ANÁLISIS

BIOQUÍMICO
 UNIDAD DIDACTICA 3
METABOLISMO DE LOS PRINCIPIOS INMEDIATOS

GLÚCIDOS LÍPIDOS

PROTEINAS
 METABOLISMO

•
Conjunto de procesos químicos que tienen lugar en las células del organismo.
•
Estos procesos pueden ser: Catabólicos y anabólicos
Glúcidos
Lípidos
El estudio de los patrones de
alteración metabólica permite
definir perfiles bioquímicos que
proporcionarán la información
necesaria para prevenir, diagnosticar,
pronosticar o comprobar la evolución
de las enfermedades relacionadas
con el metabolismo.
Un perfil bioquímico es el estudio
analítico, sistematizado y
estandarizado, de las magnitudes
bioquímicas que orientan acerca del
funcionamiento del metabolismo.
 METABOLISMO DE LOS GLÚCIDOS

Los glúcidos, son compuestos orgánicos formados por carbono, oxígeno e hidrógeno (CH2O)n.

Son la principal fuente de energía para el organismo.

Su digestión empieza en la boca y finaliza en la mucosa intestinal, donde son absorbidos en

forma de monosacáridos en el intestino delgado.

Glucosa
La glucosa una vez dentro de las células sigue un proceso catabólico para
obtener energía o bien un proceso de almacenamiento en forma de
glucógeno.

Las rutas metabólicas

del metabolismo de la
glucosa
El nivel de glucosa en sangre
(glucemia) se mantiene en un
equilibrio dinámico
(homeostasis), que viene
determinado por la regulación
de las rutas catabólicas y las
anabólicas.
Rutas catabólicas

Glucolisis.

•
Consiste en la oxidación de la
glucosa para obtener moléculas de
alta energía (ATP y NADH) y
piruvato.

•
Las moléculas de piruvato pueden
seguir la ruta metabólica y
continuar entregando energía al
organismo. Balance energético =
2ATP + 2NADH.

Glucogenolisis.
Se obtiene glucosa a partir
del glucógeno.

Tiene lugar sobre todo en

el hígado y en los músculos
por la gran cantidad de
glucógeno que pueden
almacenar.
 Vía de las pentosas fosfato.
Es una ruta metabólica estrechamente relacionada
con la glucólisis, durante la cual se utiliza la glucosa El glutatión es un tripéptido constituido por
los aminoácidos glutamato, cisteína y glicina
para generar ribosa, que es necesaria para la
biosíntesis de nucleótidos y ácidos nucleicos. .

Además, también se obtiene poder reductor en

forma de NADPH que se utilizará como coenzima
de enzimas propias del metabolismo anabólico.

De esta manera, este proceso

metabólico, el cual es regulado por
insulina, tiene una doble función, ya
que la glucosa se usa para formar
NADPH, mientras que también se
puede transformar en otros
componentes del metabolismo,
especialmente pentosas, utilizadas
para la síntesis de nucleótidos y de
ácidos nucleicos.

Así, se forma un puente entre rutas

anabólicas y catabólicas de la glucosa.
Vía del sorbitol.
La conversión de glucosa en sorbitol se produce por medio de la enzima aldosa
reductasa, que se encuentra en tejidos que no requieren insulina para tomar glucosa,
como las células epiteliales del cristalino y las células nerviosas (en ambos casos, la
glucosa entra por difusión).

La intensidad con que la

glucosa, se metabolice
por esta vía oxidativa
alterna y forme Sorbitol,
está en relación
directamente
proporcional con la
concentración de
glucosa sanguínea.

Por eso producirá

Sorbitol en mayores
cantidades, cuando hay
una hiperglicemia
importante y sostenida,
como sucede en la
DiabetesMellitus.
Rutas anabólicas

Glucogenogénesis.


Tiene lugar
principalmente en las
células hepáticas y
musculares.

Se produce cuando
existen niveles de glucosa
que no son necesarios
para mantener el gasto
energético. En esta
situación, las moléculas
de glucosa se acumulan
en forma de glucógeno.

Gluconeogénesis.

Sigue el camino inverso a la glucolisis.

