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Biomedicina y Farmacoterapia 120 (2019) 109479

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Biomedicina y Farmacoterapia

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La suplementación con hierro dividido es beneficiosa para los lechones recién nacidos
t
Xiaoyun Chena, 1 , Xiaofeng Zhangb,1 , Jing Zhaoa , Xueyou Tanga , Fengqin Wanga , Huahua Dua,
a
Laboratorio Clave de Nutrición y Ciencia de los Piensos Animales (Este de China), Ministerio de Agricultura, Laboratorio Clave de Piensos y Nutrición Animal de la Provincia de Zhejiang,

Facultad de Ciencias Animales, Universidad de Zhejiang, Hangzhou 310058, China

b
Instituto de Ganadería y Ciencias Veterinarias, Academia de Ciencias Agrícolas de Zhejiang, Hangzhou 310021, China

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACTO

Palabras clave: La deficiencia de hierro es el trastorno por deficiencia nutricional más común en el período posnatal temprano, que a menudo se manifiesta con
Deficiencia de hierro complicaciones clínicas. Por tanto, la suplementación con hierro es necesaria para evitar la anemia ferropénica en el período neonatal. Sin embargo,
Suplementación de hierro cómo complementar el hierro de forma eficaz es un gran problema. Por lo tanto, utilizando lechones recién nacidos como modelo para la deficiencia
Lechones recién nacidos de hierro, comparamos los efectos del protocolo utilizado habitualmente mediante inyección intramuscular de una gran cantidad de hierro dextrano y
Estrés oxidativo
una estrategia modificada mediante suplementación dividida con cantidades reducidas de hierro. Los resultados mostraron que la suplementación
con hierro dividido mejoró eficientemente el estado hematológico de los lechones y atenuó la inducción de la expresión de hepcidina, lo que resultó
en la recuperación de los lechones de la deficiencia de hierro y el aumento de la utilización del hierro. En comparación con los lechones que recibieron
grandes cantidades de hierro dextrano, la suplementación con dosis bajas de hierro mejoró el rendimiento del crecimiento y el desarrollo del duodeno
al aumentar la altura de las vellosidades y la profundidad de las criptas y mejorar la morfología de las microvellosidades. Además, la suplementación
con hierro fraccionado minimizó la toxicidad potencial del hierro administrado debido al estrés oxidativo y la autofagia de los hepatocitos. En general,
el presente estudio demostró que la suplementación dividida con una cantidad reducida de hierro dextrano no sólo protegió a los lechones recién
nacidos de la deficiencia de hierro sino que también eliminó la toxicidad potencial. Sugirió que, además de combatir la anemia, se deberían considerar
los posibles efectos negativos del exceso de hierro sobre el estrés oxidativo, que es especialmente importante para el desarrollo infantil.

1. Introducción La inyección de hierro exógeno para evitar la IDA en lechones ha sido bien documentada
e implementada [11].
El hierro es uno de los oligoelementos más importantes en los vertebrados y participa La inyección intramuscular de 200 mg de hierro en forma de hierro dextrano (FeDex)
en innumerables procesos bioquímicos [1]. La anemia por deficiencia de hierro (IDA) se dentro de los 2 a 3 días posteriores al nacimiento es una práctica rutinaria en la industria
reconoce desde hace mucho tiempo como un trastorno grave del hierro en los lechones porcina, que se ha demostrado que rectifica el estado hematológico de los lechones [12].
lactantes, que provoca muchos problemas como diarrea, baja tasa de crecimiento e Sin embargo, es probable que los suplementos de hierro en dosis altas perturben el
incluso la muerte [2]. La razón común de la IDA para los lechones radica en la contradicción estrecho equilibrio del metabolismo sistémico del hierro. Cuando el hierro suplementado
entre una gran demanda de hierro para un crecimiento rápido y un almacenamiento o excede la capacidad de unión de la transferrina en el suero, existe hierro libre que
suministro insuficiente de hierro. La concentración de hemoglobina de 8 g/dL se considera catalizaría los radicales libres a especies reactivas de oxígeno (ROS) mediante la reacción
el nivel de corte para la anemia en lechones lactantes [3,4], que desciende al nivel de 6­7 de Fenton, lo que induce estrés oxidativo, daño al ADN mitocondrial, apoptosis y
g/dL el día 3 después del nacimiento [5]. La baja concentración de hierro en la leche de peroxidación lipídica [13,14]. ]. Por lo tanto, se han utilizado inyecciones múltiples de
la cerda y un mayor requerimiento de hierro para un crecimiento rápido se consideran pequeñas dosis de hierro y se ha descubierto que mejoran los niveles sanguíneos, el
comúnmente factores de riesgo en el desarrollo de IDA en los lechones [6,7]. Para aumento de peso y los síntomas de diarrea en los lechones [5,15]. Sin embargo, el
prevenir esta posible enfermedad, se debe administrar una fuente de hierro exógena mecanismo específico es limitado.
mediante administración oral o inyección [8,9]. La administración oral de hierro en En este estudio, probamos una estrategia modificada para la suplementación con
lechones ha sido en gran medida infructuosa debido a la mala capacidad de digestión, hierro mediante una inyección dividida dos veces con una cantidad reducida de FeDex
como una menor secreción de ácido gástrico, una motilidad gastrointestinal débil y un los días 3 y 10 después del nacimiento. Los resultados demostraron que el procedimiento
sistema de absorción inmaduro de los lechones [5,10]. La parenteral (intramuscular o modificado no sólo podría mejorar el estado hematológico de los lechones y atenuar la
subcutánea) inducción de la expresión de hepcidina, sino también minimizar la toxicidad de los lechones altos.

