TEMA 1.

IMPORTANCIA DE TOMA Y TRATAMIENTO DE MUESTRA

1. CONCEPTOS

Contaminant: no pertenece al medio y produce un efecto negativo al medioambiente y a las

personas, en pequeñas concentraciones produce un gran impacto negativo.

Pollutant: es una palabra que se utiliza para describir un componente o ingrediente de cualquier
producto que tiene un impacto negativo. Es importante saber esto ya que dependiendo de ser
negativo o no tendrá una forma de análisis más selectiva o menos.

Residuo: es cuando algo está autorizado, pero solo puede quedar cierto nivel, por ejemplo, los
pesticidas pueden ser contaminante o residuo, al seguir las normas lo que queda de pesticida es
residuo.

Compuestos intencionados o no intencionados, es intencionado cuando se aplica (en

alfombras, trajes, por ejemplo) está autorizado su uso, los no intencionados aparecen sin
autorización. Sobre los intencionados hay legislación.

Hablamos de agua, aire y suelo, mayor importancia en agua y aire. Siempre se tiene en cuenta
la legislación a la hora de realizar el análisis. Hay legislaciones universales o individuales, las de
Europa son las más detalladas y restrictivas, el medio ambiente europeo es más vulnerable, hay
poca agua, ha habido mucha industria…

2. AGUA

La legislación es para todo tipo de aguas, hay una lista de principales contaminantes, los
compuestos organohalogenados (por ejemplo, clorobenceno, (compuesto orgánico y
compuesto halógeno)) son importantes de ver en el medio acuático porque son pollutant, son
poco solubles en agua, los compuestos poco polares son los más peligrosos, los hidrosolubles
son menos peligrosos ya que se eliminan más fácilmente, por ejemplo, el ser humano lo elimina
por la orina. Existe una lista indicativa de los principales contaminantes:

1. Compuestos organohalogenados y sustancias que puedan dar origen a compuestos de

esta clase en el medio acuático.
2. Compuestos organofosforados.
3. Compuestos organoestánnicos.
4. Sustancias y preparados, o productos derivados de ellos, cuyas propiedades
cancerígenas, mutagénicas o que puedan afectar a la tiroides, esteroidogénica, a la
reproducción o a otras funciones endocrinas en el medio acuático o a través del medio
acuático estén demostradas.
5. Hidrocarburos persistentes y sustancias orgánicas tóxicas persistentes y
bioacumulables.
6. Cianuros.
7. Metales y sus compuestos.
8. Arsénico y sus compuestos.
9. Biocidas y productos fitosanitarios.
10. Materias en suspensión.
11. Sustancias que contribuyen a la eutrofización (en particular nitratos y fosfatos).
12. Sustancias que ejercen una influencia desfavorable sobre el balance de oxígeno (y
computables mediante parámetros tales como DBO o DQO).
Hay unos compuestos que se identifican como peligrosos prioritarios (POPS) tienen un efecto
muy fuerte sobre la salud. Los niveles permitidos están por debajo de μg/L (ppb), se necesitan
métodos que permitan ver estos niveles tan pequeños. El muestreo es difícil porque varía
mucho en el espacio. Nos fijaremos en un grupo de pesticidas.

3. ATMÓSFERA

Es más incontrolable que las aguas, la atmósfera puede variar de un día para otro, la toma de
muestras es muy complicada, hay métodos de referencia. Los niveles de contaminantes a medir
son de ng/m3, se suele usar un adsorbente para la toma de muestras, el transporte de las
muestras también es complicado. El benzo(a)pireno tiene dos anillos aromáticos, tiene un
proceso de oxidación en el cuerpo humano, se junta con el ADN produciendo cáncer, lo
producen los fumadores, empresas, coches, fuentes naturales como volcanes, al ser volátil sube
a la atmósfera, también se encuentra en alimentos.

Método más usual de análisis: Puntos de muestreo de partículas (captadores de partículas),

una especie de espirales PM10 (partículas de 10 micras) donde se retienen las partículas de 10
micras para abajo para analizarlas. Pasado un tiempo, se recogen esas partículas y se analizan
periódicamente llevando a cabo su análisis.

Contaminantes de referencias: PHs.

Un problema es la gran cantidad de análisis que se han de realizar, se suele analizar el peor de
los casos. Se suelen usar marcadores químicos. Todo es posible menos en el caso de los COP
(contaminantes orgánicos persistentes), no hay legislación concreta, pero sí un listado de
compuestos que hay que vigilar. Los COP (contaminantes orgánicos persistentes) son 12
compuestos químicos que tienen que erradicarse de todos lados, cada país debe tener un
sistema de muestreo y seguimiento para ver que disminuyen los niveles de COP. Estos
contaminantes comparten cuatro características básicas: persistencia, bioacumulación,
potencial de transporte a gran distancia en el medio y efectos adversos.

Microplásticos (tamaño menor de 5 mm), por ejemplo, las fibras, fragmentos, films, uno de los
problemas al realizar el análisis es que no se produzca contaminación en el laboratorio. Hay
bastantes micro plásticos ya que hay muchos tipos de polímeros que a su vez llevan con ellos
aditivos.

3.1. Benzo(a)pireno (caso particular)

Muestra simple es la que se coge en un momento dado y la compuesta la que se coge a lo largo
de un periodo de tiempo. Las muestras simples pueden tener mucha variabilidad, al tomarlas
compuestas tenemos más histórico. Se tomaron muestras compuestas, el método es análisis
cromatográfico, si se ve que se presenta un problema determinado se necesita ver el motivo; se
investiga la zona de calidad, se estudia geográficamente, la variabilidad del benzopireno y de
otros, por último, se llega a unas conclusiones.

Proceso para el análisis:

1. Muestreo: hay que ver de qué manera se va a realizar, es importante, caro, es lo más
crítico, es difícil establecer una norma.
 2. Transporte y almacenamiento: muy importante ya que se requieren determinadas
condiciones, se pueden realizar reacciones químicas indeseadas como oxidaciones,
degradaciones por la luz, hidrólisis, degradaciones microbiológicas.
3. Tratamiento de la muestra: límite en las concentraciones, hablamos siempre de micro
contaminantes, siempre quiero ver de mg o ng / L o Kg, pues tengo que hacer un
tratamiento importante ya que quiero ver muy poquito. Control de calidad.
4. Análisis (GC/LC -MS): el problema es que hay seguir un procedimiento que cumpla con
los límites
5. Evaluación de resultados: es compleja porque a veces es difícil interpretar bien los
resultados.

Una parte importante es el Control de Calidad que también es crítico, cualquier análisis
realizado en el laboratorio tiene una incertidumbre que se conoce a través del QC.

MUESTREO (PARTE MÁS CRITICA)

La parte fundamental del análisis será el muestreo (desde el punto de vista crítico), de este
dependerán, en mayor medida, los resultados analíticos. Desde el punto de vista técnico lo más
importante será el laboratorio. El muestreo no es una tarea sencilla, ya que no siempre es
posible obtener una muestra representativa del problema planteado originalmente.

- El mayor problema que presenta el muestreo en el medioambiente será el conocimiento

del terreno en el que se va a muestrear. El muestreo deberá realizarse siempre por
personal oficial.
- El problema que encontramos del muestreo en el aire será la variación en el espacio y la
variación en el tiempo.
En muchas ocasiones lo que se utiliza en la atmosfera como muestreador de partículas
de diferentes tamaños es un muestreador de pH: presenta una espiral donde se
introducen las partículas por tamaños (normativa 10 - 2.5 micras) y se analizan, los pH
son los correspondientes a ese particulado. También se registrará el volumen de aire
que pasa. Este muestreador será pasivo, para que sea activo se le pondrá una bomba de
vacío para que cojan aire a una razón de 10 l/min. En la atmosfera es muy común la
utilización de muestreadores que se calibran y se usan como referencias. Hay
muestreadores para casos determinados para así facilitar el muestreo, activos o pasivos.
Hay diferentes formas de realizar el muestreo, una de ellas con muestreadores

En aguas también se pueden utilizar muestreadores, pero esta se puede tomar con más facilidad
gracias a la sensibilidad que presentan los equipos.

Generalmente, esto se resuelve creando un plan de muestreo. En el plan de muestreo se indica

la geolocalización, tiempo, volumen y temperatura que había en el momento de la toma de
muestra. Este plan de muestreo debe de ser realizado por alguien que conozca bien el terreno
que se va a muestrear.

TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO

Se debe de tener cuidado con las reacciones químicas indeseables que se pueden dar (por
ejemplo: oxidaciones, degradaciones por la luz (oscuridad, tapamos con papel albar), hidrolisis
y degradaciones microbiológicas). Para la eliminación de las hidrólisis, generalmente, se pone
un pH ácido (las hidrolisis más habituales son las básicas).

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA Y ANÁLISIS (QC LABORATORIO)

El tratamiento de la muestra en el laboratorio tiene como objetivo extraer lo máximo posible, el
error puede cometerse durante la extracción quedando una parte sin extraer (sesgo), durante
el análisis el error se puede deber a la falta de reproducibilidad. Durante el análisis, el error
puede encontrarse en la reproducibilidad del equipo puede no tener la suficiente precisión (si
colocamos un vial en el inyector y nos da un valor de 5, puede que lo volvamos a colocar y nos
de 5.2). Esta falta de reproducibilidad tiene como ventaja que se puede corregir haciendo
medidas repetitivas:

La incertidumbre es la suma del error producido por el sesgo y el de la reproducibilidad. El

problema es que se necesita saber cuánto vale cada uno para conocer el valor de incertidumbre.

u = (𝑠𝑒𝑠𝑔𝑜) + (𝑟𝑒𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑖𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑)

Los valores de sesgo y reproducibilidad suelen estar entre 20 y 15 %, respectivamente; es por

ello que los valores de incertidumbre siempre suelen presentar un valor del 50 %.

El problema será conocer el valor concreto de sesgo y de reproducibilidad en cada uno de los
análisis que se realizan para conocer verdaderamente la incertidumbre que hay. Todos estos
datos se extraen del control de calidad para poder dar transparencia a los resultados (todo el
procedimiento debe de quedar escrito, todo esto se recoge en la Norma ISO 17025).

 Norma ISO 17025: proporciona los requisitos necesarios que deben cumplir los
laboratorios de ensayo y calibración, facilitando la armonización de criterios de calidad,
si el laboratorio no tiene esta norma los valores que tiene son informativos y no de
decisión. Contiene los requisitos que permiten a los laboratorios demostrar que operan
de forma competente y que tienen la capacidad de generar resultados válidos. El
documento especifica los requisitos generales para la competencia, imparcialidad y la
operación coherente de los laboratorios.
 PG-10 Evaluación de calidad de los análisis: se entiende por evaluación de la calidad de
los análisis, al conjunto de técnicas empleadas para asegurar la fiabilidad d ellos
resultados de análisis. Es decisión el Director técnico la implantación de un sistema de
evaluación de la calidad que permita asegurar que el sistema de calidad es eficaz. Las
técnicas empleadas pueden ser:
o Repetición de análisis, como muestra ciega
o Control de parámetros instrumentales y/o en respuesta en equipos
instrumentales
o Participación en ensayos de intercomparacion o interlaboratorio
o Prueba de recuperación o Control de calidad diario
o Control de blanco de reactivos
o Control de blancos de matriz
o Control de las recuperaciones de patrones internos de extracción

EVALUACIÓN DE RESULTADOS (SEGUNDA PARTE MAS CRÍTICA)

A veces para la interpretación de los resultados se necesita tener información que va más allá
de la que proporciona el laboratorio.

VOCABULARIO

 Muestra puntual (simple): se toma en un sitio dado en un momento dado.

  Muestra compuesta: la que se coge generalmente a diferentes tiempos, las más
habituales son en las plantas depuradoras que tienen muestreadores que toman litros
cada hora, representa mucho mejor qué se trata, pero si hay un punto mal no se muestra
porque se hace la media.
 Representatividad: ligada al muestreo, la muestra tiene que ser representativa.
 Estudios de seguimiento/Monitoring: se hacen análisis cada cierto tiempo para ver si
suben o bajan los datos. Hacer una muestra puntual tiene un valor relativo y lo que
quiero ver es como va variando con el tiempo. Hay muestreadores en los que yo voy
haciendo análisis durante un periodo de tiempo, por ejemplo, un mes. Si yo veo que
conforme hago análisis me aumentan los niveles se que algo pasa a diferencia de que
si me quedasen cte.
 Regulación: es algo que se aprueba en la Unión Europea, tiene su correspondiente
reglamento traducido al español. Pero son de obligado cumplimiento de iguales para
toda la unión europea.
 Marcadores químicos: como hay tantos compuestos químicos, se seleccionan los más
representativos (por ejemplo, el más tóxico) en base de ir más rápido en un análisis.
 Transformaciones químicas en el análisis: se deben evitar durante el transporte,
cuando hago almacenamientos o tal debo de evitar transformaciones que puedan surgir
en las muestras como oxidaciones, hidrolisis…
 Incertidumbre de los resultados:
 Extractabilidad: capacidad teórica que se tiene para extraer un compuesto, esto sería
como el valor teórico.
 Recuperación: esta varía con el tiempo, es lo que se ve que se extrae.
 CRM: material de referencia certificado.
 Exactitud: diferencia entre el valor real y el que se da como más probable, es muy difícil
de evaluar, de medir, porque para saber la exactitud primero se necesita saber cuánto
hay de una cosa.
 Precisión: es la variabilidad.
 Límite de cuantificación: concentración mínima que se cuantifica en la acreditación.
 Proficency tests: ensayo de intercomparación, es un ejercicio de interlaboratorio cuyo
objetivo es evaluar un método de análisis previamente determinado por los
organizadores, valorando las características que una serie de laboratorios seleccionados
han obtenido al seguir un procedimiento o norma perfectamente definidos.