Este proceso consiste en la formación de glucosa a partir de precursores no glucídicos como el
ácido láctico, aminoácidos, piruvato y glicerol, enzimas específicas (mitocondriales y
citoplasmáticas) y suministro de energía en forma de ATP y GTP.

La gluconeogénesis tiene lugar en el hígado (90%) y en el riñón (10%) y es esencial para regular la
glucemia.
La insulina es una hormona
natural que se produce en el
páncreas por parte de las
células beta de los islotes de
Langerhans.

La insulina sirve para que la

glucosa que entra a la sangre, a
través de la alimentación, sea
trasportada a las células y
empleada para la producción de
energía.
El glucagón actúa en el hígado, donde activa dos
procesos metabólicos conducentes a la liberación de
glucosa a la sangre.

Por un lado, actúa sobre las reservas de glucógeno,

promoviendo su degradación, que genera moléculas de
glucosa libre.

Por otro lado, activa la gluconeogénesis, la síntesis de

glucosa a partir de otros precursores.

El glucagón y la insulina actúan de manera coordinada

para mantener constantes los niveles de glucosa en sangre
y asegurar que las células del organismo tienen suficiente
fuente de energía para realizar sus funciones vitales.

La insulina inhibe la secreción de glucagón mientras que el

glucagón activa la síntesis de insulina.
El cortisol es secretado y almacenado en la zona fascicular de la
corteza suprarrenal, una de las dos partes de la glándula suprarrenal.

Esta liberación está controlada por el hipotálamo, una parte del cerebro, en
respuesta al estrés o a un nivel bajo de glucosa en la sangre.

La secreción de la hormona
liberadora de corticotropina (CRH)
por parte del hipotálamo
desencadena la secreción de la
hipófisis de la hormona suprarrenal
corticotropina (ACTH); esta
hormona es transportada por la
sangre hasta la corteza
suprarrenal, en la cual
desencadena la secreción de
glucocorticoides.
Estimula la gluconeogénesis, la
descomposición de las proteínas y las
grasas para proporcionar metabolitos
que pueden ser convertidos en
glucosa en el hígado.
 Las catecolaminas son hormonas segregadas por el cerebro, el tejido nervioso y
las glándulas suprarrenales.

El cuerpo libera catecolaminas en respuesta al estrés emocional o físico.

Estimulan la
glucogenolisis, la lipolisis e
inhiben la secreción de
insulina.


La GH/somatotropina (hormona del
crecimiento).

Genera la resistencia a la acción de la
insulina; estimula la lipolisis.

Tienen como hormona antagonista la
somatostatina (inhibidora de GH).
Regulación del metabolismo de la glucosa
La glucemia varía a lo largo del día en función de las ingestas:

La glucemia basal. Es la que se determina en ayunas y es de 60-100 mg/dl.

La glucemia pospandrial. Se determina tras la ingesta y su valor se eleva a 120-
150 mg/dl o más.
En una persona sana, los niveles elevados de glucemia pospandrial descienden
rápidamente y se vuelve a alcanzar el nivel basal.
El metabolismo de la glucosa se regula principalmente mediante la insulina y el
glucagón con la ayuda de otras hormonas como glucocorticoides, catecolaminas y
hormona del crecimiento. Es la propia glucosa la que actúa en el páncreas exocrino
regulando la secreción de insulina o glucagón.
Patrones de alteración del metabolismo hidrocarbonado.
Los patrones de alteración del metabolismo de carbohidratos vienen dados principalmente por
la diabetes mellitus y el síndrome de hipoglucemia.

Diabetes mellitus
La diabetes es la enfermedad con mayor prevalencia y está ocasionada por el
aumento de la glucemia. Dentro de las hiperglucemias se distinguen cuatro
categorías: diabetes mellitus tipo I, diabetes mellitus tipo II, diabetes gestacional e
intolerancia a la glucosa.

Diabetes mellitus tipo I.
Determinación de la glucosa.
A continuación estudiaremos la determinación de la glucosa en sangre y en orina.

