Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Bioquímica Y Farmacia
Práctica de Laboratorio
Calificación:
Práctica N° 3. TEMA: SIEMBRA Y MÉTODOS DE SIEMBRA

Integrantes de Subgrupo

Docente: Asignatura: Microbiología I

Semestre: Curso: G3 Grupo:

OBJETIVOS
1. Conocer y realizar diferentes métodos de siembra de microorganismos
2. Realizar la técnica de agotamiento por estrías para la obtención de cultivos puros
3. Utilizar diferentes medios de cultivo para el aislamiento de microorganismos
4. Practicar la transferencia de inóculos

INTRODUCCIÓN (MARCO TEÓRICO-FUNDAMENTO)

La identificación bacteriana se realiza tras el estudio de las características de tinción,
morfológicas y bioquímicas de los microorganismos.

Con este fin, existen en el mercado una enorme variedad de medios de cultivos diseñados no solo
para permitir el crecimiento y multiplicación de los microorganismos, sino también para inhibir
los de otros (mediosselectivos) o resaltar determinadas características metabólicas (medios
diferenciales) que nos permitan establecer los fundamentos de algunas pruebas diferenciales.

Los ambientes microbianos solo en raras ocasiones albergan una cepa única. Para identificar los
microorganismos de un cierto hábitat, es preciso aislar cada especie en un cultivo puro, para lo
cual es necesario realizar aislamiento en medios especiales, selectivos y diferenciales, y poder
obtener un solo tipo de microorganismo identificándolo mediante pruebas bioquímicas o
serológicas.

El primer paso para el diagnóstico de un microorganismo es sembrar la muestra en un medio de

cultivo adecuado para su desarrollo y utilizar una técnica de siembra para poder observar sus
características macroscópicas y microscópicas como son las morfológicas y tintoriales.

Siembra
Concepto: Depositar un inoculo o semilla en n medio de cultivo adecuado para que se desarrolle.
Se necesitadarle las condiciones físicas adecuadas como son temperatura, tiempo, oxigeno, pH,
dependiendo de lo que requiere el microorganismos que se desea cultivar

Métodos de siembra
Se pueden distinguir dos tipos de siembra:

 En superficie: Corresponde a la modalidad más empleada.

 En profundidad: Se utiliza en las pruebas de identificación bacteriana

Las siembras se pueden realizar directamente desde una muestra clínica que contenga un
microorganismo, desde otro cultivo bacteriano o desde un inoculo.
Inóculo: suspensión de bacterias en un volumen pequeño de medio líquido que generalmente es
un caldo nutritivo básico o agua destilada.

Forma correcta de sembrar en tubo

Las siembras se pueden realizar con diferentes elementos, entre ellos:

Las siembras se pueden realizar con diferentes elementos, entre ellos:

a) Siembra con asa:

Se puede realizar:

• Tomando un inóculo a partir de una suspensión de bacterias o para sembrar muestras

biológicas líquidas (orinas, líquido cefalorraquídeo, etc.)
• Para formar una estría de crecimiento a partir de un inóculo realizado con hisopo.
• Para realizar traspaso de bacterias de un medio a otro, tomando directamente una
porción de una colonia.

b) Siembra con hisopo:

El hisopo está compuesto de algodón hidrófilo, lo que permite empapar este material con el fluido
en el que se desea estudiar una bacteria. Generalmente para que las bacterias permanezcan
viables se utilizan medios de cultivo denominados "de transporte", en el que se sumerge el
hisopo.

La siembra se realiza depositando el hisopo sobre una sección de la placa y posteriormente se

realiza lae stría de crecimiento con asa, o con el mismo hisopo

c) Siembra con pipeta Pasteur:

Se realiza para sembrar bacterias en suspensión.

Aislamiento
Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar
unos deotros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros.

Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que procede
generalmente de una sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una masa de
células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia.

Para obtener cultivos axénicos o puros a partir de una población microbiana mixta, se utilizan las
denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el siglo XIX. En un
principio, Lister utilizó diluciones seriadas en medio líquido con esta finalidad, pero la presencia
de contaminación, es decir, de microorganismos no deseados dificultó el aislamiento.

La escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos, complementados con Agar, y las placas
de Petri en Bacteriología, permitiendo así la separación física de las colonias sobre la superficie
del medio de cultivo o en el interior del mismo.

El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas. También es
posible tratar el medio para eliminar otro tipo de bacterias diferentes de las que se desean aislar,
antes desembraren las placas.

El aislamiento de una especie microbiana a partir de mezclas microbianas, puede a menudo ser
simplificado aprovechando una característica particular de las necesidades nutricionales de los
organismos, requerimientos de temperatura, productos metabólicos, etc. Regulando la
temperatura y el suministro de oxígeno, hemos establecido unas condiciones selectivas que
determinan el desarrollo de la flora. Los microorganismos que no se reúnen las condiciones
impuestas, no crecen.

Añadiendo ciertas sustancias químicas a un medio base, o imponiendo algunas otras condiciones
especiales es durante el crecimiento del cultivo es posible:

1. Reprimir el crecimiento de microorganismos que interfieren, permitiendo al mismo

tiempo el del cultivo deseado- selección por inhibición ó
2. Favorecer el crecimiento del microorganismo buscado, por lo que se desarrolla más
que sus competidores- selección por enriquecimiento.

En ocasiones el aislamiento a partir de un cultivo mixto puede ser favorecido sencillamente

facilitando el reconocimiento del cultivo buscado. Este método, que no requiere el empleo de un
inhibidor especial o sustancias de enriquecimiento, se denomina cultivo en medios diferenciales.

Una gran cantidad de procedimientos de aislamiento se basan en combinaciones de varios de

estos principios. Desde luego, cuanta mayor información se posee de las propiedades de un
microorganismo determinado, existen más posibilidades de conseguir un medio que impida de
una manera más efectiva el crecimiento de los microorganismos competidores.

Para realizar la identificación de un microorganismo será necesario partir de una cepa pura, para
lo cual es necesario realizar aislamiento en medios especiales, selectivos y diferenciales para
poder obtener un solo tipo de microorganismo y de esta forma realizar las pruebas de
identificación, sean estas bioquímicas o serológicas.

El primer paso para el diagnóstico de un microorganismo es sembrar la muestra en un medio de

cultivo adecuado para su desarrollo y utilizar una técnica de siembra para poder observar sus
características macroscópicas y microscópicas como son las morfológicas y tintoriales

Técnicas Generales de aislamiento y cultivo de los microorganismos

1. Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios de cultivos se realice bajo
una cabinade flujo de aire laminar o en un gabinete de seguridad biológica, con los
 protectores de plástico o vidrio para el cuello y la cara, las muestras procesadas se las
debe considerar como potencialmente infecciosas y manipularlos adecuadamente.
2. Se debe contar con todos los medios de cultivos necesarios para realizar las siembras.
3. Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el material de
vidrio (en zonas estériles) antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de
no destruirlos por calor.
4. Después de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar en todo su perímetro
5. Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas,
antes ydespués de la inoculación.
6. Durante la inoculación, los tapones se mantienen en la mano sujetándolos por la parte que
no entraen contacto con tubos y matraces.
7. Los tubos abiertos deben mantenerse en posición inclinada hacia el frente para que el
riesgo de contaminación sea mínimo.
8. Las tapas de las placas Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo boca
arriba trabajando con bacterias.

Resiembra periódica a medios nuevos

Los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos en los que han sido cultivados mediante
pasos periódicos a medios nuevos.

Cuando se va a utilizar este procedimiento para mantener una colección de cepas controles o para
un estudio posterior, se deben considerar 3 parámetros antes de realizar la resiembra:

1. El medio de cultivo
2. Tiempo de incubación
3. Temperatura de incubación
MATERIALES

MATERIALES MEDIOS DE REACTIVOS EQUIPOS

CULTIVO/CEPAS
Algodón Cepas varias Alcohol Mechero
Fósforos Agar Nutritivo Incubadora
Asa de inoculación Agar PCA Refrigeradora
Hilo de inoculación
Lápiz graso
Hisopos estériles
Gradilla

PROCEDIMIENTO
1.- Prender el mechero bunsen para crear un área estéril y aplicar la técnica aséptica
2.- Coloca las placas en posición invertida sobre la mesa de trabajo para que se facilite
manipularlas mejor.

