BIOQUIMICA II
Mg. Edgard Luis Costilla Garcia
Ácido
Ribonucleico
FLUJO DE INFORMACIÓN
Replicación y transcripción en el núcleo
Traducción en el citoplasma
Características del ARN
ARN: polímero compuesto por una
combinación de cuatro nucleótidos
adenina (A)
citosina (C)
guanina (G)
uracilo (U)
Tipos de ARN
• ARNm: contiene los nucleótidos que
codifican la secuencia de aminoácidos
para la formación de las distintas
proteínas.
• ARNt: actúa como un “intérprete”, una parte de la
molécula lee la secuencia nucleotídica codificada en
el ARNm y la otra parte, transfiere el aminoácido
apropiado a la cadena polipeptídica en formación
durante la síntesis de proteínas.
•ARNr: son moléculas asociadas con
proteínas que forman una maquinaria de
síntesis llamada ribosoma.
ARN ribosomal
ARN transferencia
• Los ARNs tienen varios usos, ya sean estructurales o funcionales:
– Traducción: ADN →Proteína
– Splicing → spliceosoma
– Localización celular → de la señal involucrada en la traslocación
de proteínas a través de la membrana plasmática celular.
– Catálisis celular →actividad de enzimática de la peptidil
transferasa en ribosomas →ARNr
TRANSCRIPCIÓN
Función:
La formación del transcrito de RNA mediante la catálisis de la unión de
nucleótidos libres a la cadena molde del DNA formando una monohebra
de RNA.
Propiedades que hacen posible la síntesis del transcrito de RNA
1. COMPLEMENTARIEDAD ENTRE BASES
A-U, C-G, G-C, T-A
2. UNIÓN DE PROTEÍNAS ESPECIFICAS AL DNA (RNA Polimerasa y otras
proteínas que actúan como factores de transcripción).
Nomenclatura de las
cadenas en relación a la
transcripción
Orientación y nomenclatura de las cadenas en relación a
la transcripción
(5)’ CGCTATAGCG (3’) → cadena estabilizadora del DNA
(3’) GCGATATCGC (5’) → cadena molde del DNA
(5’) CGCUAUAGCG (3’) → transcrito de RNA
¿Qué cadena de la doble hélice es la
codificadora?
Depende de cada gen, no es un propiedad del
cromosoma.
Orientación de la transcripción
Orientación de la transcripción
Orientación de la
transcripción de los genes
del cromosoma 13 humano
alrededor del gen BRCA2
RNA polimerasa
•Enzima compleja, no requiere primer (cebador),
no funciona la corrección de errores
•Procariotas: sólo un tipo. Con múltiples
subunidades.
E. Coli :
factor sigma iniciación + CORE
(holoenzima)
Eucariotas: 3 tipos
I -> rRNA
II -> mRNA
III -> tRNA, snRNA, rRNA 5S
RNA polimerasa
PROCARIOTAS
• En procariotas una sola polimerasa (RNA Polimerasa) se
encarga de transcribir el DNA en las diferentes clases de
RNA
ESTRUCTURA (E. coli)
• Se compone de 5 subunidades: 2 subunidades idénticas,
, ’, ω, más el cofactor .
• El cofactor tiene la propiedad de disociarse del resto de
subunidades durante el proceso dejando el núcleo central
de la enzima al descubierto.
• HOLOENZIMA = 5 subunidades (con cofactor ) →
ACTIVA
• APOENZIMA = 4 subunidades ( el cofactor disociado) →
INACTIVA
RNA polimerasa
PROCARIOTAS
•2 subunidades = ensamblan el enzima y
promueven interacciones
• = actividad catalítica
APOENZIMA = 4 subunidades •’ = se une al DNA
•ω = ensamblaje y regulación expresión
• = Se une a las regiones promotoras y posicional
a la holoenzima en el sitio de inicio
RNA polimerasa
Ciclo de la RNA pol bacteriana
Etapas de la transcripción
Etapas de la transcripción
•Iniciación:
•Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
•Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb
aguas arriba) y región -35 pb
Etapas de la transcripción
•Iniciación:
•Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
•Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb
aguas arriba) y región -35 pb
•Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb)
Etapas de la transcripción
•Iniciación:
•Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
•Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb) y
región -35 pb
•Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb)
•Elongación:
•5’->3’
•Enrollamiento aguas arriba (5’) y desenrollamiento aguas
abajo (3’) del DNA
•Terminación:
•Dependiente del factor Rho
•Independiente de Rho
Etapas de la transcripción
•Iniciación:
•Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)
•Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10 pb) y
región -35 pb
•Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb)
•Elongación:
•5’->3’
•Enrollamiento aguas arriba (5’) y desenrollamiento aguas
abajo (3’) del DNA
•Terminación:
•Dependiente del factor Rho
•Independiente de Rho
Terminación: DNA Palíndrome estructura
secundaria
Palíndrome:
“dabale arroz a
la
zorra el abad”
Terminación: mecanismo
intrínseco -> DNA
Palíndrome,
estructura tallo-bucle
Región 3’ no traducida de ~ 40 bases (3’UTR)
Estructura del gen y el mensajero
procariota
Regulación de la expresión
SISTEMA OPERÓN
un gen regulador: controla el
un operador: controla el acceso de
tiempo y velocidad de transcripción
la ARN polimerasa al promotor
de otros genes
un promotor: donde la ARN un gen estructural: codifican las
polimerasa reconoce el sitio de enzimas relacionadas o las proteínas
inicio de la transcripción estructurales
Operón inducible
Operón Lactosa
Operón reprimible
Operón Triptófano
Transcripción Eucariotas
RNAs Polimerasa en Eucariotas
• 1- Existen tres tipos de RNA polimerasa
• RNA polimerasa I, 13 subunidades. Se localiza en
el núcleo y en el nucleolo. -> Síntesis de rARN 45S.