Determinación de glucosa en sangre
La determinación de la glucosa sanguínea se realiza en suero o plasma obtenido de
sangre venosa. Se debe estar en ayunas (abstenerse de comer o beber excepto agua
desde 8 horas antes).
En personas diabéticas, los niveles de glucosa se pueden monitorizar en ayunas y
después de las comidas para conseguir finalmente un mejor control de la
enfermedad. Las concentraciones de glucosa varían según el tipo de muestra:
•
En suero es un 5% superior que en plasma, donde a su vez es superior a la medida en sangre
total.
•
En sangre venosa es inferior a la encontrada en sangre arterial.
 Metabolismo de los lípidos y las lipoproteínas.

Características generales de los lípidos.

Los lípidos son un grupo de moléculas compuestas básicamente por carbono,

hidrógeno y oxígeno, aunque también pueden contener fósforo y nitrógeno.
Tienen funciones muy variadas, ya que forman un grupo muy heterogéneo:

•
Son la principal forma de almacenamiento de energía a largo plazo del organismo
(triglicéridos).
•
Son componentes estructurales de las membranas (fosfoglicéridos).
•
Participan en la regulación del metabolismo mediante sus funciones de segundos
mensajeros, transportadores, cofactores, hormonas, vitaminas, prostaglandinas,
etc. La mayoría son esteroides derivados del colesterol.
•
Son precursores de otras moléculas como hormonas y ácidos biliares.
•
Toman parte en la respuesta inmunológica.
Los lípidos de nuestro organismo pueden proceder tanto de los alimentos que
ingerimos como de la síntesis que tiene lugar en él.
Los principales lípidos que proceden de la dieta son los triglicéridos (suponen
un 90%), seguidos del colesterol y otros esteroides, fosfolípidos, vitaminas
liposolubles, etc.
El hígado es el principal órgano donde tiene
lugar la síntesis, principalmente de colesterol,
pero también de triglicéridos, que después
serán distribuidos al resto del organismo.

Como los lípidos son insolubles en el plasma

(medio acuoso), necesitan un sistema de
transporte para poder distribuirse por el
torrente circulatorio a todo el organismo. Este
medio de transporte lo consiguen uniéndose a
proteínas. La asociación de lípidos y proteínas
constituye las lipoproteínas que cumplen con la
función de transporte de los lípidos por la
sangre. Se producen en el interior de las células
del intestino delgado (enterocitos) y en el
hígado (hepatocitos).
Principales compuestos relacionados con el metabolismo lipídico.
Los compuestos más estudiados en el laboratorio clínico relacionados con el
metabolismo lipídico son los triglicéridos, el colesterol y las lipoproteínas.
•
Triglicéridos
Son compuestos formados por la esterificación de una molécula de glicerol con tres
ácidos grasos.
Su función principal es energética: constituyen la principal reserva energética del
organismo en forma de depósitos condensados de energía metabólica. Este
almacenamiento se lleva a cabo en los adipocitos (tejido adiposo).
En situaciones de inanición, bajas temperaturas, ejercicio intenso, etc., se produce
una rápida movilización de los triglicéridos que se hidrolizan (lipolisis) y los ácidos
grasos liberados pasan a la sangre.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

Los triglicéridos pueden provenir de

la síntesis en el hígado (triglicéridos
endógenos) a partir de ácidos
grasos circulantes y de la
transformación de hidratos de
carbono, pero principalmente
proceden de la absorción intestinal
(triglicéridos exógenos) a partir de
las grasas digeridas de la dieta.
Los valores normales de
triglicéridos en suero son inferior a
160 mg/dl.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

•
Colesterol
Es un lípido insaponificable englobado dentro de los esteroides. Se transporta en
plasma unido a proteínas (formando parte de las lipoproteínas LDL, HDL, IDL, VLDL).
En el organismo cumple diversas funciones:
•
Es un componente estructural fundamental de las membranas celulares.
•
Es precursor de las hormonas sexuales y de las hormonas de la corteza
suprarrenal.
•
Participa en la síntesis de ácidos biliares.
Las 2/3 partes del colesterol del organismo son de síntesis propia, en hígado e
intestino, a partir de ácidos grasos saturados procedentes de los alimentos y el 1/3
restante proviene directamente del colesterol contenido en los alimentos.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.
•
Lipoproteínas
Las lipoproteínas son complejos macromoleculares esféricos formadas por un núcleo
que contiene lípidos apolares (colesterol esterificado y triglicéridos) y una capa
externa polar formada por fosfolípidos, colesterol libre y proteínas
(apolipoproteínas).
La proporción de cada uno de los componentes de una lipoproteína determinan sus
principales características –la densidad y la movilidad electroforética– y permiten su
clasificación en:
•
Quilomicrones. Son las partículas más grandes y menos densas
(inferior a 0,95 g/ml) y no presentan movilidad electroforética. Se
sintetizan en el interior de los enterocitos a partir de triglicéridos,
colesterol y fosfolípidos. Tienen una vida media inferior a 30
minutos y su función principal es transportar los triglicéridos
exógenos a los tejidos para su catabolismo. Contienen las
apolipoproteínas Apo B 68, AI, CII y E.
3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.
•
Lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL. Se sintetizan en el hígado y su
función es transportar triglicéridos endógenos.

