UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN-

TACNA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

Escuela Profesional de Enfermería

PRACTICA N° 03: SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

DOCENTE: ROSA LIÑAN ABANTO

ALUMNO: MARCOS JESUS NINA MAMANI

CÓDIGO: 2023-122045
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I. INTRODUCCIÓN

En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino

integrados en poblaciones mixtas. Para estudiar sus propiedades, es necesario separar unos de

otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros. (1)

Las técnicas de siembra y aislamiento permiten obtener colonias aisladas a partir de una

muestra que contenga un elevado número de bacterias. Mediante estas técnicas se logra la

separación física de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior del

mismo.

El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas. La tinción

de Gram y la ácido-alcohol-resistente, basadas en las propiedades de la pared celular bacteriana,

son las más utilizadas para ayudar en la clasificación de las bacterias.

La siembra por estría escocesa es un método cualitativo de aislamiento de

microorganismos por agotamiento en placa a partir de una muestra natural o de un cultivo de

laboratorio. Este método está basado en arrastrar, mediante un asa de siembra, un número cada

vez más pequeño de individuos. (2)

Existen técnicas especializadas de coloración que permiten identificar y estudiar

determinadas estructuras que pueden estar presentes en los microorganismos, como flagelos,

cápsulas y endosporas.
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OBJETIVOS

 Distinguir las diferencias entre un método de siembra en medio sólido y medio

líquido.

 Conocer, describir y aplicar las diferentes técnicas de siembra para el aislamiento de

microorganismos.

 Evaluar el crecimiento bacteriano en un medio sólido y en medio líquido.

 Estudiar la morfología de cada colonia desarrollada en el medio sólido.

II. MATERIALES Y MÉTODOS

II.1. Materiales:

 Muestras: Cultivos bacterianos  Mecheros

 Tubos con caldo nutritivo estéril  Set de Gram

 Matraz con medio agar nutritivo estéril  Cocinilla

 Microscopios  Propipeta

 Asa de Koll  Porta laminas

 Asa de Drigalsky estéril  Vaso de precipitados

 Lamina portaobjeto  Lupa o estereoscopia

 Placas Petri estériles

 Pipetas estériles de 1ml

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II.2. Métodos:

A. Agotamiento en estría: El propósito de este método es diluir suficientemente el

inóculo sobre la superficie del agar para obtener colonias bacterianas bien aisladas

a partir de unidades formadoras de colonias. Las colonias aisladas obtenidas, se

pueden luego subcultivar individualmente transfiriéndolas a otros medios a fin de

obtener cultivos puros que pueden ser estudiados en medios diferenciales. Es

también útil para estudiar la morfología y propiedades hemolíticas de las colonias

aisladas.

B. Procedimiento:

1. Tomar una porción de la muestra con el anillo del ansa y depositar

directamente en un extremo de la superficie solidificada del medio de

cultivo.

2. Una vez depositado el inóculo diseminar el material en la placa empleando

un ansa ojal. Para ello, se toma la base de la placa de Petri donde se

encuentra el medio de cultivo sólido, y se la levanta hasta la altura de la

llama del mechero. Rápidamente para evitar la contaminación realizar

estrías muy juntas con el ansa, pero sin hacer presión para no dañar el

agar, en una parte de la placa equivalente a un cuarto (A).

3. Se flamea el ansa, se enfría y tocar las ultimas estrías de la siembra

anterior. Se gira la placa en ángulo de 60° y se extiende el inóculo

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haciendo nuevas estrías (B). Este proceso se repite en los dos ( C y D)

cuadrantes restantes y finalmente se termina con un estriado en zig-zag.

4. Tapar las placas e incubar a 37°C por 24 horas

C.

Diseminación en superficie: Es una técnica usada para el aislamiento de colonias y

permite que se distingan las colonias por su morfología. Además, permite

igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos

exactamente el volumen de muestra sembrado.

Procedimiento:

1) Con ayuda de una micropipeta o pipeta, tomar 100 μL o 0.1 mL del

inóculo bacteriano líquido.

2) 2. Depositar el inóculo en la parte central de la superficie de una placa con

agar nutritivo.

