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J. Mamá. Res de óvulos. vol. 16, 1–9, 1999 1

­Revisar­

intracitoplasmático Esperma Inyección (ICSI)

en Ganado y Otro Animales domesticos:
Problemas y Mejoras en
Práctico Usar
Toshitaka Horiuchi1* y Takashi Numabe2

1Laboratorio de Ciencias de la Reproducción Animal, Departamento de Biorrecursos,

Universidad de la Prefectura de Hiroshima, Shoubara, Hiroshima 727­0023 y
2 Estación Experimental de Industria Animal de la Prefectura de Miyagi, Miyagi 989­6455, Japón

La inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) es la por revisa los problemas y las mejoras de ICSI
técnica de microfertilización de la inyección directa de un para uso práctico en animales domésticos, especialmente en ganado vacuno.
Espermatozoide único o cabeza de espermatozoide (núcleo) en ooplasma.
En mamíferos, Uehara y Yanagimachi [1, 2] primero Historia de ICSI en ganado y
informaron que los núcleos de esperma inyectados en oocitos de hámster Otros animales domésticos
podrían transformarse en pronúcleos masculinos. Desde entonces,
Muchas investigaciones han tenido como objetivo la producción exitosa de En el ganado vacuno y otros animales domésticos, los objetivos de

descendencia después de ICSI. Descendencia viva normal ICSI son (1) la utilización eficaz de los espermatozoides para
resultantes de ICSI han nacido en conejos [3], ganado mejora del ganado y multiplicación de animales excelentes; y (2) proporcionar
[4], humanos [5–7] y ratones [8–10]. otra opción para obtener
En ICSI humana, altas tasas de fertilización y embarazo. ovocitos fertilizados, si las tasas de fertilización in vitro (FIV) son
se lograron cuando se inyectó un espermatozoide móvil después de la bajo. Además, existe la posibilidad de utilizar
inmovilización [6]. Avances dramáticos en Espermatozoides defectuosos de animales infértiles, si los animales son
el tratamiento de la infertilidad grave por factor masculino ha sido excelentes para la productividad o poseen una especial
logrado mediante el uso de ICSI, y en la actualidad, la técnica capacidad.

de ICSI se está utilizando ampliamente en aplicaciones clínicas para Los antecedentes de ICSI en bovinos, porcinos, equinos y ovinos son
infertilidad humana. se muestran en las Tablas 1 y 2. En comparación con humanos [6,
En bovino, los primeros terneros ICSI nacieron en 1990 en 7, 33] y ratón [8–10] ICSI, tasas de fertilización, tasas de escisión y el número
Japón [4]. Estos resultados demostraron que los embriones bovinos de producción de descendencia en
producido por ICSI con un espermatozoide de toro muerto podría convertirse La ICSI bovina, porcina, equina y ovina son extremadamente
en terneros vivos. la normalidad de bajo.

los terneros (crecimiento, comportamiento y reproducción) también fue Los primeros terneros vivos después de la ICSI fueron reportados por
reportado después de cinco años [11]. Sin embargo, la escisión et al.
Ir a (1990) [4]. Su éxito dependió principalmente del progreso de la
tasa de ovocitos después de la ICSI fue muy baja (12 por ciento, 61/ maduración in vitro y en
507) [4], la tasa de producción de embriones transferibles fertilización vitro de ovocitos bovinos y el establecimiento de un sistema de
era bajo para uso práctico [4, 12­24]. en otros nacionales cultivo in vitro mediante cocultivo con
animales (cerdos, caballos y ovejas), la tasa de escisión de células del cúmulo [41]. Tras los informes anteriores de
Los ovocitos ICSI también fueron bajos [20, 24­32]. Westusin (1984) [12]y y Younis (1989)
Alabama. Alabama. y

Hay muchas revisiones excelentes sobre el estado actual y el futuro de et [4]

[14], Goto (1990) al. utilizó espermatozoides de toro capacitados muertos

la ICSI en humanos [33], ratones [34] y mediante congelación y descongelación repetidas sin
animales domésticos, incluido el ganado [35­40], y este pa­ crioprotectores. En los primeros informes sobre ICSI bovino, muchos
Los investigadores seleccionaron espermatozoides muertos para uso práctico.