•
Lipoproteínas de baja densidad (LDL). Es un producto metabólico de la
degradación de VLDL. Es la lipoproteína más rica en colesterol.

•
Lipoproteínas de alta densidad (HDL). Se sintetiza en el hígado y en el intestino.
Su función principal es captar el colesterol libre de las células de los tejidos
periféricos por la acción de la enzima lecitin-colesterol-aciltransferasa (LCAT). Es
la lipoproteína más rica en proteínas y fosfolípidos.
El metabolismo de las lipoproteínas.
En el hígado, las lipoproteínas siguen principalmente dos rutas metabólicas según cuál sea el
origen de los lípidos: la ruta exógena postprandial y la ruta endógena en ayunas.

•
Ruta exógena
Es la ruta por la que las lipoproteínas transportan los lípidos exógenos tras la digestión hacia
el hígado:
o
La digestión y absorción de los lípidos se produce en el intestino delgado.

o
Los ácidos grasos de cadena corta e intermedia se transportan unidos a la albúmina.

o
Los ácidos grasos de cadena larga en el interior de los enterocitos forman
triglicéridos.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

o
El colesterol, los fosfolípidos y los triglicéridos formados se incorporan en los
quilomicrones nacientes.

o
Los quilomicrones son capaces de atravesar las membranas y se secretan en
los conductos linfáticos, a través de los cuales llegarán a alcanzar el torrente
sanguíneo por el conducto torácico.

o
Al pasar por los tejidos periféricos, los quilomicrones van perdiendo
triglicéridos por la acción de la lipoproteína-lipasa, se vuelven más pequeños y
finalmente se captan en el hígado.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

•
Ruta endógena
Es la ruta en la que las lipoproteínas transportan el colesterol y los triglicéridos
endógenos (sintetizados en el hígado a partir de los tejidos de reserva) hacia
los tejidos periféricos:
o
Los triglicéridos y el colesterol de síntesis se incorporan en las VLDL.

o
Las VLDL por exocitosis pasan al espacio extracelular y entran en la
circulación.

o
Por acción de la enzima lipoproteína-lipasa de las células endoteliales, las
VLDL van perdiendo triglicéridos, y se convierten en IDL.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

o
Algunas IDL se transforman por eliminación de lípidos y
apolipoproteínas en las partículas LDL.

o
Las LDL se retiran de circulación por unión al receptor de LDL, a
receptores de macrófagos o por pinocitosis. Las apolipoproteínas se
degradan a aminoácidos y los ésteres de colesterol se hidrolizan. Los
macrófagos acumulan colesterol y se transforman en células
espumosas características del daño vascular ateroesclerótico.
3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

Esquema de las rutas endógenas y exógenas de las lipoproteínas

3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

En situaciones de falta de glucosa (ayuno prolongado y diabetes

mellitus) se forma los cuerpos cetónicos en los hepatocitos a partir
del acetil-CoA procedente de los ácidos grasos. Estos cuerpos
cetónicos pasan a la circulación y son la fuente energética del
cerebro. El aumento de las concentraciones de cuerpos cetónicos
puede ocasionar disminución del pH sanguíneo
(acidosis/cetoacidosis).
 Resumen del metabolismo de los lípidos

Los triglicéridos de la dieta se digieren en el estómago y en el intestino

(duodeno), donde se convierten en monoglicéridos y ácidos grasos libres por
la acción de la lipasa gástrica y se emulsifican como resultado de la peristalsis
gástrica intensa y la acción de la lipasa pancreática.
Luego, los monoglicéridos, los ácidos grasos libres y el colesterol libre se
solubilizan en el intestino en micelas de ácidos biliares, que los conducen a las
vellosidades intestinales para su absorción.