Autor para correspondencia en: Facultad de Ciencias Animales, Universidad de Zhejiang, 866 Yuhangtang Road, Hangzhou 310058, China.
Dirección de correo electrónico: huahuadu@[Link] ([Link]).
1
Xiaoyun Chen y Xiaofeng Zhang contribuyeron igualmente a este trabajo.

[Link] Recibido
el 14 de agosto de 2019; Recibido en forma revisada el 17 de septiembre de 2019; Aceptado el 18 de septiembre de
2019 0753­3322/ © 2019 The Authors. Publicado por Elsevier Masson SAS. Este es un artículo de acceso abierto bajo la licencia CC BY­NC­ND
([Link]
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examinado bajo un microscopio DM3000 (Leica, Wetzlar, Alemania).

Se empleó microscopía electrónica de barrido (SEM) para detectar la morfología de las
microvellosidades del duodeno. El tejido del duodeno se fijó con glutaraldehído al 2,5%,
se deshidrató en una serie graduada de etanol (30%~100%) y se transfirió a una mezcla
de alcohol y acetato de isoamilo (v:v = 1:1) durante 30 minutos y acetato de isoamilo
durante 1h. Luego las muestras se deshidrataron con CO2 líquido en un secador de
punto crítico Hitachi HCP­2.
Las muestras deshidratadas se recubrieron con paladio y se visualizaron utilizando Philips
SU8010 FASEM (Hitachi, Tokio, Japón).

2.4. Microscopía electrónica de transmisión (TEM)

Fig. 1. Esquema de diseño experimental. Los números sin recuadro indican los días en
La deposición de hierro y la autofagia se observaron mediante TEM. El tejido hepático
los que se sacrificaron los lechones y se recogieron muestras biológicas. Los números
se fijó, se deshidrató y se transfirió a acetona pura durante 20 min. Las muestras se
en los recuadros indican los días en los que se administró suplementos de hierro dextrano.
colocaron en una mezcla de acetona y resina Spurr (1:1 durante 1 h, 1:3 durante 3 h) y
luego se transfirieron a una mezcla de resina Spurr durante la noche. Las secciones de
dosificar hierro mejorando la morfología de las vellosidades intestinales y reduciendo la
tejido se colocaron en cápsulas que contenían medios de inclusión, se calentaron a 70
autofagia de los hepatocitos.
°C durante 9 h, se tiñeron con acetato de uranilo y citrato de plomo alcalino durante 15
minutos y se observaron bajo TEM (H­7650, Hitachi, Tokio, Japón).
2. Materiales y métodos

