos casos, mejorará la
claridad de la imagen.
5. Comparar la posición de la imagen de la letra en el ocular con la posición de la
letra sobre el portaobjeto.
6. Dibujar la letra observada. Indicar su posición y calcular su tamaño en número de
aumentos.
D) CAMBIO DE OBJETIVO
1. Girar el revólver y centrar el objetivo de mediano aumento.
2. Enfocar y aclarar la imagen con el tornillo micrométrico.
3. Describir lo observado. Dibujar y estimar el tamaño de la imagen en
número de aumentos.
E) OBSERVACIÓN DE UN PREPARADO FRESCO
1. Colocar una gota de agua estancada en una lámina portaobjeto y cubrircon
una lámina cubreobjeto.
2. Sujetar el preparado con las pinzas de platina.
3. Observar con objetivo de menor a mediano aumento.
4. Dibujar lo observado y calcular los aumentos en cada caso.
[Link] (cuales fueron los resultados)
[Link] (mencione 4 )
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[Link]
1.¿Define qué es el poder de resolución?
2.¿De cuántos sistemas consta el microscopio escolar que utilizaste?
3.¿Cuántos tipos de microscopios existen? menciónalos:
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4. ¿Cómo se llama la parte que señalan las líneas que apuntan al microscopio de la figura 1?
Figura 1.- Microscopio óptico
12. REFERENCIAS
✓ PEDRAZA FLORES, EDUARDO; VELAZCO TEJADA ELIZABETH. Manual de prácticas de biología I.
Universidad de colima
✓ AMABIS, J. M. e MARTHO, G. R. Fundamentos da biología moderna. São
✓ Paulo: Moderna, 1993. Biologia de células. São Paulo: Moderna, 1995.
✓ ATTENBOROUGH, D. A vida na terra. São Paulo: Martins Fontes, 1990.
✓ BURNS, G. W. Genética: uma introdução à hereditariedade. Rio de Janeiro: Guanabara, 1983.
✓ CUTTER, E. G. Anatomía vegetal. São Paulo: Ed. Roca, 1987.
✓ KRASILCHIK, M. Prática de ensino de biologia. 2. ed. São Paulo: [Link], 1986.
✓ PORTO, Dinorah Poletto e MARQUES, Jenny de Lourdes. Ciências: os seres vivos – 5ª a 8ª série
(solo, água e ar; os seres vivos, corpo humano, química e física). São Paulo: Scipione, 1997.
✓ RUPPERT, E. E. e SARNES H. O. Invertebrate zoology. 6. ed. USA: Saunders College 150
Publishing, 1994.
✓ SOARES, J. L. Biologia. São Paulo: Ed. Scipione, 1997. Vol. único.
✓ Biología. São Paulo: Ed. Scipione, 1992. Vol. I.
✓ STORER, T. et al. Zoologia geral. 6. ed. São Paulo: Companhia Editora Nacional, 1995.
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