Una vez absorbidos en los enterocitos, vuelven a constituir triglicéridos y se

ensamblan con colesterol para formar quilomicrones.

Los quilomicrones
transportan los triglicéridos
y el colesterol de la dieta
desde el interior de los
enterocitos a través de los
vasos linfáticos hacia la
En los capilares de los tejidos adiposo y muscular, se encuentra la
lipoproteína lipasa (LPL), que convierte el 90% de los triglicéridos dentro de
los quilomicrones en ácidos grasos y glicerol, moléculas que luego son
absorbidas por los adipocitos y las células musculares para su conversión
en energía o su almacenamiento.
La ruta endógena

Es la ruta en la que las lipoproteínas transportan el colesterol y los triglicéridos

endógenos (sintetizados en el hígado a partir de los tejidos de reserva) hacia los tejidos
periféricos:
o
Los triglicéridos y el colesterol de síntesis se incorporan en las VLDL.

o
Las VLDL por exocitosis pasan al espacio extracelular y entran en la circulación.

o
Por acción de la enzima lipoproteína-lipasa de las células endoteliales, las VLDL van
perdiendo triglicéridos, y se convierten en IDL.
Regulación del metabolismo de los lípidos.
La regulación del metabolismo de los lípidos se realiza hormonalmente por la
insulina, las hormonas tiroideas y otras que regulan la lipogénesis y la lipolisis, según
las necesidades corporales.

Lipogénesis. Es la formación de triglicéridos a partir de los ácidos grasos
procedentes de la ingesta y glicerol. La estimula la insulina y se produce
principalmente en las células del tejido adiposo.


Lipolisis. Consiste en la movilización de los triglicéridos almacenados en el tejido
adiposo cuando son requeridos como combustible. En este proceso interviene la
lipasa. Los ácidos grasos liberados difunden por la sangre, unidos a la albúmina
para ser transportados a los órganos diana, donde se utilizarán como fuente de
energía por la ruta catabólica de la beta-oxidación:
Ácidos grasos  acetil CoA  ciclo de Krebs  ATP
 Magnitudes bioquímicas del metabolismo de
los lípidos y las lipoproteínas.


Dislipemias
Patologías: Las dislipemias son un conjunto de alteraciones patológicas
que afectan al metabolismo de los lípidos, caracterizadas por
alteración de los niveles normales de lípidos circulantes.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.


Triglicéridos
Se determinan con métodos enzimáticos que utilizan la siguiente secuencia de
enzimas acopladas:
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.


Colesterol total
La determinación del colesterol se realiza a partir de muestras de suero o plasma y
en su cuantificación se utilizan métodos enzimáticos acoplados, como se muestra en
la secuencia de reacciones siguientes:
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

Determinación estimada
del colesterol LDL
a partir de la fórmula de
Friedewald
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

Otras determinaciones analíticas.


Grados de turbidez y detección de quilomicrones
Los diferentes grados de turbidez del suero después de centrifugada la muestra
reflejan la mayor o menor existencia de triglicéridos.
Cuando el aspecto es lechoso y opalescente, se puede detectar la presencia de
quilomicrones dejando reposar el suero toda la noche en nevera, de manera que se
evidencia su presencia en forma de una capa cremosa flotante.
La presencia de quilomicrones alerta de las posibles causas: no se ha respetado el
ayuno, alteraciones en la producción de lípidos, deficiencia de lipoproteína-lipasa,
etc.
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.

Apoproteínas AI y B
La determinación de apoproteínas tiene su importancia por la fuerte relación que
existe con las enfermedades cardiovasculares:

Valores de la apo-B por encima de lo normal se relacionan con un aumento del
riesgo de enfermedad cardiovascular.

Valores de apo-AI por debajo de lo normal se identifica como factor de riesgo de
cardiopatía isquémica.
También tienen su importancia por resultar formas alternativas en la determinación
de otras lipoproteínas como:

El colesterol-HDL. La medida de apolipoproteínas AI es una forma alternativa para
la determinación del colesterol-HDL, pues existe una buena correlación entre
ambos, siempre y cuando los valores de VLDL no sean elevados (Apo AI también
se encuentra en VLDL y quilomicrones).
 3. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de los lípidos y las lipoproteínas.