Recibido: 8 de diciembre de 1998 o para obtener información básica sobre la fertilizabilidad de los espermatozoides.

Aceptado: 21 de enero de 1999 núcleos (Tabla 1). Sus resultados mostraron que los núcleos de los
*A quién debe dirigirse la correspondencia. espermatozoides se transformaban en pronúcleos masculinos, incluso si los espermatozoides
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2 — J. Mamm. Res de óvulos. Vol.16, 1999

Tabla 1. ICSI en bovinos

Desarrollo in vitro Embarazo

Esperma Fertilización Referencia
Blastocisto de escisión o descendencia

Muerto 0~25% 4% ­ ­
Westhusin et al. (1984) [12]
Muerto 13% ­ ­ ­
Kameyama et al. (1985) [13]
(liofilizado)
Muerto Younis et al. (1989) [14]
Muerto 15~76% 4~38% ­ ­
Keefer y cols. (1990) [15]
Muerto ­ 12% 2% Descendencia Goto et al. (1990) [4]
Muerto 22~39% ­ ­ ­
Heuwieser et al. (1992) [16]
Muerto 46% 15~71% 7~11% 67% ­
Li y col. (1993) [17]
¿Vivir? 67% 9% 36% 4% ­
Pavasuthipaisit et al. (1994) [18]
Muerto ­ ­
Iwasaki et al. (1994) [19]
¿Vivir? 25% ­ ­ ­
Catt et al. (1995) [20]
Muerto 5% ­ ­ ­
Qian et al. (1996) [21]
¿Vivir? ­ 38~55% 0~33% 38~40% ­
Chen et al. (1997) [22]
Vivo/Muerto ­ 8% ­
Gordon et al. (1997) [23]
Vivo 81% ­ ­ ­
Katayose et al. (1997) [46]
Muerto 50% 11% ­ ­
Hosoi et al. (1998) [24]
Vivir 78% 74% 29% ­
Horiuchi et al. (1998) [42]
Vivir 60% 61% 24% Embarazada Rho et al. (1998) [59]
(tratado con TDT) 38% (16/6:~d54)
Vivir ­ 72% 28% ­
Horiuchi et al. (1999) [43]

Tabla 2. ICSI en porcino, equino y ovino

Desarrollo in vitro Embarazo

Especies Fertilización de esperma Referencia
Escote Blastocisto o descendencia

Muerto 60% ­ ­ ­
Cerdo Catt et al. (1995) [20]
Muerto 66% 10% ­ ­
Cerdo Hosoi et al. (1998) [24]
Caballo ¿Vivir? ­ 39% 21% (Mórula) Sin preg. (0/2) Meintjes et al. (1996) [25]
Caballo Vivir ­ 25% (1/4) ­
Embarazada. (1/1) Squires y cols. (1996) [26]
Caballo Vivir 30% 13% 5% (16 celdas) ­
Dell'Aquilia et al. (1997) [27]
Caballo Vivir 38% 48% ­ ­
Dell'Aquilia et al. (1997) [28]
Caballo Vivir 50% 8­20% 8% (6­8 celdas) ­
Gondahl et al. (1997) [29]
Caballo Vivir ­ 5­21% ­
Sin embarazo. (0/7) Kato et al. (1997) [30]
Vivir 63% 48% 7% ­
Oveja Catt et al. (1995) [20]
Vivir 30% ­ ­ ­
Oveja Gómez et al. (1997) [31]
Vivir 34% ­ ­ ­
Oveja Gómez et al. (1998) [32]