RUTINA DE CONTROL DE CALIDAD

Un sistema de calidad es un conjunto de procedimientos y responsabilidades con el que una

empresa asegura que cualquier químico analítico dentro de la misma dispone de la
infraestructura y recursos necesarios para realizar medidas que se adecuen a las demandas del
cliente.

La calidad de un laboratorio en el que se ejecutan los análisis depende de cada una de las
funciones que realiza, que van desde la operación de muestreo, registro de muestras y
submuestreo, hasta la obtención y análisis de resultados.

- Control de sensibilidad
- Uso de estándares internos: no debe de variar, no debe de degradarse fácilmente, que
no se encuentre en la muestra. Se suelen usar compuestos como los que estamos
analizando, pero marcados isotópicamente, están marcados con Deuterio, en vez de
 salir M saldrá M+1 (que es el deuterio) es idéntico al que se analiza, pero nunca va a
interferir en el resultado. Este estándar puede ser:
 Proceduras
 Inyección
 Cuantificación

Un estándar interno de procedimiento (P-IS) es un estándar interno agregado al comienzo del

método analítico para tener en cuenta varias fuentes de errores a lo largo de todas las etapas
del método.

Para los métodos multiresiduos, es recomendable utilizar más de un IS en caso de que se

comprometa la recuperación o detección del IS primario. Cuando se trata de un grupo específico
de analitos con propiedades similares, el IS puede elegirse para exhibir propiedades y
comportamiento analítico similares a los compuestos de interés.

Con la mayoría se usan compuestos como los que yo analizo, pero marcados isotópicamente y
así no interfiere en el resultado.

El problema de la exactitud es que muchas veces no hay materiales de referencia, una norma de
la ISO es que hay que evaluar la exactitud, la otra posibilidad para evaluar la exactitud es
haciendo tests de eficiencia, si hay materiales de referencia no es necesario hacerlo. El objetivo
no es el método, es el resultado.

Z-SCORE

Calculo cuanto me desvío del valor asignado primero y después la desviación estándar. Si este
es menor o igual a 2 será aceptable, si se encuentra entre 2 y 3 cuestionable y si es mayor a 3 no
será aceptable. Está muy vinculado a los valores de cuantificación.

PREGUNTAS

 ¿De qué depende la calidad de los resultados analíticos?

De la exactitud y precisión que tengan los resultados. La calidad de los laboratorios

dependerá de su laboratorio de control de calidad

 ¿Son los resultados más precisos siempre de mayor calidad que los imprecisos?

No, depende sobretodo de la exactitud

 ¿Es siempre importante obtener una muestra representativa?

Si, es necesario porque si no la tengo todo lo que haga después no vale para nada

 ¿Es cierto que en todo tipo de análisis es necesario mejorar el método para obtener
una mejor exactitud de los resultados?

No, lo que hay que mejorar es el control de calidad.

 Describe el papel del químico analito antes de proceder a ejecutar un análisis

Se debe de tener información de la muestra, esto será útil para el análisis

 Factores a considerar si nos solicitan evaluar la calidad de un detergente

Directivas y legislación de un detergente.

 ¿Por qué es importante para el químico analítico conocer la razón o razones para
ejecutar un análisis y el origen de la muestra? Ilustrarlo con varios ejemplos

Porque se debe de tener información para ver que compuestos se deben de medir.

 Comentario si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones:

a) El químico analítico solo puede dar un resultado del análisis de una muestra si ha
realizado la toma de muestra

Falso, el que toma la muestra debe de ser un inspector autorizado

b) Es importante establecer antes de los análisis el grado de precisión y exactitud que

se requiere

La exactitud y la precisión de un laboratorio, es la que tiene.

c) La estabilidad de los analitos en una muestra debe saberse a priori de la toma de

muestra

Verdadero, es conveniente porque si no será difícil hacer el transporte y

almacenamiento de la muestra para evitar equivocaciones. En función de que
compuestos sean se podrá organizar todo esto.

d) La conservación de la muestra no siempre es importante

Verdadero. Depende, en cosas que se pueden degradar no es muy importante. Puede

ser muy importante o muy poco importante, depende.

 Proponer relaciones del tipo muestra-analito que requieren especiales condiciones de

conservación
- Si analizamos algo que lleva plástico, que el recipiente no sea de plástico
- Si un compuesto es volátil, tener seguridad de que el recipiente este herméticamente
cerrado
- Compuestos que se degradan con la luz de sol, tapar la botella con papel de aluminio
 Diferenciar entre muestreo primario y secundario. ¿Son los errores posibles comunes
a ambos procesos?

Hay un muestreo en el campo (primario) generalmente es en mayor cantidad en masa o

volumen y otro en el laboratorio (secundario) en este hay que homogeneizar muy bien para
garantizar que lo que se tome represente bien la muestra traída y las cantidades son
menores.

 Comentar si es verdadera o falsa la siguiente afirmación:

o La buena calidad de un resultado implica siempre n alto grado de exactitud
y/o precisión: Verdadera, exactitud Y precisión.
 Establecer que información se solicitaría si se nos pidiera:
o Establecer las causas de intoxicación de antibióticos en una determinada
población: debido a las aguas residuales
o Considerar la importancia de llevar a cabo un riguroso control de calidad sobre
las materias primas en un proceso de fabricación: si las materias primas no son
las correctas, presentan impurezas pues esas impurezas acabaran en el
producto final.
 o Etapas a fórmulas para establecer el porque en pieles fabricadas en una
determinada fecha aparecieron unas manchas incontroladas:
 ¿Qué se entiende por calidad de una laboratorio analítico y de un resultado análisis?

La calidad de un laboratorio será la calidad de los resultados

 ¿Qué son las pruebas de pericia y para qué sirven?

Forma que tienen los laboratorios de demostrar su exactitud, ya que si no tienen materiales
certificados de referencia deben de hacer estas pruebas.

 Indicar e cual de las siguientes situaciones seria ventajoso disponer de sistemas de

calidad ne los laboratorios: SIEMPRE
a) Indican que la política lde laboratorio esta encaminada hacia conseguir una calidad de
los resultados
b) Serviría para identificar el grado de responsabilidad de los trabajadores
c) Serviría para reducir el riesgo de errores que se pueden cometer en la ejecución de un
análisis

RESPUESTA: la c)
TEMA 2. SELECCIÓN DEL MÉTODO DE ANÁLISIS
Es una etapa crucial en la resolución de un método analítico, en esta etapa se debe decidir el
diseño y planificación del proceso analítico más adecuado para alcanzar los objetos propuestos,
el proceso engloba muchos pasos:

Análisis

Se planifica:

- El muestreo, almacenamiento y conservación de la muestra.

- Tratamiento de la muestra.
- Eliminación de sustancias interferentes.
- Determinación del analito.
- Procesado de datos.
- Interpretación de los resultados.
- Emisión del informe final.

*Definición del problema:

- Naturaleza de la muestra
- Número de muestras
- Material disponible
- Intervalo de concentración
- Potenciales interferencias
- Exactitud requerida
- Información bibliográfica
- Tiempo disponible
- Coste

No hay que buscar el mejor método, sino el que mejor se adecúe al problema.

1. FACTORES A EXAMINAR EN LA SELECCIÓN DEL MÉTODO DE ANÁLISIS

1.1. Información requerida
El químico debe conocer con exactitud el tipo de información que requiere el cliente. Es fácil
entender que el planteamiento será sustancialmente diferente:

- Si únicamente se necesita dar un informe cualitativo sobre una determinada muestra o,

por el contrario, se necesita que sea cuantitativo.
- Si se requiere que la información sea generalizada (contenido total) o que sea
discriminada (determinación de especies).
- No es lo mismo que los resultados deban entregarse rápidamente, o incluso que se
deban conocer en tiempo real, o que el tiempo no sea un factor decisivo.
- Si se requiere una gran exactitud en los resultados o bien solo se exige que estén por
debajo de un determinado valor.
1.2. Muestra

El conocimiento de la muestra resulta un punto clave a la hora de planificar la metodología a

seguir, así, debe conocer:

- El estado físico de la muestra, sólido, líquido o gas.

- Si es una muestra estable o no lo es.
- Si es homogénea o, por lo contrario, presenta una alta heterogeneidad.
- Si se dispone de mucha cantidad o, por el contrario, es muy poco asequible.
- Si presenta una matriz sencilla o bien es compleja.

Una vez que se conoce está información, se pueden diseñar diferentes etapas dentro de la
metodología general de análisis, como son:

- Forma de almacenar y conservar la muestra.

- Tamaño de la muestra a analizar.
- Puesta en disolución de la misma.
- Necesidad de etapas de separación o de limpieza (clean-up).
1.3. Analitos

Es preciso definir los compuestos cuya presencia o concentración debe conocerse. Los analitos
pueden ser uno o por el contrario muchos; pueden tener naturaleza inorgánica u orgánica,
pueden ser macroconstituyentes, microconstituyentes o trazas.

1.4. Recursos instrumentales y humanos

El material instrumental, así como el personal del que dispone el laboratorio donde se va a
realizar el análisis constituye otro de los factores importantes, que muchas veces es decisivo a
la hora de seleccionar un determinado método. No se puede trabajar con lo que no se tiene, por
ello habrá que hacerlo con los medios disponibles o si no ser consciente de ello y no
comprometerse en la resolución de un determinado problema analítico.

1.5. Coste

Hay que tener en cuenta el precio que está dispuesto a pagar el “cliente” con el fin de ajustar
los medios, esfuerzo y tiempo a los precios convenidos.

2. TIPOS DE MÉTODOS

En función del conocimiento del analito:

 - Cualitativo: confirmación de presencia, identificación de desconocidos.
- Semicuantitativo: kits de ensayos rápidos.
- Cuantitativo: valor definido de la concentración del analito.

En función del grado de confianza:

- Métodos de barrido o Screening o criba: no da un grado de confirmación muy elevado.

Hace referencia a una criba o barrido rápido de las muestras a analizar. Estos métodos
deben cumplir algunos requisitos: deben ser rápidos, de bajo coste y no deben dar falsos
negativos.
- Métodos de vigilancia: son similares a los de barrido, pero generalmente son más lentos
ya que el número de muestras analizadas por unidad de tiempo es menor, sin embargo,
conducen a resultados cuantitativos.
- Métodos reguladores: son prescritos por organismos oficiales para el cumplimiento de
una regulación específica. Elevado grado de confianza.
o Confirmatorios: para confirmar un análisis y suelen ser métodos de rutina.
o De referencia: son métodos perfectamente válidos y probados.

3. PARÁMETROS DE CALIDAD DE UN MÉTODO ANALÍTICO

3.1. Límite de detección y de cuantificación (determinación)

En términos generales, se puede decir que el límite de detección de un analito es la mínima

cantidad de este que proporciona una señal significativamente diferente de la señal del blanco
o fondo. Se define teóricamente como la concentración a la que la relación señal ruido es igual
a 3. El límite de detección, idealmente, debe tener un valor que sea la décima parte de la
concentración a medir.

El límite de determinación o cuantificación se define como la mínima cantidad de analito capaz

de ser determinada por un método analítico con una precisión y exactitud aceptable. Por ello,
este límite es siempre mayor que el de detección. Es la concentración a la que la relación señal
ruido es igual a 10.

3.2. Sensibilidad

Es el cambio que experimenta una determinada señal analítica por unidad de concentración. Es
la capacidad para discriminar entre concentraciones semejantes de analito, será mayor cuanto
más semejantes sean las concentraciones que se pueden diferenciar o más bajas sean las
concentraciones que se puedan detectar/determinar.

La IUPAC la define como la pendiente de la curva de calibración a la concentración de interés.

Viene limitada por la pendiente de la curva de calibración y la reproducibilidad o precisión del
sistema de medida. Para dos métodos que tengan igual precisión, el que presente mayor
pendiente será el más sensible.

3.3. Exactitud

Es el grado de concordancia entre el resultado de una medida (x i), o la media de n resultados, y

el valor considerado como verdadero del analito de interés en la muestra problema. Es la
proximidad entre el resultado obtenido y el valor de referencia adecuado. Determinación de la
exactitud:
 - Material de referencia certificado (CRM) o blancos de muestras fortificados: una
muestra cuya concentración en el analito de interés es conocida, de naturaleza similar
a las muestras problema.
- Se compara el valor obtenido con el valor considerado como verdadero.
3.4. Representatividad

Es una propiedad analítica, clasificada como suprema, que está relacionada con la generación
de resultados coherentes con las muestras recibidas en el laboratorio, el sistema en estudio y el
problema analítico planteado. A veces no depende de nosotros, sino de la toma de muestra.
Por lo que el control no es directo. Es importante planificar la estrategia de muestreo para que
la muestra que se coja sea lo más representativa y completa que haya.