2.1. Diseño experimental y análisis de muestras biológicas.

2.5. Inmunofluorescencia ROS

Los experimentos se realizaron en una granja de cerdos estándar (Hangzhou,

Se utilizaron secciones del hígado fijadas con paraformaldehído e incluidas en
China). Los procedimientos experimentales con animales fueron aprobados por el Comité
parafina para la detección por inmunofluorescencia. Las rodajas con espesor
Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Zhejiang. Se tomaron
de 5 mm fueron desparafinados e hidratados, y luego se procedió al reciclaje de Ag. Las
un total de 84 lechones Duroc × Landrace × Yorkshire de 8 camadas entregadas por 8
secciones se incubaron en oscuridad durante 30 minutos con dióxido de hidrógeno al
cerdas multíparas. Fueron alojados en condiciones estándar de aproximadamente 70%
3%. Los núcleos se tiñeron con DAPI. Se fotografiaron secciones inmunofluorescentes
de humedad y una temperatura de 22 ± 2 °C. Durante el experimento, a las cerdas se les
con un microscopio Eclipse Ti­SR con DS­U3 Image­Prosystem (Nikon, Tokio, Japón).
permitió amamantar a sus lechones. El alimento (preiniciador, 0,75 mg Fe/kg) se
proporcionó a los lechones desde el día 7 al 30. Los lechones se asignaron a uno de los
siguientes grupos experimentales en función del peso corporal (pc) (Fig. 1): a) control
lechones (n = 12) que no recibieron suplementos de hierro (grupo Con); b) lechones (n = 2.6. análisis estadístico
36) inyectados por vía intramuscular con 40 mg de Fe/kg de peso corporal el día 3
posparto y nuevamente el día 14 (grupo Fe 40 + 40); c) lechones (n = 36) inyectados Todas las mediciones se realizaron al menos por triplicado y los datos se presentaron
por vía intramuscular con 150 mg de Fe/kg de peso corporal el día 3 posparto (grupo Fe como media ± error estándar (SEM). Para el análisis estadístico se utilizó el software
150). Se administró hierro a los lechones en forma de FeDex (Chuangxin, Zhangshu, estadístico IBM SPSS (versión 20). La diferencia entre grupos se determinó mediante la
China). El peso corporal y la tasa de supervivencia de los lechones se controlaron cada prueba t de Student o, si había más de dos grupos, mediante ANOVA. El valor de p <0,05
5 días. Los lechones se sacrificaron a la edad de 0, 10, 20 y 30 días mediante inhalación se consideró estadísticamente significativo, mientras que el valor de p <0,01 se consideró
de CO2 y desangrado para la recolección de tejido y sangre (3 lechones por momento). extremadamente significativo.
Las muestras de tejido se congelaron en nitrógeno líquido y se mantuvieron a ­80 °C para
su análisis. Se realizó una punción cardíaca directa inmediatamente después de la muerte
para extraer sangre en un tubo heparinizado. Se utilizó el analizador automático SYSMEX 3. Resultados
F820 (Sysmex, Shanghai, China) para determinar los parámetros de eritrocitos y el nivel
de hierro sérico. El contenido de hierro en fragmentos de hígado y duodeno se cuantificó 3.1. La suplementación con hierro dividido aumentó el peso corporal de los lechones
utilizando kits de ensayo (JianCheng, Nanjing, China).
Para evaluar el efecto de diferentes estrategias de suplementación con hierro,
primero se examinaron el rendimiento del crecimiento y los parámetros hematológicos.
Los lechones suplementados con hierro crecieron más rápidamente que los del grupo de
2.2. Aislamiento de ARN y PCR cuantitativa. control sin suplementos de hierro durante todo el período del experimento (Fig. 2A). Los
pesos corporales de los lechones del grupo Fe 40 + 40 aumentaron significativamente (P
El ARN total se aisló utilizando el reactivo TRIzol (Simgen, Hangzhou, China). El <0,01) del día 20 al 30, que fueron mucho más altos que los de los lechones del grupo
ADNc se sintetizó utilizando la transcriptasa inversa M­MLV (Thermo Fisher Scientific, Fe 150. Indicó que el aumento de peso en el grupo Fe 40 + 40 fue más rápido que el de
Waltham, EE. UU.). La PCR cuantitativa en tiempo real se llevó a cabo en el sistema de otros dos grupos en los días 15 a 20 (datos no mostrados). La evaluación de los
PCR en tiempo real StepOne (Applied Biosystems, Foster City, EE. UU.) por triplicado parámetros hematológicos de los lechones mostró claramente que sin suplementos de
utilizando Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix (YEASEN, Shanghai, China). hierro su estado hematológico empeoró gradualmente y resultó en la aparición de IDA
El nivel de expresión de ARNm se determinó mediante el método de umbral de ciclo 2­ grave desde el día 10 (Fig. 2B­E). La suplementación con hierro contribuyó eficientemente
ΔΔ . Las secuencias de los cebadores específicos se enumeran en la Tabla 1. a la recuperación del estado hematológico de los lechones. La reducción de la dosis de
hierro (40 mg Fe/kg pc) a los lechones al menos tan efectiva como la dosis única alta
(150 mg Fe/kg pc) mejoró los parámetros hematológicos hasta el día 10. Después de la
2.3. Análisis histomorfológico segunda inyección de FeDex, los valores de todos Los indicadores sanguíneos
aumentaron gradualmente.
La morfología de los tejidos duodenales se observó mediante tinción con hematoxilina
y eosina (H&E). La sección del duodeno se fijó en paraformaldehído al 4% y se incluyó Es importante destacar que no hubo diferencias en la mayoría de los indicadores
en parafina para cortarla en bloques de 5 μm y teñirla con H&E utilizando técnicas hematológicos entre los lechones del grupo Fe 40 + 40 y del grupo Fe 150 durante todo
estándar. ellos eran entonces el período experimental.

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tabla 1
Cebadores utilizados para la amplificación cuantitativa por PCR en tiempo real.