no sobrevivió. Sin embargo, las tasas de fertilización fueron Espermatozoide de toro móvil inmovilizado mediante puntuación en la cola.
varios y las tasas de escisión eran muy bajas. podría mejorar la tasa de fertilización y la tasa de división en el ganado
et informó
Van Steirteghem (1993) [6] al. una alta también [42, 43].
tasa de fertilización en ICSI con espermatozoides humanos por el Aunque se han intentado mejoras paso a paso,
aspiración de ooplasma, uso de espermatozoides móviles Ha habido un éxito limitado en el embarazo y el parto.
e inmovilización mediante rayado de la cola antes de la inyección. de descendencia en todos los animales domésticos (Tabla 1).
Particularmente, la inyección de un espermatozoide móvil después
la inmovilización mediante puntuación de la cola fue la clave del éxito. Problemas y mejoras para
Estos excelentes resultados fueron confirmados por muchos médicos y Uso práctico de ICSI en ganado
fueron aceptados. Recientemente, también en el ganado vacuno,
caballo y oveja, se han utilizado espermatozoides móviles Problemas técnicos
(Ver Tablas 1 y 2), y encontramos que ICSI con un Hay muchos informes de que las tasas de fertilización
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Horiuchi, et al. — 3

después de ICSI por el método convencional fueron bajos en Disminución de la motilidad de los espermatozoides dentro de la solución PVP. Pero PvP

ganado. La longitud total de los espermatozoides de toro es de tiene una acción perjudicial primaria sobre la membrana plasmática de los
espermatozoides humanos [49]. Barras [50]
aproximadamente 68 a 74 micras, la cabeza es de aproximadamente 8 a 10 micras. Alabama. y

micras, y la porción más ancha de la cabeza es de aproximadamente 4 informó que algunas soluciones de PVP producidas comercialmente son
a 5 micras [44]. Por supuesto, el tamaño de los espermatozoides. tóxicas y provocan un desarrollo fallido del embrión después
La cabeza depende de cada toro individual, sin embargo, la ICSI en cigotos de ratón. Además, la presencia de PVP en
El tamaño (porción más ancha) de la cabeza de esperma de un toro es mayor que los ovocitos humanos causaron cierto retraso entre la inyección de esperma
el de una cabeza de espermatozoide humano. Como resultado, el tamaño de los poros y el comienzo de las oscilaciones de calcio [51], o
de la pipeta de inyección en ICSI bovino es mayor que el retraso de la descondensación del núcleo del espermatozoide y la activación
utilizado para ICSI humana. Por tanto, la rotura del ovocito de los ovocitos [52]. Anomalías cromosómicas en el embarazo.
membrana plasmática (oolemma) por aspiración da como resultado podría estar relacionado con la inyección de PVP en humanos
daños notables. Además, el oolema de los oocitos bovinos es elástico como et al. la tasa 2PN después
ovocitos [53]. Hinka [54] encontró
el de los ratones, y era difícil determinarlo. ICSI fue significativamente mayor en un método modificado de
pincharlos mediante ICSI convencional. Kimura y ICSI sin el uso de PVP que en ICSI convencional

Yanagimachi (1995) [8] demostró que el uso de un piezo con el uso de PVP. Por otro lado, Motoishi [55] informó que la y Alabama.

El micromanipulador (PRIM Tech., Japón) fue eficaz para inyección de una pequeña cantidad de
ICSI en el ratón. Además, en ICSI humana, Huang, (1996) [45] y Alabama.
PVP (alrededor de 2­3 pl) no fue perjudicial para la fertilización
informó que era posible lograr y desarrollo embrionario de ovocitos bovinos FIV. Posiblemente el volumen
tasas de fertilización y tasas de embarazo aceptables utilizando de inyección sea el factor importante,
un maicromanipulador piezoeléctrico. Por tanto, otra opción sin embargo, el efecto directo de la PVP sobre la fertilización temprana,
para la técnica ICSI es el uso de un maicromanipulador piezoeléctrico. La escisión de ovocitos y el desarrollo embrionario siguen siendo
et al.[46] demostró que, en
Recientemente, Katayose (1997) controvertidos en la ICSI bovina.

