GOT (AST)-LQ

GOT (AST)
NADH. Cinético UV. IFCC rec. Líquido

Determinación cuantitativa de aspartato aminotransferasa 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
GOT (AST) CÁLCULOS
IVD ΔA/min x 1750 = U/L de AST
Conservar a 2-8ºC Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 μmol
de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en
PRINCIPIO DEL MÉTODO unidades por litro (U/L).
La aspartato aminotransferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa
glutamato oxaloacética (GOT) cataliza la transferencia reversible de un Factores de conversión de temperaturas
grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato con formación de glutamato y Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:
oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia Temperatura Factor para convertir a
de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH: de medición 25ºC 30ºC 37ºC
AST
L-Aspartato + α-Cetoglutarato ⎯⎯⎯→ Glutamato + Oxalacetato 25ºC 1,00 1,37 2,08
MDH 30ºC 0,73 1,00 1,54
Oxalacetato + NADH + H+ ⎯⎯ ⎯ ⎯→ Malato + NAD+ 37ºC 0,48 0,65 1,00
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio,
determinada fotométricamente, es proporcional a la concentración CONTROL DE CALIDAD
catalítica de AST en la muestra ensayada1. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
SIGNIFICADO CLÍNICO Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
esquelético y en menores cantidades en otros tejidos. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de
enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y VALORES DE REFERENCIA1
seguimiento, junto con otras enzimas como la ALT y ALP. También se 25ºC 30ºC 37ºC
emplea en el control post-infarto, en pacientes con desórdenes del Hombres Hasta 19 U/L 26 U/L 38 U/L
músculo esquelético, y en otras afecciones1,4,5. Mujeres Hasta 16 U/L 22 U/L 31 U/L
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
clínicos y de laboratorio. establezca sus propios valores de referencia.

REACTIVOS CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

TRIS pH 7,8 80 mmol/L Rango de medida: Desde el límite de detección 1 U/L hasta el límite de
R1 Lactato deshidrogenasa (LDH) 800 U/L linealidad 260 U/L.
Tampón Malato deshidrogenasa (MDH) 600 U/L Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10
L-Aspartato 200 mmol/L con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
0,18 mmol/L Precisión:
R2 NADH
Substrato α-Cetoglutarato 12 mmol/L
Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Media (U/L) 17,0 135 17,3 131
PREPARACIÓN
SD 0,72 1,05 0,81 2,25
Reactivo de trabajo (RT):
CV (%) 4,27 0,77 4,68 1,72
Mezclar: 1 vol. de (R2) Substrato + 4 vol. (R1) Tampón.
Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0048 ΔA/min.
Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 72 horas a temperatura ambiente.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad Los resultados obtenidos con 100 muestras fueron los siguientes:
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a Coeficiente de regresión (r): 0.9839.
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Ecuación de la recta de regresión: y= 0.9866x + 0.588.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
INTERFERENCIAS
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 340 < 1,00. Los anticoagulantes de uso corriente como la heparina, EDTA oxalato o fluoruro
no afectan los resultados. La hemólisis interfiere con la determinación1.
MATERIAL ADICIONAL Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm. determinación de la AST2,3.
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. NOTAS
- Equipamiento habitual de laboratorio. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
reactivo en distintos analizadores.
MUESTRAS
Suero o plasma1. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC. BIBLIOGRAFÍA
1. Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
PROCEDIMIENTO Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
1. Condiciones del ensayo: 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 1 cm paso de luz 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Temperatura constante . . . . . . . . . . .. . . .25ºC / 30ºC / 37ºC 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta: PRESENTACIÓN
R1 60 mL
Ref: 41270
RT (mL) 1,0 R2 15 mL
Cont.
Muestra (μL) 100 R1 240 mL
Ref: 41272
R2 60 mL
4. Mezclar, incubar 1 minuto.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el

cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

BEIS46 Ed.2007 SPINREACT,S.A.U. [Link] Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@[Link]
 GOT (AST)-LQ

GOT (AST)
NADH. Kinetic UV. IFCC [Link]