Gene cebadores delanteros Imprimaciones inversas

18S CCCACGGAATCGAGAAAGAG TTGACGGAAGGCACCA

hepcidina GAGCCACCGCTGGGTTTGAC ACATCCCACAGATTGCTTTGC
IL­6 TGGCTACTGCCCTTCCCTACC CAGAGATTTTGCCGAGGATG
IL­1β ACAAAGCCCGTCTTCCTG ATGTGGACCTCTGGGTATGG
DMT1 CGCTTCGCCCGAGTGAT TGAGATGCTCTACATCCTGGAAGAC
FPN GAATAATGGGAACTGTGG AAGTGGCTCTGTCTGAAT
Nrf­2 AAGCCTTCAACCAAGACCA AGAATCACTGAAGCCAAGCA
mantener1 GAGGCGGAGCCCGAGA TCAGGGGCAGAAATTGGGTG
GATO TGCCTGCAACGTTCTGTAAG CGTGGTCAGGATATCAGGT
GPX4 CCAGTTTGGGAGGGCAGGAG GGACTTTCATCCACTTCCACAG
CÉSPED GTGCAGGGGCACCATCTACTTC GATCACCTTCAGCCAGTCCTT

3.2. La suplementación con hierro dividido atenuó la inducción de hepcidina y a 20 (Figura 3D). A diferencia de la hepcidina, los niveles de ARNm de DMT1 y FPN
estado de hierro mejorado de lechones en el grupo Fe 150 fue significativamente (P < 0,05) menor que
aquellos en el grupo Fe 40+40 el día 10 (Fig. 3E­F). El alto DMT1 y
En la deficiencia de hierro, los niveles séricos de hierro caen antes que los hematológicos. La expresión del ARNm de FPN indicó que los lechones del grupo Fe 40 + 40 tenían una
los parámetros caen. El nivel de hierro sérico de los lechones inyectados con fuerte capacidad de absorción de hierro.
150 mg Fe/kg pc aumentó significativamente y subió al nivel más alto en
día 10 (P <0,05), y luego cae rápidamente (Fig. 3A). Sin embargo, 3.3. La suplementación con hierro dividido fue beneficiosa para la morfología intestinal.
el nivel de hierro sérico de los lechones suplementados con 40 mg Fe/kg de peso corporal desarrollo
aumentó suavemente y no hubo diferencias notables entre
dos grupos tratados con hierro al final del experimento. Como sitios importantes para el hierro Para evaluar el efecto de dos estrategias de suplementación con hierro en el desarrollo del
almacenamiento y absorción, se detectaron tejidos del hígado y del duodeno para intestino, se utilizaron tinción H&E y observación SEM para determinar los cambios morfológicos
deposición de hierro. En comparación con los lechones del grupo Fe 150, los lechones del grupo Fe del duodeno en
El grupo 40 + 40 tuvo un nivel de hierro hepático significativamente mayor (P < 0,05) día 10. Según la tinción H&E, los lechones del grupo de control mostraron
contenido en la etapa final del experimento (Fig. 3B). Situación similar atrofia de las vellosidades del duodeno (Fig. 4A). Sin embargo, el crecimiento de las vellosidades en
sucedió en el contenido de hierro duodenal (Fig. 3C). Sugirió que los lechones los lechones del grupo Fe 40 + 40 fueron mejores con una mayor proporción de vellosidades
suplementados con hierro de manera dividida finalmente obtuvieron más hierro que altura a la profundidad de la cripta, mientras que no hubo diferencias significativas entre
los complementados con hierro de forma tradicional. El hierro fue el primero. control y grupo Fe 150. Este resultado se confirmó mediante SEM a 150×
factor biológico que induce la expresión de hepcidina. los lechones aumento (Fig. 4B, superior). Además, graves daños superficiales a
suplementado con 150 mg de Fe/kg de peso corporal mantuvo un nivel alto de ARNm de hepcidina Se pudieron observar vellosidades en el duodeno tanto en lechones de control como de Fe 150.
nivel en el hígado, mientras que los lechones en el grupo Fe 40 + 40 mostraron solo una expresión grupo. Curiosamente, la cantidad de microvellosidades en el duodeno aumentó
residual de ARNm de hepcidina similar a los lechones de control desde el día 10 en lechones del grupo Fe 40 + 40 (Fig. 4B, inferior), cuando el segundo nivel bajo

Fig. 2. Peso corporal y parámetros hematológicos de los lechones. (A) El peso corporal de todos los lechones experimentales de supervivencia se controló cada 5 días. Los valores se expresan.
para muestras de peso obtenidas de cuatro lechones de camada en cada momento (n = 12). (B – E) Parámetros hematológicos, incluidos glóbulos rojos (RBC), hemoglobina (HB)
concentración, volumen celular medio (MCV) y hematocrito (HCT) en cada momento (n = 3). Los valores se expresan como la media ± SEM. Los asteriscos indican importantes
diferencias (*p < 0,05, **p < 0,01) entre el grupo Fe 40+40 y el grupo Fe 150. El signo de libra indica diferencias significativas (#p < 0,05, ##p < 0,01) en
comparación con los valores de control al día siguiente del nacimiento.