3.5. Precisión

Grado de concordancia entre un grupo de resultados, obtenidos al aplicar de forma repetida el

mismo método a una misma muestra. Cómo de cercano están los resultados, es decir si haces
15 análisis, cómo de cerca están esos 15 análisis.

Se define como la dispersión de los valores obtenidos alrededor del valor medio, o bien como la
proximidad entre los resultados obtenidos por aplicación del mismo procedimiento
experimental varias veces bajo condiciones predescritas.

Depende exclusivamente de la distribución de errores aleatorios y no del valor verdadero. La

precisión junto con la exactitud son los dos parámetros más importantes de los que se dispone
para cuantificar la calidad de un método de análisis.

Hay que diferenciar entre exacto y preciso, solo el primero hace referencia al valor verdadero o
de referencia y por lo tanto tiene en cuenta errores sistemáticos.

Normalmente, la evaluación de la precisión precede a la de la exactitud para de esta forma poder

conocer posteriormente los errores determinados o sesgo del método. La medida de la precisión
es una forma de cuantificar lo reproducibles que son unos resultados, ¿es lo mismo
reproducibilidad que repetibilidad?: ambas sirven para cuantificar la precisión de un método,
pero se diferencian en las condiciones en las que se han llevado a cabo las medidas.

3.6. Repetibilidad
Este término se refiere a una evaluación de la precisión a partir de una serie de resultados
individuales obtenida de forma idéntica, mismo operador, misma muestra, mismo instrumento,
mismo laboratorio.

- Medida de la variabilidad (interna) del proceso.

- Reflejo de la máxima precisión (mínima dispersión) que el método puede alcanzar.
3.7. Reproducibilidad

La evaluación de la precisión se realiza bajo condiciones experimentales diferentes, diferente

muestra, diferente operador, diferente laboratorio, diferente instrumento.

- Medida de la variabilidad del proceso (interno y/o externo).

- Refleja la mínima precisión (máxima dispersión) de un método analítico.
3.8. Rango lineal o dinámico

Es el intervalo de concentraciones en que es aplicable un método analítico, se trata del intervalo

de concentraciones en el que el analito presenta una recta de calibrado lineal.

3.9. Selectividad

Es una medida del grado de interferencia que producen los compuestos que acompañan al
analito en la muestra. La presencia de compuestos interferentes produce errores sistemáticos o
determinados y constituye uno de los problemas más importantes en química analítica.

Es la capacidad para originar resultados que dependen de forma exclusiva del analito/os para su
identificación o cuantificación en la muestra. Su falta afecta a la exactitud haciendo que el
resultado se aleje del valor verdadero.

Existen diferentes tipos de interferencias, la clase más importante es de matriz (efecto matriz):
los compuestos interferentes producen una modificación de la pendiente del calibrado con
respecto a la del estándar, lo que origina un importante error en la cuantificación del analito.

3.10. Robustez

Es la capacidad del método para permanecer relativamente insensible a ligeros cambios en el

procedimiento, a la calidad de los reactivos o a las condiciones medioambientales.

4. VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

Solamente cuando un método ha sido validado, la información proporcionada será una base útil
para posteriores decisiones sobre la implantación de medidas medioambientales, sobre
diagnósticos y tratamiento de pacientes, etc.

Los laboratorios deben demostrar que sus métodos analíticos proporcionan resultados fiables
y adecuados para su finalidad y propósito perseguido, ya que muchas de las decisiones que se
toman están basadas en la información que estos datos proporcionan.

Validar un método consiste en verificar y documentar su validez, esto es, su adecuación a unos
determinados requisitos, previamente establecidos para resolver un problema particular.

Un método se valida a partir de la norma ISO/IEC, los laboratorios deben validar todos sus
métodos a partir de esto.

 ¿Por qué validar un método analítico? Los métodos se deben validar puesto que pueden
existir errores sistemáticos y aleatorios dando lugar a defectos en la instrumentación, defectos
en el operador o en el método.

Todo esto puede venir dado por:

- No tener en cuenta la purexa de los patrones

- Utilizar patrones caducados sin comprobar su estabilidad
- No tener en cienta el efecto matriz
- No hacer blanco de reactivos
- No recalcular si se ha hecho dilución o concentración
- No emplear el método de extracción adecuado.

 ¿Qué hay que validar en un método analítico?

- Precisión, repitiendo muchas veces. Evaluándose la desviación estándar relativa, a partir
de la repetibilidad o de la reproducibilidad.
- Exactitud, con estudio de recuperación mediante material certificado (caro y no muy
disponible en función de la matriz) o patrones, es decir lo más sencillo es fortificar.
- Límite de detección y de cuantificación.
- Selectividad, análisis del blanco. En el caso de encontrarse es o porque está
contaminado o no es selectivo y hay que realizar modificaciones
- Linealidad, mediante recta de calibrado.
- Robusted, a lo largo del tiempo por modificaciones en el método de forma natural.

5. EQUIPAMIENTO DEL LABORATORIO

Las condiciones en las que se encuentre el laboratorio van a influir directamente sobre la
calidad de los resultados. Esto se acentúa conforme disminuye la concentración de los analitos
(a niveles traza o ultratraza). Variables a controlar:
a) Condiciones ambientales: en las instalaciones de un laboratorio debe tenerse en cuenta
que las condiciones ambientales del mismo influirán sobre los análisis llevados a cabo
en ducho laboratorio, así, factores como polvo, luz solar, humedad, temperatura, etc,
pueden afectar negativamente a los resultados finales.
b) Reactivos: como los empleados directamente en la reacción principal como los
secundarios: medios oxidantes o reductores, medios reguladores de pH, medios para
mantener la fuerza iónica, medios complejantes, etc. Uso de reactivos y disolventes de
alta pureza. Evitar contaminación. Almacenamiento correcto.
 c) Contenedores y material de vidrio: la elección del contenedor dependerá de la matriz
y de los analitos a determinar. Importante: limpieza del material y terminar con agua
destilada y disolvente. Calidad del material volumétrico.
d) Patrones y su preparación: la correcta preparación de los patrones es esencial, ya que
estos son los que vamos a utilizar para cuantificar. Importante: pureza de los patrones,
estabilidad, almacenamiento….
e) Equipos: mantenimiento y calibración: ideal: contrato de mantenimiento.
Mantenimiento diario, controles rutinarios. Importante: libreta de equipo. Calibración:
depende del instrumento, de la frecuencia de uso y de su ubicación.

PREGUNTAS

1. ¿Qué factores influyen en el límite de detección de un método analítico?

- La sensibilidad del equipo
- La señal/ruido
- EL efecto matriz: si tiene mucha carga de este efecto, habrá mas efecto s/r. También
relacionado con esto, esta el método de extracción que se aplique
2. Explicar las diferencias entre error sistemático y error aleatorio
- El error sistemático se puede corregir y el aleatorio no
- Errores sistemáticos: calibraciones, contaminación entre las columnas, falta de
mantenimiento de material.
- Errores aleatorios: no se pueden controlar. Son errores típicos de los instrumentos y de
la medida
3. Diferencia entre exactitud y precision
4. Es correcto decir que un método es preciso pero no exacto

Si es correcto, pero al ser preciso pero no exacto no te sirve de nada. Es muy preciso pero no
nos acercamos al valor verdadero

5. Explicar el significado de repetibilidad y reproductibilidad

TEMA 3: TOMA DE MUESTRA
1. INTRODUCCIÓN

La toma de muestra es una de las etapas previas de cualquier proceso de medida química. Tiene
como objetivo primordial reducir la masa total del material objeto del análisis a una porción que
pueda analizarse al nivel de laboratorio. La problemática de la etapa de toma de muestra nace
del hecho que las muestras relacionadas con un problema analítico no son homogéneas, sino
que, por el contrario, presentan discontinuidades tanto en su composición como en el contenido
del analito o analitos objeto de la determinación, pudiendo ser la heterogeneidad de la muestra
tanto en el tiempo como en el espacio.

La toma de muestra deberá permitir obtener muestras representativas de una población mayor.
Si la porción a analizar no es representativa del material original, no será posible relacionar el
resultado analítico con el material que formaba parte del problema analítico,
independientemente de la calidad del método analítico o el cuidado con el que se han llevado a
cabo los análisis.

Uno de los problemas asociados con la toma de muestra es que no se puede recomendar un
procedimiento único para obtener una porción representativa de un lote. A menudo el químico
analítico podrá aplicar un plan de toma de muestra basado en un protocolo estandarizado y
seguirá un procedimiento recomendado en una guía oficial, pero en la mayoría de las veces el
plan de toma de muestra deberá diseñarse según la muestra y el problema analítico específico,
siguiendo criterios estadísticos y/o personales del analista.

2. DISEÑO DE UN PLAN DE TOMA DE MUESTRA

La toma de muestra consta de una etapa previa en la que se diseña el plan de toma de muestra,
seguida de la posterior implantación de este en una situación práctica y real. Es necesario
contemplar una serie de puntos básicos en el diseño de un plan de toma demuestra.

Un plan de toma de muestra está formado por las etapas que aseguran que la muestra que será
analizada sea representativa de la población de todo el lote de muestra. Es un procedimiento
predeterminado para seleccionar, tomar, preservar, transportar y preparar las porciones que se
han de separar de la población en forma de muestras. Los detalles del plan dependerán del
problema analítico a solucionar y deberán ser especificados a priori, adaptándose al objetivo del
problema, considerando siempre el equilibrio entre el número y tamaño de las muestras a tomar
y el coste y esfuerzo que ello implica.

La toma de muestra se diseñará para evitar una contaminación de la muestra en el momento de

tomarla (por ejemplo, eligiendo el equipo y materiales adecuados en función de la naturaleza
del analito), para elegir cuándo llevarla a cabo, para preservar las formas y compuestos
químicos, para seleccionar un número o una masa de muestra y de la concentración de analito
y, en definitiva, para poder evaluar el error asociado y poder controlar la calidad del proceso.
  Definición de los objetivos: incluye decidir si se busca la composición media del lote de
muestra o se busca en cambio información sobre la heterogeneidad en su composición.
 Selección y definición exacta del lote de muestra y de los analitos a estudiar: así como
de los métodos analíticos utilizados en el análisis final.
 Establecimiento del método y del procedimiento operativo de la toma de muestra:
según criterios estadísticos y dependientes del problema analítico. El diseño estadístico
correcta será aquel que considere los objetivos del estudio, la información previa y la
incertidumbre de la forma de muestra. El establecimiento del método de toma de
muestras tendrá que incluir la descripción detalladas de los métodos experimentales de
toma de muestra, incluyendo el equipo y herramientas necesarios, la elección del
período y del momento de la toma de muestra, así como diseño del calendario para
aspectos indirectamente relacionados con la toma de muestra. El plan de operación de
toma de muestra deberá incluir aspectos relacionados con el aseguramiento de la
calidad en la toma de muestra, así como de aspectos legales y de seguridad personal
encargado de su realización.
 Establecimiento de las primeras etapas de pretratamiento de la muestra: en especial
de las etapas de transformación de la muestra primaria en muestra de laboratorio.
 Redacción del protocolo final del plan y de la operación de toma de muestra: el
protocolo deberá incluir todos los aspectos considerados en los puntos anteriores, pero
no se ha de considerar nunca como un documento definitivo.

3. ESTRATEGIAS GENERALES DE TOMA DE MUESTRA

El diseño de las estrategias generales de toma de muestra depende de si los criterios estadísticos
han sido tenidos en cuenta o, si por el contrario, la estrategia de la toma de muestra acaba
dependiendo del criterio del analista, que prioriza un factor experimental determinante en el
diseño de la toma de muestra.

3.1. Estrategias basadas en criterios probabilísticos

Cuando no se dispone de suficiente información previa de la población y cuando se busca una

muestra lo más representativa posible, es necesario llevar a cabo una toma de muestra
probabilística, que indica que todos los componentes del lote tienen una probabilidad uniforme
de ser tomados y que, en cambio, componentes ajenos al lote tienen una probabilidad nula.

A) Toma de muestra aleatoria

En este tipo de toma de muestra, las porciones de muestra se extraen del lote de forma que
cualquier porción de la población tiene la misma probabilidad de ser seleccionada. Se suele
utilizar cuando se dispone de poca información del material a estudiar, así como en ciertos
estudios relacionados con el control de productos manufacturados o la determinación de
propiedades físicas.

Es muy difícil en la realidad asegurar una muestra completamente aleatoria, ya que tomar
muestras al azar no es igual que tomarlas según un patrón aleatorio. Debido al riesgo de que los
números aleatorios determinen tomar porciones solo en una parte localizada del lote, la toma
de muestra aleatoria simple suele obligar a tomar un número muy alto de porciones.