• RNA polimerasa II, 12 subunidades. Se localiza en el
nucleoplasma. -> Síntesis de los hnRNA (transcrito primario),
los precursores de los mRNA.
• RNA polimerasa III, 17 subunidades. Se
localiza en el nucleoplasma. -> Síntesis rRNA
5S y tRNA.
Transcripción Eucariotas
Transcripción
Eucariotas
Transcripción Eucariotas
Transcripción Eucariotas
Exon e Intron en Células Eucariotas
exon exon exon
promotor intron intron DNA
3’ 5’
start codon stop codon
Transcripción
5’ 3’ mRNA
Procesamiento
cap
Cola
Splicing
poly A
Delección Intròn
mRNA maduro Al citoplasma
En núcleo
Regla GU-AG
Splicing
(corte y empalme)
Autosplicing en Tetrahymena (Tom Cech 1981)
RIBOZIMA
Estructura mensajero eucariota
Transcripción inversa
PCR DIGITAL
Table 2. Pathogenic mutations of KIT and PDGFRA genes in 21 samples of gastrointestinal stromal tumors.
Sexo Gen Case
Sex/
Exon Anatomic site Mutationa Effectb
Tumor
Heterozygous
Age Size
M: 47.6% T2 F/65 11 Stomach c.1720_1773dup54 p.T574_F591dup 16.0 cm +
H: 52.4% T4 F/67 11 Stomach c.1648_1662del15 p.K550_E554del 8.0 cm +
T6 M/62 11 Small bowel c.1669_1677delTGGAAGGTT p.K557_V559del -- +
Edad
T8 F/24 11 Duodenum c.1669_1674delTGGAAG p.W557_K558del 3.0 cm +
X = 60.14
T9 M/60 11 Small bowel c.1713_1739dup27 p.P571_H580dup -- +
Sitio anatómico T10 M/73 11 Metastasis c.1669_1674delTGGAAG p.W557_K558del 4.0 cm +
Estómago: 61.9% T11 M/64 11 Stomach c.1669_1674delTGGAAG p.W557_K558del 20.0 cm +
Int. Delgado: T13 F/64 11 Stomach c.1735_1737delGAT p.D579H 17.0 cm +
14.28%
T16 F/70 11 c.1669_1674delTGGAAG p.W557_K558del 22.0 cm +
Duodeno: 9.5% Intra-abdominal
KIT
T17 M/56 11 Small bowel c.1648_1662del15 p.K550_E554del -- -
Tamaño T18 M/72 11 Stomach c.1648_1662del15 p.K550_E554del 10.0 cm -
tumor
T19 F/57 11 Stomach c.1735_1737delGAT p.D579H 4.3 cm +
X = 12.7 ±
T20 F/54 11 Stomach c.1669T>C p.W557R 21.0 cm +
6.6
Genotipo T21 F/73 11 Stomach c.1669T>C p.W557R 13.5 cm +
Heterocigoto: T22 M/73 11 Stomach c.1648_1662del15 p.K550_E554del 4.5 cm -
81% T23 F/57 11 Duodenum c.1648_1662del15 p.K550_E554del 15.0 cm -
Homocigoto: T24 M/59 11 Stomach c.1648_1662del15 p.K550_E554del 4.5 cm +
19%
T25 M/54 11 Omentum c.1648_1662del15 p.K550_E554del 21.0 cm +
Mutación
T1 M/44 18 Stomach c.2525A>T p.D842V 16.0 cm +
p.K550_E554d
PDGFRA
el (33%) T5 F/41 18 Stomach c.2525A>T p.D842V 12.5 cm +
T15 M/74 18 Stomach c.2526_2537del12 p.I843_D846del 16.8cm +
Buleje J, Acosta O, Guevara-Fujita M, Enriquez Y, Taxa L, Machicado E, Lizaraso-Caparó F, Fujita R. Mutational
profile of KIT and PDGFRA genes in gastrointestinal stromal tumors in Peruvian samples. Rev Esp Enferm Dig
Normal Mutado
c.1669_1674delTGGAAG / p.W557_K558del
c
Normal c.1669T>C / p.W557R Mutado
d
Buleje J, Acosta Ó, Guevara-Fujita M, Enriquez Y, Taxa L, Machicado E, Lizaraso-Caparó F, Fujita R. Mutational
profile of KIT and PDGFRA genes in gastrointestinal stromal tumors in Peruvian samples. Rev Esp Enferm Dig
Mutaciones germinales en los genes BRCA1 y BRCA2,
confieren un incremento significativo en el riesgo de
desarrollar cáncer de mama.
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