El colesterol-LDL. Las apolipoproteínas B se encuentran asociadas al colesterol-
LDL y su análisis puede ser otra alternativa a la determinación del colesterol-LDL.
La cuantificación de las apolipoproteínas se determina mediante
inmunonefelometría (mide la dispersión de la luz a causa de los complejos Ag-Ac
formados) o realizando un lipidograma (separación electroforética de las
apolipoproteínas en gel de agarosa).
 Metabolismo de las proteínas.

Las proteínas son macromoléculas constituidas por carbono, hidrógeno,

nitrógeno, oxígeno y, a veces, azufre.
Están formadas por la unión de unidades más sencillas, los aminoácidos. Hay veinte
aminoácidos que, combinados según una secuencia determinada, dan lugar a
proteínas muy específicas.
Las proteínas procedentes de los alimentos son degradadas en el proceso de
digestión a sus componentes más sencillos, aminoácidos. Estos se absorben y pasan
a la circulación, que los transporta a los diferentes puntos del organismo donde se
van a utilizar.

Los aminoácidos en exceso, o los procedentes de la degradación de proteínas

propias, no se pueden almacenar, ni tampoco se pueden excretar directamente sino
que es necesario degradarlos previamente.
Características generales de las proteínas plasmáticas.

En el plasma se pueden encontrar más de 125 proteínas diferentes cumpliendo

funciones diversas y fundamentales como:

Reserva energética para los tejidos, sobre todo la albúmina.

Mantenimiento del equilibrio osmótico. Posibilitan la adecuada distribución hídrica
en los diferentes compartimentos del organismo.

Amortiguadores o tampones fisiológicos, permiten mantener el equilibrio ácido-
base.

Transporte de diversas sustancias como oxígeno, iones, bilirrubina, ácidos grasos,
hormonas, fármacos, etc.

Defensa, son capaces de neutralizar sustancias extrañas que penetran en el
organismo como las gammaglobulinas o las inmunoglobulinas.

Favorecen las reacciones químicas (enzimas, proenzimas) o las inhiben.

Participan en la hemostasia, favoreciendo la coagulación o la fibrinolisis.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

Gran parte de las proteínas plasmáticas procede de la síntesis en el hígado,

a excepción de las inmunoglobulinas que proceden de los linfocitos B o de
hormonas como la insulina que proceden de glándulas endocrinas.

El catabolismo de las proteínas plasmáticas al final de su vida útil se

produce principalmente en las células hepáticas, pero también se pueden
producir pérdidas en la filtración glomerular y a través de los capilares
donde entran en las células y son metabolizadas en aminoácidos.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

4.2 Estudio de las proteínas plasmáticas.

El estudio de las diferentes proteínas plasmáticas se

realiza por electroforesis, por determinaciones
bioquímicas o por métodos inmunológicos.

Electroforesis

La electroforesis separa y cuantifica las fracciones más

importantes de las proteínas plasmáticas obteniendo
un patrón electroforético.

El soporte sólido para la electroforesis fue

históricamente el acetato de celulosa, que ha sido
sustituido por el gel de agarosa y este a su vez por la
electroforesis capilar que está completamente
automatizada.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

En acetato de celulosa (Cellogel), el patrón electroforético permite cuantificar las

siguientes fracciones: albúmina, alfa 1, alfa 2, beta y gamma globulinas.
En la electroforesis en Cellogel el informe de electroforesis se suele dar como un
porcentaje de cada fracción respecto de la concentración total. Esta información se
puede obtener de dos formas distintas:

Espectrofotometría. Se recortan las distintas franjas y se introducen en tubos con
un disolvente que retira las proteínas del Cellogel; obteniendo así una disolución
para cada franja. Seguidamente medimos la absorbancia de cada disolución y la
comparamos con la absorbancia obtenida previamente para el total de proteínas.