En comparación con la ICSI convencional, las tasas de formación pronuclear

masculina se obtienen después de la ICSI utilizando un piezoeléctrico. Factores que afectan la descondensación y pronuclear.
micromanipulador fueron significativamente mayores (81% frente a 21%). formación de núcleos de espermatozoides después ICSI

Además de la dificultad de perforar el oo­lema bovino, la observación La mayoría de los ovocitos bovinos son preparados en
e identificación de un Maduración in vitro. El bloqueo de la síntesis de glutatión por
Los espermatozoides inyectados en el citoplasma de los ovocitos son La L­butionina­[S, R]­sulfoximina durante la maduración in vitro afecta tanto
extremadamente difícil, porque los ovocitos bovinos son opacos. la formación como la aposición de pronucleares
Por lo tanto, los detalles del proceso ICSI no pueden ser durante la FIV de ovocitos bovinos [56]. El glutatión es uno de
observado. Los ovocitos bovinos contienen vacuolas y lípidos. los componentes importantes para la unión del disulfuro de protamina
gotitas en su citoplasma que impiden una visualización clara. Sólo es reducción. Después de la incorporación de la cabeza del espermatozoide
posible predecir, por tanto, la En el ooplasma, las protaminas nucleares del espermatozoide se
punción exitosa de oolema por su movimiento, intercambian por la proteína empaquetadora del ADN derivada del ovocito.
lo cual probablemente no sea lo suficientemente exacto. Centrifugación histonas a través de la nucleoplasmina [57]. Después de eso, el
Permite la eliminación del exceso de lípidos para la visualización de Comienza la descondensación de la cabeza del espermatozoide. Estos
ovocitos bovinos [47]. La centrifugación de cigotos no resultados indican que la calidad de los ovocitos, por ejemplo, fracaso o
no afecta al desarrollo posterior y facilita la Incompletitud de la maduración in vitro de ovocitos bovinos.
visualización [48]. La confirmación de un espermatozoide resultando en ovocitos de mala calidad, afecta el éxito de
inyectado en el ooplasma debe ser eficaz para aumentar ICSI. Sin embargo, la interacción entre la calidad de
de la tasa de fertilización por ovocitos inyectados. Aunque el ovocitos bovinos y el éxito de la ICSI no está claro.
Será necesario determinar la eficacia de la centrifugación. Kefer et al. (1986) [58] informó que la protamina
En experimentos futuros, un problema potencial es que algunos Los enlaces disulfuro en los núcleos de esperma de toro pueden ser más ricos que

Los ovocitos se activan por centrifugación y extruyen el aquellos en los núcleos de esperma de hámster, como resultado del retraso
segundo cuerpo polar [47]. de la descondensación del esperma de toro en ovocitos de hámster después
Se ha utilizado solución de polivinilpirrolidona (PVP) et al.
microinyección. Recientemente, Rho (1998) [59] informó
para un fácil manejo de los espermatozoides en procedimientos ICSI. Él que el tratamiento previo de los espermatozoides con ditiotreitol (DTT) podría
no sólo evita que los espermatozoides se adhieran al mejorar significativamente la proporción de pronucleares masculinos
superficie interior de la pipeta de inyección de vidrio pero también permite Formación en ICSI bovino.

Buen control de un espermatozoide en la pipeta de inyección. Es ampliamente conocido que la descondensación del
También facilita la inmovilización de los espermatozoides para la la cabeza del espermatozoide es independiente de la activación del ovocito [57].
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4 — J. Mamm. Res de óvulos. Vol.16, 1999