Técnica de siembra por estrías en placa

 Área de trabajo, ordenar el material
Desinfectar de trabajo

Esterilizar Filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri

que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero
espera que se enfríe el asa y toma una colonia de la placa.

Tapar La caja de petri.

1 placa con agar estéril (donde vayas a sembrar) y con cuidado de no

Tomar romper el agar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el asa
en posición ligeramente horizontal

Las estrías (muy juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie

Realizar de una porción pequeña del agar; mediante unbalanceo sucesivo y rápido
de la muñeca.

El asa de nuevo y déjala enfriar. Rozar una vez con el asa de siembra las
Esterilizar estrías sembradas laprimera vez y realiza sobre una porción virgen del
agar una segunda tanda de estrías que no toque la primera.

No hagas más presión sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su mango. Es
importante emplear un asa de siembra en buen estado, pues una rota o deteriorada rasgará el agar.

Sembrado por estrías en tubo inclinado

Esterilizar Filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri
que contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero
espera que se enfríe el asa y toma una colonia de la placa.
El tubo de agar en pico de flauta
(agar inclinado) y cerca del
Tomar mechero retira el tapón de algodón
ayudándote con los dedos meñique y
anular y flamea la boca del tubo.
El asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y
Introducir empezando en el área delfondo del agar realiza una estría hacia fuera
hasta terminar en la punta del agar. Retira el asa.

Flamear La boca del tubo de nuevo y coloca el tapón de algodón bien

[Link] el asa y déjala enfriar.

A incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas después de

Llevar lasiembra.

Sembrado por agitación en caldo

 La parte de la caja de petri que contiene el medio de cultivo
Tomar sembrado. Cerca del mechero espera que seenfríe el asa y toma
una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera.

Tubo con el caldo estéril y cerca del mechero retira el tapón de algodón
Tomar
ayudándote con losdedos meñique y anular, flamea la boca del tubo.

El asa con la muestra (cuidando de no tocar las paredes del tubo) y por
Introducir agitación dentro del caldo, siembra el inóculo.

Retirar El asa y flamea de nuevo la boca del tubo y coloca el tapón de algodón
firmemente. Esteriliza el asa y déjala enfriar.

Llevar A incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas después de

lasiembra.

Sembrado en picadura en tubo vertical

Esterilizar Filamento del aguja de inoculación y toma la parte de la caja de petri que
contiene el medio de cultivo sembrado. Cerca del mechero espera que se
enfríe la aguja de inoculación y toma una colonia de la placa.

Tomar el tubo con el medio de cultivo y cerca del mechero retira el tapón de
algodón ayudándote conlos dedos meñique y anular, flamea la boca del
tubo.

La aguja con el inóculo y sin tocar las paredes del tubo, inocula en el
Introducir centro del medio de cultivosin llegar hasta el fondo del tubo. Retira la
aguja de inoculación en la misma dirección de la siembra.

Retirar El asa y flamea de nuevo la boca del tubo y coloca el tapón de algodón
firmemente. Esteriliza el asa y déjala enfriar.

A incubar y observa el desarrollo a las 24 o 48 horas después de

Llevar
lasiembra.
RESULTADOS OBTENIDOS

Técnica de siembra por estrías en placa Después de 24 horas

Sembrado por estrías en tubo inclinado

Sembrado en picadura en tubo vertical

CONCLUSIONES
 Se conoció y realizó diferentes métodos de siembra de microorganismos
 Se realizó la técnica de agotamiento por estrías para la obtención de cultivos puros
 Se utilizó diferentes medios de cultivo para el aislamiento de microorganismos
 Se practicó la transferencia de inóculos

RECOMENDACIONES
 No hacer más presión sobre el agar que la debida al propio peso del asa y su mango. Es
importante emplear un asa de siembra en buen estado, pues una rota o deteriorada rasgará
el agar.

BIBLIOGRAFÍA

 Idrovo, A., Zamora, J & (2023). Guía Práctica de Labortorio de Microbiología.

Universidad de Guayaquil. Guayaquil, Ecuador. Recuperado el 20 de Octubre del 2023.