Densitometría. Un fotómetro cuantifica el colorante fijado en cada una de las
franjas, y lo representa mediante un proteinograma que nos da las fracciones de
cada componente en relación con las proteínas totales obtenidas previamente.
Para usar esta técnica es fundamental conseguir un fondo totalmente
transparente.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

Dentro de cada fracción hay proteínas con movilidad semejante aunque muy
distintas en estructura y función. Por eso se usan métodos inmunológicos
para cuantificar específicamente algunas de ellas.

Las principales proteínas encontradas en las distintas fracciones del

proteinograma en suero son la albúmina y las globulinas alfa, beta, y gamma.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.


Determinaciones bioquímicas
Determinaciones en suero de proteínas totales
Para la determinación de las proteínas totales en sangre se usa suero. Cuando
se usa plasma, los resultados son mayores, ya que se contabiliza el
fibrinógeno que no se ha consumido en la formación del coágulo.
La estabilidad de las proteínas en suero es de una semana a temperatura
ambiente, de un mes en refrigeración y dos meses en congelación.
Algunos de los métodos habituales son el método de Biuret y el método de
Lowry, pero también se utilizan otros como los métodos refractométricos, el
método de absorción en el ultravioleta o el método de Kjeldahl.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.


Método de Biuret. Es el método de referencia y el más usado. En disolución
alcalina, las proteínas reaccionan con iones de cobre (Cu2+) formando un
complejo coloreado de gran estabilidad, cuantificable
espectrofotométricamente. La técnica es de punto final, la absorbancia se mide
a 546 nm.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

Método de Lowry. Utiliza los reactivos de Biuret y de Folin. En primer lugar se
forman los complejos coloreados Cu2+-proteína por acción del reactivo de
Biuret. Estos complejos provocan el desdoblamiento de la estructura
tridimensional de la proteína y exponen los residuos fenólicos de tirosina. Estos
grupos fenólicos provocan la reducción, en medio básico, del reactivo de Folin,
de color amarillo, dando lugar a un complejo de color azul intenso.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.


Métodos refractométricos. La cantidad de proteínas presentes en el suero o en
la orina hacen variar el índice de refracción. Para su medida se utiliza el
refractómetro clínico.

Método de absorción en el ultravioleta. Se basa en la absorción de luz UV de las
proteínas: el enlace peptídico a 200 nm, la tirosina, triptófano y cisteína a 280
nm.

Método de Kjeldahl. Método lento y complejo que determina el nitrógeno
proteico.
Determinación de la albúmina en suero
Se usan métodos colorimétricos por fijación de colorantes a un pH ácido. La
albúmina se combina específicamente con el verde de bromocresol para formar un
complejo coloreado que se determina fotométricamente.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.


Métodos inmunológicos
Son principalmente la inmunoelectroforesis y la inmunodifusión radial.
La inmunoelectroforesis combina la separación electroforética con la
provocación de reacciones inmunológicas entre las proteínas y anticuerpos
específicos frente a ellas. Las fracciones proteicas se detectan mediante la
aparición de arcos de precipitación.
La importancia de esta técnica radica en que permite cualitativamente
detectar un gran número de fracciones, así como anomalías dentro de
estas (por ejemplo inmunoglobulinas anómalas).
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

La inmunodifusión radial es una técnica de tipo inmunológico. Consiste

en colocar el suero a analizar en un pocillo practicado en una placa de
agar impregnada de anticuerpos contra la proteína que se desea valorar
(cada proteína queda atrapada por adsorción con su anticuerpo). La
reacción entre los dos forma un anillo de precipitación cuyo diámetro es
proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra. El anillo
de precipitación se cuantifica usando patrones.
4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

Procedimiento de la inmunodifusión radial

 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

4.3 Patrones de alteración de las proteínas plasmáticas.

•
Alteraciones en la cantidad de
proteínas totales
La suma de las concentraciones de
todas y cada una de las proteínas
presentes en el plasma se llama
proteínas totales.
Los valores de referencia de las
proteínas totales en plasma dependen
de muchos factores, entre ellos la edad,
y oscilan entre 7,5 y 8 g/dl.
Las alteraciones que se encuentran en estos valores reciben el nombre de:
•
Hiperproteinemia, cuando la concentración de las proteínas totales está
por encima de los valores normales. Puede ser debida a:

o
Una disminución relativa del volumen de líquido plasmático
(hipovolemia) como es el caso de situaciones de deshidratación. Lo
que varía no es la cantidad de proteínas sino la proporción entre estas
y el nivel hídrico del organismo (hemoconcentración).