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Fig. 3. Estado del hierro y metabolismo del hierro en lechones. (A – C) Nivel de hierro sérico, contenido de hierro no hemo hepático y contenido de hierro no hemo duodenal en lechones. (D– F)
Análisis cuantitativo por RT­PCR de transcripciones de hepcidina, FPN y DMT1 en homogeneizados de hígado y duodeno. Los niveles de expresión se dan como la cantidad relativa a la
expresión del gen constitutivo 18S rRNA en cada muestra. Al nivel en los lechones de control (día 0 o día 10) se le asignó el valor de 1. Las barras indican medias (n = 3) y las barras de error
indican media ± SEM. Los asteriscos indican diferencias significativas (*p < 0,05, **p < 0,01) entre el grupo Fe 40+40 y el grupo Fe 150.

Fig. 4. Morfología intestinal de lechones. El día 10, las secciones de duodeno se analizaron mediante tinción H&E (A) (barras, 200 μm) y observación SEM (B) (superior, 150 ×; inferior, 20
000 ×).

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Fig. 5. Deposición de hierro y autofagia en hígados de lechones. El nivel de deposición de hierro (A) (superior, 2500 ×; inferior, 4000 ×) y autofagia (B) (superior, 8000 ×; inferior, 15 000 ×)
en hígados de lechones se observaron mediante TEM el día 10. La flecha amarilla significa deposición de hierro, mientras que la flecha roja significa autofagosoma.

No se han administrado dosis de suplementos de hierro. Los resultados sugieren que la permanecieron bajos y no hubo diferencias significativas (P > 0,05) en los tres grupos (Fig.
suplementación con dosis bajas de hierro sería beneficiosa para el desarrollo de la morfología S1A­B). Además, la capacidad antioxidante total (T­AOC) de los lechones tampoco fue
duodenal. diferente (P >0,05) (Fig. S1C). Indicó que una inyección única de dosis alta de 150 mg de Fe/
kg de peso corporal podría causar estrés oxidativo, pero no lesión oxidativa ni respuesta
3.4. La suplementación con hierro dividido evitó la autofagia de los hepatocitos inflamatoria en lechones recién nacidos.

Nos preguntamos si la suplementación con altas dosis de hierro afectaría la arquitectura

del hígado; se utilizó el análisis TEM para detectar la deposición de hierro y la autofagia en el 4. Discusión
hígado. El estudio con microscopía electrónica reveló que los cuerpos densos en electrones
mostraban una fuerte señal de hierro después del análisis elemental mediante EELS en TEM. La IDA es probablemente la forma más frecuente de anemia en los mamíferos y la
La deposición de hierro se pudo encontrar claramente cerca del seno hepático circular y deficiencia de micronutrientes más frecuente en los cerdos [5]. Desde hace mucho tiempo se
fusiforme de los lechones del grupo Fe 150, mientras que no se detectó en los lechones del sabe que la suplementación con hierro tiene un impacto significativo en la tasa de crecimiento
grupo Fe 40 + 40 (Fig. 5A). En correspondencia con el contenido de hierro hepático el día 10 y la mejora de la anemia [12,18]. La inyección intramuscular de una gran cantidad de FeDex,
(Fig. 3B), sugirió que la depósito de hierro es desigual en el hígado de los lechones del grupo normalmente 200 mg, a lechones recién nacidos es un tratamiento relativamente sencillo y
Fe 150. Dado que la ferritina­autofagia conduciría a ferroptosis, una muerte celular regulada válido [19]. Sin embargo, parece que la ingesta parenteral elevada de suplementos de hierro
y una autofagia excesiva conducen a la apoptosis y daña proteínas y orgánulos importantes administrados en una dosis única no se metaboliza eficientemente y se ha informado toxicidad