Por lo tanto, el fracaso de la inyección de espermatozoides en el ooplasma o el nivel de calcio interno conduce de la metafase II a
Probablemente sería la primera razón para la aparición de ovocitos no metafase III en ratón activado partenogenéticamente
fertilizados. Una alta tasa de formación de pronucleares masculinos por ovocitos [76, 77]. Recientemente, Rho (1998) [75] informó
Alabama. y que retrasar la
Katayose (1997) informó piezo­ICSI [46] et al. adición de 6­DMAP durante 3 h
y Horiuchi (1998) Alabama.
[42].y después del tratamiento con ionomicina (utilizada como ionóforo de calcio)
En ICSI humana, inmovilización mediante puntuación de un espermatozoide. disminuyó en gran medida la incidencia de enfermedades cromosómicas.
cola aumentó la incidencia de fertilización normal [60– anomalías y produjo una alta proporción de ovocitos activados con un
63]. El daño físico de la membrana del espermatozoide puede único pronúcleo haploide.
Facilitar los efectos de los factores del ooplasma en los espermatozoides. Además, demostraron que la eficiencia del ganado bovino
cabeza [64], sin embargo, no está claro si la inmovilización de un La ICSI podría mejorarse mediante la activación de los ovocitos con este
espermatozoide móvil acelera la régimen de activación [59].
Interacción entre la cabeza del espermatozoide y el ooplasma. Muchos investigadores [4, 12, 14–16, 22] pensaron que
La inducción de la activación de los ovocitos fue esencial para promover la
Activación de ovocitos después ICSI y la necesidad de formación de pronucleares masculinos en ICSI bovino. Sin embargo,
activación artificial
ovocito La mejora de la técnica ICSI (de ICSI convencional a piezo­ICSI) ha
En la fertilización normal, la fusión de membranas entre aumentado las tasas de
el espermatozoide y el ovocito es esencial para la incorporación de formación pronuclear masculina. A pesar de haber espermatozoides vivos
los espermatozoides hacia el citoplasma de los ovocitos. la incorporacion o muertos, el segundo cuerpo polar fue extruido después
La introducción de la cabeza del espermatozoide en el ooplasma provoca piezo­ICSI [46, 42], y con respecto a la reanudación
la liberación del paro meiótico. La segunda metafase de la meiosis, los espermatozoides bovinos pueden poseer el esperma
transferido a la fase G1/S. Hay dos hipótesis sobre cómo los factores de activación de ovocitos asociados (SOAF).
espermatozoides desencadenan la activación de los ovocitos.
[sesenta y cinco]. Uno es el mecanismo del receptor transmembrana, Factores que afectan la escisión de los ovocitos bovinos después
el otro es un mecanismo de factores de esperma solubles [66, ICSI

67]. En ICSI, los factores espermáticos solubles son los únicos En ICSI bovino, el principal problema es un bajo clivaje.
Factores de activación de ovocitos excepto la estimulación física. tasa. Si se selecciona la técnica ICSI adecuada, la inyección exitosa de
mediante procedimiento de inyección. espermatozoides de toro permite que los núcleos de espermatozoides
En animales pequeños de laboratorio, por ejemplo, hámster y ratón, para descondensarse y transformarse en un hombre bien desarrollado
una inyección simulada, es decir, extracción de oolema o aspiración de pronúcleos. Sin embargo, la formación bipronuclear normal
ooplasma, estimuló la activación de los ovocitos y no es garantía de una primera escisión adicional.
causó escisión partenogenética [68]. En el otro Los efectos de la activación artificial de ovocitos sobre la escisión.
Por otro lado, los ovocitos bovinos maduros rara vez se han activado y desarrollo in vitro de ovocitos bovinos después de ICSI
mediante una inyección simulada [42]. se resumen en la Fig. 1. Cuando se inyectó un esperma­tozoo de toro móvil
Los ovocitos bovinos envejecidos podrían activarse fácilmente mediante inmovilizado por una puntuación de cola en
tratamiento con etanol [69], estimulación eléctrica e ionóforo de calcio ovocitos bovinos, el tratamiento de activación artificial de ovocitos (etanol
(A23187) [70]. Dependencia de la edad de al 7% durante 5 min) incrementó el desarrollo
La activación se ha demostrado en el ganado y el envejecimiento de los tasa a un estadio de más de dos células en ovocitos bovinos con
ovocitos bovinos afecta la respuesta de activación de los ovocitos. un segundo cuerpo polar después de ICSI (74% vs 33%). También el
A diferencia del ovocito bovino envejecido, la activación de los más jóvenes La tasa de blastocistos aumentó con el tratamiento con etanol al 7%
ovocitos bovinos (p. ej., madurados in vitro durante 22 a 24 horas) podrían durante 5 minutos (29% frente a 14%). Por tanto, se piensa
no ser inducido por etanol, estimulación eléctrica o A 23187 que la baja tasa de escisión de los ovocitos bovinos ICSI sin estímulos de
solo [69, 70]. Sin embargo, la activación de bovinos más jóvenes activación adicionales se debe a una insuficiencia
Los ovocitos podrían ser inducidos por una combinación de su agente estimulación de la activación de los ovocitos para el desarrollo embrionario,
partenogénico y un inhibidor de la síntesis de proteínas. no reanudación de la meiosis y extrusión de la segunda
(cicloheximida) [71, 72] o fosforilación (6­ cuerpo polar. Stice y Robl (1990) [78] informaron que el
dimetilaminopurina, 6­DMAP) [73–75]. Es difícil La actividad de un factor soluble de los espermatozoides de toro en la
Activar ovocitos bovinos más jóvenes con una sola activación. activación de oocitos fue menor que la de los espermatozoides de conejo.
estimulación sola [71, 72], sin embargo, los ovocitos bovinos más jóvenes Independientemente de la adición de activación de ovocitos, el
justo después de la ICSI han sido inducidos con un inyección de un espermatozoide de toro móvil (vivo) en el
estimulación de activación única sola según muchos El ooplasma después de la inmovilización produce más embriones
informes [4, 14–17, 19–22]. La estimulación insuficiente escindidos que la inyección de un cuerpo muerto (muerto por repetidas
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Horiuchi, et al. — 5