B) Toma de muestra sistemática

Es una de las estrategias de toma de muestra más usada. Las porciones de muestra se toman en
intervalos (de tiempo y espaciales) predeterminados y definidos en el plan de toma de muestra.
El tipo de lote de muestra afecta directamente el patrón de la toma de muestra sistemática. Si
son lotes discretos puede tomarse una porción individual de forma periódica. Sin son lotes
continuos se puede transferir porciones del material a un contenedor, tomando cada vez toda
la profundidad y amplitud de la muestra en la cinta, a intervalos de tiempo predeterminados.

Una de las limitaciones en el uso de estrategias de toma de muestra sistemática es cuando la

población tiene una tendencia periódica de variación, temporal o espacial, ya que en este caso
el riesgo de obtener una población sesgada es superior al de otras estrategias, en especial
respectos a la toma de muestra aleatoria.

o Sistemático al azar.
o Regular o sistemático.
o Sistemático alternado
o Sistemático en gradiente.
3.2. Toma de muestra estratificada

La toma de muestra estratificada contempla la división de un lote de muestra inicialmente

heterogéneo en grupos homogéneos en cuanto a propiedades de la muestra, llamados estratos.
Dentro de cada estrato se puede seguir cualquier criterio en la consiguiente selección de
muestras, aunque en la mayoría de los casos suelen aplicarse criterios probabilísticos, en
general, y estrategias de toma de muestra aleatoria, en particular. El número de muestras a
tomar en un lote estratificado siguiendo una estrategia aleatoria en cada estrato será inferior
que si se siguiera una estrategia aleatoria simple para todo el lote. Una vez establecidos los
grupos y el número de muestras total a tomar del lote completo, las porciones de muestra se
toman dentro de cada estrato proporcionalmente a su peso o volumen relativo respecto al total.

4. HERRAMIENTAS DE MUESTREO: INFORMACIÓN Y REQUISITOS GENERALES

Todas las herramientas de muestreo deben estar diseñadas y fabricadas para cumplir con su
finalidad y preservar las características originales de los productos en los que se utilicen.

Las herramientas de muestreo deben cumplir con los siguientes requisitos generales:

- Deben ser lo bastante robustas para soportar las operaciones de manipulación.

- Deben ser de fácil limpieza.
- Todas sus piezas deben estar hechas de materiales resistentes a:
 o Los efectos de los productos en los que se utilicen (por ejemplo, el ácido de las
frutas o los productos químicos).
o Los productos de limpieza (por ejemplo, lejía o tensoactivos).
- Deben cumplir además con los requisitos de seguridad.

Siempre debe comprobar si están limpias antes de usarlas. Después de utilizarlas, debe limpiar
las herramientas de muestreo siguiendo las instrucciones correspondientes.

 Muestreo de líquidos. Se podrán utilizar las siguientes herramientas: bomba de vacío,

recipientes de inmersión, pipetas, cucharones para muestras, tomamuestras con tubo
de pistón…
 Muestreo de sólidos en polvo o granulados. Se podrán utilizar las siguientes
herramientas: lanzas tomamuestras, tomamuestras tubulares, tomamuestras zonales,
palas de muestreo, tomamuestras en espiral, tomamuestras para productos
congelados, tomamuestras perforadores…
 Toma de muestras de gases. La toma de muestras requiere un cilindro metálico (cilindro
toma muestras) para tomar la muestra y transportarla. El cilindro toma muestras es un
equipo que incluye cilindro calificado para presión y válvulas de cierre de entrada y
salida.

También se podrán utilizar otras herramientas adecuadas, similares a las recién mencionadas,
con el objetivo de obtener muestras, siempre que puedan realizar las operaciones descritas y
cumplir con los requisitos en materia de seguridad. Se podrán utilizar otras herramientas para
agregar muestras primarias o para homogeneizar, separar, reducir, despiezar las muestras
finales. Con este fin se podrán utilizar diversas cajas, bidones, latas, cubos, etc., de plástico o de
metal, con sus mezcladores correspondientes. Al sumergir recipientes de inmersión se podrán
utilizar diversas bobinas manipuladas manualmente y cables de bajada y izado.

Las herramientas diseñadas para el muestreo de productos petrolíferos, disolventes orgánicos

y otros líquidos fácilmente inflamables, y gases deben estar aprobadas para dicho uso. Tendrán
que estar hechas de materiales suficientemente electroconductores para evitar que se genere
electricidad estática y no deberán generar chispa al ponerse en contacto con otros objetos
metálicos.

Las herramientas utilizadas para el muestreo de líquidos en profundidad deben estar atadas a
un cable, una cuerda o una cadena lo bastante largos para tomar las muestras al nivel necesario.
Los cables, las cuerdas y las cadenas utilizadas para el muestreo de líquidos muy inflamables
deben estar hechos de materiales que eviten la generación de electricidad estática.

Muestreadores pasivos, deben de permitir acumular, se pueden poner en cualquier sitio. Uno
muy típico de agua son uhnos filtros que absorben, mas polares y menos polares, se meten en
una caja se cierra y se pone en el lugar. Luego se coje el filtro, se eluye y se analiza y la
variación del tiempo no le afecta demasiado. (no se donde va esto pero la Sonia lo tiene
copiado así que lo coloco por aquí mismo )

4.1. Toma de muestras sólidas

A) Materia particulada en movimiento

El tamaño de partícula es el aspecto clave al plantearse la toma de muestra de un flujo continuo

de partículas sólidas. De hecho, el tamaño de la porción de muestra que se colecta dependerá
del tamaño máximo de partículas, para minimizar el riesgo de una toma de muestra sesgada
hacia partículas de pequeño tamaño. Ejemplo: una muestra en una cinta transportadora.

B) Materia particulada estática

La toma de muestra de materia particulada estática conlleva un alto riesgo de falta de

representatividad debido a la diferente distribución de las partículas en función de su tamaño.
La calidad de la toma de muestra se ve beneficiada en el caso de que las partículas tengan un
mismo tamaño. Se recomienda llevar a cabo la toma de muestra con sondas que permitan
obtener muestra de secciones en vertical u horizontal, para compensar la posible
heterogeneidad de la muestra. Una sonda es un tubo, usualmente metálico, que al ser insertado
en la muestra retiene una porción de esta en forma de cilindro. Un tipo de sonda similar consiste
en dos tubos concéntricos, en el que el tubo exterior acaba también en una punta filada. Estos
dos tipos de sonda se utilizan cuando el material es fino y permite un fácil acceso con el tubo.

C) Materiales compactados

La toma de muestra dependerá de si el análisis es determinar la concentración de un

componente mayoritario o minoritario, o si en cambio se busca el control de una propiedad
física del material.

El equipo para la toma de muestras compactas se basa en el uso de sondas como las vistas en el
apartado anterior, o más bien sondas del tipo barrena que llevan acoplado un dispositivo que
facilita la perforación y que realizan orificios a través de la masa compacta, o bien taladros de
hasta 30 cm de diámetro, que astillan o cortan la muestra. La diferencia puede radicar que al
utilizar los taladros la muestra se rompe en partículas más pequeñas y existe el riesgo de no
recoger toda la muestra y perder representatividad.

No siempre es posible realizar taladros de las muestras, especialmente si la muestra tiene un

valor económico específico y el análisis posterior es destructivo. Si la homogeneidad de la
muestra puede ser considerada como muy alta, como es el caso de materiales metálicos
procedentes de metales puros o de mezclas fundidas, la toma de muestra puede simplificarse y
basarse en tomar simplemente una porción de un extremo o de una superficie de la muestra.

4.2. Toma de muestras líquidas

En un principio la toma de muestra de líquidos se presenta más sencilla que la de sólidos, aunque
esta afirmación es solo cierta cuando la muestra líquida tiene una única fase o bien cuando la
cantidad de muestra es suficientemente pequeña para que pueda ser homogeneizada por
agitación antes de la toma de muestra.

Tipos de líquidos:

- Homogéneos o fáciles de homogeneizar

- Heterogéneos, emulsiones o suspensiones (estables o inestables)
- Mezclas de líquidos inmiscibles
- Líquidos con depósitos sólidos
- Mezclas de líquidos volátiles
- Líquidos dinámicos
- Fluidos biológicos

Tipos de muestras líquidas:

 - Si están en movimiento o estáticas
- Si son sistemas abiertos o cerrados

A) Muestras líquidas en movimiento en sistemas abiertos

La toma de muestra dependerá de si el medio es limpio (con una baja concentración de analitos,
como el océano), que presenta un alto riesgo de contaminación al tomar la muestra, o si el
medio presenta altas concentraciones de analitos (como en afluentes industriales).

Los equipos varían si son para tomar la muestra superficialmente o en la columna de agua a
grandes profundidades. Se emplean contenedores en forma de botellas con cuello amplio que
descansan en una cesta con un peso y un tapón que se quita al llegar a una profundidad
determinada para colocar de nuevo el tapón antes de recuperar la botella con las muestras
(botellas tipo Niskin).

La toma de muestras en ríos y afluentes industriales se recomienda poner un tamiz con un ojo
de malla pequeño en la entrada de la muestra, para evitar la entrada de sólidos. En vez de
botellas, se puede utilizar equipos que bombean la muestra continuamente y con equipo de
filtración incorporado.

Para la localización de puntos de toma de muestra, evitar puntos superficiales, cercanos al fondo
o zonas de estancamiento. El plan de toma de muestra deberá considerar que no haya
contaminación de las muestras líquidas tomadas por partículas de polvo ni aerosoles, y decidir
la estrategia a seguir con los sólidos en suspensión. Se recomienda filtrar la muestra y analizar
los sólidos en paralelo con la muestra líquida filtrada.

B) Muestras líquidas en movimiento en sistemas cerrados

En sistemas cerrados (por ejemplo, canalizaciones o tuberías en una industria), el parámetro que
controla la homogeneidad de las muestras líquidas es la velocidad de flujo. A bajas velocidades,
predomina el flujo laminar, siendo mayor en el centro de la conducción y menor en las paredes
de la misma. Debido a esto, es necesario crear una turbulencia antes del punto de extracción
para homogeneizar la muestra, mediante un ángulo recto en la conducción o un cambio en el
diámetro de la misma. Otra opción es tomar muestras en diferentes puntos transversalmente a
la masa líquida.

Por otra parte, a velocidades altas esto no es necesario ya que el flujo es turbulento de por sí,
asegurando la agitación y la homogeneidad de la muestra. La muestra se toma en la dirección
opuesta al flujo del líquido. El diámetro del tubo de toma de muestra, que va conectado al
recipiente de muestra, deberá adaptarse también a la velocidad del flujo de la muestra.

C) Muestras de líquidos almacenados en contenedores cerrados

Lo más común son líquidos en tanques. Un problema es que la posible heterogeneidad de la

muestra viene afectada por la estratificación por las diferentes densidades de los líquidos. Ya
que la homogeneización no se puede llevar al cabo dentro del tanque se tomarán muestras a
diferentes profundidades. Este procedimiento será muy indicado si los analitos de interés se
acumulan en alguna de las capas del tanque. Si la cantidad de volumen a tomar supera la
capacidad del contenedor, se han de tomar diferentes porciones de varios contenedores,
preparando una muestra compuesta.

D) Muestras de líquidos estáticos en sistemas abiertos

Las muestras líquidas estáticas se extraen en lagos, embalses o en aquellos medios donde el
agua no esté en movimiento a varias profundidades con tal de tener un gran abanico de
muestras. Mayor diversidad.

La toma de muestra se puede realizar con una botella similar a la que se utiliza en medios
líquidos en movimiento, aunque también se pueden utilizar bombas succionadoras para la toma
de muestra. Para evitar posibles inconvenientes en el futuro se recomienda construir una
estación permanente de toma de muestra a distintas profundidades. Periodicidad.

APLICACIÓN Y MANEJO DE APARATOS Y EQUIPOS

- Pipeta: se usa para tomar muestras representativas de pequeños volúmenes de líquido.

- Sonadas para líquidos: para tomar muestras líquidas, por medio de sondas, se
introducen en el líquido

MUESTREO MICROBIOLÓGICO

Para el muestreo microbiológico de aguas, por ejemplo, en una tubería hay que:

1) Desinfectar con alcohol, abrir la llave y desechar las primeras porciones.

2) Cerrar el grifo y flamear la gota que queda pendiente hasta que emita vapores.
3) Abrir el grifo dejando fluir el líquido durante 1-2 minutos antes de recogerlo en el
recipiente estéril de la toma de muestras.
4) Será cerrado convenientemente en condiciones asépticas.

5. ETIQUETAJE DE LAS MUESTRAS

Es obligatorio tener una documentación detallada y formalizada de todo el proceso, para

posibilitar el reconocimiento y el control de los posibles errores. Los recipientes que contienen
las muestras tienen que estar etiquetados adecuadamente, incluyendo información relacionada
con el origen de la muestra, el analito a determinar e información complementaria, como son
aspectos de seguridad si la muestra fuera peligrosa. Se recomienda utilizar un código de
etiquetado previamente establecido en el plan de toma de muestra. Las muestras se etiquetan
en el momento en que son tomadas con la siguiente información:

- Número/código de la muestra
- Descripción del material
- Lugar de muestreo
- Fecha y hora del muestreo
- Muestreador y método de muestreo
- Información adicional (pH, temperatura, etc.)
VOCABULARIO

 Lote: serie homogénea de unidades de producción en un proceso (N).