en el cuerpo [16]. Luego detectamos el nivel de autofagia y descubrimos que había más del hierro con esta administración común [8]. Para optimizar el equilibrio entre la corrección de
autofagosomas (una vacuola casi circular en el citoplasma e impurezas disueltas por los la IDA y la minimización de la toxicidad del hierro, probamos una suplementación dividida con
lisosomas en el interior) en hígados de lechones en el grupo Fe 150 con un aumento de 8000 hierro inyectando FeDex a los lechones los días 3 y 14, y evaluamos la toxicidad potencial de
× (Fig. 5B). superior). El área de autofagia grave con una gran cantidad de autofagosomas se la suplementación en dosis altas. Nuestros resultados mostraron claramente que la terapia
amplió a 15.000 aumentos (Fig. 5B, inferior), mientras que no se detectó ningún área de parenteral modificada con FeDex satisfizo todos los requisitos de la administración de hierro
autofagia en los lechones del grupo Fe 40 + 40 (Fig. 5B). Estos resultados indicaron que la a los lechones y principalmente disminuyó la toxicidad del hierro.
inyección de dosis altas del tratamiento con hierro agravó la deposición de hierro y la autofagia
de los hepatocitos.
Está bien establecido que después de la inyección intramuscular de FeDex, este complejo
se extrae rápidamente del plasma y se deposita en el sistema reticuloendotelial [20]. Luego,
los macrófagos (principalmente las células de Kupffer) liberan hierro del complejo y reingresa
3.5. La suplementación con altas dosis de hierro indujo estrés oxidativo en el hígado sucesivamente al plasma a través de una vía dependiente de la ferroportina. A continuación,
el hierro presente en el flujo sanguíneo forma complejos con la transferrina y se transporta a
Numerosos estudios han destacado el papel del hierro en el estrés y el daño oxidativo. la médula ósea para sintetizar hemoglobina. En el presente estudio, la suplementación con
ROS puede inhibir la unión de Nrf­2 a Keap1, permitiendo que una gran cantidad de Nrf­2 hierro dividido previene eficientemente la IDA mejorando los valores de los parámetros
ingrese al núcleo para inducir la transcripción de enzimas antioxidantes, como la superóxido hematológicos, así como la ingesta elevada de FeDex. Curiosamente, los lechones que
dismutasa (SOD), la glutatión peroxidasa (GSH) y la catalasa ( GATO) [17]. Los genes recibieron dos dosis bajas de suplementos de hierro mostraron una mejor tasa de crecimiento
relacionados con el estrés oxidativo en el hígado se probaron en lechones de dos grupos que los que recibieron una sola administración de dosis altas de hierro. Esta ventaja del
tratados con hierro el día 10. Los niveles de ARNm de Nrf­2, Keap1 y SOD en los lechones protocolo extendido para la suplementación con hierro probablemente se debió al aumento
del grupo Fe 150 fueron significativamente más altos que los de los lechones del grupo Fe 40 más estable en la concentración de hierro en sangre, lo que indica un metabolismo del hierro
+ 40. (Figura 6A). Este resultado también se confirmó mediante inmunofluorescencia de ROS más robusto en los lechones.
(Fig. 6B). Como el estrés oxidativo puede provocar una respuesta inflamatoria, también se
detectaron citoquinas proinflamatorias, incluidas IL­1β e IL­6. Sin embargo, las transcripciones Se sabe que la hepcidina es un importante objetivo regulado de la homeostasis sistémica
de IL­1β e IL­6 en del hierro, que actúa como un regulador negativo de la absorción y reutilización del hierro [21].
El uso de la terapia FeDex en lechones también implica

