UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADDRE GROHMANN
Escuela Profesional de Enfermería
PRACTICA N° 3: SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
I. INTRODUCCIÓN:
OBJETIVOS:
• Distinguir las diferencias entre un método de siembra en medio sólido y medio líquido.
• Conocer, describir y aplicar las diferentes técnicas de siembra para el aislamiento de
microorganismos.
• Evaluar el crecimiento bacteriano en un medio sólido y en medio líquido.
• Estudiar la morfología de cada colonia desarrollada en el medio sólido.
II. MATERIALES Y METODOS:
2.1 Materiales:
• Muestras: cultivos bacterianos • Mecheros
• Tubos con caldo nutritivo estéril • Set de Gram
• Matraz con medio agar nutritivo estéril • Cocinilla
• Microscopios • Propipeta
• Asa de Koll • Porta laminas
• Asa de Drigalsky estéril • Vaso de precipitados
• Laminas portaobjetos • Lupa o estereoscopio
• Placas Petri estériles
• Pipetas estériles de 1 mL
2.2 Métodos
A. Agotamiento en estría:
El propósito de este método es diluir suficientemente el inóculo sobre la superficie del
agar para obtener colonias bacterianas bien aisladas a partir de unidades formadoras
de colonias. Las colonias aisladas obtenidas, se pueden luego subcultivar
individualmente transfiriéndolas a otros medios a fin de obtener cultivos puros que
pueden ser estudiados en medios diferenciales. Es también útil para estudiar la
morfología y propiedades hemolíticas de las colonias aisladas.
Procedimiento:
1. Tomar una porción de la muestra con el anillo del ansa y depositar directamente en
un extremo de la superficie solidificada del medio de cultivo.
2. Una vez depositado el inóculo diseminar el material en la placa empleando un ansa
ojal. Para ello, se toma la base de la placa de Petri donde se encuentra el medio de
cultivo sólido, y se la levanta hasta la altura de la llama del mechero. Rápidamente
para evitar la contaminación realizar estrías muy juntas con el ansa, pero sin hacer
presión para no dañar el agar, en una parte de la placa equivalente a un cuarto (A).
3. Se flamea el ansa, se enfría y tocar las ultimas estrías de la siembra anterior. Se gira
la placa en ángulo de 60° y se extiende el inóculo haciendo nuevas estrías (B). Este
proceso se repite en los dos ( C y D) cuadrantes restantes y finalmente se termina
con un estriado en zig-zag.
4. Tapar las placas e incubar a 37°C por 24 horas.
B. Diseminación en superficie:
Es una técnica usada para el aislamiento de colonias y permite que se distingan las
colonias por su morfología. Además, permite igualmente el recuento de bacterias
viables en la muestra, si conocemos exactamente el volumen de muestra sembrado.
Procedimiento:
1. Con ayuda de una micropipeta o pipeta, tomar 100 μL o 0.1 mL del inóculo
bacteriano líquido.
2. Depositar el inóculo en la parte central de la superficie de una placa con agar
nutritivo.
3. Extender el inóculo con ayuda del asa de Drigalsky , previamente esterilizada, en
todas las direcciones hasta que se haya absorbido por completo el inóculo.
4. Incubar la placa, en posición invertida, a la temperatura de 37°C por 24 horas.
C. Siembra en medio líquido para bacterias
La finalidad de esta técnica es transferir un inóculo sólido o líquido a un medio de
cultivo líquido, así se obtiene una mayor población microbiana.
Puede usar el asa de siembra, o en algunos casos, micropipetas o hisopos estériles.
Los medios de cultivo a inocular líquidos o caldos, están SIEMPRE distribuidos en tubos,
o Erlenmeyer. El cultivo de procedencia puede encontrarse en placa de Petri, en tubo
(caldo), o en pico de flauta.
Procedimiento:
Para inóculo sólido
1. Con el asa de siembra en aro estéril tocar el cultivo en condiciones de esterilidad.
2. Quitar el tapón del tubo a inocular, flamear la boca del tubo e inclinar el tubo a un
ángulo de aproximadamente 30° e inocular en la superficie interior del vidrio, justo
sobre el punto en el que la superficie del líquido forma un ángulo agudo.
3. Realizar movimientos sobre el vidrio para disgregar el cultivo, poner en posición
vertical el tubo.
4. Posteriormente flamear la boca del tubo, taparlo y llevar a incubar a 37°C por 24
horas.
5. Lectura de placas: Observar si hubo crecimiento microbiano, que se evidencia por
la presencia de colonias en el medio de cultivo
Para inóculo líquido
1. Tomar el tubo con el cultivo con la mano izquierda y quitar el tapón de algodón con
el dedo meñique de la mano derecha y flamear su boca, tratando de mantenerlo
inclinado.
2. Introducir el asa de siembra, previamente esterilizada, en el tubo y tomar la
muestra sumergiendo el ansa en el cultivo.
3. Introducir el asa de siembra cargada y agitarla dentro del tubo para producir
homogeneización de la carga microbiana aplicada, y desprender la totalidad de los
microorganismos del asa.
4. Posteriormente flamear la boca del tubo, taparlo y llevar a incubar a 37°C por 24
horas.
5. Lectura de tubos: observar si hubo crecimiento bacteriano, que se evidencia por la
turbidez, presencia de grumos, precipitado o presencia de un velo superficial o
intermedio en el tubo.
III. RESULTADOS: se debe evaluar si hubo desarrollo bacteriano en el medio sólido y líquido
3.1 Cultivo en medio agar nutritivo:
A. Esquemas del desarrollo bacteriano observado en las placas con agar nutritivo
sembradas.
B. Observación macroscópica de colonias
Inóculo 1 Inóculo 2 Inóculo 3
Características de colonia
Col. a Col. b Col.a Col. b Col.a Col.b
Tamaño (diámetro en mm)
Forma
Elevación
Borde
Superficie
3.3 Cultivo en medio caldo nutritivo
Esquemas de crecimiento microbiano en los tubos con caldo inoculados.
IV. DISCUSION
VI. CONCLUSIONES
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