3) 3. Extender el inóculo con ayuda del asa de Drigalsky , previamente

esterilizada, en todas las direcciones hasta que se haya absorbido por

completo el inóculo.
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4) Incubar la placa, en posición invertida, a la temperatura de 37°C por 24

horas.

D. Siembra en medio líquido para bacterias: La finalidad de esta técnica es transferir

un inóculo sólido o líquido a un medio de cultivo líquido, así se obtiene una

mayor población microbiana. Puede usar el asa de siembra, o en algunos casos,

micropipetas o hisopos estériles. Los medios de cultivo a inocular líquidos o

caldos, están SIEMPRE distribuidos en tubos, o Erlenmeyer. El cultivo de

procedencia puede encontrarse en placa de Petri, en tubo (caldo), o en pico de

flauta. Procedimiento:

E. Para inóculo sólido

 Con el asa de siembra en aro estéril tocar el cultivo en condiciones de

esterilidad.

 Quitar el tapón del tubo a inocular, flamear la boca del tubo e inclinar el

tubo a un ángulo de aproximadamente 30° e inocular en la superficie

interior del vidrio, justo sobre el punto en el que la superficie del líquido

forma un ángulo agudo.

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 Realizar movimientos sobre el vidrio para disgregar el cultivo, poner en

posición vertical el tubo.

 Posteriormente flamear la boca del tubo, taparlo y llevar a incubar a 37°C

por 24 horas.

 Lectura de placas: Observar si hubo crecimiento microbiano, que se

evidencia por la presencia de colonias en el medio de cultivo

Para inóculo líquido

 Tomar el tubo con el cultivo con la mano izquierda y quitar el tapón de

algodón con el dedo meñique de la mano derecha y flamear su boca,

tratando de mantenerlo inclinado.

 Introducir el asa de siembra, previamente esterilizada, en el tubo y tomar

la muestra sumergiendo el ansa en el cultivo.

 Introducir el asa de siembra cargada y agitarla dentro del tubo para

producir homogeneización de la carga microbiana aplicada, y desprender

la totalidad de los microorganismos del asa.

 Posteriormente flamear la boca del tubo, taparlo y llevar a incubar a 37°C

por 24 horas.

 Lectura de tubos: observar si hubo crecimiento bacteriano, que se

evidencia por la turbidez, presencia de grumos, precipitado o presencia de

un velo superficial o intermedio en el tubo.

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III. RESULTADOS
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IV. DISCUSIONES

Para el estudio de caracterización e identificación de los distintos microorganismos

necesitamos tenerlos como cultivos puros y debido a que en la naturaleza los encontramos en las

poblaciones mixtas es necesario utilizar métodos como el de siembra por agotamiento, que

permite una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente, para su realización es

fundamental el uso de una buena técnica, la muestra debe diseminarse de manera tal que los

diferentes microorganismos queden lo suficientemente separados sobre la superficie del medio

de cultivo, de manera que luego de la incubación ellos formen colonias visibles asiladas

En los cultivos realizados en la práctica se obtuvieron resultados regulares, no hubo

contaminación de cultivo y aunque se lograron de aislar algunas colonias, el extendido de la

muestra no fue del todo bueno y puede mejorar.

Con la elaboración de esta

práctica, aprendimos cómo
esterilizar el material requerido y
el
uso de la autoclave.
Con la elaboración de esta
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esterilizar el material requerido y

el
uso de la autocl
Con la elaboración de esta
práctica, aprendimos cómo
esterilizar el material requerido y
el
uso de la autoclave.
V. CONCLUSIONES

Es necesario recurrir a medios de cultivo para estudiar en profundidad las características

bacterianas

La técnica del agotamiento es la ideal si se quiere obtener colonias aisladas que permitan

el estudio de las mismas

La práctica incluye la incubación de los microorganismos a diferentes temperaturas para

observar su crecimiento en variaciones térmicas. Se evidencia que las condiciones térmicas

influyen en el crecimiento de las colonias, permitiendo determinar el tipo de organismo presente.

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Morfología colonial: La morfología colonial es un aspecto clave en la caracterización de

bacterias. Se utilizan medios de cultivo específicos para poner en evidencia características

bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

[Link] (1)

[Link] (2)

sta. Control control y klepciela Control y ecoli Control y bacilo

control y mixtura sta. E. ecoli

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