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Fig. 6. Indicadores relevantes de los niveles de estrés oxidativo. (A) El nivel de ARNm de genes relacionados con el estrés oxidativo, incluidos Nrf­2, Keap1, CAT, GPX4 y SOD
de lechones suplementados con hierro el día 10, se detectó mediante RT­PCR. Los niveles de expresión se dan como la cantidad relativa a la expresión del gen constitutivo 18S
rRNA en cada muestra. Al nivel de los lechones en el grupo Fe 150 (día 10) se le asignó el valor de 1. Los asteriscos indican diferencias significativas (*p < 0,05) entre el grupo
Fe 40+40 y el grupo Fe 150 (n=3). (B) El nivel de ROS de los hígados de los lechones el día 10 se examinó mediante inmunofluorescencia (superior, 200 ×; inferior, 400 ×).

la necesidad de precaución, ya que la suplementación con hierro puede inducir hepatocitos alternando para unirse con ferritina [22]. Nuestro estudio anterior
excesivamente la expresión de hepcidina, inhibiendo así la absorción de hierro en demostró que la suplementación con hierro podría promover el desarrollo intestinal
la dieta, así como la liberación de hierro de los macrófagos. En nuestro estudio, la y mantener la mucosa intestinal [18]. En este estudio, encontramos además que
administración de grandes cantidades de hierro a los lechones del grupo Fe150 una suplementación de 40 mg de Fe/kg de peso corporal fue suficiente para el
dio lugar a un aumento significativo de la expresión del ARNm de hepcidina, que desarrollo del duodeno con una morfología e integridad mejoradas. Por el contrario,
apareció inmediatamente después de la inyección de FeDex y se mantuvo en la inyección tradicional con 150 mg de Fe/kg de peso corporal provocó daño al
niveles elevados hasta el final del experimento. Por el contrario, la transcripción de duodeno al reducir la altura de las vellosidades y la profundidad de las criptas y la
hepcidina apenas se indujo en los lechones con doble inyección de suplementos lesión de las microvellosidades.
de hierro en dosis bajas en comparación con los lechones con anemia del grupo En exceso, el hierro es tóxico porque genera el radical hidroxilo a través de la
de control. Dicho resultado fue consistente con informes anteriores [5,15]. El reacción de Fenton que reacciona de manera inespecífica con las moléculas
almacenamiento significativamente mayor de hierro el día 30 en el hígado y el biológicas. En consecuencia, en este estudio, los lechones cargados excesivamente
duodeno de los lechones del grupo Fe 40 + 40 indicó que un nivel bajo de hepcidina con 150 mg de Fe/kg de peso corporal mostraron un aumento desencadenado por
podría ser beneficioso para la absorción de hierro de la dieta y la reserva de hierro el hierro en los niveles de expresión de ARNm de Nrf­2, Keap1 y SOD en el día 10
en los tejidos. En este grupo de lechones, el hierro liberado por FeDex pareció posnatal, que se sabe que son inducidos por el estrés oxidativo. Estos lechones
reciclarse rápidamente en la circulación y fue entregado al parénquima hepático también mostraron niveles elevados de 8­isoprostano, un biomarcador que
en cantidades limitadas para inducir la síntesis de hep­cidina el día 10. De hecho, proporciona una medida fiable del estrés oxidativo [5]. Sin embargo, un alto nivel
el análisis de la distribución del hierro en el hígado de los lechones con dos dosis de ROS parecía no activar una serie de enzimas antioxidantes como los niveles
de 40 mg de Fe/kg de peso corporal mostró que no había una acumulación de CAT, GPX4 y T­AOC, lo que significa que la intensidad del ataque de ROS no
significativa de hierro, mientras que se demostraron lisosomas terminales muy fue suficiente para causar un gran daño oxidativo a los lechones. Sorprendentemente,
cargados de hierro en los hepatocitos de los lechones del grupo Fe 150. también encontramos que había más autofagosomas en el hígado de los lechones
El hierro se distribuye por todo el cuerpo, pero se distribuye en círculos del grupo Fe 150, lo que parecía estar relacionado con los altos depósitos de hierro
importantes en los enterocitos duodenales, precursores de eritrocitos, macrófagos y cerca del seno hepático. La autofagia puede limpiar proteínas y orgánulos dañados,

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que es una vía de degradación evolutivamente conservada que mantiene la Referencias

homeostasis. La autofagia excesiva conduce a la apoptosis y daña proteínas y
orgánulos importantes del cuerpo. En este estudio, sospechamos que la activación [1] T. Ganz, E. Nemeth, Homeostasis del hierro en la defensa y la inflamación del huésped, Nat. Rdo.

autofágica en los hepatocitos podría desempeñar un papel protector contra la Inmunol. 15 (2015) 500– 510.
[2] JI Lachowicz, VM Nurchi, D. Fanni, C. Gerosa, M. Peana, MA Zoroddu,
citotoxicidad del exceso de hierro. Se necesitarán más estudios para aclarar los Deficiencia nutricional de hierro: el papel de la suplementación oral con hierro, Curr. Medicina.
mecanismos. Química. 21 (2014) 3775– 3784.