 Muestra: parte de lote sobre el que se realiza la inspección con el objetivo de evaluar la
calidad del total del lote (n).
 Unidad de producto: elemento que se inspecciona para determinar si se considera
defectuoso o válido, o bien para señalar el número de defectos que tiene.
 Unidad no conforme: unidad que no cumple un requisito especificado. El número de
unidades no conformes de una muestra representa por la letra d.
 Nivel de calidad aceptable (NCA): porcentaje máximo de unidades defectuosas.
 Número de aceptación (A): número máximo de unidades defectuosas que pueden
aparecer en una muestra para que el lote inspeccionado sea aceptado.
 Número de rechazo (R): número mínimo de unidades defectuosas que pueden aparecer
en una muestra para que el lote inspeccionado sea rechazado.

En el establecimiento del número inicial de muestras deberán considerarse las siguientes

premisas:

- El error de muestreo no decrece al mismo ritmo que aumenta el tamaño del muestreo.
En el muestreo aleatorio, por ejemplo, el error varía inversamente con la raíz cuadrada
del tamaño del muestreo; por lo tanto, el aumentar el tamaño del muestreo suele
resultar ventajoso cuando este es pequeño, pero no logra disminuir mucho el error si el
número de muestra es ya grande.
- La variabilidad de la población es el factor principal en la determinación del tamaño del
muestreo, por lo que este no ha de ser necesariamente proporcional a la superficie del
sitio de estudio. Para conocer la variabilidad de la población puede ser conveniente
realizar un estudio piloto del sitio potencialmente contaminado.
- Será necesario estimar el tamaño muestral óptimo que establezca un error de muestreo
aceptable, para cada uno de los procedimientos alternativos considerados. En este
sentido, cabe considerar que a medida que aumenta el tamaño muestral, disminuye el
error de muestreo, por tanto la calidad de los datos será más adecuada para garantizar
una información fiable acerca de la zona estudiada. Con este objetivo, puede ser útil
definir una función que permita calcular el tamaño de muestreo para cada
procedimiento alternativo, considerando el error de muestreo admitido.
- El coste total el estudio será el otro aspecto a considerar previamente a la selección del
procedimiento de muestreo. Será necesario desarrollar una función de coste que
relacione el coste total del muestreo, en función del número de muestras necesarias y
el consiguiente análisis de las mismas.

En definitiva, se realizará un balance entre los dos aspectos mencionados (tamaño de muestreo
y coste total del estudio), y se seleccionará el procedimiento más adecuado para la satisfacción
de los objetivos de calidad de datos.

NÚMERO DE MUESTRAS

El número de muestras que se debe tomar viene dado por el valor máximo del error admitido.
Si las muestras tomadas de la población responden a una distribución normal se cumple:
PREGUNTAS

6. ¿Por qué es importante considerar la etapa de medida química en el diseño de la toma de

muestra? Osea como afecta el análisis en la toma de la muestra

Para la etapa de pre-tratamiento ya que si yo tengo una concentración muy baja, no puedo
llegar a su análisis y por tanto lo tendré que pre-tratar con una pre-concentración por ejemplo.

7. Destaque dos fuentes de error sistemático y dos fuentes de error aleatorio en la etapa de
toma de muestra

Error sistemático: Son aquellos que afectan al error del muestreo, las oxidaciones por ejemplos
son aquellos que no puedo corregir en el análisis. Por ejemplo, que haya evaporaciones, que
entre un contaminante adicional, es decir, en aquellos que la muestra no viene bien precintada
y hay posibilidad de contaminantes, entre otros.

Error aleatorio: Los puedo corregir en el análisis.

8. ¿Qué factores considerarías en la elección del tamaño de la porción de muestra en el análisis

de fosfatos en una botella de Coca-Cola?

Tiene como 200 ppb y con unos 5 de diferentes botellas nos valdría. Hay que tener en cuenta
el quitarle primero el CO2

9.¿Qué fuentes de variabilidad puede tener un resultado analítico?

Los errores.

Los aleatorios se pueden corregir, calibrando y controlando el instrumental. Estos se controlan

sobre todo con personas externas.

[Link] si las siguientes tomas de muestra son o no equivalentes en términos de precisión:

a) Se toman 5 prociones de un material y se analiza una alícuota de cada porción

b) Se toman 5 porciones de un material. Se prepara una muestra compuesta y se analizan 5

alícuotas

La b) es mejor porque es la muestra compuesta y te aseguras de que haya de todo sin

embargo, no podrías saber donde esta el error porque esta todo mezclado, es decir, pierde
información. Además si hubiese una muestra de las 5 con una concentración muy baja podría
darse el caso de que no puede identificarse.

Ventaja, valor más real.

Inconveniente, pierdo el saber donde está el error y efecto dilución

16. IMPORTANTE. Elegir 10 botellas al azar de un conjunto de 500 botellas que están
almacenadas en una caja, ¿es una buena estrategia de toma de muestra?

Depende de muchas cosas pero la variabilidad suele estar tabulado entonces buscas en este
caso entre 200 y 500 al nivel 2 y es H, lo buscas y ves que 10 es correcto.
TEMA 4. TRATAMIENTOS PREVIOS DE LA MUESTRA, SUBMUESTREO Y
CONSERVACIÓN
1. PRETATAMIENTO DE LA MUESTRA

Es la etapa intermedia entre la toma y el tratamiento de muestra. El pretratamiento incluye las

operaciones físicas sobre la muestra antes de iniciar los procesos analíticos implicados en su
disolución o preparación para el análisis (conservación, trituración, homogeneización, secado,
etc.)

Tratamiento es la etapa que implica someter la muestra a procesos físicos y químicos con o sin
reacciones químicas para prepararla para el análisis. Este proceso incluye desde etapas de
compactación hasta los tratamientos más exhaustivos y sofisticados como son las fusiones o
extracción con fluidos supercríticos.

El pretratamiento de la muestra está condicionado inevitablemente a las distintas características

de la muestra.

REQUISITOS GENERALES EN EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS

1) Sin perder ningún analito de la muestra.

2) Transformación del analito a la mejor forma química para el método que se va a
emplear.
3) Eliminación de algunas interferencias de la matriz.
4) Sin agregar nuevas interferencias.
5) Dilución o concentración de los analitos para que sus concentraciones queden dentro
del intervalo adecuado al método.

1.1. Secado de la muestra

La presencia de agua o de humedad en muestras sólidas suele dar lugar, por lo general, a
alteraciones no deseadas para el posterior análisis tanto de compuestos orgánicos como
inorgánicos al producirse alteraciones de la matriz, disoluciones parciales de la muestra etc. Así,
el contenido en agua influye en muchos casos directamente en la extracción de algunos analitos
de muestra complejas lo que hace necesario el secado previo de las mismas. En muchos casos,
especialmente en la determinación de compuestos orgánicos, el agua presente en la muestra
puede inducir reacciones de hidrólisis, lo que daría lugar a posibles pérdidas de analitos si no se
toman las precauciones necesarias.

Los resultados se deben referir a la unidad de masa (g) de muestra seca para que sean
independientes de dichos efectos. Esto da lugar a la determinación con precisión del contenido
de humedad en una alícuota antes el análisis o bien se elimina cuantitativamente antes de
proceder a su pesada. Se recomienda determinar el factor de humedad en un alícuota e
introducir el factor de corrección adecuado en las porciones empleadas en el análisis
correspondiente.

Este proceso suele realizarse antes de las etapas de trituración y homogeneización, en algunos
casos es recomendable volver a secar antes de la determinación final. El tiempo de secado es
dependiente del tamaño de partícula (a menor tamaño, mayor superficie y por tanto el proceso
de deshidratación está favorecido).
Las principales vías de secado de muestras son el empleo de hornos (estufa) y la liofilización. El
secado de aire no está recomendado para el análisis de trazas metálicas ya que el riesgo de
contaminación es elevado al permanecer la muestra en contacto con el aire durante tiempos
excesivamente largos.

A) Secado en estufa

La muestra se coloca generalmente en un vidrio de reloj y se introduce en un horno a alta

temperatura (aproximadamente 100 ºC si la cantidad de muestra es pequeña) durante el tiempo
necesario para producir la eliminación completa del agua. Si se desea secar cantidades elevadas
de muestra, se sigue el mismo proceso en hornos relativamente granes a temperatura
perfectamente controlada. Cuando no se puede aplicar altas temperaturas, la muestra se puede
secar en secadoras especiales que mantienen un flujo laminar constante de aire sin riesgos de
contaminación.

Inconvenientes: pérdida de compuestos volátiles (uso de estufas de flujo laminar). Ejemplo:

mercurio metálico.

B) Liofilizador

Aunque es un proceso más caro que el secado en horno, su empleo es recomendado cuando
existe un riesgo elevado de pérdidas de analitos o de descomposición de la matriz con el
calentamiento empleado.

Es un proceso de secado en frío. Para ello, en una primera etapa, la muestra se congela (-40 ºC
con nitrógeno líquido) para posteriormente someter el sistema a vacío (aproximadamente, 10
Pa de presión residual) consiguiendo así que el hielo sublime pasando directamente a vapor de
agua, el cual es eliminado automáticamente del sistema. Es adecuado para el secado de
alimentos, materiales biológicos y plantas.

Inconveniente: no está exento de riesgos de contaminación y pérdidas de analitos.

Es importante conservar las muestras liofilizadas en desecador pues captan agua rápidamente.

1.2. Trituración y homogeneización

Cuanto más heterogénea sea una muestra más importancia tendrá la etapa de trituración. En
general, se recomienda disminuir el tamaño de partícula lo más posible, ya que los errores
introducidos en el submuestreo son inversamente proporcionales al tamaño de partícula. Es
decir, cuanto mayor sea la submuestra y menor el tamaño de partícula menor será el error que
cometamos en esta etapa del análisis.

La finalidad de esta etapa es conseguir alcanzar la representatividad de la muestra con respecto

al lote.

Existe comercialmente disponible una gran variedad de equipos diseñados para la trituración
adecuada de los distintos tipos de muestras.

- Muestras sólidas
o Duras
 Trituradores manuales (martillo)
 Trituradores automáticos (mandíbula, rodillo, cono)
o Blandas
 Manuales (cuchillo)
  Trituradores automáticos (tipo batidora)
- Muestras líquidas

A) Muestras sólidas

Se recomienda disminuir el tamaño de partícula, los errores son directamente proporcionales al

tamaño de las partículas en la muestra. La trituración de muestras duras solo se consigue en
contacto con un material más duro, por impacto o por abrasión, de forma manual o automática.

 DURAS
 Trituradores manuales: si la cantidad de muestra disponible es pequeña. Martillo o
maza (trituración por impacto) y mortero de laboratorio (vidrio, porcelana o ágata)
(abrasión).
 Trituradores automáticos: si la cantidad de muestra es grande.
o Trituradores de mandíbulas: en estos equipos la muestra pasa a través de dos
planchas. Una de ellas suele estar fija mientras que la otra choca contra ella
triturando la muestra por aplastamiento. Con estos equipos es posible triturar
una gran variedad de muestras como rocas, cerámicas, carbón, minerales,
cemento, etc. Admiten un tamaño inicial de partícula entre 20 y 200 mm
consiguiendo un tamaño final de 1 a 20 mm.

o Trituradores de rodillo: están formados por 1, 2 o 3 rodillos y la trituración se

realiza por abrasión. La muestra cae sobre los rodillos y al pasar entre ellos es
triturada hasta el tamaño de partícula deseado, el cual depende de la distancia
existente entre los rodillos. Este tipo de trituradores es adecuado para el mismo
tipo de muestra que los trituradores de mandíbula, aunque el tamaño de
partícula inicial debe ser menor (20 mm) consiguiendo un tamaño final de
alrededor de 1 mm.

o Trituradores de cono: con estos equipos se consigues tamaños de partícula

finales de 4 mm partiendo de un tamaño inicial de 25 mm. Están constituidos
de un cono vertical que gira en el interior de un recipiente cónico truncado
invertido. La velocidad de trituración es más elevada que en los casos
 anteriores, pero su coste elevado ha provocado que su uso no sea muy
extendido.

o Molinos de bolas: está constituido por un recipiente (de tamaño variable y de

distintos materiales) relleno de bolas de un determinado diámetro. Una vez que
la muestra se ha colocado en el interior del cilindro junto con las bolas, se la
someta a un movimiento giratorio elevado lo que provoca que las bolas rueden
en su interior provocando la trituración al chocar contra la muestra. Con estos
equipos se consiguen tamaños de partícula menores de 1 micra partiendo de
partículas de 10-50 mm, aunque el tamaño final de partícula va a venir
determinado por el tamaño de las bolas empleadas, ya que cuanto menores
sean estas menor va a ser el tamaño de partícula conseguido.

