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CBT NO.1 DR. LEOPOLDO RIO DE LA LOZA, IXTAPALUCA
Tema:
AISLAMIENTO Y RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBICOS
Preparación de diluciones en tubos de ensayo.
Alumna: Parras Ramírez Cherline NL:26/29
Carrera: Técnico laboratorista químico
Turno: vespertino
Grado y Grupo: 2-B
Profesora: María Catalina Eva Flores Márquez
Materia: Emplea Técnicas de Cuantificación de Microorganismos
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Introducción
En este apartado aprenderemos el marco teórico de la práctica el aislamiento de microorganismos
aeróbicos. Se entiende por aislamiento el proceso que permite separar uno o más microorganismos
presentes en una muestra forzándolos a crecer en medios , pero no todos los microorganismos pueden
cultivarse en medios de cultivo como el caso de los vitroficos y los consorcios microbianos difíciles de
separar (parásitos obligados) los cuales se desarrollan sobre tejido vivo de su huésped -
hospedaje(virus,hongos,rickettsias), en esta práctica aplicaremos técnicas para la preparación de
medios de cultivo y siembra de microorganismos. Un medio de cultivo microbiano es una mezcla de
sus sustancias que promueve y sustento el crecimiento y la diferenciación de microorganismos al cual
se le denomina un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo
de los mismos, la composición de los medios de cultivo es que contiene nutrientes, fuentes de energía,
factores promotores de crecimiento minerales, metales, sales, amortiguadores y gelificantes para los
medios sólidos. la clasificación de medio de cultivo de acuerdo con base a su consistencia adecuada
del medio va partiendo de un medio líquido donde podemos modificar su consistencia
añadiéndolo producto como gelatina o Agar con lo que obtendremos medios en estados
semisólidos o líquido.
En esta práctica también se presentarán las diferentes técnicas de aislamiento son las estrellas
cruzadas, el vaciado en placa y la extensión con varilla, pero en ocasiones la muestra tiene gran
cantidad de microorganismo que tenemos que recurrir a la realización de disoluciones. Preparación
y disolución de muestras de alimentos para análisis microbiológico es la disolución primaria tiene
como por objeto tener una distribución lo más uniformemente posible de los microorganismos
contenidos en la muestra destinada para el análisis. La preparación de desilusiones decimales
adicionales si son necesarias, puesto que tienen como objetivo reducir el número de
microorganismos por unidad de volumen, para permitir, desde la incubación, la observación de la
prueba en el caso de tubos o matraces y la cuenta de colonias en caso de placas.
En esta práctica realizaremos el cálculo necesario para el número de placas que se ocupará en cada
una de ellas por gramo, por ende, ocuparemos el medio ya preparado para hacer el caldo
peptonado en un frasco de 90 ML y de ahí pipetear cierta cantidad a los tubos. Y de
los mismos tubos pipetear en el primer tubo mililitro 10 ml en este caso serían 11 en el segundo
pipetear otro mililitro del primer tubo y del tercer tubo pipetear un mililitro más del tubo 2. En esta
práctica se pondrán a prueba todo el marco teórico. Esperamos obtener resultados satisfactorios en
esta práctica.
Material
°Mechero.
°Matras de 100 ML. °Franela.
°Balanza granataria/analítica. °Plumón indeleble.
°Agar nutritivo. °Agua destilada.
°Pipetas de un mililitro. °Gradilla.
°Frasco de disolución con 90 ML. °Encendedor.
°Alcohol. °Bata.
°perilla de succión. °Cofia.
°Gasa. °Guantes.
°Algodón. ° Papel encerado.
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Procedimiento
Como primer paso y con las medidas de seguridad apropiadas se llevó a cabo el cálculo necesario para
saber cuántos gramos de medio Agar se ocupará para las cuatro cajas. Teniendo como referencia el
caldo peptonado:
Cada caja es de 35ml
(23g médium) (140 ML de H2O) /1000 ML de H2O = 3.22g a pesar
3.22g de medio para la preparación de caldo y llenado de las 04 cajas.
El siguiente calculo es sobre los gramos utilizados de agar para la preparación de caldo que para este
caso será usado para los tubos :
90ml de Caldo peptonado.
30ml de cada tubo .
+90ml de frasco.
=120 Ahora 15g en 1L
(15g de médium) (120ml de H2O)/1000 H2O =1.8g a pesar de médium.
En este caso de resultado dio 1.8g de agar para la preparación del caldo para los tubos.
Se colocará en cada tubo 10ml de caldo(09ml).
Después de pesar en una balanza analítica, se ocupo 120ml de agua destilada para ello se ocupo una
bureta de 100ml y un matraz de 125ml donde se hizo la preparación del médium.
En el matras Erlenmeyer de 125ml se agrego un poco de agua destilada que contenía la bureta para
después agregar los 3.22g del agar ,teniendo cuidado de que no se Esparza por el cuello del matras,
después se movió el matras en oscilaciones circulares para empezar a disolver el soluto, se agregará
el resto del agua al matras. Una vez a completado los ML en el matras ,se expondrá al fuego hasta
que de inicio a querer ebullir ,estoy se hará con una franela húmeda para evitar cualquier riego de
quemaduras.
Durante ese proceso se preparo el gorro con papel estraza y el tapón con gasa y algodó.Se deben de
colocar en el matraz al terminar su exposición al fuego .Después se metió a la autoclave durante 10 a
15 minutos mínimo.
Pasado el tiempo requerido se sacó el matraz de la autoclave, este se encontraba caliente así que con
una franela húmeda se envolvió el matras para que enfriara un poco, luego verte en el frasco
Sucesivamente se agregan 10ml con ayuda de una pipeta a cada tubo ,pero en una bureta se median
los 90ml del matraz, para si vaciar al frasco
Al final de esta parte tapamos tanto los tubos como el frasco y ya listos se metieron a la autoclave
nuevamente .,para después volver a utilizarlos.
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Resultados
1.1)Medio obtenido después 1.2)Frascos con caldo 1.3)Frasco de caldo
de hacer el cálculo,pesar y peptonado en la autoclave. peptonado,en proceso de
disolver en agua destilada a pipetear a los tubos de
exposición del fuego,(gorrito ensayo con tapa rosca.
y tapón de esterilización)
1.4)Se expulsan los ML a 1.5)se pipetea un mililitro a un 1.5)Los demás tubos se
pipetear en los tubos de ensayo tubo y de ese mismo al otro ponen en conjunto para
…. hasta a completar guardarlos en un refrigerante
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Conclusión
Al termino de esta práctica obtuvimos resultados no tan satisfactorios, puesto que en el
proceso cometimos ciertos errores.
Durante la preparación del medio, desde pesar hasta diluir el medio en agua destilada y
exponerlo al mechero ,junto con el método de esterilización no hubo complicaciones, puesto
que todo iba en orden .Más sin en cambio la esterilización en las pipetas que utilizamos no
lo estaban completamente, esté fue uno de los factores importantes, ya que en un momento
nos equivocamos en tomar una no esterilizada .
También hubo otro factor importante y fueron los mecheros ,al momento de estar
esterilizando el área de trabajo se apagaron y fue un momento de inquietud por si se
contaminaban.
Tal vez no fueron los resultados esperados ,pero si obtuvimos una mejor técnica y/o
experiencia en el proceso .
Se logró llevará acabo lo que se pedía en la práctica pero con ciertos factores
contraproducentes en el.