o
Un aumento de globulinas, principalmente de gammaglobulinas
(hiperglobulemias). A este tipo de hiperproteinemia se lo conoce
como hiperproteinemia auténtica.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

•
Hipoproteinemia, cuando se produce una disminución de las
proteínas totales. Puede darse por:

o
Un aumento del volumen plasmático, como es el caso de una
retención de líquidos (hemodilución).

o
Una disminución de la dos fracciones importantes: la albúmina
(hipoalbuminemia) y/o las gammaglobulinas
hipogammaglobulinemia.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.
•
Disproteinemias
Son alteraciones en la distribución de las fracciones obtenidas tras una electroforesis.
Las más frecuentes son la hipoalbuminemia, la hipogammaglobulemia y las
hiperglobulemias.
•
Hipoalbuminemia. Es una disminución de la fracción de la albúmina. Puede ser
debida a:
o
Síntesis insuficiente por desnutrición (déficit de determinados aminoácidos) o
insuficiencia hepática (fallo en la síntesis de albúmina).
o
Eliminación y degradación excesiva por síndrome nefrótico (se pierde
albúmina por la orina), alteraciones gastrointestinales (perdida por heces) o
quemaduras extensas (exudan por las zonas de piel lesionada).

•
Hipogammaglobulinemia. Es una disminución de las gammaglobulinas debida a
deficiencias en el sistema inmunitario (inmunodeficiencia).
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

•
Hiperglobulinemia (alfa, beta y gamma). Es un aumento de las globulinas. Las
más habituales afectan a las alfa, las alfa y las beta juntas, y las gamma.

o
El aumento de alfaglobulinas, se da en inflamaciones agudas, tumores y
necrosis de los tejidos.
o
El aumento de las alfa- y betaglobulinas es característico del síndrome
nefrótico (enfermedad renal).
o
El aumento de las gammaglobulinas se puede producir como consecuencia
de: inflamaciones, hepatopatías, enfermedades de colágeno (artritis
reumatoides), esclerodermia (acumulación de colágeno en la piel y otros
órganos).
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

•
Paraproteinemias

Una paraproteinemia es la presencia en el plasma de alguna inmunoglobulina

anormal y/o de alguno de sus fragmentos. Se trata del producto de una actividad
espontánea y excesiva de un «clon» proliferante de linfocitos B (gammapatías
monoclonales) que suele ocurrir en procesos como el mieloma múltiple (tumor de
las células plasmáticas), leucemias y linfomas. También pueden ser consecuencia
de otros procesos como la diátesis hemorrágica, las lesiones renales o el síndrome
de hiperviscosidad.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

•
Crioglobulinemias

Es la circulación en plasma de inmunoglobulinas que precipitan al descender la

temperatura. Pueden tener origen en trastornos circulatorios en las regiones distales
de las extremidades y en inflamaciones de los vasos sanguíneos (vasculitis). Para su
estudio se deben seguir unos protocolos preanalíticos estrictos en cuanto al
mantenimiento de una temperatura de 37°C. Una vez obtenido, el suero se mantiene
en nevera a 2-8°C un mínimo de tres días y las crioglobulinas se detectan porque se
observa un precipitado.
 4. Magnitudes bioquímicas del metabolismo
de las proteínas.

4.4 Diagnóstico de laboratorio para el infarto agudo de miocardio.

El infarto agudo de miocardio junto con la angina inestable y la muerte súbita se
incluyen en el llamado síndrome coronario agudo.
Las troponinas cardiacas, proteínas que se determinan en el laboratorio de
urgencias, son los marcadores bioquímicos que se utilizan para el diagnóstico del
infarto agudo de miocardio, pues reúnen una serie de requisitos que las hacen
ideales:
•
Se encuentran en alta concentración en el miocardio.
•
Están ausentes fuera del tejido cardiaco.
•
Se liberan rápidamente (son detectables a las 2-4 horas del establecimiento de la
lesión miocárdica) y de modo lineal tras la necrosis miocárdica.
•
Permanecen en circulación el tiempo suficiente para poder ser medidas.