Problema: estos sistemas de trituración se van desgastando y existe un alto riesgo

de contaminación de las muestras:

1) El material del propio sistema contamine la muestra

2) Las partículas de muestra pueden quedar en la superficie del material
(contaminación cruzada)

Limpieza:

1) Lavar con metanol y agua caliente con detergente

2) Triturar una porción de muestra pequeña y desecharla

o Molinos de anillos: en este caso en lugar de usar bolas se usan anillos, pero el
modo de operación es idéntico al caso anterior. Suele ser empleado como
pulverizador después de haber triturado la muestra previamente con alguno de
los equipos descritos anteriormente consiguiendo tamaños de partículas
inferiores a 1 micra.
o Pulverizadores de disco vertical: estos equipos están constituidos por dos
discos paralelos en posición vertical, donde uno ellos está fijo mientras que el
otro gira continuamente. Al entrar la muestra en el sistema, esta va a ser
pulverizada por fricción, siendo el tamaño final de partícula función de la
distancia entre las superficies de contacto de los discos y similar al obtenido
mediante un molino de anillos.

Los trituradores automáticos presentan una serie de inconvenientes:

- Contaminación por el material de la trituradora.

- Contaminación cruzada: importante la limpieza de material (metanol, disolventes
orgánicos, o incluso triturar cuarzo puro con agua caliente y detergente).
 - El contenido en agua puede alterarse: se genera gran cantidad de calor y la humedad
puede variar. Aplicar factor de humedad.

- La temperatura puede afectar a los analitos volátiles.

- Formación de conglomerados. Se evita añadiendo aditivos como detergentes, grafito…

 BLANDAS

Habitualmente suele ser necesario combinar las dos formas: manual y automática. Primero
se cortan con un cuchillo y luego se trituran.

Se trituran con más facilidad si antes son congeladas con nitrógeno líquido los alimentos
con:

- Un alto contenido en grasas o elásticos (algas, peces).

- Que presentan riesgo de separación de fases durante la trituración (hígado).

Los instrumentos empleados no son más que los utilizados en la vida cotidiana, como un
molinillo de café o una picadora de carne, pero fabricados con unas ciertas especificaciones
para su uso en el laboratorio las cuales se centran fundamentalmente en el material de
fabricación, velocidad de trituración (mucho más alta) y capacidad (hasta un volumen de 4
litros).

Los trituradores de laboratorio suelen estar fabricados en acero inoxidable o de titanio con
el objetivo de minimizar la contaminación de la muestra. Generalmente, los trituradores
están diseñados para trabajar a alta velocidad y en períodos cortos de tiempo por lo que, a
diferencia de la trituración de muestras duras, se genera poco calor y por tanto los riesgos
de descomposición de la muestra son bajos, aunque es recomendable que la trituración se
realice a pequeños pulsos y no de forma continua permitiendo el enfriamiento de la
muestra.

Todos ellos después de ser usados, deben desmontarse, limpiarse y secarse. Si nos interesa
saber si la muestra es homogénea o no, se puede:

- Análisis de varias replicas de la misma muestra.

- Análisis de dos submuestras de distinto tamaño.

1.3. División y submuestreo

Reducción del tamaño de muestra que llega al laboratorio → muestra de laboratorio de tamaño
adecuado.

Después de la etapa de trituración, generalmente será necesario reducir el tamaño total de

muestra intentado mantener el grado de homogeneidad de la misma. Este tipo de división se
puede llevar a cabo de forma manual o mecánica.

- Muestras sólidas
o Métodos manuales (cono y cuarteo)
o Métodos mecánicos (cuarteador mecánico o divisor continuo rotatorio)
- Muestras líquidas
 A) Muestras sólidas

Por lo general, la cantidad de muestra de la que disponemos después de la trituración es muy

grande en comparación con la que se necesita para su envío al laboratorio. Ahora es necesario
dividir la muestra sin realizar ningún tipo de discriminación respecto al tamaño, densidad o
cualquiera otra característica de las partículas que constituyen la muestra.

REDUCCIÓN MANUAL

El más directo sería tomar una determinada cantidad con una pala o espátula y realizar la
determinación. El método manual más utilizado es el denominado método manual del cono y
cuarteamiento.

La muestra finamente dividida, se coloca en una superficie plana, limpia y que no sea capaz de
absorber humedad de la muestra y con la ayuda de una pala (o una espátula) se amontona
formando un cono. Posteriormente, un simple sistema de cuarteo (dos láminas metálicas
entrecruzadas formando un ángulo de 90º) se coloca en la parte más alta del cono y se empuja
hacia abajo dividiendo así la muestra en cuatro partes iguales, de las cuales dos partes opuestas
son descartadas y las otras dos se mantienen para repetir el procedimiento tantas veces como
sea necesario para alcanzar la cantidad de muestra adecuada.

Errores: Pueden ser muy elevados ya que este procedimiento va a repetirse muchas veces

- Dificultad de construir un cono perfecto.

- Elección de la parte más alta.
- Formación del “efecto del árbol de Navidad”, especialmente en muestras heterogéneas
(se van a producir anomalías de distribución de partículas durante la formación del
cono).

REDUCCIÓN AUTOMÁTICA

 Cuarteador mecánico: consta de una caja metálica abierta en forma de rejilla por su
parte superior con salidas laterales. La muestra se añade por la parte superior y las
rejillas la reparten alternativamente entre dos recipientes situados a ambos lados, y por
tanto, se consiguen dos submuestras exactamente iguales. El ancho de la rejilla es
variable, pero siempre es 3 veces mayor que el diámetro de la partícula más grande.
Este tipo de división minimiza el “efecto del árbol de Navidad” solo si la cantidad de
muestra es suficiente para pasar a través de todas las rejillas del equipo. Un
 inconveniente es que es un método tedioso y la cantidad de muestra debe ser la
suficiente para pasar a través de todas las rendijas (mínimo 20 g).
 Divisores continuos rotatorios: actualmente este tipo de equipos consiguen dividir la
muestra de la forma más controlada y reproducible de los descritos anteriormente. La
muestra se coloca en un embudo acoplado a un sistema de vibración que permite la
salida de la muestra, de forma constante y reproducible, la cual se dirige hacia un
carrusel giratorio especial donde se encuentran hasta 16 recipientes. De esta forma,
controlando la velocidad de salida de la muestra la rotación, se obtienen submuestras
equivalentes de una forma rápida, cómoda y reproducible.

El proceso de subdivisión de la muestra puede afectar a la exactitud y precisión de los resultados

del análisis.

B) Muestras líquidas

A primera vista, el submuestreo y homogeneización será más sencillo que en el caso anterior,
ya que con este tipo de muestras no es necesaria la trituración. Si la muestra contiene partículas
en suspensión será necesario llevar a cabo una etapa de filtración, siempre y cuando no conlleve
pérdidas de los analitos (ejemplo: análisis de PAHs en agua de río). Pueden estar adsorbidos a
estas partículas en función de sus propiedades físico-químicas.

Si la muestra contiene partículas sólidas es necesario filtrar a través de filtros de tamaño de

partícula adecuado (agitación previa).

Antes del submuestreo, para garantizar la homogeneidad, se debe agitar energéticamente la

muestra, dejándola después reposar para que el aire parcialmente disuelto sea eliminado. Las
muestras con una elevada viscosidad, que son difíciles de agitar (aceites, jarabes) se podrán
calentar ligeramente para facilitar la agitación siempre y cuando no le afecte a los analitos.

2. ALMACENAJE Y TRANSPORTE

Es importante tener en cuenta estas dos etapas dentro del proceso de pretratamiento de la
muestra ya que si no se llevan a cabo correctamente pueden conllevar cambios físicos y químicos
en la muestra.

2.1. Condiciones generales de almacenaje

La elección del lugar y de las condiciones más adecuadas dependerá de las propiedades de la
muestra y de la estabilidad que presente frente a parámetros como la luz, la temperatura o la
humedad.

El objetivo primordial es evitar la degradación o transformación de los analitos de interés en las

muestras. Además, durante el almacenaje también se debe evitar los riesgos de contaminación
cruzada, evitándose almacenar las muestras problema próximas a disoluciones patrón de
concentración elevada.
 Generalmente casi todas las muestras se congelan o se mantienen refrigeradas y en la
oscuridad, para evitar reacciones fotoquímicas.

NORMAS GENERALES PARA EL ALMACENAMIENTO

 La mayoría de los analitos y matrices son más estables a bajas temperaturas →

mantener la muestra a baja temperatura.
 Evitar la pérdida o ganancia de humedad que puede alterar la composición a
provocar su degradación.
 El efecto de la luz puede dar lugar a reacciones fotoquímicas → conservar las
muestras en la oscuridad.
 Debe evitarse el almacenamiento cerca de los patrones de concentración elevada.
 Las muestras que contengan analitos volátiles deben almacenarse en contenedores
sellados y a baja temperatura.

2.2. Envasado/Contenedores

Su principal función es proteger la muestra para evitar su contaminación ambiental o posible

degradación.

TIPOS DE CONTENEDORES

Deben ser:

 Inertes (ni adsorber ni desorber compuestos).

 Asegurar que no se va ha producir variaciones en la composición de la muestra.

Según su naturaleza se pueden clasificar en:

 Polímeros
 Cerámicos
 Metálicos
 Vidrio

ELECCIÓN DE CONTENEDORES

Depende de:

 El estado de la muestra (sólida, líquida o gaseosa).

  Los analitos que se van a analizar (naturaleza-química / estabilidad).
 La naturaleza y propiedades físico-químicas del envase.

Cierres y tapones deben ser del mismo material y deben cerrar herméticamente para evitar
contaminaciones. En general los más utilizados suelen ser los contenedores de vidrio, por la baja
capacidad de transferencia de contaminantes o componentes hacia la muestra que presentan.
También se utilizan mucho los de polietileno o polotetrafluoruro-etileno (PTFE).

Observando la resistencia química que presenta un determinado contenedor frente a reactivos

y su permeabilidad, puede deducirse que tipo de contenedor será el más adecuado para una
determinada muestra.

Permeabilidad: facilidad de que el oxígeno penetre dentro del contenedor, y los compuestos
volátiles puedan difundir desde el interior hacia el exterior.

En general, el vidrio de sílice (formas transparente y opaca) es el material más utilizado, al

presentar una excelente resistencia a los [Link] y a la mayoría de los [Link]ánicos.

Se aconseja rellenar completamente los contenedores cuando se trata de muestras sólidas para
evitar la presencia de aire, ya que el oxígeno puede oxidar la superficie de la muestra. Sin
embargo, para muestras líquidas existen casos en los que se aconseja rellenar totalmente y
aumentar así su estabilidad en el tiempo, y otros en los que no se aconseja llenarlos por
completo para permitir la agitación y homogeneización de la muestra. En esos casos si la
muestra es sensible a procesos redox, se recomienda añadir un gas inerte como nitrógeno.

CONTAMINACIÓN DE LA MUESTRA POR LOS CONTENEDORES

Las principales fuentes de contaminación proceden de:

- Materiales del contenedor (deserciones de compuestos de su superficie).

- Difusión de gases (permeabilidad de gases, difunden a través del contacto).
- Reacciones del contenedor con la muestra.

Adsorción sobre contenedores: este proceso da lugar al fenómeno conocido como

contaminación negativa, en el que se observa una disminución en la concentración de algunos
analitos en la muestra. Se puede evitar aplicando:

- Apropiado tratamiento de limpieza (enjuagando previamente el contenedor con un

disolvente de extracción adecuado, MeOH, AcN…)
- Controlando el pH de la muestra (aconseja acidificar las disoluciones acuosas antes de
almacenarlas en vidrio).

2.3. Condiciones especiales de almacenaje

Es posible emplear condiciones especiales de almacenaje para conseguir aumentar la estabilidad

de muestras poco estables durante periodos de tiempo relativamente largos. Algunas de estas
condiciones son:

- Refrigeración
- Liofilización
- Congelación
- Ultracongelación (nitrógeno líquido a -120/-196ºC, reduce la movilidad total)
- Aditivos (anticoagulantes, antioxidantes)
La finalidad de todas ellas es evitar la descomposición de la muestra reduciendo las posibles
reacciones químicas y actividad biológica. En la actualidad, si no es posible llevar a cabo el
análisis inmediatamente después del muestreo, el modo de almacenaje recomendado para la
mayoría de las muestras es la congelación.

2.4. Transporte

Esta etapa debe llevarse a cabo intentado en la medida de los posible que se produzcan cambios
en las características y propiedades de la muestra. Por ejemplo, si la muestra contiene
compuestos inestables, deberán emplearse condiciones de frio o de congelación para
preservarla durante el transporte. Si es peligrosa, en más especiales y de aislamiento como
cabinas ignífugas (líquidos inflamables). Si son frágiles, proteger las muestras con papel o
plástico de burbujas, etc…

3. HOMOGENEIDAD

Conocer con precisión el grado de homogeneidad de una muestra es vital para poder conocer la
cantidad mínima que asegura su representatividad para ejecutar los análisis. La homogeneidad
de una muestra debe comprobarse evaluando la concentración de ciertos analitos en alícuotas
de distinto peso de la muestra.