A la hora de proporcionar hierro exógeno a los lechones, no debemos dejar de [3] AE Mast, MA Blinder, Q. Lu, S. Flax, DJ Dietzen, Utilidad clínica de la re­
Contenido de hemoglobina de ticulocitos en el diagnóstico de deficiencia de hierro, Blood 99 (2002) 1489– 1491.
lado ni los aspectos económicos del procedimiento ni el bienestar de los lechones.
Aunque se ha demostrado que el procedimiento de suplementación con hierro [4] SF Clark, Anemia por deficiencia de hierro: diagnóstico y tratamiento, Curr. Opinión.
dividido logra su objetivo, su aplicación práctica es problemática debido a la mano Gastroenterol. 25 (2009) 122– 128.
[5] P. Lipinski, RR Starzynski, F. Canonne­Hergaux, B. Tudek, R. Oliński,
de obra agrícola. Sin embargo, nuestro trabajo aquí reveló por primera vez que la
P. Kowalczyk, et al., Beneficios y riesgos de la suplementación con hierro en cerdos neonatales
doble inyección de hierro podría promover la absorción de hierro, mejorar el anémicos, Am. J. Pathol. 177 (2010) 1233– 1243.
desarrollo intestinal, eliminar el daño oxidativo y evitar la autofagia de los hepatocitos. [6] M. Svoboda, J. Drabek, Deficiencia de hierro en lechones lactantes: etiología, aspectos clínicos
y diagnóstico, Folia Vet. 49 (2005) 104– 111.
Las funciones anteriores favorecen el crecimiento saludable de los lechones y
[7] JC Kim, P. Wilcock, MR Bedford, Estado del hierro en lechones e impacto de la superdosis de fitasa en la
aumentan los beneficios del ganado. Por lo tanto, desde la perspectiva del beneficio fisiología del hierro: una revisión, Anim. Alimentar ciencia. Tecnología. 235 (2018) 8– 14.
general, la administración de suplementos de hierro mediante doble inyección de
[8] Z. Dong, D. Wan, G. Li, Y. Zhang, H. Yang, X. Wu, et al., Comparación de la administración de hierro oral y
FeDex los días 3 y 14 es factible.
parenteral sobre la homeostasis del hierro, el estado oxidativo e inmunológico en cerdos neonatales anémicos ,
Biol. Elemento de seguimiento. Res. (2019), [Link] .
5. Conclusión
[9] D. Sperling, B. Freudenschuss, A. Shrestha, B. Hinney, H. Karembe, A. Joachim, Eficacia
comparativa de dos preparaciones parenterales que contienen hierro, hierro gleptoferrón y hierro
La deficiencia de hierro es un problema de salud muy común. Los lechones dextrano, para la prevención de la anemia. en lechones lactantes, Vet. Rec.
recién nacidos son modelos ideales para investigar la etiología multifactorial de la Abierto 5 (2018) e000317.
IDA en mamíferos. Nuestros estudios demostraron que modificar el programa con [10] HA Larkin, J. Hannan, Absorción intestinal y estructura en lechones con deficiencia de hierro, Res.
Veterinario. Ciencia. 36 (1984) 199– 204.
dos pequeñas dosis de suplementos de hierro en lechones recién nacidos tuvo
[11] M. Svoboda, J. Vanhara, J. Berlinska, Administración parenteral de hierro en la lactancia
beneficios evidentes. La inyección a los lechones de 40 mg de Fe/kg de peso lechones, Acta Vet. Brno. 86 (2017) 249– 261.
corporal el día 3 fue indispensable y suficiente para prevenir la deficiencia de hierro [12] AK Egeli, T. Farmstadt, Una evaluación de la suplementación con hierro­dextrano en lechones
administrados mediante inyección el primer, tercer o cuarto día después del nacimiento, Res.
y promover el desarrollo morfológico intestinal. Además, administrar suplementos de
Veterinario. Ciencia. 66 (1999) 179– 184.
hierro a los recién nacidos en pequeñas dosis no sólo podría minimizar la expresión [13] HJH Fenton, Reacción de Fenton, Proc. Química. Soc. 9 (1893) 113– 115.
de hepcidina, que en consecuencia maximiza la absorción del hierro de la dieta, sino [14] WS Yang, BR Stockwell, Ferroptosis: muerte por peroxidación lipídica, Trends Cell
Biol. 26 (2016) 165­176.
que también podría disminuir principalmente la toxicidad del hierro al eliminar el
[15] RR Starzynski, CMM Laarakkers, H. Tjalsma, DW Swinkels, M. Pieszka, A. Stys, et al., Suplementación
estrés oxidativo y evitar la autofagia de los hepatocitos. de hierro en lechones lactantes: cómo corregir la anemia por deficiencia de hierro sin aumentar los
niveles plasmáticos de hepcidina, PLoS One 8 (2013) e64022.
[16] M. Gao, P. Monian, Q. Pan, W. Zhang, J. Xiang, X. Jiang, La ferroptosis es una autopsia
Declaración de intereses en competencia
proceso mágico de muerte celular, Cell Res. 26 (2016) 1021– 1032.
[17] W. Li, AN Kong, Mecanismos moleculares de la respuesta antioxidante mediada por Nrf2, Mol.
Todos los autores declaran que no existe ningún conflicto de intereses. Carcinógeno. 48 (2009) 91– 104.
[18] Y. Pu, S. Li, H. Xiong, X. Zhang, Y. Wang, H. Du, El hierro promueve el desarrollo intestinal.
Opmento en lechones neonatales, Nutrients 10 (2018) E726.
Agradecimientos [19] M. Szudzik, RR Starzyński, A. Jończy, R. Mazgaj, M. Lenartowicz, P. Lipiński, Suplementación de hierro
en lechones lactantes: una terapia aparentemente fácil de la anemia por deficiencia de hierro
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de neonatal, Pharmaceuticals 11 (2018) 128.
[20] P. Geisser, M. Baer, E. Schaub, Relación estructura/histotoxicidad de preparaciones de hierro
China (31572411, 31872363), el Gran Proyecto de Ciencia y Tecnología de la
parenteral, Arzneimittelforschung 42 (1992) 1439– 1452.
provincia de Zhejiang (2015C02022) y los Fondos de Investigación Fundamental [21] T. Ganz, E. Nemeth, Hepcidina y homeostasis del hierro, Biochim. Biofísica. Actas de 1823
para las Universidades Centrales (2019FZJD008). (2012) 1434– 1443.
[22] C. Beaumont, Múltiples mecanismos reguladores actúan en conjunto para controlar la expresión de ferroportina y
el reciclaje del hierro hemo por parte de los macrófagos, Haematologica 95 (2010) 1233– 1236.
Apéndice A. Datos complementarios

El material complementario relacionado con este artículo se puede encontrar, en la versión en línea,
en doi:[Link]