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Escala McFarland

Este documento describe la escala de McFarland, un método para estandarizar suspensiones bacterianas mediante la comparación de su turbidez con una serie de patrones de referencia. Explica cómo funciona la escala, cómo se prepara el patrón estándar de McFarland y cómo puede usarse para estimar la concentración bacteriana en una muestra.

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Luis Fernando Gonzalez Guerrero
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Este documento describe la escala de McFarland, un método para estandarizar suspensiones bacterianas mediante la comparación de su turbidez con una serie de patrones de referencia. Explica cómo funciona la escala, cómo se prepara el patrón estándar de McFarland y cómo puede usarse para estimar la concentración bacteriana en una muestra.

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Escala McFarland

- Gonzalez Guerrero Luis Fernando


- Reyna González Daniela
¿Como funciona?

● La escala de Mcfarland consiste en una serie de tubos con una


densidad óptica diferente por un precipitado de sulfato de
bario.

● Cada turbidez se asocia a una concentración conocida de


bacterias/ml

● Para cada cepa se tiene que establecer la equivalencia entre


turbidez de cada tubo y la concentraciónde masa de bacterias
UFC/ml
Preparación de la turbidez estándar de
Mcfarland.

● Agregando 0.5ml de solución de cloruro de bario (BaCl2) al


1.175% p/v a 99.5 ml de ácido sulfúrico (H2SO4) al 1% v/v.

● La turbidez se divide en alícuotas

● Se sella y se puede almacenar hasta 6 meses

● La composición de la turbidez estándar y la densidad de


bacterias se muestran en la siguiente tabla.
● La exactitud de la densidad se debe verificar con
espectrofotómetro.

● Para la de 0.5 a 625 nm debe ser de 0.08 a0.1

● También se puede verificar por ajuste de una suspensión


bacteriana con una cepa control (E. Coli) a la misma turbidez.

● Esto preparando diluciones seriadas 10 veces y desarrollando


después conteos de colonias en placas.
Método de conteo
En placa para probar la turbidez estándar de 0,5 en la escala de
McFarland

Objetivo: Determinar # de bacterias Materiales:


por mL de fluido.
- Siete tubos estériles de
Una suspensión bacteriana tapa con rosca
equivalente en turbidez a la turbidez - Siete placas de agar
estándar contiene aprox 108 - Pipetas capaces de
bacterias. medir 4.5 y 0.5 mL
- Máquina vortex
Interpretacion

● La placa 7 tendria de 1-9 millones de UFC


● 6 de 100 mil-900 mil UFC
● 5 de 10 mil - 90mil UFC
● 4 de 1000- 9000 UFC
● 3 de 100-900 UFC
● 2 de 10-90 UFC
● 1 de 1-9 UFC

● La placa que se puede contar es la 3, pero si esta tiene


más de 300 UFC se cuenta la 2.
Construcción de la Curva

● Se prepara un medio de cultivo previo al inoculo como blanco.

● Después se toman muestras del cultivo a determinados


tiempos.

● Se realizan mediciones a una longitud de onda de 600 nm.


Construcción de la Curva

● Se construye una curva de calibración de número de


número de células contra densidad óptica. Para conocer
factor de conversión

● Para esto primero se debe estandarizar el número de


células con un método.

● Con esto se puede extrapolar cualquier punto de la curva


de crecimiento a numero de celulas/ml.
● Finalmente se saca antilogaritmo de la concentración
de microorganismo para generar una recta de
concentración contra tiempo.
Bibliografía:

● de Cary-Blair, M., & de Stuarts, M. de A. y. M. (2009).

Medios de transporte y almacenamiento.

[Link].

[Link]

09/[Link]
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