La homogeneidad de una muestra debe controlarse en cualquier caso ya que, incluso aunque
en un principio fuese homogénea, esta propiedad se podría alterar por el empleo de algún
estabilizante o por migraciones, efectos de bacterias, por el transporte, etc. Cuando se dispone
de un único lote debe comprobarse su homogeneidad dentro del lote, pero si se han preparado
varios botes debe además demostrarse la homogeneidad entre los mismos.

Para llevarse a cabo los estudios de homogeneidad, debe utilizarse un método analítico que sea
altamente reproducible. Los métodos ideales de análisis para estudios de homogeneidad deben
poseer bajos límites de detección y dar una respuesta lineal en un amplio intervalo de
concentración, que tenga alta sensibilidad para poder detectar pequeñas variaciones en la
homogeneidad. Cuando mayor sea el peso de la muestra que tomemos, menos será la
incertidumbre.

Los gráficos de control son útiles para detectar posibles problemas de homogeneidad.

4. ESTABILIDAD DE LA MUESTRA

Factores que afectan a la estabilidad de la muestra:

- Actividad química: tiene lugar cuando se dan reacciones químicas, por lo general, su
incidencia en muestras sólidas y secas es muy escasa o tendrá lugar a una velocidad muy
lenta. Refrigeración o congelación para disminuir el riesgo de actividad química.
- Efectos físicos: luz, temperatura, gravedad (separación de partículas) y adsorción. Para
evitarlos se usan recipientes adecuados, refrigeración o congelación, agitar las muestras
antes de su uso.
- Actividad biológica: es el factor que confiere una mayor inestabilidad a la muestra.
o Destrucción de microorganismos: esterilización a elevadas temperaturas (riesgo
pérdida comp. Volátiles), irradiación gamma (posible riesgo de pérdida de
analitos), empleo de antisépticos (más sencillo).
o Bloqueo de actividad microbiana: aumento de la fuerza iónica de la matriz,
eliminación de agua.
Es importante que el método sea:

- Altamente reproducible
- Que posea bajo límite de detección
- Que tenga alta sensibilidad

EVALUACIÓN DE LA ESTABILIDAD DE LA MUESTRA

 Estudios a diferentes temperaturas

 Estudios a diferentes tiempos

El tiempo de integridad de una muestra es el máximo periodo de tiempo que puede trascurrir
desde su obtención hasta su análisis sin que la muestra cambie significativamente sus
propiedades.

El máximo tiempo de conservación es aquel en el que la concentración varía en un valor de

3σ(~95% nivel de confianza).

1. Se representan los valores de concentración en función del tiempo.

2. Se resta 3σ al primer valor de concentración.
3. En ese punto se traza una línea horizontal.
4. En el primer valor de concentración que supere la línea por debajo se determina el
tiempo máximo de conservación.

5. INSPECCIÓN Y RECEPCIÓN DE MUESTRAS

Inspección: comprobar el estado de conservación y el tipo de muestra a su llegada al laboratorio.

Comprobaciones que incluye la inspección de muestras:

- El grado de conservación del embalaje e idoneidad para el ensayo solicitado.

- La claridad en la identificación.
- Que los datos incluidos en la documentación sean suficientes y correctos.
o Nombre y dirección del cliente.
o Descripción e identificación del producto u objeto.
o Condiciones ambientales de almacenamiento requeridas por norma o
caducidad.
o Cantidad de productos u objetos.
 o Identificación de la especificación del ensayo, si está definida o análisis
solicitados.
- Otros datos de interés:
o Composición aproximada.
o Precisión solicitada, si no existe norma.
o Riesgos para la salud. Seguridad.
o Descripción del procedimiento de muestreo.
- Del grado de representatividad de la muestra.
- Observación visual de heterogeneidad.

Recepción: obtener los datos necesarios para el análisis al identificar la muestra para que
pueda pasar su procesamiento.

Aspectos que incluye la recepción de muestras:

- Creación de una ficha que reúna los datos aportados con la muestra. Debe tener dos
partes bien diferenciadas:
o Administrativa (datos del cliente).
o Técnica (datos de la muestra).
- Identificación con un registro único (referencia básica para el analista). El recipiente
que contiene la muestra solo debe contener el registro, los análisis solicitados y la
fecha de caducidad. Puede ir acompañado, cuando sea necesario, por una hoja
explicando el historial de la muestra.
- Entrega personal para su almacenamiento o análisis.
TEMA 5. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA LA DETERMINACIÓN DE
ANALITOS ORGÁNICOS
1. INTRODUCCIÓN

En la determinación de este tipo de compuestos solo será posible utilizar métodos de análisis
que no alteren al compuesto objeto de análisis o, si lo hacen, que sea al menos de una forma
perfectamente controlada, lo que no siempre va a ser una tarea sencilla. Por ejemplo, los
hidrocarburos poliaromáticos (PAHs) son fotosensibles, por lo que se debe evitar la exposición
de la muestra a la luz desde el mismo momento en que se ha realizado la toma de muestra.

Todo el peso del análisis recae en la preparación de la muestra, donde se ha de conseguir la

separación del/los analito/s de la matriz y de otras sustancias interferentes. Esta preparación de
la muestra englobará, en general, tres etapas: extracción, preconcentración y limpieza (clean-
up), aunque en algunos casos será posible realizarlas simultáneamente.

El objetivo de la preparación de la muestra es disponer del analito en el estado más puro posible.
Por tanto, la primera etapa será aislar la sustancia a determinar separándola de la matriz
(muestras sólidas y líquidas).

2. EXTRACCIÓN

El objetivo de esta etapa es “arrancar” el analito de la matriz a la que está unido. Para ello, la
muestra se ha de poner en contacto con un extractante (sólido, líquido o fluido supercrítico) en
unas determinadas condiciones de tal forma que se debiliten completamente las interacciones
“analito-matriz” a la vez que se incrementan las interacciones “analito-extractante”. En este
sentido se puede utilizar la máxima “similar disuelve a similar”, es decir, si el analito es un
compuesto apolar, se deberá, en general, emplear un extractante lo suficientemente apolar
para que así el analito tienda a interaccionar con este con mayor intensidad que la que presente
con la matriz. Hay otros factores que afectan a estas interacciones (pH, fuerza iónica,
temperatura…)

Objetivos:

- Extracción cuantitativa
- Mínimo tiempo
- Preconcentración
- Clean-up

CONSIDERACIONES GENERALES EN EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS EN ANÁLISIS DE TRAZAS

 La mayoría de técnicas analíticas requieren que la muestra sea extraída de la matriz→

DISOLUCIÓN/EXTRACCIÓN.
  La mayoría de técnicas no tienen la suficiente sensibilidad para el análisis de trazas→
PRECONCENTRACIÓN DE LOS ANALITOS.
 En general, las muestras son muy complejas y las técnicas analíticas no son selectivas→
ELIMINACIÓN DE INTERFERENCIAS/LIMPIEZA/CLEAN-UP.

Por ejemplo: se quiere extraer un pesticida de una muestra de sedimento, en primer lugar, el
disolvente debe entrar en el interior de los poros de las partículas de sedimento (etapa 1) para
así desorber el analito unido a los puntos activos de la matriz (etapa 2). Posteriormente, el
analito debe difundir a través de la materia orgánica adherida a la superficie de las partículas
(etapa 3) e iniciar su disolución en el disolvente empleado (etapa 4). De nuevo el analito tiene
que difundir a través del disolvente para salir de los poros de las partículas (etapa 5) y ser
arrastrado por el disolvente exterior (etapa 6).
¿Qué parámetros pueden influir en el éxito de la extracción? En primer lugar, el disolvente a
emplear debe ser aquel capaz de disolver fácilmente el compuesto a extraer facilitando así las
etapas 2 y 6 descritas. Es sabido que, en general, la solubilidad aumenta la temperatura y por
tanto será otro de los parámetros a optimizar. Además, a altas temperaturas aumentan los
coeficientes de difusión (etapas 3 y 5) y se aumenta la capacidad del disolvente para debilitar
las interacciones analito-matriz (etapa 2). Pero antes de que ocurran todas estas etapas, el
disolvente debe penetrar a través de los poros de las partículas y, por tanto, en algunos casos
será necesaria alta presión para superar la tensión superficial. La optimización de todos estos
parámetros no solo va a garantizar la extracción cuantitativa, sino que además se reducirá
considerablemente el tiempo dedicado al proceso.

 MUESTRAS SÓLIDAS

Extracción sólido-líquido

1. Soxhlet

Consiste en la extracción de la muestra en un recipiente (matraz redondo de boca esmerilada)

utilizando un disolvente a elevada temperatura (manta calefactora, un mechero o una placa
(baño maría)).

1) La muestra se coloca en el dispositivo B junto con sulfato sódico (para eliminar el agua
de la muestra) dentro de un cono de material que sea resistente al disolvente orgánico
pero no sea impermeable.
2) Se llena el matraz redondo con un volumen adecuado de disolvente orgánico.
3) Se calienta por encima de su punto de ebullición → el disolvente se evapora y va
condensando en el deposito donde está la muestra y este comienza a llenarse.
4) Cuando se llena completamente el tubo D, el deposito se vacía y todo el disolvente cae
nuevamente en el matraz redondo y así sucesivamente durante el tiempo necesario
para la extracción (estos periodos suelen ser de 6, 12, 18 o 24 horas).
  La extracción se favorece por la temperatura, y el contacto sucesivo con porciones
limpias de disolvente.
 No útil para analitos termolábiles, tiempos de extracción largos, elevado consumo de
disolvente, etapa posterior de preconcentración (pérdidas).

2. Agitación mecánica

Es una técnica de extracción líquido-sólido convencional. Procedimiento muy suave y tiene lugar
exclusivamente sometiendo a la muestra a la acción del disolvente a través de un proceso de
agitación. Es solo aplicable a analitos débilmente unidos a la matriz. A parte de la polaridad del
disolvente, la eficacia en la extracción dependerá también del tiempo de agitación y,
lógicamente, del tipo de matriz.

Una vez extraído el analito, el disolvente y la matriz se separan por filtración o centrifugación.
En general, el volumen de disolvente utilizado es elevado y por tanto suele ser necesaria la
evaporación del mismo antes de la determinación final con el fin de preconcentrar los analitos
a determinar. El proceso se repite varias veces para conseguir la extracción completa de los
analitos.

3. Microondas

La energía de microondas es absorbida por moléculas con momento dipolar permanente

produciendo su rotación, la cual es responsable del calentamiento de la muestra. Se puede
calentar el disolvente o la muestra si esta contiene agua.

La elección del disolvente es clave. Se utilizan: acetona, acetonitrilo, diclorometano, metanol. A

mayor momento dipolar, mayor capacidad de extracción.

Se consigue un calentamiento eficaz e inmediato. La extracción se puede llevar a cabo tanto en

sistemas cerrados como abiertos.

4. Extracción acelerada → Extracción con fluidos presurizados

La extracción con fluidos presurizados (PFE) es el nombre genérico de una técnica de extracción
desarrollada por Dionex en 1995 a la que en un primer momento se le llamó extracción
acelerada con disolventes (ASE). Esta técnica utiliza un disolvente a elevada presión y
temperatura lo que permite someter la muestra a una temperatura superior al punto de
ebullición del disolvente → reduce el tiempo de extracción.

 Célula de extracción de acero inoxidable que se

llena de disolvente.
 Horno y una bomba controlados eléctricamente
(mantienen la muestra a T y P).
 Dispositivo donde se recoge el extracto para su
posterior análisis.

FUNDAMENTO DE LA TÉCNICA

- Presurización de la célula (500-3000 psi) que contiene la muestra → el disolvente

orgánico utilizado para la extracción se encuentra en fase líquida incluso a temperaturas
de extracción altas (> 200 ºC).
- Se mantiene la muestra en esas condiciones de P y T durante un corto período de tiempo
(entre 5-10 minutos).
- A continuación, el extracto es arrastrado hasta un dispositivo donde se recoge para su
posterior análisis.

PROPIEDADES DE UN FLUIDO PRESURIZADO

- Los disolventes líquidos a elevadas temperaturas y presiones  incremento en la

extracción comparados con su uso a temperatura ambiente y a presión atmosférica.
- Disolventes a elevadas temperaturas:
o Incrementan la solubilidad de los analitos.
o Aumento de la velocidad de difusión del disolvente a través de las muestras
o Disminuye la energía necesaria para los procesos de desorción del analito de la
matriz.
o Disminuye la viscosidad del disolvente permitiendo una mejor penetración en
la muestra y mejorando el proceso de extracción.
- Disolventes a elevada presión:
o Permite trabajar a temperaturas por encima del punto de ebullición del
disolvente, permaneciendo en estado líquido.
o Facilita la extracción de analitos que se encuentran en el interior de matrices
porosas  el disolvente puede penetrar en el interior de los poros y entra en
contacto con los analitos, lo que no ocurriría a presión atmosférica.