congelación y descongelación) espermatozoide de toro. El uso de los polos del primer huso mitótico. La cola del esperma
los espermatozoides de toro muertos provocaron la notable disminución permanece asociado a uno de los polos. En el ganado vacuno, el
en las tasas de escisión en ICSI bovino [43]. Hay muchos centrosoma de espermatozoides después de su incorporación al ooplasma
informes [4, 12, 15, 17, 24] sobre bajas tasas de escisión en ICSI Tiene un papel importante en la migración del pronúcleo masculino, la
con espermatozoides de toro muerto. aposición de bipronúcleos y la primera miosis.
Altas tasas de desarrollo embrionario mediante ICSI con muertos Por otra parte, en roedores, la herencia centrosomal
Se informaron espermatozoides o núcleos de espermatozoides aislados en parece ser principalmente maternal. Asteres citoplasmáticos
roedores, por ejemplo ratones [8, 79] y hámsteres se encuentran en ovocitos no fertilizados, y estos ásteres son
(Yamauchi y Horiuchi, inédito). Ohsako [80] encontró que el ADN y Alabama.
necesario para la migración pronuclear.
genómico de los espermatozoides es muy resistente al tratamiento de La introducción de un centríolo defectuoso o de múltiples centríolos
congelación y descongelación en comparación con en un ovocito puede provocar una fertilización anormal
Células somáticas (hígado, riñón y testículos) en hámster dorado. En y desarrollo embrionario en humanos [83, 84]. Por lo tanto, las anomalías
términos de organización y dinámica del citoesqueleto. del centríolo del espermatozoide muerto
Durante la fertilización normal, las diferencias entre roedores y otros espermatozoides de toro muertos por mostos congelados y descongelados repetidos
mamíferos se muestran en la Tabla 3. En ser una de las razones de la baja tasa de escisión.
En el ganado bovino, se forma un áster de microtúbulos radicales en Sin embargo, el comportamiento de los ásteres de esperma­tozoos
asociación con la cabeza de espermatozoide incorporada [82]. Estos muertos después de la ICSI no está claro.

Los microtúbulos son necesarios para la migración pronuclear. El

El áster de esperma se divide para formar dos ásteres, que sirven como Problemas para Práctico Uso de ICSI en Cerdo, caballo y

Oveja
Hay algunos informes sobre ICSI en cerdos [20, 24], caballos
[25–30] y ovejas [20, 31, 32]. Lo mismo que ICSI en
En el ganado vacuno, las tasas de división eran bajas en estos animales
domésticos. La técnica ICSI se ha aplicado en caballos,
debido a las bajas tasas de fertilización por fertilización in vitro
[40]. En porcino, los notables avances de la maduración in vitro, la
fecundación in vitro y el sistema de cultivo in vitro han
[85, 86]. En un futuro próximo, la rápida
Se puede esperar un progreso de la ICSI en cerdos. En el mismo
al menos, la información básica de fertilización y ovocitos.
activación, etc., debe registrarse para el éxito de
ICSI en estos animales.