Quantitative determination of aspartate aminotransferase 5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and read
GOT (AST) absorbances at 1 minute intervals thereafter for 3 minutes.
6. Calculate the difference between absorbances and the average absorbance
IVD differences per minute (ΔA/min).
Store at 2-8ºC
CALCULATIONS
PRINCIPLE OF THE METHOD ΔA/min x 1750 = U/L of AST
Aspartate aminotransferase (AST) formerly called glutamate oxaloacetate
(GOT) catalyses the reversible transfer of an amino group from aspartate Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 μmol
to α-ketoglutarate forming glutamate and oxalacetate. The oxalacetate of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed
produced is reduced to malate by malate dehydrogenase (MDH) and in units per litre of sample (U/L).
NADH: Temperature conversion factors
AST
L-Aspartate + α-Ketoglutarate ⎯⎯⎯→ Glutamate + Oxalacetate To correct results to other temperatures multiply by:
MDH Assay Conversion factor to
Oxalacetate + NADH + H+ ⎯⎯ ⎯ ⎯→ Malate + NAD+
The rate of decrease in concentration of NADH, measured photometrically, temperature 25ºC 30ºC 37ºC
is proportional to the catalytic concentration of AST present in the sample1. 25ºC 1.00 1.37 2.08
30ºC 0.73 1.00 1.54
CLINICAL SIGNIFICANCE 37ºC 0.48 0.65 1.00
The AST is a cellular enzyme, is found in highest concentration in heart
muscle, the cells of the liver, the cells of the skeletal muscle and in smaller QUALITY CONTROL
amounts in other weaves. Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
Although an elevated level of AST in the serum is not specific of the SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
hepatic disease, is used mainly to diagnostic and to verify the course of If control values are found outside the defined range, check the instrument,
this disease with other enzymes like ALT and ALP. reagents and technique for problems.
Also it is used to control the patients after myocardial infarction, in skeletal Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
muscle disease and other1,4,5. actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should REFERENCE VALUES
1
integrate clinical and other laboratory data. 25ºC 30ºC 37ºC
Men up to 19 U/L 26 U/L 38 U/L
REAGENTS
Women up to 16 U/L 22 U/L 31 U/L
TRIS pH 7.8 80 mmol/L These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
R1 Lactate dehydrogenase (LDH) 800 U/L
Malate dehydrogenase (MDH)
its own reference range.
Buffer 600 U/L
L-Aspartate 200 mmol/L PERFORMANCE CHARACTERISTICS
R2 NADH 0.18 mmol/L Measuring range: From detection limit of 1 U/L to linearity limit of 260 U/L.
Substrate α-Ketoglutarate 12 mmol/L If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10 with
NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
Precision:
PREPARATION
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Working reagent (WR):
Mean (U/L) 17.0 135 17.3 131
Mix: 4 vol. (R1) Buffer + 1 vol. (R2) Substrate SD 0.72 1.05 0.81 2.25
CV (%) 4.27 0.77 4.68 1.72
Stability: 21 days at 2-8ºC or 72 hours at room temperature (15-25ºC).
Sensitivity: 1 U/L = 0,0048 ΔA/min.
STORAGE AND STABILITY Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
All the components of the kit are stable until the expiration date on the systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and The results obtained using 100 samples were the following:
contaminations prevented during their use. Correlation coefficient (r): 0.9839.
Do not use reagents over the expiration date. Regression equation: y= 0.9866x + 0.588.
Signs of reagent deterioration: The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
- Presence of particles and turbidity.
- Blank absorbance (A) at 340 nm < 1.00. INTERFERENCES
Anticoagulants currently in use like heparin, EDTA, oxalate and fluoride do not
ADDITIONAL EQUIPMENT affect the results. Haemolysis interferes with the assay1
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 340 nm. A list of drugs and other interfering substances with AST determination has been
- Thermostatic bath at 25ºC, 30ºC o 37ºC (± 0.1ºC) reported by Young et. al2,3.
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
- General laboratory equipment. NOTES
SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
SAMPLES Instructions for many of them are available on request.
Serum or plasma1: Stability 7 days at 2-8ºC.
BIBLIOGRAPHY
PROCEDURE 1. Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
1. Assay conditions: Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . .1 cm. light path 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . .25ºC /30ºC / 37ºC 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water or air. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
3. Pipette into a cuvette:
PACKAGING
WR (mL) 1.0 R1 60 mL
Ref: 41270
Sample (μL) 100 R2 15 mL
Cont. R1 240mL
Ref: 41272
4. Mix, incubate for 1 minute. R2 60mL

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