OPTIMIZACIÓN DE PARÁMETROS

- Selección del disolvente con el que realizar la extracción  es una de las variables más
importantes para obtener resultados satisfactorios.
Se suelen utilizar los mismos disolventes empleados en las extracciones clásicas con
Soxlhet, se aconseja el uso de mezclas 1:1 de dos disolventes diferentes (Acetonitrilo-
hexano, actonitrilo-diclorometano, tolueno-metanol, etc…).
 - La temperatura de extracción  es una de las variables que contribuyen a la obtención
de mejores recuperaciones en menores tiempos.
Sin embargo, para compuestos termolábiles trabajar a altas temperaturas puede
provocar su degradación y por tanto aunque la extracción sea más lenta será necesario
seleccionar una temperatura menor.
- Selección de la presión  un aumento suponer que el punto de ebullición del disolvente
sea mayor y por tanto la temperatura de extracción pueda ser también elevada.
Para muestras que contengan agua atrapada en sus poros, el trabajar a elevada presión
fuerza al disolvente a entrar en el interior de los poros y favorecer el contacto del analito
con el disolvente.

VENTAJAS

- Es más rápida que los procedimientos tradicionales  15 min frente a 2-24 horas.
- Requiere menores volúmenes de disolventes  menos de 15 mL cada 10 g de muestra
frente a 50-500 mL.
- Es más eficaz independientemente de la matriz, es automatizable y puede extraer
muestras secuencialmente.

INCONVENIENTES

- Las extracciones son más completas, pero menos selectivas.

- Requiere temperaturas de extracción más altas.
- El equipo tiene un precio elevado.

APLICACIONES

- Extracción de PAHs (hidrocarburos aromáticos policíclicos)  Método de la EPA 3545.

o Extracción a 100 ºC y a 140 bar de presión durante 5 minutos.
o Disolventes: acetona-diclorometano 1:1 v/v y acetona-hexano 1:1.
o Recuperaciones satisfactorias.
o Otros estudios  a mayores temperaturas (entre 120-170 ºC) utilizando
tolueno con resultados buenos.
- Extracción de PCBs (bifenilos policlorados)  método de la EPA 3545
o Extracción a 160 ºC en muestras de suelos y sedimentos marinos.
o Disolventes: acetona-hexano 1:1, acetona-diclorometano 1:1 y hexano.
o Recuperaciones superiores al 85% (tolueno).

5. Fluidos supercríticos

Utiliza un fluido a una presión y temperatura superiores a sus Tc y Pc. Los valores críticos se
caracterizan por el hecho de que la sustancia no puede licuarse por mucho que aumentemos la
P y tampoco pueden vaporizarse al aumentar la T. En esta zona la sustancia no es un gas y
tampoco un líquido, sino que se encuentra en estado supercríticos (fluido supercrítico), con
propiedades intermedias entre ambos.
DIÓXIDO DE CARBONO

- Es el más usado ya que tiene una Pc moderada (72,9 atm) y una Tc de 31 ºC  extracción
de compuestos termolábiles.
- Se puede separar fácilmente del soluto ya que es un gas a P atmosférica (de manera que
el gas se puede dejar escapar a la atmósfera tras la extracción), no es tóxico (no produce
problemas ambientales), es inerte, barato y puede adquirirse con un elevado grado de
pureza.
- El principal inconveniente, es apolar  no es adecuado para extraer analitos de elevada
polaridad
- Solución  uso de modificadores orgánicos polares (MeOH).
- Por ejemplo, es muy habitual usar CO2 con pequeñas cantidades de metanol para
conseguir extracciones completas de analitos apolares.

DIÓXIDO DE NITRÓGENO

- Es otro de los fluidos más utilizados ya que tiene un poder solvente parecido al CO2.
- Inconveniente  alta reactividad con numerosos compuestos (Degradaciones) y puede
causar efectos fisiológicos peligrosos.

INSTRUMENTACIÓN

1) Fuente de CO2 o de otra sustancia utilizada.

2) Bomba de alta presión
3) Celda de extracción
4) Restrictor (es la zona donde se produce la descompresión del sistema)
5) Sistema de recogida de extractos

APLICACIONES

- Las características especiales de los fluidos supercríticos para disolver sólidos a baja
presión fueron descritas por Hannay y Hogarth en 1879.
- A finales de los 70 se produje un gran desarrollo de la SFE en el campo de la alimentación
para la extracción de productos naturales (Aceites esenciales, sabores…). También se
emplea en la industria alimentaria para descafeinar el te y el café y para obtener
productos con menos grasa.
- En la actualidad la extracción de contaminantes ambientales en muestras sólidas es uno
de los campos en los que se ha investigado más.
 - Ejemplos: extracción de contaminantes en sólidos (suelos, sedimentos, partículas en
aire, etc…) y en tejidos vegetales o animales, principalmente plaguicidas.

Extracción sólido-sólido (MSPD)

1. Dispersión en matriz sólida

La técnica de dispersión de matriz en fase sólida (MSPD) es muy parecida a la técnica de

extracción en fase sólida (SPE). Esta última se emplea para muestras líquidas, mientras que la
MSPD se usa para muestras sólidas.

PROCEDIMIENTO

1) Se mezcla la muestra sólida con un sólido adsorbente (por ejemplo, C18,

octadecilsilano).
2) Se introduce en un cartucho vacío (o con un adsorbente previo, para incrementar la
limpieza).
3) Se añaden pequeños volúmenes de disolventes orgánicos para eluir los analitos del
cartucho. (En ocasiones se puede incluir una etapa previa de limpieza de la muestra con
un disolvente que no eluye a los analitos pero si a otros compuestos de la muestra).

 MUESTRAS LÍQUIDAS
1. Extracción líquido-líquido

Se basa en la diferencia de solubilidad de un soluto en dos fases líquidas inmiscibles. En analito

se transfiere desde la muestra líquida a un extracto de la misma hasta una fase líquida inmiscible
que se separa de la anterior. Además de la preconcentración se consigue la limpieza de la
muestra.

1) Se adiciona a la muestra un volumen de disolvente orgánico inmiscible en un embudo

de decantación.
2) Se agita la mezcla vigorosamente durante varios minutos.
3) Se deja en reposo hasta que las dos fases se separen.
4) Se recoge la segunda fase en un matraz redondo.
 5) Se repite le proceso.
6) Los total de extractos se lleva a sequedad y se redisuelve el residuo con un volumen de
disolvente adecuado para el análisis.

PARÁMETROS A OPTIMIZAR

- Volumen de muestra
- Naturaleza y volumen del disolvente orgánico.
- pH y adición de sales.
- Tiempo de agitación.

APLICACIONES

- Extracción de PAHs en aguas

2. Extracción en fase sólida

Es una de las técnicas más usadas en el análisis de contaminantes orgánicos en aguas. Su

fundamento es similar al de la LLE. Diferente afinidad que presenta el analito/matriz por una
fase sólida o por la propia muestra líquida.

Se pasa una muestra líquida a través de una fase sólida (polar, apolar intercambio iónico, etc,.),
algunos compuestos quedarán retenidos en ella, mientras otros pasarán inalterados.

Después los analitos que han quedado retenidos habrá que eluirlos con un pequeño volumen
de disolvente.

- Extracción de muestras líquidas.

- Purificación de extractos: eliminando interferencias de la matriz → 50% de su empleo
(proteínas de fluidos biológicos, grasas de alimentos, comp. Iónicos de muestras
acuosas…)
- Preconcentración de analitos → 30% de su empleo (preconcentración de PAHs en agua,
abuso de drogas en orina, plasma…)
- Cambio de fase (disolvente inadecuado GC).
- Conservación y transporte de la muestra (“muestreo de campo → gases).

ETAPAS

1) Selección del adsorbente y acondicionamiento del cartucho: disolvente propiedades

similares a la muestra.
2) Carga: paso de la muestra a través del cartucho → retención de los analitos (Reacciones
de intercambio iónico o bien de adsorción).
3) Lavado → eliminación de interferencias.
4) Secado del cartucho con aire o nitrógeno → mejora de las recuperaciones.
5) Elución: disolvente adecuado, el cual dependerá del analito.

PARÁMETROS A OPTIMIZAR

- Naturaleza del sorbente: apolares (C18, C8, C2…), polares (cianopropil, silica, diol,
aminopropil), intercambiadores iónicos (SAX, SCX), exclusión molecular y de afinidad.
- Acondicionamiento del cartucho → capacidad del sorbente: máxima cantidad de
analito (interferentes) que puede ser retenida en una cantidad de sorbente (ya no
quedan centros activos vacíos).
 - Volumen y flujo de muestra → volumen de ruptura: volumen máximo de muestra que
puede hacerse pasar a través del sorbente sin que se produzcan perdidas de analito.
- Disolvente de elución.

NATURALEZA DEL SORBENTE: Sorbentes apolares

Adecuados para muestras líquidas polares (agua, bebidas, fluidos biológicos…)

- Alquil-silicas de C18, C8. Donde los grupos alquilos se unen a los grupos silanoles a
través de enlaces covalente.
- Resinas de estireno-divinilbenceno y de metacrilato. Pero requieren la purificación
exhaustiva de los extractos. Se han sustituido por nuevos polímeros o copolímeros de
estireno-divinilbenceno (OASIS HLB).

NATURALEZA DEL SORBENTE: Sorbentes polares

Adecuados para la purificación de extractos orgánicos (muestras vegetales, tejidos animales,

sedimentos, suelos…)

- Gel de sílice ( SiO2·H2O).

- Alúmina (Al2O3·2H2O, ácida, neutra o báisca).
- Florisil.

NATURALEZA DEL SORBENTE: Intercambiadores iónicos

Adecuados para la pre-concentración de compuestos orgánicos iónicos o fácilmente ionizables.

- Intercambiadores aniónicos: Amina primaria/secundaria, [Link], aminopropilo

→ fenoles, ácidos carboxílicos, sulfóxidos, fosfatos, herbicidas, fenoxiácidos, etc.
 - Intercamviadores catiónicos: Ác. Carboxílicos, bencenosulfónicos, propilsulfónico →
anilinas, aminas, comp. Piridínicos.

NATURALEZA DEL SORBENTE: Exclusión molecular

Adecuados para la purificación de muestras biológicas (suero, plasma…) → separación de los

compuestos en función a su tamaño molecular (eliminación de proteínas e ghidratos de C para
análisis de drogas, antibióticos…)

- Sephadex o Bio-gelP.
- Materiales de acceso restringido (poros con una fase ligada iónica, apolar, etc, que
aumentan la sleectividad.

Las partículas del sorbente tienen pequeños poros, donde solo pueden penetrar las moléculas
pequeñas. RELENTIZA SU AVANECE Y PERMITE SU SEPARACIÓN. Tamaño de los poros dependerá
del proceso de fabricación.

EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA DISPERSIVA: QuEChERS

Fue desarrollados en 2003 por Anastassiades y colaboradores. Hy día es el método multiresiduo

más utilizado por los laboratorios oficiales europeas para el análisis de residuos de plaguicidas.

Ventajas, frente a otros métodos más tradicionales:

- Proporciona buenas recuperaciones (Exactitud) para un número de compuestos elevado

con una amplia polaridad y volatilidad.
- Ofrece una alta precisión del método con una dispersión muy reducida de los resultados.
- Es rápido al minimizar los tiempos de extracción empleados por cada muestra.
- Se encuentra parcialmente automatizado.
- Se emplea un volumen de disolventes muy pequeño y no se utilizan disolventes
organoclorados.
- Todo el proceso lo puede llevar a cabo por una única persona, y necesita de muy poco
material, por lo que resulta económico.

Primera etapa: extracción con disolvente orgánico, generalmente acetonitrilo, en presencia de

diferentes sales. Las sales que pueden ser empleadas en esta etapa son el sulfato de magnesio,
el cloruro sódico, el citrato tribásico de sodio dihidrato y citrato de sodio dibásico
sesquihidratado. La función de cada una de estas sales en la etapa de extracción es diferente:
  Sulfato de magnesio: mejora la recuperación del analito al facilitar la partición de los
pesticidas en la fase orgánica (Acetonitrilo) gracias a que retiene agua.
 Cloruro sódico: ayuda a controlar la polaridad favoreciendo la separación de fases entre
el contenido d agua y la orgánica.
 Acetato de sodio ayuda a la regulación del pH.
 Sales de citrato se emplean para ajustar el pH a valores de 5,5 donde se extraen la
mayoría de los componentes ácidos y básicos de las muestras.

Segunda etapa: limpieza o cleanup del extracto mediante la extracciónen fase sólida dispersiva.
Este paso facilita la eliminación del agua residual y de los compuestos presentes en amtriz del
alimento que podrían provocar interferencias en el análisis, como los lípidos, azúcares, ácidos
orgánicos y pigmentos. Las sales y adsorbentes empleados en esta fase son:

 Sulfato de magnesio: elimina el exceso de agua residual.

 Amina primaria/secundaria (PSA): elimina ácidos orgánicos, ácidos grasos, azúcares y
pigmentos de antocianina.
 Adsorbente C18: elimina grasas, esteroles y otras interferencias no polares de la
muestra.
 Carbón negro grafitizado (GCB): elimina pigmentos de la muestra como clorofilas y
carotenoides, sin afectar a los compuestos planares.