Conclusión

En la actualidad, existen varios problemas relacionados con

el uso práctico de ICSI en ganado y otros animales domésticos
Fig. 1. Resumen de la extrusión de 2 cuerpos polares (PB) y animales. Para la resolución de estos problemas, se han realizado
desarrollo in vitro de ovocitos bovinos después de ICSI muchos estudios. El uso de piezo­ICSI ha
utilizando un micromanipulador piezoeléctrico [42]. ns=no
facilitó la punción del oolema bovino y la
significativo (P>0,05), s=significativo (P<0,05).

Tabla 3. Diferencias de organización y dinámica del citoesqueleto durante la fertilización.

entre animales domésticos y otros mamíferos

vaca cerdo Oveja Humano Ratón Hámster

citoaster No No No No si Sí
aster de esperma Sí Sí Sí sí No No
Cola de esperma en el polo miótico Sí Sí Sí sí No No
Centrioles en la primera mitosis. Sí Sí Sí sí No No

Citado de Navara et al. (1995) [81].

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6 — J. Mamm. Res de óvulos. Vol.16, 1999

inyección de espermatozoides de toro y la inyección de un Inyección citoplasmática de espermatozoides en ratones: aumento

de la fertilización y desarrollo a término después de la inducción de
Se ha demostrado que los espermatozoides inmovilizados mediante la puntuación de la cola
la reacción acrosómica. Tararear. Reprod., 10, 2642–2649.
útil en ganado vacuno, como en humanos. Activación adicional
11) Goto, K. y Yanagita, K. (1995): Normalidad de los terneros
Se requieren estímulos para la escisión y el desarrollo
obtenido mediante inyección intracitoplasmática de espermatozoides. Tararear.
embrionario en ICSI bovino, pero no para pronucleares masculinos. Reprod., 10, 1554.
formación. La técnica ICSI para la producción de bovinos. 12) Westhusin, ME, Anderson, JG, Harms, PG,
blastocistos se mejora continuamente. En el futuro, Kraemer, DC (1984): Microinyección de espermatozoides
la competencia de desarrollo de embriones bovinos ICSI en huevos de vacuno. Teriogenología, 21, 274–275.

en descendencia debe confirmarse a gran escala. Además, 13) Kameyama, K., Hamano, K., Sugawara, S. y
Masaki, J. (1985): Inyección en cabeza de esperma liofilizado
necesitamos aclarar la razón por la cual ICSI con
en huevos de bovino madurados in vitro. J. Mamá. Óvulo
los espermatozoides de toro muertos conducen a menores tasas de
Res., 2, 25­26.
desarrollo embrionario.
14) Younis, AI, Keefer, CL y Bracket, BG (1989):
Fertilización de ovocitos bovinos mediante inyección de esperma.
Referencias Teriogenología, 31, 276 (abstr.).
15) Keefer, CL, Younis, AI, Brackett, BG (1990): Desarrollo por escisión de
1) Uehara, T. y Yanagimachi, R. (1976): Inyección microquirúrgica de ovocitos bovinos fertilizados por esperma.
espermatozoides en huevos de hámster con inyección. Mol. Reproducción. Dev., 25, 281–285.
posterior transformación de los núcleos de espermatozoides en masculinos. 16) Heuwieser, W., Yang, X., Jiang, S. y Foote, RH
pronúcleos. Biografía. Reprod., 15, 467–470. (1992): Una comparación entre la fertilización in vitro
2) Uehara, T. y Yanagimachi, R. (1977): Comportamiento de y microinyección de espermatozoides inmovilizados de
Núcleos de espermatozoides testiculares, caupto y cauda toros productores de espermatozoides con defectos. Mol.
epididimarios inyectados en huevos de hámster. Biografía. Reprod., 16, Reproducción. Dev., 33, 489–491.
315–321. 17) Li, X., Iwasaki, S. y Nakahara, T. (1993): Investigación de diversas
3) Hosoi, Y., Miyake, M., Utsumi, K. e Iritani, A. condiciones en la microfertilización de
(1988): Desarrollo de ovocitos de conejo tras microinyección de ovocitos bovinos y cambios posteriores en el núcleo y
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